Hepatoma cells up-regulate expression of programmed cell death-1 on T cells

AIM： To investigate the effect of hepatoma cells on up-regulation of programmed cell death-1 （PD-1）, and the function of PD-1 on T cells. METHODS： HepG2 or HepG2.2.1.5 cells were cocultured with a lymphoma cell line-Jurkat cells. PD-1 expression was detected by flow cytometry. IL：2, INF-γ and IL-10 in culture supernatant were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Cytotoxic action of T cells was determined by MIF reduction assay-direct mononuclear cell cytotoxicity assay. RESULTS： The PD-1 expression on Jurkat cells increased by 16.17% ± 2.5% and 17.43% ± 2.2% after HepG2 or HepG2.2.1.5 cells were co-cultured for 48 h. The levels of IL-2, INF-γ and IL-10 in the culture supernatant were 202.9 ＋ 53.0 pg/mL, 88.6 ± 4.6 pg/mL and 63.7± 13.4 pg/mL respectively, which were significantly higher than those （102.9 ± 53 pg/mL, 39.3 ± 4.2 pg/mL, and 34.6 =E13.7 pg/mL） in the control group （P 〈 0.05）. The OD value for MTT assay in the blocking group （0.29 ± 0.06） was significantly higher than that （0.19 ± 0.09） in the control group （P 〈 0.05）. CONCLUSION： PD-1 expression on Jurkat cells is upregulated by hepatoma cells, cytokines and cytotoxic action are elevated after PD-1/PD-L1 is blocked.     

HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的树突细胞免疫功能的影响

背景：树突细胞（DC）是体内功能最强的抗原呈递细胞,可激活初始型T细胞,生成辅助性T细胞和杀伤性T细胞。DC具有特异性呈递肿瘤抗原的能力,在肿瘤免疫中发挥重要作用。目的：探讨HepG2细胞抗原对脐血CD34^＋造血干细胞诱导分化的DC免疫功能的影响。方法：分离培养脐血CD34^＋造血干细胞后,加入细胞因子组合诱导生成DC并将其分成HepG2细胞抗原负载组和对照组．以流式细胞仪测定DC生成率和免疫表型,以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测干扰素-γ（IFN-γ）含量,以MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL细胞）对HepG2细胞的杀伤作用。结果：DC生成率为60．2％±9．4％。与对照组相比,HepG2细胞抗原负载组DC免疫表型CD1a^＋／CD40^＋、CD83^＋／CD86^＋、CD14^＋／HLA-DR^＋比例显著增高（57．6％±5．4％对33．2％±6．0％、32．5％±3．9％对26．0％±2．8％、38．1％±2．6％对29．1％±2．1％,P〈0．01）;IFN-γ含量呈时间依赖性增高;CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用显著增强（43.3％±11.3％对13．9％±4．6％,P〈0．01）。结论：应用HepG2细胞抗原孵育脐血CD34^＋造血干细胞可诱导分化成熟DC,DC可促进异基因淋巴细胞活化分泌IFN-γ,并产生特异性CTL细胞,杀伤肝癌HepG2细胞。     

PD-1分子对慢性丙型肝炎患者T细胞免疫功能的影响

目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血T细胞表面程序性死亡因子-1（PD-1）分子在T细胞免疫应答中的作用。方法受试对象包括40例慢性丙型肝炎患者,10例非病毒性肝炎的肝病患者,以及20名健康对照。取外周血,采用流式细胞术检测CD4^＋及CD8^＋T细胞上PD-1的表达水平;ELIsA法测定混合淋巴细胞培养上清中IFN—γ及IL-2的浓度。结果慢性丙型肝炎患者外周血CD4^＋及CD8^＋T细胞上PD-1阳性表达率[（38．61±4．35）％、（48．17±5．16）％]明显高于其他肝病患者及健康对照（P〈0．01）。慢性丙型肝炎患者产生Ⅰ型细胞因子的能力明显降低,阻断PD-1共刺激信号途径能够增强患者T细胞分泌I型细胞因子的能力。结论慢性丙型肝炎患者外周血T细胞上PD-1表达水平的升高,可能是导致T淋巴细胞应答能力下降的重要原因。     

