过表达GATA-4的小鼠骨髓间充质干细胞改善小鼠心肌梗死后的心功能

目的探讨过表达GATA-4的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对小鼠心肌梗死后心功能的影响。方法通过慢病毒载体携带GATA-4感染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4的小鼠BMSCs。将过表达GATA-4-BMSCs,空载体-BMSCs(NC-BMSCs)及BMSCs用于低氧培养诱导细胞凋亡。48 h后,用流式细胞计量术检测细胞凋亡率;用Western blot检测caspase-3、caspase-9和β-actin及细胞色素C的表达。给心肌梗死模型小鼠尾静脉注射上述细胞,用心脏彩超检测48 h心功能;用TUNEL技术检测心肌梗死局部凋亡细胞数量。结果过表达GATA-4-BMSCs组与BMSCs组、NC-BMSCs组比较具有较强的抗凋亡能力(P0.05)。GATA-4-BMSCs组的caspase-8和cytochrome C表达量最低(P0.05)。过表达GATA-4-BMSCs对射血分数及左室短轴缩短率改善幅度最大(P0.05)。48 h后,过表达GATA-4-BMSCs组心肌梗死局部凋亡细胞数量减少(P0.05)。结论过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强BMSCs抗凋亡,有效改善小鼠心肌梗死后的心功能。     

低浓度H_2O_2预处理增强小鼠BMSCs抗氧化应激损伤能力

目的探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路介导的低浓度过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)抗氧化应激损伤的作用及机制。方法通过差速贴壁法分离培养小鼠BMSCs。BMSCs经或不经低浓度(50μmol/L)H_2O_2预处理12 h,再暴露于不同高浓度H_2O_2(200、250、300和500μmol/L)刺激24 h后,流式细胞术检测BMSCs凋亡;低浓度H_2O_2预处理12 h再暴露于300μmol/L H_2O_224 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达以及对PI3K/Akt/m TOR信号通路的影响。结果 H_2O_2呈浓度依赖性诱导BMSCs凋亡,50μmol/L H_2O_2预处理可降低200~500μmol/L诱导的BMSCs凋亡率,以及能降低300μmol/L诱导的促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3的上调和抗凋亡蛋白Bcl-2及磷酸化Akt和m TOR蛋白的表达的下调(P0.05,P0.01);PI3K抑制剂LY294002可明显地阻断H_2O_2预处理引起的上述变化。结论低浓度H_2O_2预处理通过活化PI3K/Akt/m TOR信号通路增强骨髓间充质干细胞的抗氧化应激损伤能力。     

经bcl-2基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对缺血性心功能不全兔心功能及血管新生的影响

目的:探讨经bcl-2基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对急性心肌梗死家兔心肌细胞凋亡、血管再生及心功能的影响。方法:体外分离、培养、纯化兔BMSCs,分别转染腺病毒及重组腺病毒-Bcl-2。结扎兔冠状动脉前降支制作心肌梗死(MI)模型,2周后于心梗边缘区分别注射等量的腺病毒-Bcl-2-BMSCs(MI+Bcl-2-BMSCs组)、腺病毒-BMSCs(MI+BMSCs组)及DMEM液(MI组)。细胞移植4周后经超声测定心功能;荧光显微镜观察BMSCs的存活及分布;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;real-time PCR检测VEGF mRNA表达;免疫组化染色法检测CD31表达,计算新生毛细血管密度。以上数据分别与心功能进行相关性分析。结果:与MI组相比,MI+Bcl-2-BMSCs组和MI+BMSCs组的心功能改善、细胞凋亡率降低、VEGF mRNA表达增多、毛细血管密度增加,其中MI+Bcl-2-BMSCs组的变化更为显著(P0.05)。相关性分析显示左室射血分数与心肌细胞凋亡率呈负相关;与VEGF mRNA的表达量及毛细血管密度呈正相关(P0.01)。结论:经bcl-2基因修饰的BMSCs移植可显著减少缺血性心功能不全兔心肌细胞凋亡、促进血管再生、改善心功能。     

