谷氨酸在低氧性脑损伤中的作用

目的探讨谷氨酸(Glu)在低氧性脑损伤的作用机制。方法实验采用氨基酸分析和放免技术,研究缺氧后12,24,48h脑组织Glu和钙调蛋白(CaM)含量的变化以及钙/钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CaM-PKⅡ)活性的影响及其机制。结果缺氧组脑组织Glu、CaM含量在缺氧后48h明显高于12,24h和对照组;缺氧组脑组织Ca2+/CaM-PKⅡ活性在缺氧后48h明显低于12,24h和对照组;而N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂地佐环平(MK-801)和钙通道拮抗剂尼莫地平(nimodipine)可对抗这种改变。结论缺氧后Glu的兴奋毒引起脑损伤和Ca2+/CaM-PKⅡ的活性下降,主要由NMDA受体介导和胞外Ca2+内流增加有关。     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的 观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞内游离钙的浓度（[Ca^2 ]i)，环磷酸腺苷（cAMP），钙调蛋白（CaM)和钙调蛋白激酶Ⅱ（Ca^2 /CaM-PKⅡ）。方法 采用放免技术，从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性，细胞内[Ca^2 ]i变化，cAMP,CaM和Ca^2／CaM-PKⅡ的。结果 缺氧组PC12细胞cAMP,CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组：Ca^2 /CaM-PKⅡ活性明显低于正常对照组。结论 [Ca^2 ]i,cAMP,CaM和Ca^2 /CaM-PKⅡ在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

Ca^2＋-钙调蛋白在M3R介导逼尿肌细胞收缩中的作用

背景：毒蕈碱受体在调节逼尿肌细胞收缩过程中起重要作用，其受体亚型M3R直接介导逼尿肌细胞收缩。Ca^2＋是刺激逼尿肌细胞收缩的直接因素，Ca^2＋有数十种受体结合蛋白质，Ca^2＋通过与不同受体蛋白结合调节不同反应。 目的：探讨Ca^2＋-钙调蛋白在M3R介导逼尿肌细胞收缩中的作用。 设计：以逼尿肌细胞为观察对象，对比观察。 单位：解放军第三军医大学西南医院泌尿中心。 材料：实验在重庆西南医院中心实验室完成，实验动物选择健康雌性Wistar大鼠。 方法：将原代培养逼尿肌细胞分为实验组和对照组，接种于6孔培养板上培养，实验组培养细胞70％融合时加入1&;#215;10^-4mmol／L卡巴胆碱和毒蕈碱受体亚型M2R拮抗剂，分别阻断M3R、M2R，采用Ca^2＋浓度和钙调蛋白活性检测试剂盒分别测定两组逼尿肌细胞Ca^2＋浓度和钙调蛋白活性。 主要观察指标：两组细胞内[Ca^2＋]i浓度、钙调蛋白活性变化。 结果：实验组的[Ca^2＋]i和钙调蛋白的平均通道荧光对数值高于对照组（3．26&;#177;0．38，2．06&;#177;0.12，P〈0．01）；（2．87&;#177;0.34，2．14&;#177;0．24，P〈0．05）。 结论：实验结果提示Ca^2＋-钙调蛋白以信号传导途径参与了M3R介导逼尿肌细胞收缩的调节过程。     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞内游离钙的浓度(犤Ca2+犦i)、环磷酸腺苷(cAMP)、钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白激酶II(Ca2+/CaM-PKII)的变化。方法采用放免技术,从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性、细胞内犤Ca2+犦i变化,cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII的变化。结果缺氧组PC12细胞cAMP、CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组;Ca2+/CaM-PKII活性明显低于正常对照组。结论犤Ca2+犦i、cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的：观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法：实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞，随机分为3组：①正常对照组：细胞置于36℃，含体积分数为0．9的空气、体积分数为0．1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组：细胞移至4000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（体积分数为0．9氮气、体积分数为0．1的CO2），在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组：在缺氧前24h在培养液中加入1 μmol／L的纳洛酮，其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果：3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著（P〉0．05）。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组（7．94&;#177;0．13，6．68&;#177;0．33，3．39&;#177;0．36，P〈0．01），且缺氧组高于纳洛酮组（P〈0．01）。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组（8.67&;#177;0．61，11．59&;#177;1．34，P〈0．01），但两组均高于正常对照组（3．48&;#177;0.28，P〈0．01）。结论：缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高，证实[Ca^2＋]i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关，且恢复氧供并不能纠正[Ca^2＋]i异常。应用纳洛酮后，在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的[Ca^2＋]i升高幅度较缺氧组明显减小，说明纳洛酮对缺氧的神经元[Ca^2＋]i具有一定的稳定作用，可以减轻神经元[Ca^2＋]i的升高，进而对神经元细胞起到保护作用。     