KCNJ15诱导钙离子内流促进T细胞分泌白介素17实验研究

目的:探讨内向整流钾通道J亚家族成员-15 (KCNJ15)对HBV诱导的慢加急性肝衰竭患者T细胞的作用及机制。方法:构建人KCNJ15真核表达质粒,电转染Jurkat细胞系,采用Cytometric Bead Array (CBA)试剂盒检测Jurkat细胞上清液Th1/Th2/Th17及IL-9等细胞因子表达水平;流式细胞术检测细胞内钙离子浓度。结果:人KCNJ15真核表达质粒转染Jurkat细胞后,与对照组相比,KCNJ15在基因水平(10~(5.51±0.58)比10~(1.41±1.16),P=0.001)和蛋白水平表达明显增强,Jurkat细胞分泌细胞因子IL-17A的水平显著升高[(9.55±1.06)pg/ml比(5.77±1.32)pg/ml,P=0.005];转染后24h细胞内钙离子浓度显著增高[(0.15±0.05)μmol/L比(0.06±0.01)μmol/L,P=0.005]。结论:过表达KCNJ15可能通过促进钙离子内流增强T细胞分泌IL-17,从而参与免疫诱导肝脏损伤的病理过程。     

小鼠外吐小体免疫原性与1型糖尿病的相关性

目的研究外吐小体免疫原性及其与1型糖尿病病程的相关性。方法采用超滤、高速离心法分离6～15周龄NOD小鼠MIN6β细胞系以及原代胰岛胶质细胞来源的外吐小体,分为对照组、外吐小体组,以Westernblotting分析蛋白表达,以流式细胞术检测外吐小体刺激抗原递呈细胞后表型变化和细胞因子释放水平,掺入。３[H]以检测T淋巴细胞增殖水平,酶联免疫斑点法检测脾细胞受外吐小体刺激干扰素（IFN）－γ阳性T细胞克隆数和NOD小鼠病程的相关性。组间比较采用t检验。结果（1）外吐小体具有典型球状囊泡结构并携带1型糖尿病自身抗原谷氨酸脱羧酶65（GAD65）蛋白;（2）外吐小体组（11．5％）较对照组（2．6％）组织相容性抗原Ⅱ和CD。分子双阳性抗原递呈细胞增加;（3）外吐小体组CD11b＋、CD11c＋和B220＋亚群细胞的白细胞介素6（IL-6）均高于对照组,分别为：（115．0±2．4）比（25．3±2．9）pg／ml,（64．7±3．0）比（22．9±1．4）pg／ml,（10．7±1．2）比（6．3±O．6）pg／ml（均P〈0．05）;（4）外吐小体组CD11b＋、CD11c＋和B220＋亚群细胞的肿瘤坏死因子α（TNF—α）均高于对照组,分别为：（125．0±8．6）比（29．7±1．6）pg／ml,（108．0±6．7）比（16．7±2．1）pg／ml,（24．2±1．4）比（13．5±1．7）pg／ml（均P〈0．01）;（5）外吐小体组CD4阳性T细胞亚群高于阴性对照组[外吐小体10μg/ml组：（21510±1704）cpm,1μg／ml组：（4450±304）cpm,阴性对照组：（575±64）cpm,均P〈0．01],且IFN－γ阳性T细胞克隆数在雌性NOD小鼠随鼠龄呈递增趋势。结论外吐小体具有活化自身反应性T细胞功能并与1型糖尿病病程密切相关。     

