IL-6对人冠脉平滑肌细胞中PAPP-A、MMP-3、TIMP-1基因表达的影响

目的探讨细胞因子白介素6(IL-6)对人冠脉平滑肌细胞中妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)基因表达的影响。方法应用10μg/L的IL-6刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养0,2,4,8,24,36h后收集细胞。应用不同浓度IL-6(0,5,10,50μg/L)刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养6h后收集细胞。应用实时定量PCR方法检测细胞内PAPP-A,MMP-3,TIMP-1基因表达量。结果在IL-6刺激下,PAPP-A、MMP-3表达量在2h时就开始发生上调,8h左右达高峰,而后开始下降;在不同浓度IL-6刺激下,PAPP-A,MMP-3表达量随着细胞因子浓度加大呈上升趋势。TIMP-1在IL-6刺激下,表达量在2h时就开始发生下调,4h左右达最低,而后开始上升;在不同浓度的IL-6刺激下,TIMP-1表达量随着细胞因子浓度加大呈下降趋势。结论炎性因子IL-6对冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物PAPP-A、MMP-3、TIMP-1表达的影响,可能是炎症在急性冠脉综合征发生发展中作用机制之一。     

白介素-6对人髓核细胞表达基质金属蛋白酶-3和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的影响

目的研究炎症因子白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）对人髓核细胞表达基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响。方法①应用不同浓度的IL-6（0ng／ml、10ng／ml、100ng／ml、1000ng／m1）刺激体外培养的人髓核细胞,共同培养72h．~收集细胞;②应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测MMP-3和TIMP-1的表达情况。结果在不同剂量IL-6的刺激下,MMP-3的表达量在实验剂量范围内随着IL-6的剂量加大而呈上升趋势,TIMP-1的表达量实验剂量范围内随着IL-6的剂量加大而呈下降趋势。结论较大剂量的IL-6可抑制人髓核细胞基质的合成,从而促进椎间盘退变。     

IL-1β对人冠脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-3及基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的影响

目的探讨炎症因子IL-1β对人冠脉平滑肌细胞表达平滑肌细胞基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响。方法①应用20μg/L浓度的IL-1β刺激人冠脉平滑肌细胞,分别在共同培养0、2、4、8、24、36 h后收集细胞;②应用不同浓度的IL-1β（0、5、20、40μg/L）刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养6 h后收集细胞;③应用实时荧光定量PCR的方法检测细胞内MMP-3和TIMP-1基因的表达量。结果同剂量IL-1β刺激下,MMP-3的表达量在2 h时就开始发生上调,8 h达高峰,而后开始下降;在不同剂量IL-1β刺激下,MMP-3的表达量在实验剂量范围内随着IL-1β的剂量加大呈上升趋势。而TIMP-1表达量在2 h时就开始发生下调,8 h达最低,而后开始上升;在不同剂量IL-1β刺激下,TIMP-1的表达量在实验剂量范围内随着IL-1β的剂量加大呈下降趋势。结论炎症因子IL-1β能促进冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物MMP-3、TIMP-1的表达,可能是炎症在急性冠脉综合征的发生发展中起重要作用的机制之一。     

β1转化生长因子对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌相关的基质金属蛋白酶的影响

目的探讨β1转化生长因子（TGF-β1）对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的调节作用,及TGF-β1与瘢痕的关系。方法培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞经TGF-β1处理,采用酶联免疫法（ELISA）测定瘢痕疙瘩成纤维细胞上清液中MMP-1、MMP-2和TIMP-1的水平。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1、MMP-2和TIMP-1的生成量显著高于正常皮肤（P〈0.01）;加TGF-β1处理后,瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1的分泌量显著降低（P〈0.01）,MMP-2的分泌量显著升高（P〈0.01）,而TIMP-1的分泌量无显著改变（P〉0.05）。结论培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞显示MMP-1、MMP-2和TIMP-1增加,TGF-β1在生成调节过程中起重要作用。     

