地塞米松对骨髓细胞的诱导作用

目的:观察不同含量地塞米松对骨髓细胞的诱导作用,探讨骨髓作为骨组织工程种子细胞来源的可行性。方法:新生新西兰兔骨髓细胞取材,分别以含不同含量地塞米松的DMEM培养液进行培养。培养96h后,进行细胞计数、四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测和碱性磷酸酶(A)活性检测,评价细胞增殖和分化情况。LP结果:骨髓细胞生长增殖迅速。在不同含量地塞米松作用下,活细胞总数差异无显著性意义,但细胞总数呈抛物线样变化趋势。同时,随着地塞米松含量的增加,ALP活性逐渐增强,表达成骨细胞表型水平增加,明显大于未加入地塞米松组。结论:地塞米松可以诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化,形成骨髓基质成骨细胞。地塞米松发挥诱导作用的同时,可能存在抑制旁路分化机制。骨髓可以作为良好的骨种子细胞来源用于骨组织工程研究和应用。     

氨磷汀对氢醌诱导骨髓细胞凋亡的影响

苯的代谢产物氢醌是苯的骨髓毒性作用的主要物质,其作用与细胞凋亡有关[1 ] 。而氨磷汀作为广谱细胞保护剂选择性地保护正常细胞免受放化疗的毒害作用已广泛应用于临床[2 ] 。我们在体外观察了氨磷汀对氢醌诱导的骨髓单个核细胞凋亡的影响,以探讨氨磷汀对苯骨髓毒性的保护作用。材料和方法1　药物及主要试剂　1 ,4 氢醌购自上海凌峰化学试剂有限公司,灭菌双蒸水配制成原溶液。阿米福汀(注射用氨磷汀)购自湖南银河生化工程有限公司,生理盐水配制成原溶液。按不同倍数稀释成所需浓度。膜联蛋白(Annexin)Ⅴ FITC试剂盒购自CaltagLabratoies…     

不同浓度地塞米松对骨髓基质细胞成脂、成骨分化的影响

目的：观察不同浓度地塞米松对大鼠骨髓基质细胞成脂、成骨分化能力的影响。方法：实验于2003-10／2005-01在兰州大学医学院中心实验室完成。①选取清洁级雌性6周龄Wistar大鼠6只，采用全骨髓法分离大鼠双侧股骨骨髓基质细胞，传至第3代细胞用于实验，随机分为4组：地塞米松成脂诱导组、单纯成脂诱导组、地塞米松成骨诱导组、单纯成骨诱导组。②传代后培养液中分别加成脂、成骨诱导剂，地塞米松成脂诱导组、地塞米松成骨诱导组培养基中均含有lO^-10，lO^-9，lO^-8，l0^-7．10^-6,10^-5mol／L不同浓度地塞米松,单纯成脂诱导组、单纯成骨诱导组培养基中无地塞米松，其余条件相同进行培养。通过细胞内三酰甘油含量和碱性磷酸酶活性的测定来比较不同浓度地塞米松在大鼠骨髓基质细胞分化中的作用。 结果：不同浓度地塞米松对细胞内三酰甘油含量及碱性磷酸酶活性的影响：①培养21d，地塞米松成脂诱导组随地塞米松浓度的增加，细胞内三酰甘油含量明显增加，均高于单纯成脂诱导组（P〈0.05或P〈0．01）。②培养12d，地塞米松成骨诱导组地塞米松浓度为10^-8mol／L时碱性磷酸酶活性增至最高，之后随地塞米松浓度的增高，碱性磷酸酶活性逐渐降低。 结论：10^-8mol／L以上高浓度地塞米松可诱导骨髓基质细胞分化为脂肪细胞，同时抑制其向成骨细胞的分化，可能与皮质类固醇激素性骨质疏松的发病有关。     

人脐血中分离骨髓间充质干细胞成骨诱导前后的生物学特性

目的 观察诱导因素对骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的影响，探索骨组织工程的种子细胞来源。方法 使用密度梯度离心法分离来源于人脐血的骨髓间充质干细胞进行培养。保留已贴壁细胞传代，观察在加有地塞米松、维生素C、β—甘油磷酸钠的培养液中骨髓间充质干细胞的生长及分化情况。结果 分离得到的骨髓间充质干细胞呈成纤维样表现，诱导条件下第2代细胞碱性磷酸酶活性增高，12d达到最高，为(33．10&;#177;0．54)U／ml，P&;lt;0．00l，t=-48．32，且出现矿化结节。结论 人脐血来源的骨髓间充质干细胞在诱导培养液作用下具有一定的成骨能力，可作为骨组织工程种子细胞。     

