影响替硝唑葡萄糖注射液有关物质含量不合格的因素

注射液是指由静脉滴注输入体内的大剂量液体制剂.有关物质系指中药材经提取、纯化制成注射剂后,残留在注射剂中可能含有并需要控制的物质.除另有规定外,一般还应控制蛋白质、鞣质、树脂等;静脉注射液还应控制草酸盐、钾离子等.     

1994年江苏首例霍乱菌株的分型

江苏1994年度,由病人分离的首例pT”or霍乱菌株,经vP;～vP;噬菌体裂解、山梨醇发酵、溶血、溶源性噬菌体敏感性、溶源性等诸项实验检查,由江苏省卫生防疫站鉴定为噬菌体-生物分型fo型。1994年江苏首例霍乱菌株的分型@蒋小皖~~     

应用激光显微分离技术在骨肉瘤组织原位筛选噬菌体肽库

目的将激光显微分离(laser capture microdissection, LCM) 技术应用于噬菌体表面呈现肽库的筛选过程,建立一种可以直接在天然组织中筛选肽库的方法。方法将新鲜人骨肉瘤组织块在噬菌体肽库溶液振荡孵育后制成组织冰冻切片,免疫组化染色检测噬菌体在组织中的浸润扩散。改进常规LCM切片处理方法,以冻干法替代酒精/二甲苯法脱水,以期在LCM操作过程中提高切片上噬菌体的存活率。LCM法分离摄取骨肉瘤切片上的肿瘤靶细胞,转染回收这些细胞上特异结合的噬菌体。滴定法检测所筛选的噬菌体对特异性细胞的亲和力。结果利用LCM技术,可以由肿瘤冰冻切片上收集到足够的与特异性噬菌体短肽,应用于噬菌体表面呈现肽库筛选。经过3轮筛选后所获得的噬菌体与人骨肉瘤组织的特异性亲和力提高16倍。结论本研究首次将LCM技术应用于噬菌体表面呈现肽库的筛选,可以使我们直接在新鲜人肿瘤组织中筛选与特定细胞群甚至单个细胞亲合的短肽;同时又避免了天然组织中其他杂质细胞的污染,为研制细胞特异性导向载体提供了一个新的途径。     

应用激光显微分离技术在骨肉瘤组织原位筛选噬菌体肽库

目的：将激光显微分离（laser capture microdissection，LCM）技术应用于噬菌体表面呈现肽库的筛选过程，建立一种可以直接在天然组织中筛选肽库的方法。方法：将新鲜人骨肉瘤组织块在噬菌体肽库溶液振荡孵育后制成组织冰冻切片，免疫组化染色检测噬菌体在组织中的浸润扩散。改进常规LCM切片处理方法，以冻干法替代酒精/二甲苯法脱水，以期在LCM操作过程中提高切片上噬菌体的存活率。LCM法分离摄取骨肉瘤切片上的肿瘤靶细胞，转染回收这些细胞上特异结合的噬菌体。滴定法检测所筛选的噬菌体对特异性细胞的亲和力。结果：利用LCM技术，可以由肿瘤冰冻切片上收集到足够的与特异性噬菌体短肽，应用于噬菌体表面呈现肽库筛选。经过3轮筛选后所获得的噬菌体与人骨肉瘤组织的特异性亲和力提高16倍。结论：本研究首次将LCM技术应用于噬菌体表面呈现肽库的筛选，可以使我们直接在新鲜人肿瘤组织中筛选与特定细胞群甚至单个细胞亲合的短肽；同时又避免了天然组织中其他杂质细胞的污染，为研制细胞特异性导向载体提供了一个新的途径。     