血红素氧合酶1提高骨髓间充质干细胞在梗死后心脏的存活

背景：移植骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)修复梗死后心功能受到围移植期移植细胞大量死亡的限制。因此寻找一种保护因子对移植细胞提供保护至关重要。 目的：观察血红素氧合酶1(heme oxygenase,HO-1)对BMSCs在梗死后心脏生存的影响。 方法：体外分离扩增培养大鼠BMSCs,Adv-hHO-1、Adv-GFP分别转染,移植前DAPI标记。结扎左前降支1 h后,分别将DAPI-hHO-1-BMSCs、DAPI-GFP-BMSCs多点注射到大鼠心脏梗死区周边,对照组注射等量PBS。 结果与结论：Adv-hHO-1转染BMSCs后获稳定表达。仅hHO-1-BMSCs组稳定表达hHO-1 mRNA;hHO-1-BMSCs组血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子表达均高于其他两组(P < 0.01);存活BMSCs数量在第3,7天均明显高于GFP-BMSCs组(P < 0.05);大鼠心功能各项参数明显优于其他两组(P < 0.01)。移植4周后,HO-1-BMSCs组梗死区周边毛细血管密度明显高于GFP-BMSCs组和对照组(P < 0.01),且胶原蛋白沉积减少,心室壁变厚,梗死面积较其他两组明显缩小(P < 0.01)。提示HO-1提高移植到梗死心脏BMSCs的存活,HO-1协同BMSCs抑制心室重构,改善心功能。     

γ-干扰素通过激活JAK/STAT信号转导途径上调小鼠系膜细胞内HMGB1表达

目的:本实验以小鼠系膜细胞为研究对象,IFN-γ为刺激物,通过检测JAK/STAT信号途经的激活及HMGB1mRNA及蛋白表达,探讨γ干扰素刺激系膜细胞HMGB1表达上调的可能机制。方法:常规培养小鼠系膜细胞(Mousemesangial cell,MMC),无血清培养基同步化后分为正常对照组、IFN-γ(500 U/ml)刺激组和INF-γ+AG490(INF-γ500 U/ml+AG490 200μmol/ml)组。Western blot检测JAK、STAT1和HMGB1蛋白的表达变化,RT-PCR检测HMGB1mRNA的表达变化。结果:Western blot结果显示IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞JAK、STAT1磷酸化和STAT1核转位,并呈时间依赖性;AG490能够降低IFN-γ介导的JAK1、JAK2、STAT1的活化,并呈时间依赖性。IFN-γ能够上调系膜细胞中HMGB1mRNA及蛋白表达,并随着刺激时间延长,其相对表达量呈上升趋势,AG490处理后,系膜细胞中HMGB1mRNA蛋白表达降低,并随时间延长而下调。结论:IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞HMGB1表达上调,JAK/STAT信号通路激活可能是其主要机制之一。     

葫芦素B对小鼠淋巴细胞活化、增殖和凋亡的影响

目的分析葫芦素B(CuB)对多克隆丝裂原激活的小鼠淋巴细胞活化、增殖、凋亡和γ-干扰素(IFN-γ)表达的影响,探讨其免疫调节作用的机制。方法经CuB处理的小鼠淋巴细胞,在刀豆蛋白(ConA,5μg/ml)或者佛波醇酯(PDB,10-7 mol/L)和离子霉素(Ion,0.5μg/ml)刺激后,细胞计数观察CuB对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析CD69和IFN-γ的表达及亚二倍体峰和线粒体膜电位的变化;免疫印迹分析Caspase 3的活化水平。结果细胞计数分析显示,CuB对小鼠淋巴细胞增殖的抑制呈剂量依赖关系。对细胞DNA含量分析表明,随着CuB浓度的增加,处于亚二倍体峰(即凋亡峰)的细胞数量增加。同样,经CuB处理后,早期活化标志CD69和IFN-γ在CD3+T细胞中的表达均受剂量依赖性抑制。JC-1染色结果表明,10μmol/L CuB能显著使小鼠淋巴细胞的线粒体膜电位发生下降(P<0.01)。免疫印迹分析表明,10μmol/L CuB处理24 h后,Caspase 3明显活化。结论 CuB对小鼠淋巴细胞的增殖和活化具有明显抑制作,可以诱导体外培养的小鼠淋巴细胞发生凋亡,具有潜在的抗炎免疫调节活性。     

