碱性成纤维细胞生长因子对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor ,bFGF)对兔晶状体上皮细胞（rabbit lens epithelia cell,RlECs)的作用。方法：采用bFGF作用于第2－3代培养细胞,用MTT法测定细胞对增殖的影响;电观察细胞形态的变化,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果：bFGF可促进晶状体上皮细胞的增殖,尤其是浓度为10μg.L^-1作用最明显,透射电镜显示细胞增殖活跃,流式细胞仪观察进入S期的细胞明显增加。结论：bFGF是促进培养兔晶状体上皮细胞增殖的重要因素。     

碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞增殖及移行作用的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养的人晶状体上皮细胞（HLEC）增殖及移行作用的影响.方法 在无血清培养液培养的HLEC中分别加入不同终浓度的bFCF（0.01、0.1、1、10及100 μg/L）,MTT法测定其促细胞增殖的情况;流式细胞仪分析细胞周期;HLEC损伤愈合模型,观察不同终浓度bFGF处理24 h后HLEC的移行情况.结果 bFGF浓度为0.1、1、10、100 μg/L时,其对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,100 μg/L作用24 h增殖率最大,达112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性.bFGF通过促进细胞周期变化,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多,通过促进HLEC由G0向G1的转化来促进细胞的增殖;bFGF浓度1、10、100 μg/L作用24 h.可明显促进HLEC的移行,其移行能力分别为27.21%、154.42%、和238.77%,与阴性对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0.01）.结论 bFGF可促进HLEC的增殖和移行,是HLEC强有力的有丝分裂原和促移行因子.     

碱性成纤维细胞生长因子对牛晶状体上皮细胞增殖的影响及其在牛晶状体上皮细胞中的蛋白表达

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ） 在体外对牛晶状体上皮细胞（ＢＬＥＣ） 增殖的影响及确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 方法　ＢＬＥＣ 原代培养。用不同浓度的ｂＦＧＦ 及３Ｈ胸腺嘧啶（３ＨＴＤＲ） 处理ＢＬＥＣ３６ ｈ 后,液闪测定ｂＦＧＦ 对ＢＬＥＣ３ＨＴＤＲ 掺入率的影响。Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹（ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ） 法确定ＢＬＥＣ 是否表达ｂＦＧＦ 蛋白。 结果　ｂＦＧＦ 在体外有促进ＢＬＥＣ 增殖作用,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 法表明ＢＬＥＣ 可表达低分子量（１８ ０００）ｂＦＧＦ 蛋白。 结论　ｂＦＧＦ 可能通过晶状体上皮细胞的自分泌,促进白内障术后残留晶状体上皮细胞的增殖,导致后发性白内障     

碱性成纤维细胞生长因子作用于人晶状体上皮细胞系内Ca2+转导通路的初步研究

目的 初步探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于人晶状体上皮细胞(LEC)系-B3(LEC-B3)内Ca^2 转导的途径。方法 人LEC-B3传代培养,在激光扫描共焦显微镜下于解冻后的第三代细胞中分别加入10μg／L bFGF、10mmol／L咖啡因、10mmol／L兰尼碱、50mmol／L普鲁卡因及0．5mmol／L金雀异黄素,通过观测细胞内相对荧光强度实时观察细胞内Ca^2 浓度的变化。结果 10μg/L bFGF在细胞外液含或无Ca^2 、Mg^2 的情况下,均可迅速引起人LEC-B3内Ca^2 浓度升高,且持续时间基本相同;而在细胞外液无Ca^2 和Mg^2 、含1mmol／L乙二醇双乙醚四乙酸时,人LEC-B3内Ca2^ 浓度更高。50mmol／L普鲁卡因和10mmol／L兰尼碱与10μg/L bFGF共同作用,人LEC-B3内Ca^2 浓度虽升高,但低于10μg/L bFGF单独作用的效果;10mmol／L咖啡因和0．5mmol／L金雀异黄素可明显降低追加的10μg/L bFGF升高人LEC-B3内Ca^2 浓度的作用,后者尤为明显。结论 bFGF主要通过激活络氨酸蛋白激酶信号转导途径引起人LEC-B3内Ca^2 浓度升高;肌醇1,4,5-三磷酸受体和兰尼碱受体通道发挥一定作用;Ca^2 主要来源于细胞内Ca^2 库释放。（中华眼科杂志,2004,40：832-835)     