青海高原喜马拉雅旱獭血清中特异性鼠疫噬菌体抗体的检测

目的 利用微量法间接检测青海高原喜马拉雅旱獭血清中特异性鼠疫噬菌体抗体,为后续噬菌体和哺乳动物免疫学之间的相互作用、噬菌体治疗、噬菌体与生态学研究提供理论依据。方法 以青藏高原鼠疫疫源地分离的3株野生型鼠疫噬菌体和实验室诊断用鼠疫噬菌体为抗原,利用微量板法和双层琼脂平板法定性检测青海高原同德县、贵南县、共和县、兴海县、天峻县5个疫源县采集于2020年、2021年7—9月份喜马拉雅旱獭血清中的特异性鼠疫噬菌体免疫抗体。结果 4株鼠疫噬菌体分别与847份喜马拉雅旱獭血清进行中和试验,通过点滴法均未检测到与鼠疫噬菌体抗原反应的特异性噬菌体免疫抗体。结论 青海高原喜马拉雅旱獭血清中未发现特异性鼠疫噬菌体抗体,这与2020—2021年青海省天峻县、同德县、共和县、兴海县、贵南县5个鼠疫疫源县采样地点的鼠疫流行病学显示为静息期无鼠疫病原体存在的流行特点一致,即无鼠疫病原体的存在,间接说明这些鼠疫疫源地鼠疫噬菌体不存在或者比较微弱的存在,故检测不到特异性鼠疫噬菌体免疫抗体。可能反映了宿主动物与鼠疫噬菌体自然接触频率少,抗噬菌体抗体可能与鼠疫感染的形式和疾病的强度有关。     

从土壤样本中分离鼠疫噬菌体方法的建立

目的建立由土壤环境中分离鼠疫噬菌体的方法。方法采用点滴法和双层琼脂平皿法分离模拟土壤中的鼠疫噬菌体。结果分别加入5、50、500、1 000μl鼠疫噬菌体的模拟土壤样本,通过点滴法分离噬菌体结果显示,过滤液在稀释前均出现明显的噬菌斑,高压灭菌的模拟土壤样本中鼠疫噬菌体的最小检出量为30 PFU噬菌体颗粒;通过双层琼脂平皿法检测模拟土样中鼠疫噬菌体的结果显示,4个模拟土壤样本在双层琼脂平皿上均出现明显的噬菌斑,且不同浓度模拟土壤样本过滤前后鼠疫噬菌体的效价都会降低两个数量级以上。结论采集的环境样本中野生型鼠疫噬菌体含量很少时,可通过富集提高鼠疫噬菌体的分离率。双层琼脂平板法检测鼠疫噬菌体,既能检测出噬菌体,又能较准确地测定其效价。     

T4、φχ174D和 f2三种噬菌体对戊二醛消毒剂抵抗力的比较研究

目的筛选出消毒实验中评价消毒因子对病毒灭活效果的指示噬菌体.方法比较研究噬菌体T4、φχ174D和f2对戊二醛消毒剂的抵抗力.消毒剂对噬菌体的灭活效果采用悬液定量灭活试验、中和剂鉴定试验、噬菌体的检测采用双层琼脂法.结果①3000 mg/L的戊二醛对噬菌体T4作用20 min,或6000 mg/L的戊二醛对噬菌体T4作用5 min即可达到消毒水平(对噬菌体T4的灭活对数值(LIV)或噬菌体T4的对数减少值[LRV)(log10No-log10Nt)≥4.00 log10];②2500 mg/L的戊二醛对噬菌体φχ174D作用20 min,或5000 mg/L的戊二醛对噬菌体φχ174D作用5 min达到消毒水平;③4000 mg/L的戊二醛对噬菌体f2作用40 min,或8000 mg/L的戊二醛对噬菌体f2作用10 min达到消毒水平.结论上述三种噬菌体对戊二醛的抵抗力由强到弱为:噬菌体f2>噬菌体T4>噬菌体φχ174D.     