系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群及Th1、Th2类细胞因子变化的临床意义

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T淋巴细胞亚群及Th1、Tb2类细胞因子变化及其临床意义。方法选取SLE患者10例（SLE组）和查体健康者10例（对照组）,采用ELISA法检测其外周血IFN-γ、IL-10,采用流式细胞术检测CD4、CD8＋T淋巴细胞比例。结果SLE组IFN-γ、IL-10分别为（19．74±5．16）、（57．32±11．96）pg／ml,IFN-γIL-10为0．36±0．09;对照组分别为（13．87±4．08）pg／ml、（18．274-5．98）pg／ml、0．75士0．20;两组比较P均〈0．01。SLE组CD4＋为（43．14±6．08）％、CD8＋为（49．39±8．15）％、CD4＋／CD8＋为0．86±0．13;对照组分别为（52．89±7．65）％、（34．16±5．83）％、1．59±0．52,两组比较P均〈0．01。结论SLE患者T淋巴细胞亚群及Th1、Th2类细胞因子存在异常,这种变化可能是导致SLE发病的重要机制之一。     

HLA-DRB1＊15及相应位点下Th1／Th2细胞相关因子对乙肝疫苗免疫效果的影响

目的探讨广西人群HLA—DRB1＊15基因及相应位点下Th1／Th2细胞相关因子IFN-γIL-4对乙肝疫苗免疫应答水平的影响。方法选取完成重组乙型肝炎疫苗标准全程接种的广西籍汉族健康大学生中抗-HBsS／N值〈10mIU／ml的无、弱应答者80名（A组）作为研究对象,随机选取抗-HBsS／N值〉10mIU／ml的中、强应答者62名（B组）作为对照。应用PCR—SSP进行HLA-DRB1＊15等位基因的检测,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中Th1／Th2细胞相关因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）。结果①A组HLA—DRB1＊15基因表达频率为11．25％,显著低于B组的36．67％（P=0．001）;②A组中IFN-γ的平均表达水平为（6．28±6．84）pg／ml,显著低于B组（16．28±10．05）pg/ml（P=0．000）;③A组的IL-4平均表达水平为（2．36±1．91）pg／ml。显著低于B组（8．50±6．68）pg／ml（P=0．000）;④HLA—DRB1＊15阳性组IFN-γ平均表达水平为（13．82±9．89）pg／ml,显著高于HLA—DRB1＊15阴性组（9．76±9．54）pg／ml（P=0．029）;⑤HLA-DRB1＊15阳性组IL-4平均表达水平为（5．81±4．27）pg／ml,阴性组IL-4平均表达水平为（4．82±5．84）pg／ml,两组间差异无统计学意义（P=0．207）。结论①HLA—DRB1＊15基因可能是促进广西人群乙肝疫苗免疫应答的相关基因;②Th1／Th2细胞相关因子IFN-1、IL-4的表达水平可能影响机体乙肝疫苗的免疫效果;③HLA—DRBB1＊15基因可能是通过影响Th1细胞相关因子IFN-γ的表达水平,而不是通过影响Th2细胞相关因子IL-4的表达水平来影响乙肝疫苗的免疫应答。     