大鼠脑缺血后P-CaMKⅡ的表达与Ca2+浓度的关系

目的 探讨脑缺血后脑组织Ca^2＋浓度和磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（P—CaMKⅡ）表达的变化及其相关关系。方法 采用大鼠大脑中动脉阻断模型，千湿质量法测量脑组织含水量，免疫组化方法检测P—CaMKⅡ的表达，Fura-2／AM荧光法测定水肿周围Ca^2＋浓度。结果 与对照组相比，脑缺血后6h，P—CaMKⅡ的表达、Ca^2＋浓度和脑含水量均开始上调，在脑缺血2-3d表达最强；Ca^2＋浓度的变化与P—CaMKⅡ的表达强度呈正相关。结论 脑缺血后由于细胞内Ca^2＋超载，导致CaMKⅡ磷酸化作用增强，它们可能共同参与了缺血性脑水肿的形成。     

丹参酮ⅡA预防血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌肥大的机制

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐（sodium tanshinone ⅡA sulfonate，STS）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响，以探讨STS在钙调神经磷酸酶（calcineurin，CaN）依赖的信号通路心肌肥大中的作用。方法：以培养的原代心肌细胞为模型，用AngⅡ刺激细胞外Ca^2＋内流，丹参酮ⅡA及钙离子拮抗剂雏拉帕米（Ver）进行干预，检测心肌细胞[Ca^2＋]i及CaN活性；[^3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标。用Western blot法检测心肌细胞CaN蛋白的表迭。结果：AngⅡ刺激组[Ca^2＋]i水平、CaN蛋白的表达及蛋白核酸合成速率明显增高，与对照组相比差异有显著性（P〈0．01），而STS能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca^2＋]i增高（P〈0．01vs AngⅡ组），明显抑制AngⅡ诱导的蛋白质合成速率的增加（P〈0．01 vs AngⅡ组）。AngⅡ刺激组CaN活性及其蛋白表达明显高于对照组，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。STS及Ver抑制AngⅡ介导的心肌细胞CaN活性及其蛋白表达的增高。结论：CaN通路在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用；STS具有Ca^2＋阻滞剂的特点，能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca^2＋]i增高，导致CaN活性及其蛋白表达降低，阻滞心肌肥大的发生和发展。     

