用β葡萄糖苷酶快速鉴定细菌和假丝酵母菌

β葡萄糖苷酶在传统细菌学鉴定中很少应用.近年由于人工合成了此酶的色原底物,已较多地用于自动或人工细菌鉴定装置而受到重视.我们用国产底物建立了此酶的快速检测法并用于细菌和假丝酵母菌的鉴定,报告如下.     

临床常见病原菌16S rDNA单链构象多态性分析

目的 原核生物的rRNA基因位点具有高度的保守性,同时不同种属细菌之间又存在相对稳定的变异性,因此可被用于细菌的分类和鉴定.本研究试图利用16S rRNA基因结合分子生物学方法,达到快速鉴定临床常见病原菌的目的.方法 收集临床常见各种病原菌333株,筛选2对通用引物在5′端用不同荧光标记,然后对细菌基因组DNA进行聚合酶链反应（PCR）扩增,产物在测序仪上通过毛细管电泳-单链构象多态性（CE-SSCP）分析,通过不同细菌的峰谱不同达到快速鉴定病原菌目的.结果 所有受试细菌经过CE-SSCP分析后都有各自不同的峰谱出现,相互之间容易区别.结论 利用PCR-CE-SSCP作为病原菌鉴定手段,高效、准确,较传统方法省时,而且灵敏度较高,是一种很有应用前景的细菌快速鉴定方法.     

细菌微量快速生化鉴定方法学研究

目的建立细菌微量快速生化鉴定系统,用于临床实验室细菌学的快速诊断。方法应用所研制的27种微量快速生化反应试剂与传统试管方法检测208株临床分离菌及8种质控菌株生化反应符合率,依据杭州24 h的JY Z-15E及JY Z-11E肠杆菌生化编码鉴定管的项目要求组合了该法的肠杆菌15种(RE 15n)及肠杆菌11种(RE 11n)生化鉴定试验条,用208株临床分离菌及8种质控菌菌株进行鉴定试验。结果27种细菌微量快速生化反应试剂与传统试管法生化反应总符合率为93.5%~100%。对208株临床分离菌及8株质控菌的菌种鉴定,其完全符合率15种(RE 15n)为99.9%,11种(RE 11n)为100%。8种质控菌株鉴定完全正确。结论用细菌微量快速生化反应系统鉴定细菌,具有简单、快速的特点,无需特殊设备,成本低廉,所得结果准确、可靠,能够满足临床需要。     

基因探针对细菌性腹泻病原菌的检测

随着DNA杂交检测技术的不断改进,特异性病原菌核酸探针的不断发展,探针技术的广泛应用,以及部分核酸探针的商品化.使得基因探针在临床诊断中的作用愈更重要.新近研究表明:核酸探针用于细菌性腹泻病原菌的鉴定,与常规细菌鉴定相比,具有特异、敏感、简便、快速的优点.此外,由于核酸探针能够检测吞噬细胞中死的或活的细菌,所以当血液或粪便标本培养分离不出细菌,或常规细菌试验失败时,DNA探针可对疾病做出诊断.同样,核酸探针还能     

16S rRNA及相关技术用于临床细菌鉴定的研究进展

<正>快速、准确地鉴定细菌是临床微生物学最基本的任务,传统的细菌鉴定方法依赖于直接涂片检查、纯培养,从表型特征方面加以鉴定。该方法繁琐、费时,主要又依赖于专业人员的经验和专业知识。随着核酸技术发展,16SrRNA序列测定被用于细菌分型鉴定,还可用于发现和描述新的细菌种类,尤其是表型鉴定难于确定的细菌。随着细菌基因组研究的进展,利用分子生物学对细菌进行鉴定已初步应用于临床,包括16S     

解析VITEK 2 COMPACT微生物全自动分析系统的质量控制

VITEK 2 COMPACT微生物全自动分析系统是由法国生物梅里埃公司生产的的一种药敏试验和快速细菌鉴定全自动分析设备,系统自带专家分析程序,具有操作方便、方法简单等特征,能够大大缩短常规药敏试验和细菌鉴定所需时间,在最短时间内获得临床用药情况和细菌鉴定试验结果,然而,这一鉴定系统适用范围较小,无法实施完全意义上的无菌操作,因此,在其应用过程中,应由药敏试验和细菌鉴定所用的仪器和试剂质量,以及程序的准确度与精密度出发,在严格执行无菌操作规范的基础上,实施更加有效的质量控制。     

