天麻素对毛果芸香碱诱发的癫痫大鼠TLR4/NF-κB信号通路影响的研究

目的:探讨天麻素对毛果芸香碱诱发的癫痫大鼠的脑保护作用及其作用机制。方法:72只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、天麻素组、Toll样受体4 (TLR4)激活剂脂多糖(LPS)组、天麻素+LPS组,每组12只。采用腹腔注射毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型。双抗体夹心酶联免疫法检测大鼠血清和海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)水平,TUNEL染色法检测海马组织细胞凋亡数,Western blot分别检测海马组织活化半胱氨酸基天冬氨酸酶-3 (CleavedCaspase-3)、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、TLR4、兔抗大鼠p-核因子-κB亚基p65亲和肽(p-NF-κBp65)和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκB-α)表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠脑电频率显著降低(P<0.05),波幅显著升高(P<0.05);血清和海马组织TNF-α和IL-1β水平,海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4和p-NF-κBp65蛋白明显升高(P<0.05);IL-10水平,Bcl-2和p-IκB-α蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性药组、天麻素组和天麻素+LPS大鼠脑电频率显著升高(P<0.05),波幅显著降低(P<0.05),血清和海马组织TNF-α和IL-1β水平,海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4和p-NF-κBp65蛋白明显降低(P<0.05),IL-10水平,Bcl-2和p-IκB-α蛋白表达显著升高(P<0.05);LPS组大鼠脑电频率、血清及海马组织IL-10水平、Bcl-2蛋白显著降低(P<0.05),血清与海马组织TNF-α与IL-1β水平、海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4、p-NF-κBp65和p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05)。与LPS组比较,天麻素+LPS组大鼠脑电频率显著升高(P<0.05),波幅显著降低(P<0.05);血清及海马组织TNF-α与IL-1β水平、海马组织细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Bax、TLR4、p-NF-κBp65蛋白表达均明显降低(P<0.05),IL-10水平、Bcl-2及p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:天麻素可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路对毛果芸香碱诱发的癫痫大鼠发挥脑保护作用。     

芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组(10 mL/kg生理盐水)和芪楼丸低、中、高剂量组(6.75、13.5、27 g/kg芪楼丸浸膏),各组连续干预5 d,腹主动脉取血制备含药血清。取对数生长期人肝癌HepG2细胞，分别给予各组芪楼丸含药血清干预24、48、72 h。采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测细胞凋亡情况，ELISA法检测细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9水平，RT-qPCR法检测细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达，Western blot法检测细胞JAK2、STAT3、STAT5、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，芪楼丸含药血清能抑制HepG2细胞增殖(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01),细胞中Bax、caspase-3、caspase-9水平和Bax mRNA表达均升高(P<0.01),Bcl-2水平、Bcl-2 mRNA表达和JAK2、STAT3、p-JA...     

人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝大鼠的干预作用

目的 探究人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝大鼠的干预作用。方法 将大鼠随机分为5组，即正常组、模型组、二甲双胍组(阳性对照，20 mg/kg)及人参皂苷低、高剂量组(20、40 mg/kg),除正常组外均构建非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型，灌胃给药8周，检测大鼠肝功能(AST、ALT)、血脂(TG、TC、HDL-C、LDL-C)、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平，以及肝组织细胞凋亡蛋白(Bax、caspase-3、Bcl-2)、β-氧化相关酶(CAT1、CoASH1、ACOX1)表达，HE、TUNEL染色观察肝组织细胞形态及凋亡情况。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均升高(P<0.05),肝组织Bax、caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),肝组织Bcl-2、CAT1、CoASH1、ACOX1蛋白表达均降低(P<0.05),肝组织病理形态受损，凋亡细胞增多，凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较，各给药组上述指标均得到改善(P<0....     

菟丝子含药血清对TNF-α诱导凋亡蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

[目的]观察菟丝子含药血清对TNF-α诱导人凋亡蜕膜细胞Bc1-2和Bax蛋白表达的影响,以期从蜕膜细胞凋亡的角度探讨菟丝子安胎的机理。[方法]体外常规进行人蜕膜细胞的培养,选用适宜浓度的TNF-α诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型,用菟丝子含药血清干预,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测对照组、模型组(TNF-α)、治疗组(TNF-α+菟丝子含药血清)凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。[结果]与对照组比较,模型组细胞促凋亡蛋白Bax的表达明显增加,抑制凋亡蛋白Bc1-2的表达明显降低,均有显著性差异(P0.05);与模型组比较,治疗组促凋亡蛋白Bax的表达明显降低,抑制凋亡蛋白Bc1-2的表达明显增加,均有显著性差异(P0.05)。[结论]菟丝子含药血清可降低异常凋亡蜕膜细胞Bax水平,升高Bcl-2水平,从而可抑制早期蜕膜细胞的异常凋亡,起到保胎作用。     