IL-35对慢加急性肝衰竭患者外周血CD8+T淋巴细胞功能的影响

目的观察慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血清IL-35表达水平,评估IL-35对ACLF患者CD8+T淋巴细胞功能的影响。方法纳入2018年11月-2019年4月在海南省人民医院就诊的ACLF患者28例和健康对照者14例,采用ELISA法检测血清IL-35水平。分选外周血CD8+T淋巴细胞,使用重组人IL-35刺激培养,应用实时定量PCR法检测CD8+T淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA水平,流式细胞术检测CD8+T淋巴细胞中程序性死亡分子-1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达。应用直接接触和间接接触共培养系统将HLA-A2限制性CD8+T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,加入重组人IL-35后通过检测靶细胞死亡比率和细胞因子分泌评估CD8+T淋巴细胞的细胞毒性和非细胞毒性功能的变化。符合正态分布的计量资料2组间比较采用两独立样本t检验或配对t检验;不符合正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验;相关性分析采用Spearman秩相关分析。结果 ACLF患者血清IL-35水平[72. 32(54. 04～111. 30) pg/ml]较健康对照者[46. 00(27. 02～82. 29) pg/ml]显著升高(Z=2. 184,P=0. 020)。ACLF患者存在CD8+T淋巴细胞功能耗竭,主要表现为CD8+T淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量降低、PD-1和CTLA-4阳性细胞比例升高、细胞杀伤(诱导靶细胞死亡)和非细胞杀伤功能(分泌IFNγ)下降(P值均0. 05)。使用重组IL-35刺激后,ACLF患者和健康对照者CD8+T淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA的相对表达量均显著降低,PD-1和CTLA-4的比例则显著升高,CD8+T淋巴细胞的直接细胞杀伤功能均显著降低(P值均0. 05)。结论升高表达的IL-35抑制ACLF患者CD8+T淋巴细胞的直接细胞杀伤功能,提示IL-35在ACLF中可能诱导细胞免疫功能耗竭。     

肝癌耐药细胞中MDR1 mRNA、P-糖蛋白的表达变化及意义

目的观察肝癌耐药细胞中MDR1 mRNA及P-糖蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用药物浓度递增法,诱导产生对盐酸阿霉素（Adr）具有稳定耐药性的肝癌HepG2细胞（HepG2Adr）;采用RT—PCR及免疫组化SP法,分别检测HepG2、HepG2Adr细胞中的MDR1 mRNA、P-糖蛋。结果经0．01、0．10、1．00、10．00μmol／LAdr诱导产生的HepG2Adr细胞中MDR1 mRNA的表达量分别为0．26±0．11、0．56±0．17、10．78±0．2、1．21±0．17,P-糖蛋白阳性表达率分别为15．44％±4．55％、26．76％±5．23％、64．21％±14．22％、90．23％±7．68％;HepG2细胞中MDR1 mRNA、P-糖蛋白分别为0．18±0．08、5．73％±0．52％。肝癌HepG2Adr细胞与HepG2细胞中MDR1 mRNA、P-糖蛋白表达量比较,P均〈0．05;且随着肝癌HepG2Adr细胞耐药性增高,MDR1 mRNA、P-糖蛋白表达量逐渐增高（P均〈0．05）。结论肝癌耐药细胞中MDR1 mRNA及P-糖蛋白高表达,二者可能与肝癌多药耐药的产生有关。     

树突状细胞负载甲胎蛋白、细胞毒性T细胞表位肽后的免疫应答

目的 用负载hAFP 218-226位LLNQHACAV九肽的树突状细胞（dendritic cells,DC)诱导自身淋巴细胞，使之活化为肝细胞癌（HCC）特异性细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL)，并特异性杀伤HCC细胞。方法 在体外用GM-CSF和IL-4诱导HLA-A2^ 健康志愿者外周血单核细胞，使其分化为高纯度DC。用负载hAFP 218-226位LLNQHACAV九肽的DC诱导自身淋巴细胞，使之成为HCC特异性CTL。结果 诱导的DC分泌较高水平的IL-12（17.6-21.5pg/ml)，其中以第7天为最高（21.5pg/ml)，经DC和DC负载AFP表位肽后活化的淋巴细胞培养上清液中TNF水平均比在IL-2条件下培养的未活化淋巴细胞高。L929细胞死亡百分率分别为80.65和11.6%；经DC和DC负载AFP表位肽后活化的淋巴细胞培养上清液中IL-12水平分别为20.5pg/ml和46.9pg/ml，经DC活化后淋巴细胞增殖指数大于3。活化后的淋巴细胞不但特异性杀伤HLA-A2^ 的HCC细胞HepG2和负载AFP表位肽的T2细胞，而且还不同程度杀伤HLA-A3^ HCC细胞Alexander和其它表型HCC细胞，对NK细胞敏感的靶细胞慢性髓原白血病细胞K562也有较强的杀伤作用。结论 负载hAFPHLA-A2限制性CTL九肽的DC对表达AFP HCC的研究和治疗有潜在应用价值。     