生物制品的定义

用微生物(细菌、噬菌体、立克次氏体、病毒等)、微生物代谢产物、寄生虫、动物 毒素、人或动物的血液或组织等直接制备或用现代生物技术、化学方法制成,作为     

T4、φχ174D和 f2三种噬菌体对戊二醛消毒剂抵抗力的比较研究

目的筛选出消毒实验中评价消毒因子对病毒灭活效果的指示噬茵体。方法比较研究噬菌体T4、ψX174D和f2对戊二醛消毒剂的抵抗力。消毒剂对噬菌体的灭活效果采用悬液定量灭活试验、中和剂鉴定试验、噬菌体的检测采用双层琼脂法。结果①3000mg／L的戊二醛对噬菌体T4作用20min,或6000mg／L的戊二醛对噬菌体T4作用5min即可达到消毒水平（对噬菌体T4的灭活对数值（LIV）或噬菌体T4的对数减少值CLRV）（log10No-log10Nt）≥4．00log10];②2500mg／L的戊二醛对噬菌体似174D作用20iln,或5000mg／L的戊二醛对噬菌体ψX174D作用5min达到消毒水平;③4000mg／L的戊二醛对噬菌体力作用40min,或8000mg／L的戊二醛对噬菌体,2作用10min达到消毒水平。结论上述三种噬菌体对戊二醛的抵抗力由强到弱为。噬菌体f2〉噬茵体T4〉噬菌体以ψX174D。     

T4、ΦX174D、MS2和f2噬菌体对γ射线抵抗力的比较研究

目的为筛选出辐照灭菌中评价对病毒灭活效果的指示噬菌体,比较研究了噬菌体T4、ФX174D、MS2和f2,以及两种细菌参考株大肠杆菌8099和枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372对电离辐射γ射线的抵抗力。方法采用钻源。60^Co-γ射线辐射源对噬菌体和细菌进行辐照处理;灭活方法采用悬液灭活试验;噬菌体的检测采用双层琼脂法。结果方差分析表明,不同剂量的γ射线组间（P〈0．01）和不同的噬菌体组间（P〈0．05）,差异均有统计学意义。LIV（灭活对数值）和KL（杀灭对数值）为：（1）T4、ФX174、f2和MS24种噬菌体经100Gy的γ射线辐照可达到消毒水平（LIV≥4．00log10）;在此剂量下4种噬菌体的LIV分别为：6．31,6．92,5．74和4．46log10;（2）在前述剂量下,大肠杆菌8099的KL〉7．97log10;（3）在前述剂量下,枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372的KL为1．61log10结论6种微生物对γ射线的抵抗力由强到弱为：枯草杆菌黑色变种芽孢〉噬菌体MS2〉噬菌体MS2〉噬菌体f2〉噬菌体T4〉ФX174〉大肠杆菌。     

噬菌体展示技术用于寄生虫病的研究

噬菌体展示 (phagedisplay)技术是指将蛋白分子或肽段的基因克隆到单链噬菌体的基因组中 ,并使噬菌体表面表达该异源性分子。其主要特点是将特定分子的基因型和表型统一在同一病毒颗粒中 ,即在噬菌体表面表达特定蛋白或肽 ,在噬菌体核心DNA中含有该蛋白或肽的结构基因。这种基因型和表型的统一使蛋白的基因工程改造成为可能。另外 ,该技术将扩增和选择有机地结合在一起 ,使表面表达特定蛋白或肽的噬菌体易于得到有效富集 ,并利于做进一步研究。噬菌体展示技术再生至今 ,已被广泛用于抗体文库及肽文库的构建和筛选、蛋白分子的识别和改造、…     

铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法　电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌 噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果　噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1～ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论　PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3 4     

吖啶橙与长波紫外线灭活血浆中f2噬菌体的形态变化

目的　观察吖啶橙 (AO)与长波紫外线 (UVA)消毒血浆中f2 噬菌体后形态的变化。方法　以f2 噬菌体为试验病毒 ,通过AO与UVA单用及联用灭活病毒效果测定筛选二者协同作用的最佳条件 ,在此最佳消毒条件下利用透射电镜观察f2 噬菌体在消毒前后形态的变化。结果　经AO处理后再经UVA照射 ,能明显减少血浆中f2 噬菌体的滴度 ,两因素的T E值大于 1;经有效灭活病毒的剂量 ( 6μg mlAO 4 5 0 0J m2 UVA)消毒后与消毒前相比 ,血浆中大多数f2 噬菌体由球形变为纺锤状和丝状 ,且轮廓变得不清晰 ,电子密度降低。结论　AO与UVA两因素具有协同增效作用 ;消毒后f2 噬菌体的形态明显发生了变化 ,由球形变为纺锤状和丝状。     