小檗碱通过下调miR-1290缓解高糖诱导的足细胞损伤研究

目的探究小檗碱对高糖诱导的足细胞损伤的影响及其对miR-1290的调控作用。方法采用高糖诱导小鼠肾足细胞MPC5建立细胞损伤模型,给予不同浓度(1.0、2.5、5.0μmol/L)小檗碱进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用qRT-PCR法检测miR-1290 mRNA表达情况。将阴性对照(mi R-NC)和mi R-1290模拟物(miR-1290mimics)分别转染至MPC5细胞,给予5μmol/L小檗碱进行干预,考察miR-1290对小檗碱抑制高糖诱导的细胞凋亡及炎性因子分泌的影响。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与小檗碱+miR-NC组比较,小檗碱+miR-1290 mimics组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05)。结论小檗碱能够通过下调mi R-1290表达抑制高糖诱导的足细胞凋亡及炎性反应,从而减轻细胞损伤。     

桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探究桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组及桂郁金醇提物高(10 g/kg)、中(5 g/kg)、低(1 g/kg)剂量组,灌胃给药2次/d,连续3 d,最后一次给药1 h后,用10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,制备含药血清。使用不同浓度的H_2O_2诱导HUVEC细胞3 h,建立细胞氧化应激模型,采用CCK-8试剂检测细胞存活率,明确H_2O_2的最适造模浓度为800μmol/L;利用CCK-8试剂进行含药血清对HUVEC细胞及H_2O_2损伤的HUVEC细胞存活率的影响;利用试剂盒检测细胞培养上清液中SOD、GSH-Px、MDA、LDH、NO、t-PA、PAI-1、IL-6、TNF-α水平;采用Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;利用RT-PCR技术检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结果:与模型组比较,各剂量含药血清均能升高细胞存活率,高剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平,降低LDH、MDA、t-PA、IL-6、TNF-α水平及Caspase-3、Bax mRNA表达,升高Bcl-2/Bax比值;中剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平及Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比值,降低LDH、t-PA水平及Caspase-3 mRNA表达;低剂量能升高NO水平,降低t-RA水平及Caspase-3 mRNA表达。结论:桂郁金醇提物含药血清对H_2O_2诱导的HUVEC细胞具有保护作用,其机制可能与升高SOD、GSH-Px活性,降低LDH、MDA含量,升高扩血管因子NO,调节纤溶系统,减少炎症因子含量,减少细胞凋亡,调控Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达有关。     

黄芪总黄酮对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激、炎症、凋亡的影响

目的探讨黄芪总黄酮对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激、炎症、凋亡的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平(15 mg/kg)组及黄芪总黄酮低、高剂量组(30、60 mg/kg),灌胃给药15 d后线栓法制备脑缺血模型(缺血2 h后再灌注24 h)。然后,计算神经功能学评分、脑组织含水量,ELISA法检测MDA水平和GSH-Px、SOD活性,放射免疫法检测IL-1β、TNF-α水平,实时荧光定量PCR法检测caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA表达,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果与模型组比较,黄芪总黄酮组神经行为学评分,脑组织含水量,MDA、IL-1β、TNF-α水平,caspase-3、Bax mRNA表达显著下降(P0.05),GSH-Px、SOD活性,Bcl-2 mRNA表达,p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著升高(P0.05)。结论黄芪总黄酮对脑缺血再灌注损伤大鼠具有明显的保护作用,其机制可能与抑制氧化应激水平、减少炎症反应、抗凋亡作用有关。     

补肾调经方改善体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步提高卵母细胞质量的机制研究北大核心CSCD