MMP-3/TIMP-1、Th17/Treg在类风湿关节炎中的作用及其临床意义

多种研究表明,基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase,MMP-3)的高表达在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜、软骨和软骨下骨的细胞外间质的降解中充当重要角色。金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase1,TIMP-1)与MMP-3特异结合,抑制MMP-3的活性,MMP-3/TIMP-1平衡对RA的临床结局有着重要作用。新的研究发现,抑制Th17细胞分化,维持Treg细胞(regulatory T cell)活性,调节Th17/Treg平衡,可为治疗RA提供新的作用靶点。进一步研究发现,RA早期患者外周血MMP-3与白介素17(Interleukin17,IL-17)表达明显升高,两者呈正相关,Treg的下降可影响MMP-3/TIMP-1的平衡。本文将对MMP-3/TIMP-1和Th17/Treg在RA中的作用机制及其临床意义作一综述。     

IL-1β对人分泌中期子宫内膜细胞分泌MMP-9及TIMP-3蛋白的影响

目的初步研究白介素-1β(IL-1β)对离体培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其特异性组织抑制物-3(TIMP-3)的影响。方法原代培养人分泌中期子宫内膜细胞,利用粘附式细胞仪570型,采用间接免疫荧光法检测IL-1β对内膜细胞分泌MMP-9和TIMP-3的影响。结果(1)MMP-9:空白对照组为1491.38±68.95,50U/ml组为1592.40±47.57,100U/ml组为1702.63±75.31,500U/ml组为1994.49±52.98,1000U/ml组为2347.58±45.87。随着IL-1β的浓度增加,原代培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌MMP-9表达量呈浓度依赖性显著升高(P<0.05);(2)TIMP-3:空白对照组为1643.31±61.29,50U/ml组为1597.27±49.07,100U/ml组为1443.93±81.23,500U/ml组为1343.28±54.80,1000U/ml组为1157.85±47.95。随着IL-1β的浓度增加,原代培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌TIMP-3表达量呈浓度依赖性显著下降(P<0.05)。结论IL-1β通过促进MMP-9分泌,抑制TIMP-3分泌,使细胞外基质降解,有利于绒毛滋养层细胞侵入。     

强脉冲光对UVB照射后人皮肤成纤维细胞金属基质蛋白酶-1、金属基质蛋白酶-3表达的影响

目的 观察强脉冲光(IPL)照射人皮肤成纤维细胞后金属基质蛋白酶-1(MMP-1)、金属基质蛋白酶-3(MMP-3)表达的变化,探讨强脉冲光嫩肤的分子生物学机制.方法 原代培养人皮肤成纤维细胞,分为三组:A组(正常对照组):无UVB照射无IPL照射;B组(UVB照射组):采用UVB(20 mJ/cm2)照射成纤维细胞;C组(UVB+IPL照射组):先用UVB(20 mJ/cm2)照射成纤维细胞,24 h后再用强脉冲光照射成纤维细胞.培养48 h后采用免疫组化检测细胞中MMP-1、MMP-3的表达.结果 UVB照射后成纤维细胞中MMP-1及MMP-3表达较对照组显著升高(P＜0.05),C组成纤维细胞MMP-1及MMP-3表达较B组显著降低.结论 强脉冲光能显著抑制UVB导致的成纤维细胞MMP-1、MMP-3的表达升高,可能通过该机制改善光老化中皱纹的形成.     

高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响.方法 体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40 mmol/L)培养48 h(高糖1～3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2) mRNA的表达.以加入含25 mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组.结果 随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01).RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05).结论 高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少.     

高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响.方法 体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40 mmol/L)培养48 h(高糖1～3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2) mRNA的表达.以加入含25 mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组.结果 随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01).RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05).结论 高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少.     