噬菌体宿主特异性变化的分子机制研究

噬菌体是细菌病毒,于1915年和1917年分别由Frederik Twort及 Felixd'Herelle发现.人们将噬菌体作为一种抗细菌感染的制剂来使用,并取得一定的研究成果,噬菌体研究一度成为研究热点.由于噬菌体具有严格的宿主特异性,这就限制了噬菌体治疗的发展.随着分子生物学的长足进展,人们对噬菌体及其宿主菌的相互作用、噬菌体寄生的基因控制及特异性吸附的分子生物学机制有了比较清楚的认识,可利用这些原理对噬菌体蛋白或基因进行有目的的人工改造,改变噬菌体的宿主谱,现就相关技术进行综述.     

分枝杆菌噬菌体Leo的生物学和基因组学特征

目的 筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息.方法 双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱.采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用Phred/PhraD/Consedh软件包组装,拼接重叠群,PCR扩增重叠群缺口.采用DNAStar软件包、Glimmer3.0基因预测软件、Promoter prediction/Prokaryotic程序进行基因成分分析,基因功能预测,启动子区预测,并同时对Leo作共线性分析及构建系统进化树.结果 噬菌体Leo由多面体头部和尾部构成,头部直径(70.0±3.0)nm,尾长(211.0±31.7)nm.其噬菌斑清晰透明,能裂解不同的结核分枝杆菌临床分离株.Leo基因组全长39 981 bp,GC含量66.86％,含3个可能的启动子区,不含串联重复序列和tRNA区.Leo含59个基因,gene32编码整合酶,不含编码阻遏蛋白的基因和不利基因,Leo与BPs和Angel相似性最高.结论 噬菌体Leo是一株不含不利基因的裂解性噬菌体,能裂解结核分枝杆菌,可以作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体.     

噬菌体抗体库展示技术及其研究进展

<正>1噬菌体展示技术的基本原理噬菌体展示技术(phage display technology)是一项通过基因重组的方法,将目的蛋白或部分片段基因以融合的方式重组到噬菌体的外壳蛋白的基因上,通过噬菌体的包装将目的蛋白展示在噬菌体的表面。这项技术在蛋白质组学、医药工程、临床等方面具有重要的应用价值。该技术是以改造的噬菌体     

转化生长因子-β1噬菌体模拟肽促进成纤维细胞增殖的效果

目的从噬菌体随机12肽库中筛选获得转化生长因子β1(TGF-β1)噬菌体模拟肽,评估其促进人正常皮肤成纤维细胞增殖的效果。方法以人TGF-β1单克隆抗体为靶,生物淘选噬菌体模拟肽。选择其中一组与TGF-β1基因序列相似度最高的噬菌体模拟肽,设定4组,阴性对照组、噬菌体M13对照组、TGF-β1对照组和噬菌体模拟肽组。噻唑蓝(MTT)比色法定量测定活细胞数量以检测细胞的增殖。免疫荧光方法检测噬菌体模拟肽与成纤维细胞的亲和力。实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞I型胶原蛋白(COL1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL3)和结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达水平。结果共获得10种噬菌体模拟肽,选择与TGF-β1基因序列相似度最高的第一组噬菌体模拟肽进行实验。MTT结果显示,噬菌体模拟肽组能够促进成纤维细胞增殖(P<0.05)。免疫荧光结果显示,噬菌体上的模拟肽,而非噬菌体本身,能够与成纤维细胞结合;实时定量PCR的结果显示,48 h噬菌体模拟肽组COL1和COL3 mRNA的表达水平较阴性对照组和噬菌体M13对照组均明显增高(P<0.05),而CTGF的mRNA表达水平较阴性对照组和噬菌体M13对照组2 d时明显增高(P<0.05),3 d时表达有所降低(P<0.05)。结论噬菌体模拟肽可能是通过调节CTGF的表达,调节成纤维细胞的增殖。     