分子生物学技术在微生物学诊断中的研究进展

各种细菌的鉴定技术,对细菌性感染疾病的诊断和流行病学调查是致关重要的.近年来随着医学研究的日益深入,由型、亚型、株基至分子水平上鉴定微生物变得愈来愈重要了.分子生物学理论和技术在微生物学诊断中的渗透和应用,使细菌鉴定更加准确,简洁和快速.细菌质粒DNA分型技术,DNA探针和聚合酶链反应(PCR)等技术的应用是在核酸和分子水平上鉴定细菌的主要进展.本文综述了当前细菌学鉴定和分型时所采用的新技术和意义及其在感染性疾病诊断中的应用.并尽可能的对分子生物学在细菌学诊断中的应用的前景给予简单的介绍.     

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定常见细菌和酵母菌

目的 应用MALDI-TOF MS鉴定临床常见病原菌.方法 复苏560株临床分离株,其中革兰阳性细菌(G+ )260株、革兰阴性细菌(G-)180株、酵母菌60株、肠道致病菌60株.MALDI-TOF MS鉴定结果与Vitek2 Compact全自动微生物鉴定系统比对,结果差异菌株采用16S rDNA测序验证.结果 MALDI-TOF MS与Vitek2 Compact鉴定结果比较,G+细菌鉴定符合率为94.6％( 246/260),G-细菌鉴定符合率为96.7％ (174/180),酵母菌鉴定符合率为95.0％ (57/60),肠道致病菌鉴定符合率为93.3％( 56/60).15株鉴定结果不符的菌株经16S rDNA测序确认,结果与Vitek2Compact和MALDI-TOF MS鉴定符合率分别为26.7％ (4/15)和66.7％( 10/15).结论 MALDI-TOF MS可用于常见病原微生物鉴定,其快速、低成本的特点具有推广价值.     

临床常见病原菌16S rDNA单链构象多态性分析

目的原核生物的rRNA基因位点具有高度的保守性,同时不同种属细菌之间又存在相对稳定的变异性,因此可被用于细菌的分类和鉴定。本研究试图利用16SrRNA基因结合分子生物学方法,达到快速鉴定临床常见病原菌的目的。方法收集临床常见各种病原菌333株,筛选2对通用引物在5′端用不同荧光标记,然后对细菌基因组DNA进行聚合酶链反应(PCR)扩增,产物在测序仪上通过毛细管电泳-单链构象多态性(CE-SSCP)分析,通过不同细菌的峰谱不同达到快速鉴定病原菌目的。结果所有受试细菌经过CE-SSCP分析后都有各自不同的峰谱出现,相互之间容易区别。结论利用PCR-CE-SSCP作为病原菌鉴定手段,高效、准确,较传统方法省时,而且灵敏度较高,是一种很有应用前景的细菌快速鉴定方法。     

McAb—Dot—ELISA对空肠弯曲菌快速鉴定的研究

应用本室研制的抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体。以Dot-ELISA 对空肠弯曲菌进行快速鉴定.通过对实验条件的优选,确定了Dot-ELISA 的工作程序.对两种参考菌株(Pcnner.Loir)、人及10种动物来源的476株空肠弯曲菌进行了鉴定,结果均为阳性反应。可在3h 内报告结果.与11种其它细菌的试验结果表明,除与幽门弯曲茵发生弱阳性反应外,与另外其它10种细菌均为阴性反应.为空肠弯曲菌的鉴定提供了一种特异、快速的方法.     

直接与常规药敏试验在临床血液细菌检验中的应用评价

目的评价直接与常规药敏试验在临床血液细菌检验中的应用。方法选取2018年8月-2019年8月我院检验科收集的需行血液细菌检验的血液样本120份,分别进行直接药敏试验和常规药敏试验,比较两种方法检验细菌的符合率,并记录检测时间。结果两种方法细菌鉴定总符合率为81.67%,其中G+球菌鉴定符合率为72.73%、G-杆菌鉴定符合率为83.67%;直接法检测所需时间(9.84±2.35)h,低于常规法检测所需时间(72.46±8.24)h,比较差异明显(P<0.05)。结论直接药敏试验与常规药敏试验在临床血液细菌检验中的应用效果差异不大,但是直接药敏试验的检测时间较短,能快速确诊病原菌和药敏结果,对于临床早期治疗有利。     

β－葡萄糖醛酸酶试验快速鉴定大肠埃希菌

β－葡萄糖醛酸酶试验快速鉴定大肠埃希菌张永生，凌伟，王靖，郭品娥，张乐之，晏碧君近年，国外以呈色素原和荧光素原为底物作单一酶试验，已用于多种细菌的鉴定。我们参考有关文献根据大肠埃希菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）具有β－葡萄糖醛酸酶，可分解一种新的底物－吲哚酚－β...     