目的探讨补肾调经方改善体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步提高卵母细胞质量的作用机制。方法日龄10天的雌性ICR小鼠200只,随机分为补肾组(60只)、血清对照组(60只)和空白对照组(80只)。分别处死小鼠分离窦前卵泡,加入补肾调经方大鼠含药血清、正常大鼠血清和不加大鼠血清进行细胞培养,结束培养后分别收集MⅡ期卵母细胞计算卵母细胞第一极体排出率、活细胞荧光探针观察线粒体分布、实时荧光定量PCR检测卵母细胞线粒体DNA拷贝数(mtDNA)、解偶联蛋白(UCP2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)mRNA表达;收集卵丘颗粒细胞实时荧光定量PCR检测促凋亡基因Bax、抗凋亡基因Bcl-2以及缝隙连接蛋白Cx43、Cx37 mRNA表达。结果与空白对照组和血清对照组比较,补肾组卵母细胞第一极体排出率升高(P<0.05),线粒体均匀分布于细胞质中,mtDNA、PGC-1α、UCP2 mRNA表达升高(P<0.05),与空白对照组比较,血清对照组Cx37 mRNA表达升高(P<0.05),补肾组Cx43、Bcl-2、Bcl-2/Bax mRNA表达升高(P<0.05);与血清对照组比较,补肾组Cx37 mRNA表达降低(P<0.05),Cx43、Bcl-2、Bcl-2/Bax mRNA表达升高(P<0.05)。结论补肾调经方可促进体外培养小鼠卵母细胞核质成熟同步,提高卵母细胞质量,其机制可能与减少颗粒细胞凋亡、改善线粒体功能有关。     

黄芪甲苷通过调控ET-1对糖氧剥夺致损伤星形胶质细胞中 NLRP3通路的影响北大核心

目的:研究黄芪甲苷通过调控内皮素(ET-1)影响星形胶质细胞中NLRP3通路的作用机制。方法:糖氧剥夺构建星形胶质细胞损伤模型,用qRT-PCR检测细胞中ET-1 mRNA表达,鉴定造模成功与否。CCK-8法筛选黄芪甲苷对模型细胞干预的最佳作用浓度(30μmol/L)和时间(24 h)。细胞分为5组:正常对照组、模型组、心钠肽(ET-1抑制剂)组、黄芪甲苷组、联合组。CCK-8检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;qRT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达;ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平;Western Blot检测NLRP3通路蛋白NLRP3、Caspase-1表达。结果:与正常对照组比较,模型组细胞增殖能力及Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、炎症因子水平及Bax、Caspase-3 mRNA表达和NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组细胞增殖能力及Bcl-2蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、炎症因子水平及Bax、Caspase-3 mRNA表达和NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05),其中联合组的效果最显著。结论:黄芪甲苷可通过抑制ET-1表达进而抑制NLRP3信号通路来保护缺血性星形胶质细胞损伤。     

肝喜合剂含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究肝喜合剂对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用不同浓度肝喜合剂含药血清(10%、15%、20%)处理HepG2细胞，CCK-8法检测细胞存活率，流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况，RT-qPCR和Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 肝喜合剂含药血清可抑制HepG2细胞生长(P<0.05,P<0.01),促进HepG2细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),升高Bax、Puma、active caspase-9蛋白表达及Bax、Puma mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 肝喜合剂可有效抑制HepG2细胞增殖，促进凋亡，其机制可能与促进凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9表达有关。     

苗药白龙须对RA滑膜细胞STAT-3/IL-17炎症通路的影响

目的:观察苗药白龙须对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(RA-FLS)增殖及STAT-3相关炎症通路的影响，揭示白龙须对RA滑膜炎症的调控机制。方法:培养3～5代RA-FLS细胞，分为空白组(胎牛血清)、正常组(正常兔血清)、雷公藤多苷(TG)组、来氟米特(LEF)组、白龙须低剂量组、白龙须中剂量组和白龙须高剂量组，按各组剂量加含药血清培养，用CCK8法检测各组RA-FLS增殖抑制率的差异，ELISA法检测RA-FLS与CD4⁺T细胞共培养上清液中炎症细胞因子IL-6、IL-17、IL-23和TNF-α浓度，蛋白印迹法(Wersten Blots)检测RA-FLS中pSTAT-3、SOCS-3的蛋白表达。结果:白龙须能够抑制RA-FLS的增殖，降低共培养体系细胞上清中IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α等4种炎症细胞因子的浓度，降低RA-FLS中pSTAT-3的表达量，同时上调SOCS-3蛋白表达。结论:白龙须可能通过抑制STAT-3/IL-17炎症通路的活化发挥抗炎作用，抑制RA-FLS持续性增殖。     