IL-6促进小鼠小胶质细胞系BV2坏死性凋亡

目的 探究在神经炎性反应中小胶质细胞凋亡的调控机制。方法 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠小胶质细胞系BV2,构建神经炎性反应细胞模型,使用白介素-6(IL-6)拮抗剂塞妥昔单抗(siltuximab)处理LPS诱导的BV2细胞。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6与TNF-α含量;RT-qPCR检测BV2细胞M1极化标志物IL-1β、IFN-γ与M2极化标志物CD206、Arg-1表达;Western blot检测JAK-STAT3信号通路关键蛋白及坏死性凋亡相关蛋白(RIP1)和RIP3表达。结果 LPS诱导后BV2细胞的增殖活力下降,凋亡增加,炎性因子IL-6与TNF-α含量增加(P<0.01)。M1极化标志物IL-1β、IFN-γ表达增加(P<0.01),M2极化标志物CD206、Arg-1表达减少(P<0.01)。JAK-STAT3通路关键蛋白磷酸化增加(P<0.01),RIP1、RIP3蛋白表达增加(P<0.01)。IL-6拮抗剂siltuximab处理细胞后,JAK-ST...     

M2型肿瘤相关巨噬细胞通过p53途径下调肝癌化疗敏感性的机制研究

目的 通过研究M2肿瘤相关巨噬细胞调控p53表达来下调肝癌化疗敏感性的机制,以此拓宽建立抗肿瘤耐药的措施.方法 构建小鼠肝癌模型及分离肝癌组织,研磨组织提取巨噬细胞,通过RT-PCR方法检测巨噬细胞表面CD206及CD163分子表达情况.培养人单核巨噬细胞(THP-1),PMA (100ng/mL)和IL-4 (100ng/mL)作用诱导分化成肿瘤相关巨噬细胞后,与肝癌细胞(HepG2、SMMC7721,Hep 3B)共培养,加入奥沙利铂(20μ g/mL)作用24小时,通过Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase 3、抗凋亡蛋白Bcl-2及p53的表达,通过MTT方法检测化疗对肝癌细胞增殖情况.结果 成功构建了肝癌模型,分离出了肝癌组织巨噬细胞,RT-PCR检测CD206和CD163的表达显著升高;人单核细胞(THP-1)经加入PMA(100ng/mL)和IL-4 (100ng/mL)分化诱导48h后其细胞的表面CD206和CD163的表达明显高于THP1分化诱导的细胞表面表达量;肝癌细胞SMMC7721和HepG2与M2型肿瘤相关巨噬细胞共培养24h,经奥沙利铂作用后,肿瘤细胞Bcl-2表达明显升高,Caspase 3和p53的表达显著降低;肿瘤细胞的增殖抑制率明显降低,而Hep 3B细胞的凋亡则明显降低.结论 M2型肿瘤相关巨噬细胞调控肝癌细胞中p53的表达,进而抑制了肝癌化疗的敏感性.     