MDI301调节MMP-1、MMP-2、TIMP-1和前胶原蛋白的表达

目的:检测MDI301对正常细胞和高糖细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和I、III型前胶原蛋白表达的影响。探讨MDI301对糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗潜力。方法:采用Real time PCR检测人成纤维细胞中MMP-1、MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达水平;ELISA方法检测细胞培养基中TIMP-1蛋白表达量;Western blot检测I型和III型前胶原蛋白表达水平。结果:MDI301能降低高糖细胞中MMP-1和MMP-2 mRNA的表达(P<0.05),增加TIMP-1 mRNA和细胞培养上清中TIMP-1蛋白的表达(P<0.05);同时还能增加高糖细胞中I和III型前胶原蛋白的表达量(P<0.05)。结论:MDI301可能会对糖尿病患者体内MMP-1、MMP-2、TIMP-1和I、III型前胶原蛋白的表达有相似的作用,使其有望用于糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗。     

IL-17A对成骨细胞系MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响及其作用机制

目的 检测IL-17A对MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响,并探讨其作用机制。方法 采用小鼠重组细胞因子IL-17A作用于MC3T3-E1细胞,通过Real-time PCR和ELISA分别检测MMP-2及MMP-9在mRNA水平及蛋白水平上的表达情况;通过免疫荧光和Western Blot检测NF-κB的磷酸化水平的变化,并通过使用NF-κB阻断剂检测其在MMP-9表达中的影响。结果 IL-17A在mRNA水平及蛋白水平上均上调MMP-9的表达(P＜0.01),然而对MMP-2的表达无明显影响;IL-17A促进转录因子NF-κB的磷酸化水平(P＜0.01);阻断NFκB的活性可减弱IL-17A对MMP-9的上调作用(P＜0.05);IL-17A对MC3T3-E1细胞中TIMP-1及TIMP-2的表达没有影响。结论 IL-17A可以通过激活NF-κB促进MC3T3-E1细胞分泌MMP-9。     

压力对猪眼小梁细胞表达ELAM-1、MMPs/TIMPs的影响

目的 培养猪眼小梁细胞,研究压力对体外培养的猪眼小梁内皮细胞白细胞粘附分子-1 (ELAM-1)、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-3及基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-2表达的影响。方法 培养猪眼小梁细胞并鉴定,建立细胞水平的青光眼模型,对传第3代猪眼小梁细胞分别施加20、40、60 、80mmHg压力作为实验组,0mmHg为对照组。培养6h后行ELAM-1免疫组织化学SP法染色,培养24h后行MMP-2、MMP-3和TIMP-2免疫组织化学SP法染色,并对染色结果进行统计学分析。结果 培养细胞为猪眼小梁细胞,正常小梁细胞不表达ELAM-1,压力为40、60、80mmHg时,ELAM-1的表达同0、20mmHg组相比表达明显增加。正常小梁细胞可以少量表达MMP-2、MMP-3及TIMP-2。压力为40、60mmHg时,MMP-2、TIMP-2的表达同0、20、80mmHg相比表达明显增加,压力不影响小梁细胞MMP-3的表达。结论 一定范围内压力的变化可以促进猪眼小梁细胞表达ELAM-1,可以改变MMPs／TIMPs之间的平衡状态,进而影响小梁细胞外基质(ECM)的代谢,改变房水外流阻力, ELAM-1、MMPs在青光眼的发病中可能发挥重要作用。     

BRS-3激活对人支气管上皮细胞MMP-9和TIMP-1分泌的影响及其机制

目的观察蛙皮素受体亚型-3(bombesin receptor subtype3,BRS-3)激活对人支气管上皮细胞MMP-9/TIMP-1分泌的影响及MMP-9、TIMP-1对人肺成纤维细胞增殖的影响。方法人支气管上皮细胞常规培养,ELISA检测基质金属蛋白酶及其抑制物分泌,MTT检测人肺成纤维细胞增殖。结果(1)臭氧应激使支气管上皮细胞基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的分泌增加及MMP-9/TIMP-1的比值降低;用特异性人工激动剂P3513激活BRS-3可选择性下调臭氧应激所诱导的MMP-9、TIMP-1的分泌及使MMP-9/TIMP-1的比值增高;激活BRS-3下调支气管上皮细胞分泌MMP-9、TIMP-1的作用可为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD98059所部分逆转。(2)MMP-9可促进肺成纤维细胞增殖,但TIMP-1对肺成纤维细胞的增殖无显著影响。结论BRS-3激活下调臭氧应激所诱导的支气管上皮细胞MMP-9及TIMP-1分泌,从而改变MMP-9/TIMP-1比值,其机制与丝裂原活化蛋白激酶途径有关;另MMP-9可促进人肺成纤维细胞增殖。上述结果提示BRS-3参与了气道重构,可能在哮喘等气道高反应性疾病中起保护作用。     