地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子kB活化受体配体基因表达的干预作用

目的：观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子kB活化受体配体基因表达水平的变化，并探讨地塞米松对骨代谢的影响.方法：实验于2004—01／09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成。选择雄性6周龄SD大鼠4只．抽取大鼠股骨骨髓，使用密度梯度离心分离有核细胞，贴壁分离法获取骨髓基质细胞，以2&;#215;10^4／cm^2的密度接种进行细胞传代与分组实验。实验分2组，对照组继续用原培养液培养；实验组在原培养液基础上加入地塞米松（浓度10^-7mol／L）诱导培养。两组细胞继续培养1周后，抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析。比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平。骨保护素与核因子kB活化体配体mRNA表达量用β—actin表达量来标准化。结果：①骨保护素mRNA表达水平（骨保护素／β—actin）：实验组显著低于对照组[1．21&;#177;0．12，2．05&;#177;0．11（t=10．320，P〈0．01）]。②核因子kB活化受体配体mRNA表达水平（核因子kB活化受体配体／β—actin）：实验组显著高于对照组[2．53&;#177;0．14，1．17&;#177;0．19（t=11．525，P〈0．01）]。③核因子kB活化受体配体／骨保护素mRNA表达水平比值：实验组显著高于对照组[2．21&;#177;0．17，0．62&;#177;0．08（t=16．925，P〈0．01）]。结论：加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少，从而减弱其对核因子kB活化受体配体-核因子kB活化受体信号轴的抑制作用，因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强，导致骨重建失衡。     

自体树突状细胞活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病细胞毒性作用研究

目的 考察自体树突状细胞（DC）活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病（CGL）细胞的毒性作用。方法 用免疫磁珠从2例缓解的CGL患者骨髓单个核细胞（BMMNC）分离DC,另取BMMNC分成3份,分别加入长期培养基,建立Dexter培养体系。第1份为对照,第2份加重组人白细胞介素2（rhIL-2),第3份于培养第4天加入收获的DC,培养10d后收集非贴壁细胞。以上述3份非贴壁细胞为效应细胞,对照非贴壁细胞为靶细胞,采用双色流式细胞技术进行细胞毒性实验,同时用流式细胞技术检测BMMNC的P210表达。结果 DC活化的效应细胞比rhIL-2活化的效应细胞对靶细胞有更大的杀伤作用,靶细胞中的死细胞比例例1分别为63．12％和42．59％,例2分别为61．60％和21．46％。另外,DC活化的效应细胞与靶细胞混合孵育后,效应细胞本身的死细胞比例明显增加,rhIL-2活化的效应细胞无此现象。BMMNC经培养后非贴壁细胞中P210阳性细胞比例明显减少,以含DC者最为显著,含rhIL-2者次之。结论 自体DC活化的骨髓细胞能对CGL细胞产生明显的细胞毒性作用,DC的作用胜过rhIL-2。这些经DC活化的骨髓回输后可能在体内发挥移植物抗白血病（GVL）效应。     

骨髓间充质干细胞在骨组织工程中应用的研究进展

骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BM-SC)无论从它的来源、分离方法及可分化组织类型上有其独特的优势，本就BMSC的发现、生物学特性、分离培养、定向诱导分化和在骨组织工程中的应用加以综述。     

活性骨组织体外调节和促进成骨细胞黏附特性的作用

目的:研究兔活性骨组织在共培养条件下对同种骨髓基质细胞来源成骨细胞黏附特性的影响。方法:分别应用生理盐水和三蒸水浸泡新鲜兔骨碎粒5h后与同种骨髓基质细胞来源成骨细胞共培养作为实验组;未进行共培养的成骨细胞作为对照组。应用体视学计数法观察接种后0.5,1,2,4,8h各时间点成骨细胞贴壁情况,计量贴壁细胞数,计算出细胞贴壁率。结果:实验组的成骨细胞贴壁率均显著高于对照组(P<0.01),与三蒸水浸泡的兔活性骨组织共培养的同种成骨细胞的贴壁率最高。结论:活性骨组织在体外具有调节和促进同种成骨细胞黏附特性的作用,用三蒸水浸泡的活性骨组织的作用最强。     