人乳头瘤病毒16型E4蛋白表达、纯化及抗血清制备

目的 表达人乳头瘤病毒16型(HPV16) E4蛋白,并制备小鼠抗HPV16 E4血清.方法 将HPV16 E4基因克隆入pQE30,重组质粒pQE30-HPV 16E4经鉴定后转化大肠埃希菌M15(PREP4),诱导表达并鉴定表达产物.因纯化、变性和复性方法,制备可溶性HPV16 E4蛋白.免疫Bal B/C小鼠制备抗血清,检测小鼠IFN-γ水平、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化.结果 酶切和测序结果表明pQE30-HPV16F4构建成功.表达分子相对分子量(Mr)为10 000,Western blot法证明具有较高特异性.小鼠抗血清效价升高,CD4/CD8无升高,小鼠γ干扰素(IFN-γ)无升高.结论 成功制备可溶性HPV16 E4蛋白和小鼠抗HPV16 E4高效价的抗血清.     

PcDNA3.0/p27~(kip1)真核表达质粒对小鼠哮喘模型Th1/Th2的影响

目的:探讨细胞周期负性调控蛋白PcDNA3.0/p27kip1重组真核表达质粒转染小鼠哮喘模型对Th1/Th2比例失衡的调节作用。方法:小鼠各10只分为A组(正常对照组)、B组(哮喘模型组)、C组(质粒治疗组)三组。用卵蛋白致敏法构建小鼠哮喘模型,以本实验室构建的PcDNA3.0/p27kip1重组真核表达质粒经静脉转染小鼠哮喘模型,36小时后Western blot检测肺组织中p27蛋白表达量;流式细胞仪分析小鼠脾CD4+、CD8+T细胞比例;ELISA检测小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平。结果:B组与A组比较,哮喘发病后肺p27蛋白表达量明显降低;脾CD4+T细胞显著增高而CD8+T细胞显著降低;血清IL-4、IL-5、IL-13水平明显升高而IFN-γ明显降低。C组与B组比较,肺p27蛋白表达量明显增加,脾CD4+T细胞比例显著降低而CD8+T细胞显著升高;血清IL-4、IL-5、IL-13水平明显降低而IFN-γ明显升高。结论:PcDNA3.0/p27kip1静脉给药可在哮喘模型肺组织中表达,并通过基因干预调控细胞周期的方式调节Th1/Th2比例失衡,为哮喘防治提出了新思路。     

骨髓间充质干细胞异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法全骨髓贴壁培养法获得大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞免疫表型,并诱导成骨方向分化。取雌性C57BL/6小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组和大鼠BMSCs组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35~55联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。小鼠免疫后38d和48d腹腔注射PBS或大鼠BMSCs进行治疗,神经功能评分观察各组小鼠神经功能变化。二次治疗12d后取各组小鼠脊髓、脾脏和外周血。HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾脏制成单细胞悬液,细胞CFSE标记后10mg/L刀豆球蛋白(Con A)和MOG_(35~55)刺激培养3d,观察脾细胞增殖情况。ELISA检测大鼠BMSCs移植后外周血细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)含量。结果流式细胞术显示,大鼠BMSCs第3代(P3)细胞表达抗原CD29、CD90、CD106,不表达CD45。体外诱导其能向成骨分化。小鼠发病后,大鼠BMSCs组小鼠神经功能缺损症状较PBS组减轻,评分降低。HE染色和Luxol fast blue染色结果显示,大鼠BMSCs组脊髓炎细胞浸润和脱髓鞘比同时间点PBS组减轻(P0.05)。Con A和MOG_(35~55)刺激培养后,PBS组和大鼠BMSCs组脾细胞增殖增加,而大鼠BMSCs组又较PBS组降低。与PBS组相比,大鼠BMSCs组血浆细胞因子IFN-γ、IL-17含量降低(P0.05)。结论全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化BMSCs,大鼠BMSCs异体移植对小鼠EAE模型有治疗作用。     

