AML—M5b外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点

目的研究AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点，并分析分选的患者T细胞经体外诱导、活化及短期培养后其TCR Vβ亚家族的利用及克隆性增殖情况。方法运用RT—PCR-基因扫描技术分析初治AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族利用和克隆性增殖，免疫磁珠分选患者T淋巴细胞，体外利用自体白血病DC细胞联合CD3单抗、CD28对T细胞进行诱导、活化，并对诱导后T细胞进行TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖分析。结果9例患者T细胞在体外获得增殖，TCR即分析显示患者外周血T细胞均表达部分Vβ亚家族，体外诱导前后的T细胞TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖特点不完全相同，有部分出现新的邯亚家族表达及克隆性增殖，有部分Vβ亚家族在诱导前后始终表现为克隆性增殖，体外杀伤性分析发现诱导后的T细胞对自体白血病细胞具有一定的识别作用。结论AML—M5患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖，部分Vβ亚家族T细胞在诱导前后始终保持克隆性增殖状态，可能是机体针对白血病相关抗原的特异性CTL，体外诱导活化及短期培养后患者T细胞TCR Vβ亚家族表达数量增加，并出现新的克隆性增殖Vβ亚家族T细胞，提示体外诱导活化能够产生白血病患者自体的白血病特异性CTL。     

中老年男性非小细胞肺癌患者TCR Vβ基因表达谱分析

目的分析非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）T细胞受体（TCR）Vβ基因在中老年男性患者外周血的表达情况。方法分离健康人及患者外周血的T细胞,用流式细胞术分析TCR Vβ各亚家族表达谱,统计分析其特点。结果患NSCLC的中老年男性外周血中TCR Vβ部分亚家族高表达,其中CD8＋TCR Vβ3、4、9表达有统计学意义（P均〈0.05）,同时CD8＋TCR Vβ3与Vβ4两基因表达有相关性;r=0.541,P=0.008。结论患NSCLC的中老年男性CD8＋TCR Vβ在外周血呈倾斜性分布,推测与肿瘤表位特异性表达有关。     

晚期肺癌患者胸水及外周血中T细胞受体(TCR)Vβ亚家族表达的对比研究

目的探讨晚期肺癌患者(Ⅲ～Ⅳ期)胸水及外周血中T细胞受体Vβ亚家族的表达,比较二者的异同。方法收集2010年7月至2012年5月共89例临床诊断为肺癌晚期的患者胸水及外周血标本,采用流式细胞仪方法测定其T细胞受体Vβ亚家族的表达情况,统计分析胸水及外周血中Vβ亚家族表达的异同。结果 89例晚期肺癌外周血和胸水均主要高表达Vβ3和Vβ9,分别为Vβ3(16/89)、Vβ9(18/89)和Vβ3(20/89)、Vβ9(15/89);患者胸水与外周血Vβ亚家族存在差异,部分差异有统计学意义(P<0.05),部分差异无统计学意义(P>0.05),其中胸水中Vβ3的高表达相对于患者外周血和健康人差异均有统计学意义(P<0.05)。结论晚期肺癌患者胸水及外周血中Vβ亚家族的表达不全相同;晚期肺癌胸水中的高表达Vβ亚家族少于外周血,其中Vβ3在胸水中可能有特异性。此研究为晚期肺癌的生物治疗及T细胞过继免疫疗法在临床中的应用奠定理论基础。     

淋巴细胞白血病和淋巴瘤T细胞受体基因重排研究

目的：探讨淋巴细胞白血病及淋巴瘤的T淋巴细胞受体（TCR）Vβ亚家族分布特点。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测急性淋巴细胞白血病5例,慢性淋巴细胞白血病2例,弥漫大B淋巴瘤3例及外周T淋巴瘤3例患者的外周血或淋巴结T淋巴细胞TCR Vβ亚家族表达。对照组为健康人8例。结果：对照组健康8例外周血淋巴细胞表达全部24个Vβ亚家族。急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞TCR Vβ亚家族均呈限制性表达,外周T淋巴瘤2例和弥漫大B淋巴瘤1例Vβ亚家族呈限制性表达,另外3例表达未受抑制。而淋巴瘤患者淋巴结标本Vβ亚家族全部呈限制性表达。结论：TCR基因重排对淋巴瘤和淋巴细胞白血病的诊断有辅助作用。     

脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD分子机制的初步研究

目的:初步探讨成人脂肪源间充质干细胞(adult adipose tissue-derived mesenchymal stemcells ,AMSC)治疗急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease ,aGVHD)的分子机制。方法:3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD患者,以每公斤体重2×106个细胞剂量静脉输注AMSC;应用RT-PCR扩增患者AMSC使用前后外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族的CDR3 ,了解患者TCR VβT细胞的分布情况。结果:患者发生aGVHD时,有TCR Vβ3及其他亚家族基因表达,输注AMSC后,GVHD得以有效控制,Vβ3不表达;当患者GVHD复发时,Vβ3基因又表达,治疗后不表达。结论:AMSC治疗aGVHD的分子机制可能与其抑制TCR Vβ亚家族基因表达有关,TCR Vβ3可能是AMSC作用的靶基因。     

CML患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 了解慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者慢性期(chronic phase,CP)和缓解期(complete remission,CR)外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)Vδ亚家族T细胞的分布和克隆性情况.方法 利用RT-PCR扩增8例CML-CP和8例CML-CR患者外周血T细胞中8个Vδ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解TCR Vδ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性.10例健康人外周血作为对照.结果 8例CML-CP患者外周血T细胞平均表达(3.25±0.89)个Vδ亚家族,主要以Vδ1、Vδ2和Vδ3的表达为主,而8例CR期患者则平均表达(3.50±0.76)个Vδ亚家族,主要集中在Vδ1、Vδ2、Vδ3和Vδ8中表达;两组与健康对照组(3.50±0.52)比较无统计学意义.此外,Vδ8表达频率在CML-CR患者(5/8)中略高于健康人(3/10)和CML-CP患者(2/8).基因扫描绝大多数患者和健康人外周血TCR Vδ亚家族T细胞均存在克隆性增殖现象,主要以Vδ1-Vδ3为主,但在CML-CR患者中,表达V87亚家族的两例样本均呈克隆性增殖,这在10例健康人中均未检测到.结论 3组样本的外周血T细胞中TCR Vδ谱系和克隆性增殖类似,提示CML患者T细胞免疫抑制可能并不主要累及TCR Vδ谱系变化,并在CML-CR期所出现了一些不同的Vδ表达和克隆模式.     

APL细胞诱导脐血TCR Vα和Vβ亚家族T细胞增殖和细胞毒性研究

目的 了解急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞体外诱导脐血T细胞的TCR Vα和Vβ亚家族克隆性增殖及针对APL细胞特异性杀伤情况.方法 采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用APL细胞体外诱导脐血T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因和24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各亚家族的T细胞克隆性增殖特点,并应用LDH法分析诱导增殖的T细胞针对APL细胞特异性杀伤作用.结果 经APL细胞刺激后增殖的脐血T细胞表达部分Vα和Vβ谱系基因,并在Vα10、Vβ5和Vβ15出现有克隆增殖趋势,诱导后T细胞对APL细胞的杀伤性均高于未诱导组的T细胞.结论 APL细胞体外诱导脐血T细胞出现抗原相关的TCR Vα和Vβ亚家族优势利用和克隆性增殖;诱导后的T细胞对APL细胞具有特异性细胞毒性作用.     

应用RT—PCR和基因扫描分析TCR Vβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞

目的：了解急性单核细胞白血病（AML-M5）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT-PCR分别扩增9例M5病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ谱系的表达情况。PCR 产物进一步经基因扫描分析,确定T细胞克隆性。结果：9例AML-M5病人仅存在1-10个Vβ亚家族T细胞,而正常血标本则可检测到24个Vβ亚家族。基因扫描分析显示：8例病人的某些Vβ亚家族出现这一主峰图象（寡克隆性T细胞）。Vβ2寡克隆T细胞发现于6例病人中。结论：结果提示AML-M5病人存在克隆性增殖的T细胞,主要为Vβ2亚家族,推测这可能是对白血病细胞（M5）相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

实时定量PCR检测GVHD患者TCR Vγ亚家族基因表达水平

目的 了解异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)疾病状态下T细胞受体(TCR)Vγ亚家族T细胞水平的变化情况.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应对18例GVHD患者外周血单个核细胞TCR VγⅠ～Ⅲ亚家族基因表达水平进行相对定量检测;12例健康成人外周血样本作为对照.结果 GVHD患者外周血中TCRVγⅡ的表达量显著低于正常对照;GvHD患者TCR VγⅠ～Ⅲ亚家族的表达模式也发生了改变.TCRVγⅡ的表达量比TCRVγⅠ或TCRVγⅢ的表达量低.结论 TCRVγ Ⅱ亚家族的表达低下可能与GVHD的发病相关.     

