HPV DNA与FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌筛查中的应用探讨

目的 探讨高危型HPV(hr-HPV)与FAM19A4基因启动子甲基化检测在筛查宫颈癌中的临床应用价值。方法 选取2016—2018年在咸宁市中心医院就诊的210例患者拭子样本,其中正常及良性宫颈炎65例,CIN1 47例、CIN2 32例、CIN3 46例、宫颈癌20例。所有患者样本均接受高危型HPV检测及FAM19A4甲基化检测,对比单独HPV检测、单独甲基化检测以及两者联合检测在宫颈癌筛查中的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果 在正常及良性宫颈炎、CIN1、CIN2、CIN3及宫颈癌患者中,hr-HPV检测、FAM19A4基因启动子甲基化检测在不同程度宫颈病变患者阳性率均逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05); FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌早期病变诊断中的灵敏度低于hr-HPV检测,差异有统计学意义(P<0.05),特异度高于hr-HPV检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 hr-HPV检测具有高灵敏度和低特异度的特点,FAM19A4基因启动子甲基化具有低灵敏度和高特异度的特点,两者联合在宫颈癌早期病变筛查中具有较高的应用价值,可为宫颈癌早期病变筛查诊断提供参考依据,提高诊断准确性,改善疾病预后。     

FAM19A4基因启动子DNA甲基化对宫颈病变的诊断价值研究

目的探讨序列相似家族19成员A4(FAM19A4)基因启动子DNA甲基化水平在不同宫颈病变中的差异以及对宫颈癌和癌前病变的诊断价值。方法收集188例不同阶段宫颈病变的宫颈细胞样本,其中正常宫颈组65例,低度鳞状上皮内病变(LSIL)组33例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)组56例,宫颈癌组34例。用靶向二代测序法检测FAM19A4基因启动子DNA甲基化的表达水平,分析不同组别甲基化水平差异及对宫颈病变的诊断价值。结果宫颈癌组、HSIL组、LSIL组及正常宫颈组FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平的中位数分别为18.89、11.39、9.72、8.89,宫颈癌组明显高于HSIL组、LSIL组及正常宫颈组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平与宫颈病变程度呈正相关,相关系数为0.521(P<0.05)。FAM19A4基因启动子DNA甲基化诊断宫颈癌的灵敏度为82.35%,特异度为86.15%,ROC曲线下面积为0.91。结论宫颈癌和HSIL患者的FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平异常增高,该指标对宫颈癌具有一定诊断价值。     

IL-10基因启动子区CpG岛甲基化与宫颈癌的相关性研究

目的:探讨IL-10基因启动子甲基化与HPV感染导致宫颈癌的相关性。方法:采用PCR和甲基化特异性PCR(MSP)分别检测宫颈癌49例、癌前病变50例(19例CIN1、10例CIN2、21例CIN3)及正常对照50例宫颈组织中HPV16及IL-10基因启动子甲基化状态,并分析IL-10基因甲基化状态与不同临床病理特征之间的联系。结果:宫颈癌组及癌前病变组IL-10基因甲基化率与对照组比较差异均有统计学意义(P﹤0.05)。宫颈癌组IL-10基因甲基化和HPV16 E7 DNA检测结果有一定的关联性(χ2=20.163,P<0.05,Pearson列联系数r=0.345)。不同年龄、肿瘤组织大小、病理分级、临床分期及有无淋巴结转移和IL-10基因甲基化未见明显关系(P>0.05)。结论:宫颈癌IL-10基因启动子CpG岛甲基化与高危型HPV16感染具有关联性,IL-10基因启动子区低甲基化与宫颈癌发病相关。     

多发性骨髓瘤中RASSF2A基因甲基化分析研究

目的 检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中RASSF2A基因启动子区甲基化程度及其mRNA表达水平,分析甲基化在MM进展中的调控机制.方法 通过甲基化特异性PCR(MSP)分别检测30例MM患者与30例正常对照组外周血中RASSF2A基因启动子甲基化水平,通过荧光定量PCR检测RASSF2A m...     