细菌rDNA分类鉴定的方法学研究

目的 研究细菌rDNA快速鉴定方法.方法 以细菌16S rDNA、16S-23S rDNA基因间隔区（ISR）和常见细菌耐药基因为对象,通过改进标本中细菌DNA提取方法,指纹分析、直接测序与多重聚合酶链反应（PCR）技术,建立快速细菌分子鉴定方法.结果 细菌属种不同表现出独特的16S-23S rDNA ISR指纹,在分析软件指导下进行初步细菌鉴定和亲缘关系研究;16S rDNA和16S-23SrDNA ISR序列可确定细菌种与型;序列分析与生化鉴定一致.多重PCR可解决葡萄球菌16S rDNA与mecA基因、产超广谱β内酰胺酶菌16S rDNA与TEM和SHV基因同步检测.结论 细菌rDNA分类方法,提高了非培养细菌的鉴定能力.     

Microflex~(TM) MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对肠杆菌科细菌鉴定能力的比较

目的比较MicroflexTM基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对肠杆菌科细菌的鉴定能力。方法采用MicroflexTMMALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact同时对545株肠杆菌科质控菌株和临床分离菌株进行鉴定,鉴定结果不一致者采用沙门菌血清凝集试验或细菌16S r DNA基因测序予以确证。结果 MicroflexTMMALDI-TOF MS对545株细菌的种和属的鉴定率分别为97.1%、2.9%。Vitek 2 Compact对545株细菌的种、群、属的鉴定率分别为83.3%、13.9%和2.2%,鉴定错误率为0.2%,未鉴定率为0.4%。结论 MicroflexTMMALDI-TOF MS对肠杆菌科细菌的鉴定符合率高于Vitek 2 Compact,且操作快速、简便,成本低,可用于临床肠杆菌科细菌的常规快速鉴定。     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

用快速发酵试验测定娇嫩细菌的碳水化合物反应

用肉汤法测定娇嫩细菌分解碳水化合物产酸的能力,一般需要较长的时间.某些细菌的生长须要在培养基中添加血清或其它营养成份.用快速发酵试验(Rapid Fermentation test RFT)鉴定淋病双球菌可以得到可靠的结果.作者将Brown氏法进行改良以适于鉴定其它娇嫩细菌.试验所用试剂有:①20%碳水化合物肉汤溶液:碳水化合物20.0克,蛋白胨10.0克,肉膏3.0克,氯化钠5.0克,蒸溜水1000毫升,校正pH7.0,过滤除菌.②缓冲盐     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

对血培养阳性标本直接检测的评估

菌血症和败血症是临床上严重危及患者生命的疾病 ,进展迅速、死亡率较高[1 ] 。快速准确地检测出血液中细菌进行鉴定和药敏试验 ,是临床有效诊断和治疗的关键。对此 ,我们对ＢＡＣＴＥＣ90 50全自动血培养仪检出阳性瓶培养液 ,直接用于美国德灵公司ＷａｌｋＡｗａｙ40型自动鉴定系统上机进行药敏试验。报告如下。1 标本来源 :自 2 0 0 0年 1 1月～ 2 0 0 1年 8月本院急诊及各病区发热有全身感染症状患者的 30 2份血标本。2 血培养瓶 :一次性全封闭树脂血培养瓶 ,采用ＢＤ公司ＢＡＣＴＥＣ90 50系统培养仪 ;细菌鉴定和药敏试验鉴定板 :采用…     

CEC—Ⅰ微机在细菌鉴定中的应用

本文简要介绍应用微机鉴定细菌的基本原理和方法,以及我们利用 CEC—I 微机在肠杆菌科细菌鉴定中做的一些工作和几种实用的 CEC—I 微机细菌鉴定软件。1 基本原理人工鉴定细菌的传统方法是先根据细菌的形态、染色特性和简单生化反应初步确定其科或属的分类,然后通过详细的生化反应试验鉴定到种。所