超抗原肠毒素B对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

目的 观察超抗原肠毒素B(SEB)活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义.方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞,RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应.结果 与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖;而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCR Vβ14亚族.SEB刺激的T细胞早期(8 h)出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达(P<0.01或P<0.05).结论 CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志.     

肺结核患儿与卡介苗成功接种儿童外周血基因克隆研究

目的 研究肺结核患儿与卡介苗接种抗体阳性儿童外周血TCR Vβ基因克隆.方法 分别提取15名肺结核患儿及15名卡介苗接种抗体阳性儿童外周血RNA,经逆转录扩增后,以Genescan方法分别检测其TCR Vβ的基因克隆.以健康儿童卡介苗接种抗体阴性作为对照.结果 肺结核患儿与卡介苗接种抗体阳性儿童外周血TCR Vβ基因家族均以Vβ2,Vβ16,vβ21,vβ22克隆增生为主,克隆抑制以Vβ14和Vβ17为主;不同的个体之问TCR Vβ基因克隆不尽相同.结论 卡介苗接种抗体阳性儿童与肺结核患儿具有相似的TCR TCR Vβ基因克隆增生家族.     

醛缩酶A在恶性胸腔积液中的表达水平及与癌胚抗原、乳酸脱氢酶的相关性

目的观察比较不同病理类型肺癌患者和结核性胸膜炎患者胸腔积液中醛缩酶A（ALDOA）的表达水平及其与恶性胸腔积液部分生化指标的相关性。方法收集未经抗炎或类固醇激素治疗的65例肺癌伴恶性胸腔积液患者（恶性组）和15例结核性胸膜炎患者（结核组）胸水。ELISA法检测胸水中ALDOA浓度,化学发光法检测胸水中癌胚抗原（CEA）、乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果恶性组ALDOA、CEA、LDH浓度分别为（46．75±21．39）ng/mL、（82．24±56．63）ng／mL和（755．76±382．54）U／L,结核组分别为（23．92±17．21）ng／mL、（2．55±1．67）ng/mL和（388．37±163．87）U／L,恶性组ALDOA、CEA、LDH浓度均明显高于结核组（均P〈0．01）。不同病理类型肺癌患者恶性胸腔积液中ALDOA浓度分别为：腺癌（71．65±32．09）ng/mL,小细胞肺癌（22．43±18．23）ng／mL,鳞癌（19．16±13．85）ng／mL,腺癌组明显高于另两组（P〈0．05）。CEA浓度分别为：腺癌（112．40±62．71）ng／mL,小细胞肺癌（62．45±54．78）ng／mL,鳞癌（71．87±52．4）ng／mL,腺癌组明显高于另两组（P〈0．05）。LDH浓度分别为：腺癌（661．81±328．93）U／L,小细胞肺癌（737．62±315．41）U／L,鳞癌（767．85±503．28）U／L,腺癌组与另两组差异无统计学意义（P〉0．05）。恶性组和结核组患者胸水中ALDOA与CEA、LDH均呈正相关关系（P〈0．01或0．05）。结论ALDOA、CEA、LDH表达水平在恶性胸腔积液中明显高于结核性胸腔积液,其中肺腺癌胸腔积液ALDOA、CEA水平明显高于另两种病理类型。不论恶性胸腔积液或结核性胸腔积液,ALDOA均与CEA、LDH水平高度正相关。     

无胸水肺癌患者胸膜腔冲洗液细胞学检查与术中蒸馏水热灌注化疗的临床研究

目的证明无胸水肺癌患者胸膜腔内存在游离癌细胞并探讨术中蒸馏水热灌注化疗对生存期的影响。方法对320例无胸水肺癌患者术中进行了胸腔冲洗液细胞学检查。于开胸后探查前冲洗,收集冲洗液后立即细胞学检查,阳性者随机分为A组和B组,A组关胸前应用43℃顺伯（80mg）蒸馏水（1000mL）灌注化疗,B组未给予治疗常规关胸。结果阳性患者87例（27.2%）。A组与B组1、3、5生存率分别为95.5%、72.7%、56.8%;100%、41.9%、27.9%。结论无胸水肺癌患者胸膜腔内有游离癌细胞存在,术中蒸馏水热灌注化疗能提高阳性肺癌患者5年生存率。     