基质细胞衍生因子-1_α/CXCR4/CXCR7轴对骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中蛋白和mRNA的表达;及SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴对BMSCs迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100及CXCR7中和抗体分别阻断CXCR4及CXCR7,通过Western blotting和RT-PCR分别检测BMSCs蛋白和mRNA的表达变化;Transwell法检测细胞迁移能力。本次实验分为单纯BMSCs组(A)、AMD3100预处理BMSCs组(B)、CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(C)及AMD3100+CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(D)。结果经鉴定第3代大鼠BMSCs中CD29和CD44均呈阳性表达,而CD34表达阴性。BMSCs中CXCR4、CXCR7蛋白和mRNA均有表达。与A组相比,B组及D组CXCR4及CXCR7蛋白表达明显受到抑制(P0.05),C组只有CXCR7蛋白表达降低(P0.05);各组CXCR4 mRNA和CXCR7 mRNA的表达差异均无显著性。SDF-1α可以诱导BMSCs迁移,与0μg/L组相比,10μg/L组和100μg/L组穿膜细胞数均显著增多(P0.01),与10μg/L组相比,100μg/L组穿膜细胞数亦明显增多(P0.01);AMD3100和CXCR7中和抗体均能抑制BMSCs的迁移作用(P0.05),当两者同时作用时,抑制效应更为显著(P0.05)。结论 BMSCs共表达CXCR4、CXCR7蛋白及mRNA;BMSCs的迁移具有SDF-1α浓度依赖性;SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴介导BMSCs的迁移作用,CXCR4受体和CXCR7受体对BMSCs的迁移可能具有协同促进作用。     

Striatal extracts promote the dopaminergic differentiation of GFP-bone mesenchymal stem cells

Bone mesenchymal stem cells (BMSCs) are an attractive donor graft source because of the potential of self-renewal and multi-direction differentiation. However, it is a great challenge to induce BMSCs to specifically differentiate to dopamine (DA) neurons for the treatment of Parkinson's disease. Because the striatum is the target tissue for the projection of DA neurons in the midbrain, we investigated whether its extracts could promote the dopaminergic differentiation of BMSCs. BMSCs were isolated from green fluorescent protein (GFP) transgenic mice. Flow cytometry was used to identify the expression of CD29 and CD11b in cultured BMSCs; and immunochemical staining was employed to determine the differentiation of BMSCs. Our results showed that striatal extracts could induce differentiation of BMSCs into both neurons and glia, especially the DA neurons. When transplanted to the rat striatum, GFP-BMSCs could differentiate into tyrosine hydroxylase positive neurons and demonstrate potential migration in the brain. Taking together, our results suggest that striatal extracts can specifically promote the dopaminergic differentiation of GFP-BMSCs, thereby providing a feasible strategy for the treatment of Parkinson's disease.     

心复康含药血清对骨髓干细胞转录和分泌SDF-1α的影响

目的 研究心复康含药血清对骨髓干细胞（BMSCs）中间质源性细胞因子α（SDF-1α）mRNA表达和蛋白分泌的影响.方法 采用全骨髓培养法分离和扩增BMSCs,并用流式细胞仪进行鉴定.以定量PCR（q-PCR）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）分别检测含药血清作用后BMSCs中SDF-1α mRNA表达和蛋白分泌的改变情况.结果 经心复康含药血清作用72 h后,SDF-1α mRNA的表达量明显增加,实验组约为对照组的200倍（P＜0.05）;SDF-1α蛋白分泌量增加近1倍（P＜0.05）,其中实验组为（277.561 1±15.651 8）pg/ml,对照组（153.107 1±14.765 1）pg/ml.结论 全骨髓培养法可获得高纯度的BMSCs,含药血清可明显促进SDF-1αmRNA的表达及其蛋白分泌.     