骨组织工程种子细胞的研究近况

目的：分析比较各种种子细胞在骨组织工程中作用，归纳较理想的种子细胞的条件，为骨缺损患者修复与恢复功能选择最适宜的种子细胞提供科学依据. 资料来源：应用计算机检索Medline1990—01／2006—01有关骨组织工种、种子细胞、骨缺损修复方面的文献，检索词为“bone，tissue engineering．seed cell、bone defect．bone repair”并限定文章语言种类为英文。中文文献应用计算机从中国期刊全文数据库检索。 资料选择：对资料进行初审，纳入标准：选取有关骨组织工程种子细胞实验或临床研究文献排除标准：①非随机对照实验、重复实验。②综述、讲座、笔谈等非原著性文献。 资料提炼：共收集了384篇有关骨组织工程种子细胞实验或临床研究方面文献．其中23篇符合纳入标准，排除361篇对23篇文章中提及的①骨种子细胞：成骨细胞，骨髓基质细胞．间充质干细胞．骨髓间充质干细胞。②骨外种子细胞：骨外间充质干细胞，胚胎于细胞．③转基因干细胞等种子细胞进行综合分析。 资料综合：较理想的种子细胞的条件应该是：①取材方便，对供体损伤小。②在体外培养体系中具有较强的增殖传代能力，生物活性好，衰亡率低，能在较短时间内得到数量较多并易定向分化为成骨细胞。③植入机体后能适心受区环境、保持高质量成骨活性，且远期效果良好。④生物毒性低，组织相容性好，免疫活性低，致癌性低等。 结论：骨组织工程中对种子细胞的研究已进入临床研究阶段，并取得可喜的进展，其中以间充质干细胞最好，它取材容易，安全性好，是很有发展前景的种子细胞。     

直流小电场对肺癌细胞凋亡的诱导作用

目的 观察应用直流电疗法对肺癌细胞凋亡的影响，研究直流小电场对于肺癌细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。方法 应用体外直流小电场作用于肺腺癌细胞系A549，观察其对肺癌细胞凋亡和重要基因p53、Rb以及E2F1表达的影响。结果 直流小电场对肺癌细胞系A549有明显的诱导作用，200mV/mm和250mV/mm组癌细胞大量脱落，电场组凋亡癌细胞数目随电场强度升高而增多（F=795.372,P=0.000）。电场组p53、Rb基因mRNA表达明显升高，E2F1基因mRNA表达明显下降。结论 直流小电场对肺癌细胞系A549具有明显的凋亡诱导作用并可能与p53、Rb以及E2F1基因的表达相关。     

早期使用地塞米松对重症胰腺炎的治疗作用

本文探讨了早期使用地塞米松对重症胰腺炎 (ＳＡＰ)的治疗作用。现将 2 4例ＳＡＰ早期使用地塞米松的疗效报告如下。1　临床资料本院 1991年 1月～ 2 0 0 0年 10月收治急性胰腺炎 (ＡＰ)189例。其中ＳＡＰ 2 4例 ,男 11例 ,女 13例 ,年龄 2 8～ 78岁 ,均有明显腹痛、呕吐、腹膜炎症 ,ＷＢＣ 14× 10 9/Ｌ以上 ,血、尿淀粉酶明显增高 ,伴不同程度脏器功能障碍。Ｂ超检查发现胰腺不同程度增大 ,光点粗糙。 6 7%的患者有胆道结石或胆道炎症征象。全部诊断符合 1997年全国外科学会胰腺学组ＡＰ临床诊断标准[1] 。2　治疗方法及结果手术治疗组 6…     

地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子кB活化受体配体基因表达的干预作用

目的:观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子кB活化受体配体基因表达水平的变化,并探讨地塞米松对骨代谢的影响。方法:实验于2004-01/09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成。选择雄性6周龄SD大鼠4只,抽取大鼠股骨骨髓,使用密度梯度离心分离有核细胞,贴壁分离法获取骨髓基质细胞,以2×104/cm2的密度接种进行细胞传代与分组实验。实验分2组,对照组继续用原培养液培养;实验组在原培养液基础上加入地塞米松(浓度10-7mol/L)诱导培养。两组细胞继续培养1周后,抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析。比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平。骨保护素与核因子кB活化受体配体mRNA表达量用β-actin表达量来标准化。结果:①骨保护素mRNA表达水平(骨保护素/β-actin):实验组显著低于对照组犤1.21±0.12,2.05±0.11(t=10.320,P<0.01)犦。②核因子кB活化受体配体mRNA表达水平(核因子кB活化受体配体/β-actin):实验组显著高于对照组[2.53±0.14,1.17±0.19(t=11.525,P<0.01)]。③核因子кB活化受体配体/骨保护素mRNA表达水平比值:实验组显著高于对照组[2.21±0.17,0.62±0.08(t=16.925,P<0.01)]。结论:加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少,从而减弱其对核因子кB活化受体配体-核因子кB活化受体信号轴的抑制作用,因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强,导致骨重建失衡。     