T细胞受体基因与疾病研究概况及进展

T细胞受体(TCR)基因与疾病的发生、诊断及治疗密切相关,弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征、IgA肾病中TCR有其不同基因型的表达特点。在弥漫性大B细胞淋巴瘤中,TCRVβ13和TCRVβ15亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高;在慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征中,外周血TCRVβ20基因优势克隆;在IgA肾病中,TCRCα-575A/G及TCRCα-560C/T基因多态性与疾病的发生相关。现就TCR基因在肿瘤治疗上的研究现状以及通过TCR基因修饰的T细胞在治疗恶性肿瘤等疾病方面的巨大发展潜能予以综述。     

基因扫描分析一例cGVHD病人稳定性克隆性扩增的TCR Vβ6，Vβ17和Vβ19T细胞

目的　分析慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)中TCRVβ谱系的分布和克隆性。方法　应用RT PCR扩增一例CML异基因骨髓移植后cGVHD病人第 35,39,4 3和 4 5个月的外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族的CDR3,了解病人TCRVβT细胞的表达 ,PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性。结果　cGVHD病人每个标本存在 14 16个Vβ家族T细胞 ;寡克隆T细胞可见于Vβ6 ,16 ,17,19和 2 1亚家族 ,稳定性克隆性TCRVβ6、17和 2 1T细胞可见于全部标本。结论　cGVHD病人存在倾斜性分布和克隆性生长T细胞 ,它可能与cGVHD的发生有关     

沙培林治疗晚期肺癌所致恶性胸腔积液的疗效观察

目的：探讨沙培林治疗晚期恶性胸腔积液的疗效及不良反应。方法：40例诊断为晚期肺癌所致恶性胸腔积液的患者,行单腔中心静脉导管经皮穿刺胸腔闭式引流后,胸腔内注入沙培林,每次5KE,观察疗效及不良反应。结果：完全缓解15例（37.5%）;部分缓解18例（45%）：无效7例（17.5%）;总有效率（82.5%）。结论：胸腔内注射沙培林治疗晚期肺癌所致恶性胸腔积液疗效肯定,是控制恶性胸腔积液的有效方法。     

顺铂联合香菇多糖对肺癌并发恶性胸腔积液患者胸水调节性T细胞的影响及意义

目的：分析肺癌并发恶性胸腔积液患者胸腔内注入顺铂联合香菇多糖前后胸水调节性T细胞（CD4C＋D25C＋D127low）及CD4C＋D25C＋D127high的改变,探讨香菇多糖联合顺铂胸腔内注射治疗肺癌并发恶性胸腔积液局部胸腔微环境的免疫功能改变。方法选取肺癌并发胸水患者60例（观察组和对照组各30例）。对照组给予顺铂50mg（体重＞50kg）或40mg（体重＜50kg）胸腔内注射治疗,观察组在对照组治疗的基础上加用香菇多糖（4mg）。两组患者分别于给药前及给药后第7、14天抽取胸水检测CD4C＋D25C＋D127low及CD4C＋D25C＋D127high。结果观察组总缓解率明显高于对照组（P＜0.05）,不良反应发生率的差异无统计学意义（P＞0.05）。给药前及给药后第7天,两组患者CD4＋CD25＋CD127low/CD4及CD4＋CD25＋CD127high/CD4的差异均无统计学意义（均P＞0.05）;给药后第14天,观察组CD4＋CD25＋CD127low/CD4明显低于对照组,CD4＋CD25＋CD127high/CD4明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与给药前比较,给药后第7、14天CD4＋CD25＋CD127low/CD4均明显降低,CD4＋CD25＋CD127high/CD4均明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。结论胸腔内注入顺铂联合香菇多糖能影响肺癌并发恶性胸腔积液患者胸水中调节性T细胞的水平,可能对胸腔内微环境的免疫功能改变有一定的优化作用。     

IL－2／TNF／LAK／TIL治疗晚期肺癌的近期疗效及免疫机理研究

作者报道用ＩＬ－２／ＴＮＦ／ＬＡＫ／ＴＩＬ治疗３０例失去手术机会和不能耐受全程化疗的晚期肺癌的结果。该法总有效率（ＣＲ＋ＰＲ）达４３．３％，９例伴有恶性胸水者经ＩＬ－２／ＴＮＰ／ＴＩＬ局部胸腔治疗后显效５例，有效４例。文中对该疗法的免疫机理作了初步探讨。