雄激素干预后缺氧缺血新生大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化

目的：观察雄激素干预缺氧缺血性脑病新生大鼠后，鼠脑匀浆中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的变化。 方法：实验于2004-02在西安交通大学第二医院完成。选择7d龄一级SD大鼠56只。随机抽签法分成假手术对照组8只、缺氧缺血性脑损伤＋生理盐水组24只、缺氧缺血性脑损伤＋雄激素组24只，按照取材时间的不同，缺氧缺血性脑损伤＋生理盐水组和缺氧缺血性脑损伤＋雄激素组又分为缺氧缺血后6，24,48h 3个时间点，每个时间点8只。制备缺氧缺血性脑损伤模型，取颈正中切口，游离左颈总动脉，结扎并缝合切口，恢复2～3h后置于约5L自制常温常压密闭容器中，以1．0～2．0L／min的速度输入含体积分数0．08的氧气和体积分数0．92的氮气的混合气体，约2．5h后取出。假手术组仅做颈正中切口，游离左颈总动脉，但不结扎。缺氧缺血性脑损伤＋雄激素组在缺氧缺血后立即给予腹腔注射丙酸睾丸酮25mg／kg；缺氧缺血性脑损伤＋生理盐水组给予等量生理盐水作对照。然后分别于缺氧缺血性脑损伤后6，24，48h后断头取脑制作脑匀浆，以硫代巴比妥法测定丙二醛含量；黄嘌呤氧化酶发光法测定超氧化物歧化酶。 结果：在实验过程中，缺血性脑损伤＋生理盐水组死亡7只；缺血性脑损伤＋雄激素组死亡4只；假手术组无死亡。故假手术组8只、缺血性脑损伤＋生理盐水组17只、缺血性脑损伤＋雄激素组20只大鼠进入结果分析。①假手术组脑组织匀浆中超氧化物歧化酶活性为（60．67&;#177;7．26）kNU／g；缺氧缺血性脑损伤＋生理盐水组缺氧缺血后6h超氧化物歧化酶活性开始降低，24h降至最低值，与假手术组比较差异均有显著性意义（P〈0．05），48h后逐渐恢复后仍低于正常水平，与假手术对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）；缺氧缺血性脑损伤＋雄激素组脑组织中超氧化物歧化酶活性缺氧缺血后6，24，48h均明显高于缺氧缺血性脑损伤＋生理盐水组，差异有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01），与假手术组接近。②假手术组脑组织中丙二醛含量为（2．45&;#177;0．87）μmol／g；缺氧缺血性脑损伤＋生理盐水组缺氧缺血后6h丙二醛含量开始升高，24h升至最高，与假手术对照组比较差异均有显著性（P〈0．05或P〈0．01），48h后逐渐恢复后仍高于假手术组的水平，但差异无显著性（P〉0．05）；缺氧缺血性脑损伤＋雄激素组缺氧缺血性脑损伤后6，24h脑组织中丙二醛含量均明显低于缺氧缺血性脑损伤＋生理盐水对照组，差异有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01）；48h后丙二醛含量仍低于生理盐水组，但差异无显著性（P〉0．05）。 结论：雄激素可能通过减少抗氧化剂的消耗和抑制氧自由基的生成以减轻新生鼠缺氧缺血后神经细胞的损伤。     

强啡肽A在新生鼠缺氧、缺血性脑损伤中的阿片样和非阿片样受体机制

目的：探讨强啡肽A1-13在新生鼠缺氧、缺血性脑损伤中作用的受体机制。方法：将7d龄新生鼠左侧颈总动脉结扎并在低氧环境下制成半球性脑缺氧、缺血模型，伤后即刻向小脑延髓池注射阿片k受体拮抗剂nor-BNI或N-乙酰-D-门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801，比较其对损伤后脑含水量、脑内强啡肽A1-13免疫活性物质(ir-DynA1-13)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果：给予nor-BNI或MK-801均可降低损伤后的脑含水量，给药后皮层、海马ir-DynA1-13和/或MDA水平在脑损伤后的升高被部分逆转，SOD活性也部分恢复。MK-801恢复SOD活性的作用明显而nor-BNI的作用较弱。结论：强啡肽A1-13对新生鼠缺氧、缺血脑损伤的影响，很可能是通过阿片受体和NMDA受体途径共同作用而实现的，其影响的环节可能有所不同。     

缺氧缺血对新生鼠脑Caspase-3效应蛋白酶及细胞凋亡的影响

目的：观察缺氧缺血对新生鼠脑Caspase-3活性及Caspase-3与脑细胞凋亡之间的关系。方法：实验于2002-03／12在解放军第三军医大学新桥医院呼吸研究所完成。7d龄Wistar大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage，HIBD)1，12，24，48h组。HIBD模型建立后。分别在上述各时间点用四肽荧光底物法测定脑组织Caspase-3活性；用免疫组化法检测活化Caspase-3蛋白以及用TUNEL法检测细胞凋亡。结果：HIBD后1h患侧脑组织Caspase-3活性已升高，到24h达高峰，48h明显下降；患侧脑细胞凋亡自HIBD后1h已升高，到24h达高峰，48h仍维持较高水平，两者之间呈正相关。结论：HIBD新生鼠患侧脑组织中Caspase-3激活，且与细胞凋亡明显相关。提示Caspase-3活化参与了HIBD的脑细胞凋亡。     

钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞Ca^2＋内流的作用机制

【目的】探讨钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞中Ca^2＋内流的作用机制。【方法】将酶解分离好的大鼠结肠平滑肌细胞,随机分为以下4组：①对照组;②EGTA组;③EGTA＋Veraparmil组;④EGTA＋W7组。荧光探针Fura-2／AM标记细胞内游离Ca^2＋,荧光分光光度计检测大鼠结肠平滑肌细胞Ca^2＋浓度。【结果】在无Ca^2＋缓冲液中加入EGTA（1mmol／L）使Ca^2＋浓度由静息时（82．24±3．65）nmol／L升高至（267．45±4．86）nmol／L,继之,向细胞外液中引入两种浓度的Ca^2＋（1．5mmol／L和3．0mmol／L）,导致Ca^2＋浓度进一步升高,分别为（470．23±4．21）hmol／L、（945．32±3．56）nmol／L．上述升高效应对L型电压操纵性钙通道阻滞剂维拉帕米（verapamil,5μmol／L）不敏感（P〉0．05）,但钙调蛋白抑制剂W7对上述升高效应有抑制作用（P〈0．01）。【结论】钙调蛋白参与大鼠结肠平滑肌细胞的钙内流。钙调蛋白抑制剂W7能抑制由EGTA引起的细胞钙内流。这对于进一步深入研究钙通道活性改变,为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病具有重要意义。     

激光共聚焦显微镜观察前胡丙素对新生大鼠缺氧再灌注心肌细胞内游离钙的影响

目的 激光共聚焦显微镜观察缺氧再灌注损伤对心肌细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的影响，以及前胡丙素对模拟心肌缺氧再灌注过程中减轻钙超载的作用。方法 采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养，建立模拟缺氧再灌注模型。实验分4组：正常组：细胞正常培养；缺氧预适应组：预先缺氧2h，复氧1h，再缺氧12h后，复氧2h；前胡丙素预处理组：先予前胡丙素单体终浓度为100μmol／L 作用1h，再行缺氧12h，后复氧2h；模拟缺氧再灌注组缺氧12h，后复氧2h。细胞上清检测LDH值。心肌细胞以Fluo-3／AM荧光指示剂负载，应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞（[Ca^2＋]i）变化。结果 模拟缺氧再灌注组心肌细胞（[Ca^2＋]i）荧光强度值显著高于前胡丙素预处理组及缺氧预适应组（P〈0．01），前胡丙素预处理组与缺氧预适应组细胞内荧光强度无明显组间差异。结论 心肌细胞缺氧再灌注损伤导致Ca^2＋超载，而前胡丙素有明显减轻心肌细胞模拟缺氧再灌注时Ca^2＋超载的作用。应用激光扫描共聚焦显微镜技术可以直观地进行细胞内钙离子研究。     

心肌挫伤后心功能障碍发病机制探讨

目的 探讨心肌挫伤（MC）后心功能障碍与钙稳态改变之间的关系及其意义。方法 随机选取兔36只，分为6组：正常对照，伤后2h、4h、8h、12h、24h，每组6只。经右颈总动脉插管至左心室测左室压力。采用BIM-Ⅱ型生物撞击机致成MC模型。在上述时相点测定左室压力，并取动物心脏，测定心肌细胞内[Ca^2＋]i含量、游离钙调素和总钙调素活性的变化。结果 心脏收缩／舒张功能受到损害，左心室收缩功能在伤后4-6h恢复至伤前水平，舒张功能在伤后24h不能恢复至伤前水平；心肌细胞内[Ca2^＋]i含量和总钙调素活性升高（P〈0．05），游离钙调素活性降低（P〈0．05）。相关分析表明心肌细胞内[Ca^2＋]i含量升高和心脏收缩／舒张功能障碍呈明显相关（P〈0．05）。结论 MC后心脏收缩／舒张功能发生明显改变，心肌细胞钙稳态失调是引起心功能障碍的原因之一。     