基于AMPK-mTOR信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病的影响

目的?观察甲亢宁胶囊对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1凋亡的影响，基于磷酸腺甙活化蛋白激酶（AMPK）-雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病（GD）的影响。方法?M22诱导人甲状腺滤泡上皮细胞株（Nthy-ori-3-1）建立GD细胞模型，设对照组、模型组、空白血清组、甲亢宁含药血清低剂量组、甲亢宁含药血清中剂量组和甲亢宁含药血清高剂量组。CCK8检测甲亢宁含药血清高、中、低浓度干预Nthy-ori-3-1增殖的抑制率；ELISA检测各组细胞上清液中cAMP释放量；流式细胞术检测各组Nthy-ori-3-1细胞凋亡情况；qRT-PCR检测各组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2-相关X 蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3）mRNA表达；Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达。结果?甲亢宁含药血清各剂量组Nthy-ori-3-1细胞凋亡率较模型组增高（P<0.05），且随着药物浓度升高，细胞凋亡率越高（P<0.05）。与对照组比较，模型组的cAMP释放量升高，Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达量及蛋白表达升高，p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，甲亢宁含药血清低、中、高剂量组cAMP 释放量减低，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达升高， Bcl-2 mRNA及蛋白表达、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01）；同时，甲亢宁含药血清中、高剂量组p-AMPK蛋白表达升高（P<0.01）。结论?甲亢宁含药血清促进细胞凋亡，对GD细胞凋亡的调控作用可能与通过激活AMPK-mTOR信号通路有关。     

扶正康复合剂与顺铂联用抑制移植性肺癌的实验研究

目的:研究扶正康复合剂对移植性肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将48只NOD/SCID裸鼠随机分为8组:模型对照组,顺铂组,扶正康复合剂低、中、高剂量组,顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组,共8组,每组6只,皮下接种H1975细胞建立移植性裸鼠肺癌模型,接种15 d后开始给药,连续给药7 d,称取体重及瘤重,计算抑瘤率,ELISA法检测裸鼠血清BUN、Cr、TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6的表达水平,免疫组化法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin的表达情况,q-PCR法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin mRNA的表达水平。结果:扶正康复合剂高剂量组、顺铂组、顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组与模型对照组相比:荷瘤裸鼠瘤质量显著减轻(P<0.05),血清TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-2水平显著升高(P<0.05),血清IL-6水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达量显著减少,Bax表达量增加。其中顺铂+扶正康复合剂高剂量给药组裸鼠抑瘤率最高,两者具有协同作用。与顺铂组相比:顺铂+扶正康复合剂高剂量组裸鼠血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),顺铂+扶正康复合剂中、高剂量组裸鼠血清TNF-α、INF-γ水平显著升高(P<0.01);顺铂+扶正康复合剂高剂量组Bcl-2、Survivin、VEGF表达量降低,Bax表达量增加。结论:扶正康复合剂与顺铂联用能够降低顺铂的肾损伤作用,调节机体的Th1/Th2细胞免疫平衡,通过抑制Bcl-2、Survivin、VEGF并促进Bax的表达,进而促进肺癌细胞的凋亡。     

西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖的影响

研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖以及Bcl-2,Bax,TP53 mRNA及蛋白表达的影响,以期探讨西黄丸抗乳腺癌的作用特点和机制。大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组(Control)和西黄丸含药血清组(XH),以含药血清干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Bcl-2,Bax,TP53 mRNA的表达,免疫荧光法检测Bax蛋白的表达。结果显示,西黄丸大鼠含药血清可抑制MDA-MB-435细胞增殖(P0.05),西黄丸大鼠含药血清可以提高MDA-MB-435细胞中TP53和Bax mRNA以及Bax蛋白的表达(P0.05),降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。同时西黄丸含药血清可以上调MCF-7细胞中Bax mRNA,并降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05),而西黄丸含药血清干预MCF-7细胞后TP53 mRNA和Bax蛋白表达无显著性差异。结果表明,西黄丸含药血清可诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡,机制有可能是通过上调TP53 mRNA表达,从而诱导凋亡蛋白Bax表达,促进Bax向线粒体转移,最终发挥诱导细胞凋亡作用。     

疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2的影响

目的：研究疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231三阴性乳腺癌(TNBC)细胞凋亡及相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达的影响。方法：给大鼠灌胃疏肝健脾解毒方制备含药血清,设置空白对照组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组及阳性对照组,以流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot测定Bcl-12、Bax蛋白表达量。结果：各给药组凋亡率及Bax、Bcl-12蛋白表达水平与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);含药血清低、中、高剂量组Bax、Bcl-2蛋白表达水平与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：疏肝健脾解毒方对MDA-MB-231 TNBC细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与干预Bax、Bcl-2蛋白表达有关。     