增殖细胞核抗原反义寡核苷酸对牛晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　探讨增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)反义寡核苷酸对牛晶状体上皮细胞增殖的影响。方法　取体外培养的第 2代牛晶状体上皮细胞用于实验。A～F组分别加入PBS、30 μmol/LPCNA反义寡核苷酸、30 μmol/LPCNA正义寡核苷酸、10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、10 μg/LbFGF及 30 μmol/L反义寡核苷酸、10 μg/LbFGF及30 μmol/L正义寡核苷酸 ;常规培养 2 4h后 ,使用流式细胞仪检测细胞周期的变化和PCNA蛋白的含量。提取细胞mRNA ,采用地高辛标记PCNA探针和Northen酶联吸附免疫杂交法 ,在酶标仪上测定吸光度 (A值 )以表达PCNAmRNA含量。结果　牛晶状体上皮细胞S期的细胞数量占细胞总数的百分比A组为 ( 15 7± 1 8) % ,B组为 ( 7 9± 0 4) % ,两组比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;PCNAmRNA含量A组A值为 0 2 0 6± 0 0 0 4,B组A值为 0 173± 0 0 14,两组比较差异有显著意义 (P<0 0 5 ) ;PCNA蛋白表达率A组为 ( 5 5 2 7± 2 6 4) % ,B组为 ( 12 32± 1 82 ) % ,两组比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。牛晶状体上皮细胞S期的细胞数量占细胞总数的百分比D组为 ( 2 3 4± 2 8) % ,E组为( 19 9± 2 3) % ,两组比较差异有显著意     

碱性成纤维细胞生长因子在牛晶状体上皮细胞中的表达和调控

目的　探讨牛晶状体上皮细胞 (BLEC)中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达和胎牛血清对表达的调控作用 ,推测白内障摘除术后血 房水屏障破坏对bFGF的影响。方法　采用免疫组化法和Westernblot法检测体外培养的BLEC中bFGF的表达 ,以及不同浓度胎牛血清 (0 1%、1 0 %及 10 0 % )作用 2 4h、10 0 %胎牛血清作用不同时间 (4、8、12及 2 4h)对bFGF相对表达量的影响。结果　免疫组化法检测显示绝大部分BLEC胞浆中可见bFGF表达。Westernblot法检测显示BLEC中表达的bFGF相对分子质量为 180 0 0 ;bFGF的表达随胎牛血清浓度的增加而增强 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;随胎牛血清作用时间的延长而增强 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　BLEC中可见低相对分子质量bFGF的表达 ;胎牛血清可诱导BLEC中bFGF表达 ;白内障摘除术后血 房水屏障的破坏可导致房水中血清浓度改变 ,引起晶状体上皮细胞中bFGF表达增强。     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸及其脂质体对体外培养的大鼠晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸及其脂质体对大鼠晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用。方法 体外培养大鼠LEC,细胞传代后分别加入bFGF反义和正义寡核苷酸及其脂质体,以营养液和无药脂质体为对照培养24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖情况,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞bFGF mRNA的表达情况。结果 大鼠LEC原代培养24 h可见细胞生长,形态为多边形,培养2-3周细胞汇合成片;传代培养细胞可在1～2周汇合成片。MTT法测定显示,bFGF反义寡核苷酸组(Ⅰ组)、正义寡核苷酸组(Ⅱ组)及营养液组(Ⅴ组)的吸光度(A值)分别为0.138±0.074、0.325±0.097及0.370±0.079,Ⅰ组A值显著小于Ⅱ和Ⅴ组(P=0.024,0.005);bFGF反义寡核苷酸脂质体组(Ⅲ组)、正义寡核苷酸脂质体组(Ⅳ组)及无药脂质体组(Ⅵ组)的A值分别为0.128±0.032、0.258±0.120及0.348±0.017,Ⅲ组A值显著小于Ⅵ组(P=0.000)。RT-PCR法检测结果显示,以2μg总RNA为模板,循环30次,bFGF反义寡核苷酸、bFGF正义寡核苷酸及营养液的扩增产物的量分别为0.33、0.99及0.85μg;:bFGF反义寡核苷酸脂质体、bFGF正义寡核苷酸脂质体及无药脂质体的扩增产物的量分别为0.23、0.48及0.56μg。结论大鼠LEC可在体外培养;bFGF反义寡核苷酸及其脂质体可     