小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞表面标记表达的比较

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)和骨髓源间充质干细胞(BMSCs)表面标记表达的差异。方法分别对小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞进行成骨、成脂、成心肌分化诱导、鉴定;流式细胞术与细胞免疫荧光法检测CD29、CD44、CD45和CD73的表达并进行比较。结果 BMSCs形态均一,呈长梭形;ADMSCs形态多样,呈梭形、星形、多角形等,胞体较大,表面分泌物较多;两者均可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和心肌样细胞。流式细胞术检测显示,BMSCs表面分子CD29、CD44和CD73表达率分别为(83.43±1.97)%、(90.33±0.81)%、(2.63±0.42)%;ADMSCs表面分子CD29和CD44的表达率分别为(53.1±1.05)%、(34.8±2.1)%,CD73表达不稳定,在1.8%~19.7%之间波动。两种细胞均不表达造血干细胞标记物CD45。免疫荧光显示,CD73分子与部分CD29、CD44阳性细胞共表达。结论小鼠BMSCs和ADMSCs均具有成脂、成骨、成心肌分化能力,但是在形态上和分子表达上均存在差异。BMSCs的CD44和CD29表达高于ADMSCs;而CD73的表达则相反,CD73在两种细胞的表达均较低,在ADMSCs的表达不稳定。     

改良法体外分离培养成年大鼠骨髓间充质干细胞实验研究

目的寻找一个稳定、快速、获取大量高纯度的成年骨髓间充质干细胞(BMSCs)的实验方法,为组织工程种子细胞来源提供实验依据。方法使用全骨髓贴壁法分离成年大鼠BMSCs,设立含10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养组为对照组,含10%FBS、10ng/mL表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12培养组为实验组,倒置显微镜下观察比较两组原代、传代后BMSCs的形态及生长情况,使用流式细胞仪检测实验组P6、P10细胞表面标记。结果实验组原代细胞达融合的时间为5～6d,对照组为7～9d。传代后实验组细胞贴壁伸展的时间为2h,而对照组为6h。对照组p1细胞达融合时间为5～6d,实验组P1细胞达融合时间为4d,流式细胞仪检测实验组P6、P10BMSCs,发现P6细胞92%细胞表达CD29,3.5%细胞表达CD44,有14%的细胞表达CD45;而P10BMSCs抗原表达具有较高的均一性,CD29/CD44强阳性表达,仅有2%的细胞表达CD45。结论 10%FBS、10ng/mL表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12全骨髓贴壁法培养BMSCs能够稳定、简便、快速获取大量高纯度成年大鼠BMSCs,满足组织工程对种子细胞的要求。     

奥氮平对骨髓间充质干细胞成脂分化的作用及机制

目的探讨第2代抗精神病药物(SGA)奥氮平(olanzapine)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外脂肪分化的影响及其作用机制。方法培养小鼠BMSCs,MTT法检测不同浓度奥氮平对BMSCs增殖的影响;通过油红O染色观察细胞形态,Western blotting检测脂肪分化标志基因蛋白αP2和C/EBPβ的表达,Real-time PCR检测成脂相关基因Leptin、C/EBPα和TNF-α的mRNA表达情况;同时Western blotting检测Akt信号通路上下游相关分子的表达水平及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt特异性阻断剂对小鼠BMSCs脂肪分化的影响。结果 MTT法结果显示,20μmol/L奥氮平对BMSCs的毒性最小;油红O染色可见加入奥氮平的细胞内脂肪滴明显多于对照组;Western blotting结果显示,αP2和C/EBPβ的表达水平较对照组上升了36%(P0.01)和25%(P0.05);Realtime PCR结果显示,Leptin、C/EBPα和TNF-α的表达水平较对照组分别上升68%(P0.001)、79%(P0.01)和60%(P0.01),均具有统计学意义;Western blotting检测结果显示,p-Akt的含量明显高于对照组,磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)的表达随着p-Akt表达的增加逐渐减少;加入PI3K/Akt特异性阻断剂(LY294002)后αP2和C/EBPβ的表达受到抑制,细胞中的脂肪滴也明显减少。结论奥氮平可能通过促使PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平升高来促进小鼠BMSCs的脂肪分化。     