不同浓度地塞米松对骨髓基质细胞成脂、成骨分化的影响

目的:观察不同浓度地塞米松对大鼠骨髓基质细胞成脂、成骨分化能力的影响。方法:实验于2003-10/2005-01在兰州大学医学院中心实验室完成。①选取清洁级雌性6周龄Wistar大鼠6只,采用全骨髓法分离大鼠双侧股骨骨髓基质细胞,传至第3代细胞用于实验,随机分为4组:地塞米松成脂诱导组、单纯成脂诱导组、地塞米松成骨诱导组、单纯成骨诱导组。②传代后培养液中分别加成脂、成骨诱导剂,地塞米松成脂诱导组、地塞米松成骨诱导组培养基中均含有10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L不同浓度地塞米松,单纯成脂诱导组、单纯成骨诱导组培养基中无地塞米松,其余条件相同进行培养。通过细胞内三酰甘油含量和碱性磷酸酶活性的测定来比较不同浓度地塞米松在大鼠骨髓基质细胞分化中的作用。结果:不同浓度地塞米松对细胞内三酰甘油含量及碱性磷酸酶活性的影响:①培养21d,地塞米松成脂诱导组随地塞米松浓度的增加,细胞内三酰甘油含量明显增加,均高于单纯成脂诱导组(P<0.05或P<0.01)。②培养12d,地塞米松成骨诱导组地塞米松浓度为10-8mol/L时碱性磷酸酶活性增至最高,之后随地塞米松浓度的增高,碱性磷酸酶活性逐渐降低。结论:10-8mol/L以上高浓度地塞米松可诱导骨髓基质细胞分化为脂肪细胞,同时抑制其向成骨细胞的分化,可能与皮质类固醇激素性骨质疏松的发病有关。     

地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达的干预作用

目的观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达水平的变化,并探讨地塞米松对骨代谢的影响.方法实验于2004-01/09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成.选择雄性6周龄SD大鼠4只,抽取大鼠股骨骨髓,使用密度梯度离心分离有核细胞,贴壁分离法获取骨髓基质细胞,以2×104/cm2的密度接种进行细胞传代与分组实验.实验分2组,对照组继续用原培养液培养;实验组在原培养液基础上加入地塞米松(浓度10-7mol/L)诱导培养.两组细胞继续培养1周后,抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析.比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平.骨保护素与核因子κB活化受体配体mRNA表达量用β-actin表达量来标准化.结果①骨保护素mRNA表达水平(骨保护素/β-actin)实验组显著低于对照组[1.21±0.12,2.05±0.11(t=10.320,P＜0.01)].②核因子κB活化受体配体mRNA表达水平(核因子κB活化受体配体/β-actin)实验组显著高于对照组[2.53±0.14,1.17±0.19(t=11.525,P＜0.01)].③核因子κB活化受体配体/骨保护素mRNA表达水平比值实验组显著高于对照组[2.21±0.17,0.62±0.08(t=16.925,P＜0.01)].结论加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少,从而减弱其对核因子κB活化受体配体-核因子κB活化受体信号轴的抑制作用,因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强,导致骨重建失衡.     

地塞米松诱导成骨细胞凋亡的蛋白激酶C途径

背景：地塞米松以增加细胞周期时间的方法提高细胞凋亡来减少成骨细胞和骨细胞的数量。蛋白激酶C是细胞内信号传导通路的一种,与细胞凋亡有关已有相关文献报道。目的：探讨地塞米松诱导成骨细胞凋亡在蛋白激酶C细胞内信号转导途径方向的机制。方法：取胎鼠骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,分为塞米松模型组、佛波醇组和星型胞菌素组。地塞米松模型组加入1×10-6 mol/L地塞米松,佛波醇组加入1×10-6 mol/L地塞米松和1×10-7 mol/L佛波醇,星型胞菌素组加入1×10-6 mol/L地塞米松和1×10-7结果与结论：地塞米松可明显的诱导凋亡,加入佛波醇后凋亡明显增加,加入星形孢菌素后凋亡明显减少。加入地塞米松后胞浆的蛋白激酶C明显减少,包膜明显增加。加入地塞米松不同时间,胞浆和胞膜的蛋白激酶C变化在30 min最明显。说明地塞米松诱导成骨细胞凋亡的机制与蛋白激酶C有关,地塞米松为蛋白激酶C激动剂。细胞受到刺激后,胞浆的蛋白激酶C转移至包膜,胞浆中的蛋白激酶C量减少,包膜中的增加。mol/L星型胞菌素,观察不同干预组细胞的增殖或抑制,并对细胞膜及细胞质中蛋白激酶C含量的变化进行检测。     