亚低温对急性缺氧缺血新生鼠脑线粒体能量代谢的作用

目的：研究亚低温治疗对缺氧缺血脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠的脑线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SHD)复合酶Ⅱ的活性及ATP合成能力的影响，以探讨亚低温治疗的神经保护机制。方法:将HIBD模型鼠随机分为缺氧缺血(HI)常温恢复组和亚低温干预组，同时设对照组。各组动物在HI后不同时间点(0、2、6、24、48、72h)断头取脑，用密度离心及差速离心方法提取线粒体，生化法测定脑线粒体SDH和复合酶Ⅱ的活性，并用酶萤光法检测脑线粒体的ATP合成能力。结果：HI常温恢复组结扎侧大脑脑线粒体SDH的活性在HI后2—6h先下降后再逐渐恢复，72h最高但仍明显低于正常；脑线粒体复合酶Ⅱ的活性及脑线粒体ATP合成能力在HI后2h明显恢复，6h出现第2次下降，72h恢复正常。亚低温干预组各时间点脑线粒体SDH活性、脑线粒体复合酶Ⅱ的活性及ATP的合成能力均显著高于同一时间点常温组，SDH在72h恢复正常，复合酶Ⅱ在48h恢复正常，ATP合成能力在24h恢复正常。结论：亚低温可减轻HIBD鼠线粒体SDH及复合酶Ⅱ活性的下降，增加脑ATP的合成，缩短继发性能量衰竭的时间，从而保护脑组织。     

Ca2+-钙调蛋白在M3R介导逼尿肌细胞收缩中的作用

背景:毒蕈碱受体在调节逼尿肌细胞收缩过程中起重要作用,其受体亚型M3R直接介导逼尿肌细胞收缩。Ca2 是刺激逼尿肌细胞收缩的直接因素,Ca2 有数十种受体结合蛋白质,Ca2 通过与不同受体蛋白结合调节不同反应。目的:探讨Ca2 -钙调蛋白在M3R介导逼尿肌细胞收缩中的作用。设计:以逼尿肌细胞为观察对象,对比观察。单位:解放军第三军医大学西南医院泌尿中心。材料:实验在重庆西南医院中心实验室完成,实验动物选择健康雌性Wistar大鼠。方法:将原代培养逼尿肌细胞分为实验组和对照组,接种于6孔培养板上培养,实验组培养细胞70%融合时加入1×10-4mmol/L卡巴胆碱和毒蕈碱受体亚型M2R拮抗剂,分别阻断M3R、M2R,采用Ca2 浓度和钙调蛋白活性检测试剂盒分别测定两组逼尿肌细胞Ca2 浓度和钙调蛋白活性。主要观察指标:两组细胞内[Ca2 ]i浓度、钙调蛋白活性变化。结果:实验组的[Ca2 ]i和钙调蛋白的平均通道荧光对数值高于对照组(3.26±0.38,2.06±0.12,P<0.01);(2.87±0.34,2.14±0.24,P<0.05)。结论:实验结果提示Ca2 -钙调蛋白以信号传导途径参与了M3R介导逼尿肌细胞收缩的调节过程。     

丁咯地尔对实验性脑梗死后脑组织钙的抑制作用研究

目的：研究丁咯地尔对大鼠单个脑细胞内游离钙（[Ca^2＋]i）及脑梗死后脑组织钙的作用及其机制。方法：应用AR-CM—MIC阳离子测定系统测量细胞内[Ca^2＋]i和PEAA300原子吸收分光光度计测定脑组织钙。结果：丁咯地尔0．1、1．0、10.0μmol／L对细胞静息[Ca^2＋]i无明显影响，对去甲肾上腺素诱导的细胞内[Ca^2＋]i增高可明显抑制，对组胺诱导的[Ca^2＋]i增高具有一定的抑制作用，丁咯地尔10、20mg／kg降低缺血脑组织钙含量。结论：丁咯地尔能抑制去甲肾上腺素、组胺引起的单个脑细胞[Ca^2＋]i增高．并能降低缺血脑组织钙含量。     