干扰素-γ诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞表达细胞黏附因子-1和干扰素-γ受体α

目的 以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)为研究对象,探讨干扰素-γ(IFN-γ)对于体外培养的RIMMVECs表达细胞黏附因子-1(ICAM-1)和IFN-γ受体α(IFN-γRα)的影响.方法 体外分离培养RIMMVECs,用不同浓度的IFN-γ对所培养的RIMMVECs进行诱导,通过荧光定量RT-PCR法和流式细胞术,从mRNA和蛋白水平检测活化后的RIMMVECs表达ICAM-1和IFN-γRα的情况.结果 浓度为20 μg/L和40 μg/L的 IFN-γ可以激活RIMMVECs,在mRNA和蛋白水平均能提高ICAM-1的表达,并且6 h时达到高峰;20 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs后,可使其上调表达IFN-γRα mRNA,但是蛋白表达量却随着刺激时间逐渐降低;而40 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs 2 h后,IFN-γRα mRNA 达到峰值,6 h之后,其表达量呈下降趋势,IFN-γRα蛋白浓度也随之逐渐降低;10 μg/L的IFN-γ对于ICAM-1和IFN-γRα的表达无影响.结论 IFN-γ可能是通过影响微血管内皮细胞(MVECs)表面IFN-γRα分子和ICAM-1的表达,从而调控和参与细胞免疫反应和炎症反应.     

嗜酸性粒细胞通过调节巨噬细胞极化减轻脂多糖诱导的急性肺损伤

目的：观察体外嗜酸性粒细胞（Eos）对巨噬细胞极化的影响,以及体内注射嗜酸性粒细胞对脂多糖（LPS） 诱导的急性肺损伤（ALI）的作用及其相关机制。方法：原代培养小鼠巨噬细胞,在嗜酸性粒细胞存在或不存 在的情况下,将细胞暴露于脂多糖和干扰素-γ（IFN-γ）以模拟ALI,采用荧光定量PCR 检测各组巨噬细胞中促 炎及抗炎因子的表达,采用免疫印迹法检测巨噬细胞过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPARγ）蛋白的表达;将 PPARγ siRNA（si-PPARγ）转染小鼠巨噬细胞,采用免疫印迹法检测巨噬细胞的极化情况;Balb/c 小鼠随机分为 对照组、ALI 组和ALI+Eos 组,ALI 组为通过气管内注射LPS 诱导ALI,ALI+Eos 组给予尾静脉注射嗜酸性粒细 胞,对照组尾静脉注射生理盐水。监测动物7 d 的存活情况。在LPS 注射后3 h 和24 h 处死动物,通过组织学评估 左肺损伤程度,荧光定量PCR 检测右肺促炎和抗炎细胞因子mRNA水平,采用免疫印迹法检测右肺组织PPARγ 蛋白的表达,流式细胞术检测肺泡巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和CD206 的百分比。结果：与嗜酸性 粒细胞共培养后,用LPS+IFN-γ 刺激巨噬细胞,其肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-6 mRNA水平 呈剂量依赖性下降;而IL-10 mRNA 水平和PPARγ 活性呈剂量依赖性增加。巨噬细胞与嗜酸性粒细胞共培养后, 其iNOS 表达增加和重组人精氨酸酶1（Arg1）表达减少,呈剂量依赖性逆转。转染si-PPARγ 抑制了嗜酸性粒细 胞促进巨噬细胞向M2表型分化的作用。静脉注射嗜酸性粒细胞显著提高了ALI 小鼠的存活率,且显著改善小鼠 的肺组织损伤,降低肺组织IL-6 和TNF-α mRNA水平,增加IL-10 mRNA 水平和PPARγ 活性。此外,嗜酸性粒 细胞干预增加了肺泡巨噬细胞CD206 的百分比,而iNOS 的百分比明显降低。结论：嗜酸性粒细胞通过促进巨噬 细胞M2型极化改善LPS 诱导的ALI。