胰岛素抵抗肝癌细胞IGF-1R/NF-κB表达及多药耐药机制研究

目的 探讨胰岛素抵抗（IR）肝癌细胞胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和核因子-κB（NF-κB）表达变化及多药耐药（MDR）发生机制。方法 采用高浓度胰岛素诱导人肝癌细胞（HepG2和HepG2.2.15）建立胰岛素抵抗（IR）细胞模型。采用Western blot 法检测胰岛素受体（InsR）、IGF-1R、NF-κB 和 P-糖蛋白（P-gp）表达变化。使用流式细胞仪（Annexin V-FITC法）检测阿霉素对细胞凋亡的影响。结果 分别用100 nmol/L 和 1 000 nmol/L 胰岛素培养 HepG2 和 HepG2.2.15 细胞 48 h,成功建立 IR 肝癌细胞模型;IR 肝癌细胞 IGF-1R、NF-κB、P-gp 表达上调,而InsR 表达下调;应用 25μg/mL 阿霉素作用细胞 24 h 后,IR-HepG2 细胞组凋亡率（31.1%±1.9%）显著低于HepG2 细胞组【（49.7%±2.2%）,P＜0.01】,IR-HepG2.2.15细胞凋亡率【（20.1±1.7） %】显著低于 HepG2.2.15 细胞【（33.8±1.8）%,P＜0.01】;HepG2.2.15 和 IR-HepG2.2.15 细胞凋亡率分别较 HepG2 和 IR-HepG2 细胞显著降低（P＜0.01）。结论 IGF-1R/NF-κB/P-gp 过表达可能介导 IR 肝癌细胞对阿霉素的多药耐药。     

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1及其配体表达的变化

目的 探讨慢性乙型肝炎患者在抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1(PD-1)及其主要配体PD-L1表达的变化情况及其与HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系.方法 对10例人类白细胞抗原(HLA)-A2阳性的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以替比夫定抗病毒治疗24 周,分别于治疗的0、12周和24周随访,检测HBV DNA水平、外周血单个核细胞(PBMC)表面PD-1和PD-L1表达水平、HBV特异性T淋巴细胞数量与其表达PD 1水平,及PBMC体外培养上清液中干扰素(IFN)γ水平.其中HBV DNA定量采用荧光定量PCR法检测;PBMC自新鲜血分离,部分PBMC加入重组HBcAg体外培养7d,加入HBV抗原表位肽五聚体复合体;PD-1和PD-L1阳性细胞、CD8'T淋巴细胞以及CD8和PD-1双阳性细胞用流式细胞仪检测;IFN γ水平用酶联免疫吸附试验检测.比较不同时间点PBMC表面PD-1和PD L1表达水平、HBV特异性CD8'T淋巴细胞数量及其PD-1表达水平、PBMC培养上清液中IFN γ水平.对抗病毒治疗前后对应指标数值的变化采用配对t检验分析.结果 治疗前HBV DNA水平为5.16～8.77 log10拷贝/ml,治疗24周时,7例HBV DNA水平低于检测下限,3例仍可检测到,但明显低于基线水平.2例HBeAg/抗-Hbe血清学转换,2例HBeAg阴转,6例仍维持HBeAg阳性.0、12周和24周PBMC表面PD 1表达水平分别为52.1%±17.0%、39.1%±18.2%和23.4%±16.3%(24周和0周比较,P＜0.01);PD-L1分别为45.6%±15.4%、34.6%±16.2%和20.9%±9.5%(24周和0周,P＜0.01;24周和12周比较P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞上PD-1表达水平分别为76.2%±10.4%、66.5%±15.4%和49.5%±25.3%(24周和0周比较,P＜0.01;12周和0周比较,P＜0.05;24周和12周比较,P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞分别为1.3%±0.5%、1.5%±1.0%和2.2%±1.5%; IFN γ水平(pg/ml)分别为91.7±82.1、99.4+93.5和109.0+86.6.24周HBeAg/抗-Hbe血清学转换者上述指标变化明显大于无HBeAg/抗-Hbe血清学转换者.结论 直接抑制HBV复制能降低PD-1、PD-L1表达水平,并增加HBV特异性CD8'T淋巴细胞的数量和功能.早期PD-1快速下降和HBV特异性T淋巴细胞数量及功能的恢复与早期HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系有待于进一步研究.     