碱性成纤维细胞生长因子对不同年龄白内障患者晶状？…

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞（ｈｕｍａｎ ｌｅｎｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ,ＨＬＥＣ）增殖的影响并探讨机制。方法 将白内障手术中取出的晶状体前囊膜在１０ｕｇ／ＬｂＦＧＦ中培养４８ｈ,免疫组织化学法染色后,采用医 功能图像分析软件测定增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉ９ｆｅｒａｔｉｎｇ     

兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变中碱性成纤维细胞生长因子和增殖细胞核抗原表达的变化

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibrob-last growth factor，bFGF）和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）在兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR）中表达的动态变化及其相关性。方法采用原位杂交法和免疫组化法分别检测兔外伤性PVR模型bFGF和PCNA表达，染色结果行图像分析。结果伤后bFGF和PCNA表达呈现先升高后降低的动态变化，14d组阳性表达最高（平均积分光密度分别为18502.31±10822.69和89343.75±19686.711，与7d、21d、28d组比较差异有显著性：bFGF和PCNA表达之间有显著相关性（r=0.580，P≤0.01）。结论bFGF参与外伤性PVR增殖细胞的生长调控，与细胞增殖的动态变化呈高度相关性。     

γ干扰素对兔晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的 :探讨γ干扰素 (interferon γ ,IFN γ)对兔晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearcntigen ,PCNA)表达的影响。方法 :采用新西兰白兔白内障囊外摘除模型 ,术中囊袋内灌注BSS为A组即对照组。B、C组为治疗组 ,分别灌注 10 3 IU/mlIFN γ和 10 4IU/mlIFN γ。术后 3个月运用免疫组化法和计算机图象分析技术检测晶状体上皮细胞PCNA表达。结果 :γ干扰素组PCNA阳性表达少 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,高浓度抑制作用强。结论 :IFN γ有抑制兔晶状体上皮细胞PCNA表达的作用 ,IFN γ对PCNA表达的抑制作用具有浓度依赖性     

bcl-2基因和增殖细胞核抗原在人晶状体上皮细胞中的表达

目的：观察正常胚胎、儿童和老年人晶体上皮细胞中bcl-2基因和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuchlear antigen,PCNA)的表达状况,探讨其与晶状体上皮细胞增殖潜能的关系。方法采用免疫组织化学染色法光谱下检测胚胎组（胎龄5－10个月）、儿童组（7个月至13岁）及老年组（＞50岁）晶状体上皮细胞中bcl-2基因和PCNA的表达状况。结果：bcl-2基因和PCNA在胚胎组和儿童组晶状体上皮细胞中表达的阳性率显著高于老年组（P＜0．01）,且以晶状体赤道部明显,结论日 状体上皮细胞的增殖潜能以及后发性白内障的发生与晶状体上皮细胞内bcl-2基因及PCNA的表达有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞增殖的影响

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晶状体前囊膜下上皮细胞增殖性病变的临床病理分析

目的：观察晶状体前囊膜下上皮细胞增殖的组织病理学变化,并探讨其发生原因。方法：取不同病因致手术摘除的伴晶状体前囊膜下上皮细胞增殖的眼球标本64例,其中眼外伤36例,绝对期青光眼10例,角巩膜葡萄肿6例,视网膜母细胞瘤5例,眼内炎4例,白内障手术后2例,糖尿病性白内障1例,在光镜下进行组织病理学观察研究。结果：增殖的晶状体前囊膜下上皮细胞形态不规则,排列不整齐、向后囊膜下延伸;囊膜破裂或部分缺如 前囊膜下纤维结缔组织化生,纤维组织形成;晶状体纤维崩解、液化和钙化,结论：眼内多种病状态,如眼外伤、眼内炎、青光眼,以及糖尿病等全身疾患均可命名晶状体前囊膜下上皮细胞增殖,导致晶状体发生病变,眼内炎和眼外伤后晶状体发生增殖的程度最重。     