剑川野鼠鼠疫疫源地鼠疫噬菌体的分离及其流行病学意义

目的 调查剑川野鼠鼠疫疫源地宿主动物中是否携带鼠疫噬菌体,并探讨其流行病学意义。方法 2017年1-6月采集剑川野鼠鼠疫疫源地4个曾流行过鼠疫乡镇6个自然村的鼠类标本,以鼠疫疫苗株EV76为饲养菌,采用双层平板法分离鼠疫噬菌体,并对分离结果进行流行病学分析,同时挑取部分噬菌体进行电镜扫描。结果 共获得641份标本（齐氏姬鼠334只,大绒鼠236只,其余71只）,分离到9株鼠疫噬菌体,总分离率1.40%;有4个疫点（白山母村、石龙村、新松村、大庆村）分离到了鼠疫噬菌体,另外2个点（长乐村、西门社区）未分到鼠疫噬菌体;9株鼠疫噬菌体中,8株分离自齐氏姬鼠,1株自大绒鼠;初次分离这些鼠疫噬菌体时,其噬斑在双层平板上表现为大（直径~2.0 mm）、中（~1.0 mm）及小（<0.5 mm）3种噬斑;4株有代表性噬菌体皆为肌尾病毒科噬菌体。结论 剑川野鼠鼠疫疫源地中普遍存在鼠疫噬菌体,齐氏姬鼠是主要的携带宿主,所分鼠疫噬菌体为肌尾病毒科噬菌体且具有多态性,值得进一步研究。     

青藏高原野生型鼠疫噬菌体对鼠疫诊断噬菌体耐受株的特异性裂解

目的研究青藏高原野生型鼠疫噬菌体对鼠疫诊断噬菌体耐受株的特异性。方法 18株野生型鼠疫噬菌体通过富集、分纯后,利用双层琼脂平板法检测其对实验室诱导的3株鼠疫诊断噬菌体耐受株的特异性裂解能力。结果分离自青藏高原鼠疫疫源地的18株野生型鼠疫噬菌体对典型鼠疫弱毒菌EV 76和0614F均能完全裂解,对R-0614F-10代菌株不完全裂解,对R-0614F-38代、R-0614F-43代不裂解,这与鼠疫诊断噬菌体Yep-phi对R-0614F-10代、R-0614F-38代、R-0614F-43代的裂解能力一致。选取3株野生型鼠疫噬菌体作用于鼠疫诊断噬菌体耐受株R-0614F-12代,形成的噬菌斑大小不一致,直径为2~10 mm,边缘不整齐,中心有再生菌生长。结论 18株野生型鼠疫噬菌体对3株鼠疫诊断噬菌体耐受株裂解作用的特异性可能与鼠疫菌细胞壁受体结构和菌株基因组序列发生改变有关。     

噬菌体生物活性物质及其应用研究进展

噬菌体(Bacteriophage,Phage)是一类能特异性感染细菌、真菌等微生物的病毒的总称，20世纪初就被应用于细菌感染性疾病的治疗。随着抗生素的发现和应用对噬菌体的研究逐渐减少，近年“超级耐药细菌”的出现和流行使噬菌体疗法再次受到关注。噬菌体疗法不仅其本身可作为生物制剂替代抗生素还可将其尾丝蛋白、裂解酶及穿孔素等具有识别、裂解细菌功能的生物活性物质应用于细菌感染性疾病的治疗。噬菌体疗法的优势在于噬菌体特异性好、易获得，可在不影响机体正常菌群的情况下靶向清除病原菌等，但作为活的生物体，也存在免疫原性强、裂解谱窄等问题。噬菌体活性物质包括识别蛋白、解聚酶、穿孔素及其他功能蛋白等，应用于细菌感染性疾病治疗可避免上述问题，但也存在研发周期长、应用范围小等缺点。本综述主要讲述与裂解细菌有关的噬菌体生物活性物质的组成、作用机制和应用。