褪黑素对吗啡戒断大鼠海马神经细胞内游离钙和钙调蛋白的影响

目的　探讨褪黑素对吗啡戒断大鼠海马神经细胞内游离钙 ( [Ca2 ]i)和钙调蛋白 (CaM)的影响。方法　以剂量递增法连续 5d皮下注射吗啡成瘾模型。用流式细胞术测定海马神经细胞内游离钙和钙调蛋白活性。结果　①与对照组比较 ,吗啡成瘾大鼠海马神经细胞内游离钙含量和钙调蛋白活性明显升高 (P <0 0 1)。纳洛酮催促戒断后细胞内游离钙含量迅速下降 (P <0 0 1) ,但钙调蛋白相对活性无显著变化 (P >0 0 5 )。②与纳洛酮催促组比较 ,褪黑素可以抑制吗啡戒断大鼠海马神经细胞内CaM活性和游离钙含量的迅速下降 (P <0 0 5 )。结论　吗啡成瘾及戒断直接影响大鼠海马神经细胞内游离钙含量和钙调蛋白活性。MT对吗啡戒断综合征的抑制作用可能与MT对海马神经细胞内游离钙和钙调蛋白的调控有关     

雄激素干预后缺氧缺血新生大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化

目的:观察雄激素干预缺氧缺血性脑病新生大鼠后,鼠脑匀浆中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的变化。方法:实验于2004-02在西安交通大学第二医院完成。选择7d龄一级SD大鼠56只。随机抽签法分成假手术对照组8只、缺氧缺血性脑损伤 生理盐水组24只、缺氧缺血性脑损伤 雄激素组24只,按照取材时间的不同,缺氧缺血性脑损伤 生理盐水组和缺氧缺血性脑损伤 雄激素组又分为缺氧缺血后6,24,48h3个时间点,每个时间点8只。制备缺氧缺血性脑损伤模型,取颈正中切口,游离左颈总动脉,结扎并缝合切口,恢复2～3h后置于约5L自制常温常压密闭容器中,以1.0～2.0L/min的速度输入含体积分数0.08的氧气和体积分数0.92的氮气的混合气体,约2.5h后取出。假手术组仅做颈正中切口,游离左颈总动脉,但不结扎。缺氧缺血性脑损伤 雄激素组在缺氧缺血后立即给予腹腔注射丙酸睾丸酮25mg/kg’缺氧缺血性脑损伤 生理盐水组给予等量生理盐水作对照。然后分别于缺氧缺血性脑损伤后6,24,48h后断头取脑制作脑匀浆,以硫代巴比妥法测定丙二醛含量;黄嘌呤氧化酶发光法测定超氧化物歧化酶。结果:在实验过程中,缺血性脑损伤 生理盐水组死亡7只;缺血性脑损伤 雄激素组死亡4只;假手术组无死亡。故假手术组8只、缺血性脑损伤 生理盐水组17只、缺血性脑损伤 雄激素组20只大鼠进入结果分析。①假手术组脑组织匀浆中超氧化物歧化酶活性为(60.67±7.26)kNU/g;缺氧缺血性脑损伤 生理盐水组缺氧缺血后6h超氧化物歧化酶活性开始降低,24h降至最低值,与假手术组比较差异均有显著性意义(P<0.05),48h后逐渐恢复后仍低于正常水平,与假手术对照组比较差异无显著性意义(P>0.05);缺氧缺血性脑损伤 雄激素组脑组织中超氧化物歧化酶活性缺氧缺血后6,24,48h均明显高于缺氧缺血性脑损伤 生理盐水组,差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01),与假手术组接近。②假手术组脑组织中丙二醛含量为(2.45±0.87)μmol/g’缺氧缺血性脑损伤 生理盐水组缺氧缺血后6h丙二醛含量开始升高,24h升至最高,与假手术对照组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01),48h后逐渐恢复后仍高于假手术组的水平,但差异无显著性(P>0.05);缺氧缺血性脑损伤 雄激素组缺氧缺血性脑损伤后6,24h脑组织中丙二醛含量均明显低于缺氧缺血性脑损伤 生理盐水对照组,差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01);48h后丙二醛含量仍低于生理盐水组,但差异无显著性(P>0.05)。结论:雄激素可能通过减少抗氧化剂的消耗和抑制氧自由基的生成以减轻新生鼠缺氧缺血后神经细胞的损伤。     