白喉毒素氨基端389个氨基酸-人碱性成纤维细胞生长因子靶向毒素的克隆表达及对人晶状体上皮细胞毒性研究

目的 为阻止白内障术后囊膜混浊寻找物质基础.方法 提取灭活的白喉杆菌DNA和12周胎脑皮质RNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增出编码白喉毒素氨基端389个氨基酸(DT389)的基因片段及编码18kd人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的基因全序列,将两基因先后插入表达载体中,构建含有DT389-hbFGF融合基因的表达质粒,测序后,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,纯化鉴定表达产物,噻唑蓝(MTT)试验检测其对体外培养人晶状体上皮细胞(HLECs)的毒性作用,流式细胞术鉴定不同剂量融合毒素所致HLECs成活率及细胞死亡形式.结果 扩增得到DT389基因片段及hbFGF全基因序列;构建了DT389-hbFGF融合基因的原核表达载体并成功表达;表达的融合蛋白对HLECs有明显的毒性作用并在一定范围内呈明显剂量依赖性,半数致死量为3.8×10-11mol/L,所致细胞死亡方式主要以凋亡为主.结论 DT389-hbFGF免疫毒素克隆表达的成功为药物促晶状体上皮细胞的凋亡、抑制后发障的研究奠定了物质基础.     

bFGF对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦＧ）在体系对人晶状体上皮细胞增殖的影响及机制探讨。方法 取人晶状前囊膜培养。加入不同浓度ｂＦＧＦ（１μｇ．Ｌ＾－１１０μｇＬ＾－１、１００μｇ．Ｌ＾－１）,４８ｈ后免疫组化测增殖核细胞抗原阳性面积率,取人晶状体前囊膜免疫组化测ｂＦＧＦ受体。结果 一定浓度（１～１００ｕｇ．Ｌ＾－１）的ｂＦＧＦ在体     

碱性成纤维细胞生长因子受体基因在牛眼晶体上皮细胞内的表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对晶体上皮细胞促增殖作用的机理。方法从培养的第二代牛眼晶体上皮细胞提取ＲＮＡ，经逆转录反应合成ｃＤＮＡ。借助从人体胎盘纤维细胞ｂＦＧＦ受体序列合成的寡核苷酸引物，聚合酶链反应体外扩增ｃＤＮＡ。扩增的ｃＤＮＡ片段克隆后，Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其序列。结果探测出牛眼晶体上皮细胞ｂＦＧＦ受体的ｍＲＮＡ，测序后发现其氨基酸序列片段中仅３个氨基酸与人体不同。结论晶体上皮细胞存在ｂＦＧＦ受体，当ｂＦＧＦ与其受体结合后，对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊具有重要作用。     

姜黄素诱导牛晶状体上皮细胞凋亡的机制

目的探讨天然药物姜黄素对晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的诱导效应及其机制。方法通过透射电镜观察姜黄素对体外培养的牛LEC超微结构的影响;采用流式细胞术(FCM)观察姜黄素对LEC的DNA含量及线粒体跨膜电位(AΨm)的影响。结果透射电镜下可观察到姜黄素组LEC呈现核染色质凝聚、固缩、边集、核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变。经FCM检测显示,姜黄素组作用早期(24 h)LEC细胞核的DNA量没有改变,在作用的中、晚期(48、72 h)细胞核内DNA呈现明显的下降趋势,DNA含量显著低于空白对照组(P<0．01);而姜黄素作用早期线粒△Ψm已经开始下降,8 h时△Ψm下降的细胞数占(4．13±0．52)％;作用72 h后达高峰,占(46．91±3．71)％。各期与正常对照组的差异均有统计学意义(P<0．01)。结论姜黄素可通过细胞核和细胞质两种途径诱导LEC凋亡。诱导LEC凋亡可能是姜黄素减少晶状体后囊膜混浊的细胞和分子机制,姜黄素可能成为一种新型的、高效低毒的防治后发性白内障的药物。