Effects of (-)-epigallocatechin-3-gallate on expression of matrix metalloproteinase-1 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in fibroblasts irradiated with ultraviolet A

Skinphotodamage,aresultofultravioletirradiation,ismainlyduetotheimpairmenttostructuralproteinsofthedermisandthebasementmembraneHistologicalanalysisindicatesthatmajormodificationsincludedegenerationofcollagenfibersandmatrixmetalloproteinase(MMP)inducedchangesintheratiosofdifferenttypesofcollagen1　()Epigallocatechin3gallate(EGCG)isthemajorandmosteffectiveantioxidantingreenteaandcanofferprotectionagainsttheultravioletinduceddepletionofantioxidantenzymesandtheinductionofepidermallipidperoxidati…     

SIGNIFICANCE OF MMP-2 AND TIMP-2 mRNA EXPRESSIONS ON GLOMERULAR CELLS IN THE DEVELOPMENT OF GLOMERULOSCLEROSIS

Objective To study the expressions of MMP-2 and TIMP-2 mRNA on cultured rat mesangial cells (MsC) and in human diseased glomeruli, and to explore their significance in the development of glomerulosclerosis.Methods The expressions ofMMP-2, TIMP-2, and Col Ⅳ mRNA on cultured rat MsC stimulated by IL-1 or/and TGF-β1were investigated through Northern blot analysis. The levels of MMP-2 and TIMP-2 mRNA expressions and immunoreactivity of PCNA and Col Ⅳ in human diseased glomeruli from renal biopsies of lupus nephritis (LN) patients were examined by in situ hybridization and immunohistochemistry, respectively.Results The levels of MMP-2, TIMP-2, and Col Ⅳ mRNA expressions were markedly increased on cultured rat MsC stimulated by IL-1 or/and TGF-β1. Meanwhile, upregulation of MMP-2 and TIMP-2 mRNA expressions was confirmed in diseased glomeruli from patients with various subtypes of LN, and was closely related to the positive cell number of PCNA presentation and deposition of Col Ⅳ in glomeruli.Conclusion The results suggest that the over-expressions of MMP-2 and TIMP-2 mRNA on glomerular cells might play a critical role in the development of glomerulosclerosis.     

hIGF-1基因转染对成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因转染对成纤维细胞增殖的影响。方法：用脂质体转染法将pcDNA3.1-hIGF-1质粒转染鼠成纤维细胞NIH3T3,经G418筛选抗性NIH3T3细胞并继续培养4周,进行原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF-1的表达,MTT方法和流式细胞仪检测NIH3T3细胞增殖能力。结果：转染pcDNA3.1-hIGF-1后的NIH3T3细胞内有大量hIGF-1 mRNA和蛋白质的表达;MTT检测显示转染pcDNA3.1-hIGF-1的NIH3T3细胞光吸收值增大,与未转染的NIH3T3细胞组比较,差异具有显著性(P<0.01);流式细胞仪检测显示转染组细胞,S期比例增加（59.3%）,G₁期比例减少（27.2%）。结论：pcDNA3.1-hIGF-1质粒转染成纤维细胞后,可以获得稳定表达,并能明显促进成纤维细胞的增殖。     

Multifactor Regulation on Expressions of MMP-9 and TIMP-1 in Endometrial Stromal Cells

Recent evidence suggests that preparation of the endometrium for implantation is notmerely a question of adequate hormonal stimulation but that implantation also depends on theinteraction between the blastocyst and the endometrium and is mediated by cytokines,growthfactors,and adhesion molecules,which are produced and secreted by the endometrium andthe blastocyst[1].Implantation is a complex process that involves embryo apposition andattachment to the maternal endometrial epithelium,the extrace…