内热针通过调控Bcl-2/Bax平衡改善大鼠膝骨关节炎损伤

目的:观察内热针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效并探究其相关分子机制。方法:32只大鼠随机分为常组、模型组、电疗组和治疗组4组各8例。经过3周治疗后,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠膝关节软骨组织病理变化,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠滑膜液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)的分泌水平,RT-qPCR及Western blot分别检测软骨组织中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-Associated X(Bax)mRNA及蛋白表达水平,TUNEL染色观察各组大鼠膝骨关节中软骨细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠软骨组织的病理学变化,下调滑膜液中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-17的表达水平(P<0.01);上调软骨组织中Bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),下调Bax在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),且能显著抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡。结论:内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠的病理学变化,缓解炎症反应,抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡,这可能与其对Bcl-2/Bax平衡的调控密切相关。     

益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探究益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法选取15只大耳兔分别给予高剂量益肺方、低剂量益肺方和生理盐水连续灌胃14天处理,采心脏血液并取其血清,并在体外培养的肺癌A549细胞株中加入上述益肺方含药血清。使用MTT法检测肺腺癌A549细胞增殖能力,使用Annexin V/PI法检测细胞凋亡、使用Westen Bolt和RT-PCR定性、半定量检测Bcl-2、Bax、P-mTOR、P-AMPK、caspase-3、caspase-9的表达量。结果MTT比色结果显示,相比空白对照组,低剂量组和高剂量组细胞抑制率显著升高(P0.01),相比低剂量组,高剂量组的抑制率显著提高(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组含药血清caspase-3、caspase-9表达量显著增加,相比低剂量组,高剂量组caspase-3、caspase-9表达量显著增加(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01),相比低剂量组,高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01)。结论:益肺方含药血清可以抑制肺腺癌A549细胞增殖,同时可以通过调控AMPK/mTRO信号通路促进结直肠癌细胞的凋亡。     

补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:研究补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax、IL-2表达的影响。方法:1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞制作病理细胞模型,分组:正常组;模型组;补肾益气组。Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡;Real-time PCR和Western blotting法检测Bcl-2、Bax、IL-2的表达。结果:皮质酮诱导胸腺细胞凋亡率显著升高(P0.01);bax表达显著升高,bcl-2/bax比值、IL-2表达降低(P0.05)。与模型组比较,补肾益气组凋亡率降低(P0.05);Bax mRNA表达降低,bcl-2/bax比值、IL-2表达升高(P0.05)。结论:补肾益气方含药鼠血清能通过改善模型细胞bcl-2/bax的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡,提高胸腺依赖性免疫功能。     

活血消瘿方含药血清调控AMPK/mTOR通路对脂多糖诱导的甲状腺滤泡上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨活血消瘿方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的甲状腺滤泡上皮细胞(TFECs)自噬和凋亡的影响以及作用机制。方法 光学显微镜观察分离培养的SD大鼠TFECs细胞的形态;免疫荧光染色鉴定TFECs中特异抗原甲状腺球蛋白(Tg)。取对数生长期的TFECs,分为对照组、LPS组、含药血清组、含药血清+compound C(AMPK抑制剂)组、含药血清+MHY1485(mTOR激活剂)组,MTT法检测各组细胞活力;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测各组细胞自噬小体变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡;western blot检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)I、LC3II、Beclin1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达。结果 光学显微镜观察显示,TFECs形态为梭形、形态均一,且可成簇生长。免疫荧光结果显示,TFECs细胞质中可见较强的Tg荧光染色。与对照组比较,LPS组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著降低,炎性因子IL-6 、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著升高(P< 0.05);与LPS组比较,含药血清组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著升高,炎性因子IL-6 、 TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著降低(P< 0.05);与含药血清组比较,含药血清+compound C组、含药血清+MHY1485组TFECs中相应指标与上述趋势相反。结论 活血消瘿方含药血清对LPS诱导的TFECs自噬的促进作用及细胞凋亡的抑制作用可能与激活AMPK/mTOR通路有关。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊含药血清影响软骨细胞线粒体凋亡通路的作用机制。方法:SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,Ⅱ型胶原原位杂交鉴定。第3代软骨细胞培养72h,SNP诱导软骨细胞凋亡,采用含药血清干预凋亡软骨细胞,Hocehst 33342染色检测软骨细胞的凋亡率,Real time RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:干预24h,软骨细胞的OD值,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bcl-2mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显低于空白组(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能下调软骨细胞促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导。