丹参酮抑制钙调蛋白信号传导系统在心肌梗死后恶性心律失常中的作用

目的：观察丹参酮对心肌梗死家兔模型恶性心律失常的作用,并探讨丹参酮导致的钙调蛋白（CaM）信号传导系统改变与恶性心律失常发生率降低之间的关系。方法选取健康大耳家兔共90只,随机分为3组：心肌梗死模型家兔（无干预组）、心肌梗死丹参酮干预家兔（干预组）和假手术对照家兔（对照组）,每组30只。对3组家兔恶性心律失常发生率、CaM、钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMK-Ⅱ）活性、跨室壁复极离散度（TDR）、心肌细胞内 Ca2＋浓度进行统计并比较。结果对照组未发生恶性心肌梗死,无干预组和干预组恶性心律失常发生率均高于对照组,差异有统计学意义（P ＜0．05）;无干预组恶性心律失常率（60．0％）高于干预组（10．0％）,差异有统计学意义（P ＜0．05）。无干预组和干预组家兔的 CaM 蛋白水平分别是对照组家兔的1．483倍和1．321倍,差异均有统计学意义（P ＜0．05）;无干预组家兔 CaM 蛋白水平高于干预组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。3组间 CaMKⅡ的活性比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。无干预组血清钙离子水平高于对照组和干预组,差异有统计学意义（P ＜0．05）;干预组低于无干预组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。干预组 TDR 低 于 无 干预组,这两组 TDR 均高于对照组,差 异 有 统 计 学意义（P ＜0．05）。干预组梗死心肌单细胞水平胞内钙浓度低于无干预组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论CaM 信号传导系统的相关信号因子的水平对心肌梗死后恶性心律失常有提示作用。丹参酮可以通过抑制 CaM 信号传导系统而在预防心肌梗死后恶性心律失常中发挥重要作用。     

大鼠中等程度创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与活性的时效关系

目的：观察大鼠中等程度创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的时间动态演变，并探讨三者之间的时效关系。方法：实验于2004-04／10在解放军第三军医大学创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室完成。选择健康SD大鼠48只，随机分为假致伤组8只和损伤组40只，损伤组根据处死时间分为2，12，24，48，72h共5个时相点，每个时相点8只大鼠。损伤组制备中等程度创伤性脑损伤模型，假致伤组仅作颅骨钻孔而不致伤，术后24h处死。观察中度脑损伤后2h-3d伤侧大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况采用原位末端标记技术；观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的变化采用免疫组织化学及免疫荧光技术。结果：48只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠中度脑损伤后不同时间点大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况：创伤性脑损伤后2h在伤侧皮质和海马区即可见有少量凋亡细胞，并呈逐渐增多趋势，主要分布在伤侧皮质、皮质下白质、海马等区域，12-24h凋亡细胞增多，48-72h达到凋亡高峰，明显高于假致伤组。②各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达：脑损伤后2h在损伤灶及其周围皮质即有少量的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞，脑损伤后24-48h阳性细胞数量明显增加。脑挫伤后72h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数有所下降。假致伤组脑组织偶见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞。③各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：脑损伤后损伤灶及附近皮质神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，伤后48h达高峰，损伤侧海马区域神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，24h达高峰，而后开始下降。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马神经细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性增加可能是导致细胞凋亡的因素。