阻断肝再生增强因子表达对HepG2细胞转化生长因子-α及表皮生长因子受体表达的影响

目的用RNA干扰技术阻断人肝再生增强因子（human augmenter of liver regeneration,hALR）表达,观察人肝癌细胞HepG2中转化生长因子-α（transforming growth faetor-α,TGF-α）及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达是否受影响,以阐明hALR在促进肝癌细胞生长的相关细胞因子网络中的作用。方法将构建好的人肝再生增强因子siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B分别转染至HepG2细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,计算转染效率。免疫细胞化学法检测转染细胞中hALR表达,确定抑制效果。根据转染质粒的不同,将HepG2细胞分为3组：转染组（转染pSIALR-A）、阴性对照组（转染pSIALR-B）和空白组（未转染重组质粒）。放射免疫法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞培养上清中TGF-α水平,Western blot法检测阻断肝再生增强因子后各组细胞EGFR蛋白的表达。结果转染组、空白组和阴性对照组TGF-α分别为（5.27±0.86）pg／ml、（7.92±2.65）pg／ml和（6.50±1.28）pg／ml,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义（P％0.05）;EGFR相对表达量分别为0.946±0.136、1.115±0.606和1.131±0.509,转染组与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在促进肝癌细胞生长的细胞因子网络中,肝再生增强因子除了可以直接刺激肝癌细胞增殖外还可通过上调TGF-α及EGFR的表达水平参与肝癌的发生、发展。     

PD-1抑制剂联合仑伐替尼治疗老年中晚期原发性肝癌患者临床疗效研究

目的 探讨应用程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制剂联合仑伐替尼治疗老年中晚期原发性肝癌(PLC)患者的临床疗效。方法 2017年2月～2020年2月我院收治的56例PLC患者被分为对照组28例和观察组28例,分别给予仑伐替尼治疗或替雷利珠单抗联合仑伐替尼治疗。评估客观缓解率(ORR)和局部控制率(LCR)。使用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群、CD4⁺细胞PD-1和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达,采用ELISA法检测血清酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果 在治疗3月末,两组ORR(42.9%对25.0%)和LCR(78.6%对64.3%)比较,无显著性差异(P>0.05);观察组CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺细胞百分比显著高于对照组,而CD4⁺/CD8⁺细胞比值及细胞PD-1和CTLA-4表达显著低于对照组(P<0.05);观察组血清aFGF、b...     

自身免疫性肝炎患者外周血CD8~+T淋巴细胞PD-1表达及意义

目的研究自身免疫性肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞程序性死亡受体1(PD-1)表达的变化。方法选择自身免疫性肝炎患者22例和健康人20例,使用流式细胞仪检测所有被研究者外周血CD8+T淋巴细胞PD-1分子的表达状况,比较不同分期和不同性别疾病患者PD-1表达水平。结果自身免疫性肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-1分子阳性百分比为2.5±0.5%,显著高于健康对照组(0.5±0.1%,P<0.001);自身免疫性肝炎发病期患者CD8+T淋巴细胞表达PD-1百分比为2.6±0.7%,与缓解期比无统计学差异(3.4±0.8%);16例女性AIH患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-1阳性百分比为3.5±0.7%,亦略高于6例男性患者的1.3±0.3%,但无显著统计学差异(P=0.1021),可能与例数较少有关。结论自身免疫性肝炎患者CD8+T淋巴细胞PD-1表达率增加,PD-1可能在自身免疫性肝炎的发病中起了重要作用。     