维吾尔族妇女子宫颈癌CCNA1基因甲基化检测

目的:探讨CCNA1基因启动子区域甲基化与维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)方法,对40例子宫颈癌患者手术切除肿瘤组织及其40例正常子宫颈组织CCNA1基因启动子区域甲基化进行检测。结果:CCNA1基因在40例子宫颈癌中甲基化率为87.5%,正常子宫颈组织中甲基化率为2.5%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CCNA1基因启动子甲基化与维吾尔族妇女子宫颈癌发生相关。     

基因甲基化修饰对宫颈癌病变影响的研究进展

宫颈癌是最常见的妇科肿瘤之一,宫颈癌筛查可以降低宫颈癌的发病率和死亡率,因此寻找宫颈癌发生发展中的分子生物学标志并应用于宫颈癌筛查中尤为重要。DNA甲基化是表观遗传学的主要表现形式之一。许多文献报道宫颈癌中存在基因甲基化异常,包括DAPK1、RASSF1A、CADM1、PAX1等宿主基因,以及整合于宿主基因的人乳头瘤病毒DNA等。宫颈癌中普遍存在的基因甲基化异常可为宫颈癌的早期诊治及治疗后监测方法提供新思路,而寻找特异性好、敏感度高且临床实践可行的甲基化生物学标志物,可能会成为今后研究的重点。     

维吾尔族妇女子宫颈鳞癌MGMT基因甲基化检测

目的 检测O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区甲基化与维吾尔族子宫颈鳞癌之间的相关性.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation spe-cific PCR,MSP)对41例维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织及32名正常维吾尔族妇女子宫颈组织进行甲基化检测.结果 32名正常子宫颈组织MGMT基因启动子区均未发生甲基化,为非甲基化状态;41例子宫颈鳞癌组织中共有13例发生MGMT基因启动子区甲基化(32%).结论 MGMT基因启动子区甲基化可能部分参与维吾尔族妇女子宫颈癌的发生发展过程,是维吾尔族子宫颈鳞癌发生过程中常见的分子事件,有可能作为维吾尔族妇女子宫颈癌诊断的肿瘤标志物.     

肝癌患者血浆RASSF1A及p16基因异常甲基化检测

目的探讨血浆RASSF1A基因(Ras association domain family 1 gene)和p16基因的启动子区异常甲基化与原发性肝癌关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)法,对100例原发性肝癌(HCC)患者、30例乙肝患者、30例肝硬化患者和30名健康体检者血浆中RASSF1A和p16基因的启动子区异常甲基化状况进行检测。结果 HCC患者血浆RASSF1A和p16基因异常甲基化检出率分别为38.0%(38/100)和65.0%(65/100),而乙肝患者、肝硬化患者和健康体检者均未检出,与HCC组比较,差异均有统计学意义(P=0.000);Logistic回归分析发现,患者年龄、性别、血浆甲胎蛋白(AFP)、HBsAg、p16基因(RASSF1A基因)甲基化状况等与血浆中RASSF1A基因(p16基因)异常甲基化检测结果无关(P0.05)。结论原发性肝癌患者血浆DNA中可检测到RASSF1A基因和p16基因的甲基化;RASSF1A基因和p16基因的甲基化检测对肝癌筛查有重要意义。     

MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN启动子甲基化的实验研究

目的:探讨甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化的方法及意义。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态。结果:膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化可行。     