IPS-1SNP在调控HBV感染后干扰素应答机制的研究

目的：探讨干扰素β启动子刺激因子1（IPS-1）不同单核苷酸多态性（SNP）基因型对HBV感染后干扰素应答作用机制。方法利用IPS-1野生型和rs17857295、rs7262903、rs7269320三种SNP基因型慢病毒表达载体,转染目的细胞HepG2、HepG2．2．15细胞,qPCR检测HBV感染和IPS-1不同SNP基因型对目的基因表达情况的影响,检测细胞转染后IFN-βmRNA表达水平,探讨IPS-1不同SNP基因型对HBV感染后细胞干扰素应答的机制。结果IPS-1rs17857295和rs7262903两种SNP基因型转染HepG2．2．15细胞后,IPS-1基因表达水平显著低于野生型转染组（451．77比712．53,498．71比712．53,P＜0．01）;但IFN-βmRNA表达水平显著高于野生型转染组（分别为5．33比0．98和3．59比0．98,P＜0．01）;rs7269320SNP基因型过表达后,IPS-1基因表达水平显著低于野生型转染组（290．63比712．53,P＜0．01）,但IFN-βmRNA表达水平无明显变化（0．74比0．98）。另外,rs17859295基因型分别转染HepG2和HepG2．2．15细胞后,后者IFN-βmRNA表达水平显著高于前者（5．33比2．25,P＜0．01）。结论IPS-1rs17857295和rs7262903两种SNP基因型HBV感染者,尤其rs17857295SNP基因型,清除病毒的能力可能强于野生型的感染者;而IPS-1野生型和rs7269320SNP基因型HBV感染者可能更易形成病毒感染的慢性化。     

维甲酸诱导基因-I诱导干扰素的产生在乙型肝炎病毒感染清除中的作用

目的探讨维甲酸诱导基因-I(RIG-I)在诱导HBV感染IFN产生中的影响,以期对阐明乙型肝炎慢性化机制,寻找新的治疗靶点提供新的思路。方法以RIG-I表达载体flagRIG-l-ful1转染培养6孔板中的HepG2、HepG2.2.15,24h后用水疱性口炎病毒(VSV)感染细胞,然后在0、8、16和24h收集细胞及培养上清液,采用quantitive RT-PCR、Western印迹检测RIG-I、MDA5、IPS-1、ISG54等基因的表达,ELISA检测培养上清液中分泌的IFN-β水平。结果 HepG2.2.15细胞在VSV感染后IFN-β分泌水平(11.18±1.34)pg/mL明显低于HepG2细胞(275.50±22.97)pg/mL(P<0.01);通过质粒flagRIG-I-ful1转染高表达RIG-I后,HepG2.2.15分泌IFN-β的能力恢复至(548.78±57.99)pg/mL与HepG2细胞(532.10±39.34)pg/mL接近的水平(P=0.7013)。结论 HepG2.2.15细胞感染VSV后IFN产生障碍,高表达RIG-I后IFN表达水平得到恢复,提示RIG-I功能缺陷导致抗病毒免疫应答降低,RIG-I可能在HBV感染清除中起重要作用。     

慢性乙型肝炎患者PD-1/PD-L1信号通路的免疫调节作用研究进展

程序性死亡分子-1（PD-1）是T淋巴细胞膜表面表达的负向协同刺激分子, 与其主要配体（PD-L1）形成通路后,可以减弱T淋巴细胞的免疫反应,甚至导致T淋巴细胞功能衰竭。PD-1/PD-L1信号通路在乙型肝炎病毒感染后的效应T细胞免疫耐受中具有重要作用,阻断该途径可能是抗病毒治疗的方向之一,具有良好的应用前景。