配对盒家族基因1甲基化状态与宫颈组织病变的相关性研究

目的：探讨定量测定配对盒家族基因1（PAX1）甲基化状态与宫颈组织病变的相关关系。方法：收集正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变CINI组织50例、CINII组织50例、CINIII组织50例和宫颈癌组织50例。采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation specific PCR,MSP）分析宫颈病变组织中PAX1基因启动子区甲基化状态,结合定量PCR（real time-PCR）检测PAX1mRNA表达情况行综合分析。结果：宫颈癌组织中PAX1基因启动子甲基化率达94%（47/50）,CINI组织中PAX1基因启动子甲基化率达40%（20/50）,CINII 52%（26/50）,CINIII 84%（42/50）,而正常对照组织均无甲基化状态（P〈0.05）。不同临床分期的宫颈癌组织PAX1甲基化率也不尽相同（P〉0.05）,病理组织学分化程度不同,PAX1甲基化率不同,呈负向相关性（P〈0.05）。50例甲基化的宫颈癌组织中有PAX1mR N A表达,随着临床分期升级,PAX1mR N A表达增加,有统计学意义（P〈0.05）;而不同组织分化程度的PAX1mR N A表达量差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：DNA修复因子PAX1甲基化状态可能与子宫颈癌的病因学发生存在相关关系,在临床筛查和宫颈癌的早期诊断中可能具有潜在的应用价值。     

食品中产气荚膜梭菌α毒素基因快速检测方法的研究

目的建立分子信标荧光PCR体系检测产气荚膜梭菌的快速检测方法,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检验。方法根据GenBank公布的保守序列,针对α毒素基因设计一对引物和分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5’端,并进行特异性和灵敏度分析,同时以10种细菌作对照。结果分子信标荧光PCR反应体系检测10种细菌,只有产气荚膜梭菌出现特异荧光信号,其他均无荧光信号,而且与其他细菌无交叉反应。对40份食品样品进行检测,3份产气荚膜梭菌PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2 h。3份阳性样本经传统方法培养,2份有检出产气荚膜梭菌。结论分子信标荧光PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于产气荚膜梭菌食物中毒的快速诊断和食品污染物及感染性腹泻等监测工作中,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

多基因遗传风险评分指导肺癌个体化筛查的前瞻性队列研究

目的探索如何利用遗传风险评分,制订个体化的肺癌筛查方案。方法利用中国慢性病前瞻性研究(CKB)队列10个地区100615例具有全基因组基因分型信息的样本,根据前期课题组发表的19个遗传变异构建肺癌多基因遗传风险评分PRS-19。以55岁且吸烟剂量30包/年人群的5年绝对发病风险为参考届值,在吸烟者和非吸烟者中分别计算不同遗传风险人群5年肺癌绝对发病风险随年龄和吸烟剂量的变化趋势,并绘制5年绝对发病风险分布图,从而判断不同遗传风险人群达到参考界值时的理论年龄或吸烟剂量。根据上述结果给出不同遗传风险人群参加肺癌筛查起始年龄的具体建议。结果CKB队列中55岁吸烟者,当吸烟量为30包/年时,5年内发生肺癌的绝对风险为0.67%。在吸烟者中,随着遗传风险增加,其5年绝对发病风险呈不断上升趋势,对于高遗传风险人群应降低筛查起始年龄,遗传风险最高的1%人群建议从50岁开始进行筛查;若保持筛查起始年龄55岁不变,则应在高遗传风险人群中降低吸烟剂量标准;不管累积吸烟剂量为多少,遗传风险最高的1%人群都应纳入肺癌筛查。在非吸烟者中,高遗传风险人群同样具备筛查价值,建议遗传风险最高的1%人群从62岁起进行肺癌筛查,而对于遗传风险最低的5%人群,当年龄达到74岁时才可达到参考届值。结论对于不同遗传风险的个体,可采用个体化的肺癌筛查方案,对于高遗传风险的吸烟者可减小肺癌筛查起始年龄或吸烟剂量,而我国高遗传风险的非吸烟者同样具备筛查价值。     

高危型人乳头瘤病毒阴性宫颈癌的研究进展

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤,持续性高危型人乳头瘤病毒（high-risk human papillomavirus,HR-HPV）感染是导致宫颈上皮内瘤变及癌变的必要因素。目前临床上针对宫颈癌的早期筛查方法有HPV检测、宫颈脱落细胞学和阴道镜检查。临床上多数宫颈癌患者HPV检测结果为HR-HPV阳性,但有不足1%的宫颈癌患者HPV检测结果为HR-HPV阴性。与HR-HPV阳性宫颈癌患者相比,多数HR-HPV阴性宫颈癌患者的预后较差。因此寻找HR-HPV阴性宫颈癌的发病机制、探索特异性生物标志物及新的治疗靶点成为目前最为迫切的问题。综述HR-HPV阴性宫颈癌的发病原因、临床特征及分子生物学研究,以期为HR-HPV阴性宫颈癌的诊疗提供新的临床思路及依据。     

焦炉工人周围血细胞p16基因甲基化研究

目的分析焦炉工人周围血细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化状态,寻找焦炉工人肺癌辅助筛查的生物标志物。方法以74名男性焦炉工人为接触组,以47名供水厂男性职工为对照组。采集2组人员的班后尿,用高效液相色谱法检测其内暴露指标1-羟基芘(1-OH-Py)的水平;同时采集晨起空腹肘静脉血,分离周围血单个核细胞,用彗星实验检测DNA损伤情况;并提取基因组DNA,用甲基化特异性聚合酶链反应技术检测p16基因启动子区CpG岛甲基化发生情况。结果接触组尿1-OH-Py水平[(0.46±0.12)μmol/mol Cr]和DNA拖尾的Olive尾距[(0.41±0.25)μm]高于对照组[(0.17±0.06)μmol/mol Cr、(0.32±0.12)μm],差异有统计学意义(P<0.05)。接触组p16基因的异常甲基化的检出率(36.49%)高于对照组(4.26%),差异有统计学意义(P<0.01);并且p16基因的异常甲基化检出率随着尿1-OH-Py的水平升高逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论周围血p16基因异常甲基化可能是焦炉工人肺癌早期筛查有效的生物标志物。     

上皮性卵巢癌的病理及分子诊断

上皮性卵巢癌(EOC)就其病理学特征而言,可被分为Ⅰ、Ⅱ型EOC,二者在肿瘤来源、恶性表型方面均有所不同。Ⅰ、Ⅱ型EOC在病理学形态、临床特征、分子表型等方面,均体现出极高的异质性特点。随着二代基因测序技术对EOC分子特征数据的积累,深化了临床对EOC生物学行为的认识。综合病理及分子特征进行诊断,可能为EOC提供更加高效、精准的筛查和治疗策略。笔者拟就EOC的病理及分子诊断机制,分子诊断技术的发展现状,以及在EOC筛查和治疗应用中的最新研究进展进行阐述。     

结肠癌患者CDH13基因启动子甲基化状态

目的 分析结肠癌患者CDH13基因启动子甲基化情况.方法 留取32例结肠癌患者的手术标本(观察组)及12例非结肠癌患者正常结肠组织(对照组),应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法分析CDH13基因启动子甲基化情况.结果 观察组CDH13基因启动子甲基化总发生率为59.4％(19/32),显著高于对照组的8.3％(1/12)(P=0.002).结论 结肠癌中存在着较高比例的CDH13基因启动子甲基化,提示CDH13在结肠癌的发生中起着重要作用.     

水源致病菌检测新技术的研究进展

摘要:受污染水体中可能会含有威胁人类身体健康的致病菌。部分致病菌在水中含量少,难分离,而且多变异,所以传统的检测方法难以得到准确的结果。随着分子生物学的发展,很多分子检测技术已经广泛应用到水源致病菌的检测和动态跟踪中。比如荧光定量PCR、环介导等温扩增,以及新发展起来的基因芯片和宏转录组技术等。本文将针对这些分子检测方法以及其他新方法的研究进展进行概述。     

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌（LMO）的快速方法，应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法：根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立改良分子信标-实时PCR检测体系，应用于食品中LMO检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg，菌液灵敏度为99cfu／ml或4cfu／PCR反应体系，无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO，均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测，8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份1310细菌培养阳性。结论：改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高，特异性强．能提高LMO的检出率和准确性，可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。