一氧化氮拮抗地塞米松对炎痛的镇痛作用

在小鼠福尔马林致痛模型上,地塞米松（Ｄｅｘ）５～２０ｍｇｋｇｉｐ剂量依赖性抑制小鼠福尔马林Ⅱ相反应。ｉｐ硝普钠（ＳＮＰ）２．２５～３ｍｇｋｇ或左旋精氨酸（ＬＡｒｇ）７５～１００ｍｇｋｇ可拮抗Ｄｅｘ的镇痛作用并呈剂量依赖性。在该剂量范围内,ＳＮＰ或ＬＡｒｇ对小鼠福尔马林双相反应无明显影响。结论：地塞米松的镇痛作用机制可能与其抑制体内一氧化氮（ＮＯ）的信息系统有关。     

地塞米松对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠的保护作用

目的 通过地塞米松对脂多糖（Lipolysaccharides,LPS）诱导的大鼠急性肺损伤时炎症介质的影响作用,探讨其对肺脏的保护机制。方法 健康雄性S—D大鼠随机分成A、B、C、D组,各组分别按1、2、4h三个时间点再设立3个亚组。A组经腹腔注射地塞米松;B组经腹腔注射LPS,C组在腹腔注射LPS前1h经腹腔注射地塞米松,D组为对照组。在到达各时间点后,经腹腔注射加倍剂量的硫喷妥钠处死,切开气管,并予0℃0．9％氯化钠注射液（normal saline,NS）作肺泡灌洗。采用酶联吸附免疫法（ELISA）测定肺泡灌洗液（broncho alveokar lavage fluid,BALF）中的肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor—α,TNF—α）、白介素-1β（iaterlrukin—1β,IL—1β）与巨噬细胞炎性蛋白-2（macrophafe inflamnatovy protein-2,MIP-2）。另外12只大鼠按上述分组法随机分成4组,每组3只,动物模型同上,作肺组织病理观察。结果 在病理形态学上与D组比较,B组肺损伤严重。BALF中TNF—α、IL—1β、MIP-2在A、B、C、D组间比较差异均有统计学意义（F分别=15．51、47．37、19．94、134．27、65．44、57．29、18．44、85.31、89.13,P均〈0．05）。B组与D组比较,TNF—α差异有统计学意义（t分别=5．37、8.69、6．43,P均〈0．05）、IL—1β差异有统计学意义（t分别=7．25、9.77、11．51,P均〈0．05）、MIP-2差异有统计学意义（t分别=6.84、12.38、15．52,P均〈0．05）;C组与D组比较,TNF—α差异有统计学意义（t值分别为2．43、2．67、1．98,P均〈0．05）、IL—1β差异有统计学意义（t分别=3．58、4．15、4．81,P均〈0.05）、MIP-2差异有统计学意义（t分别=1．87、3．73、7．55,P均〈0．05）;C组与B组比较,TNF—α差异有统计学意（t分别：3．15、4．19、4．03,P均〈0．05）、IL—1β差异有统计学意（t分别=3．71、5．27、5．81,P均〈0．05）、MIP-2差?     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胶质瘤细胞的诱导凋亡作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosisfactor related apoptosis-inducingligand,TRAIL）可以诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,并且对正常细胞没有明显的毒性作用,因此在美国已进入临床Ⅱ期药物开发阶段。     

甲状旁腺素相关肽诱导骨髓细胞生成破骨细胞及对骨吸收的影响

目的：建立甲状旁腺素相关肽(PTHrP)诱导的破骨细胞培养系统，并观察其特点。方法：分离小鼠骨髓细胞后，用0，20，50，100ng的PTHrP刺激，第6天时观察生成的破骨细胞数目。用PTHrP 50ng刺激，观察培养后4，6，8．10，14d时破骨细胞生成数目。结果：破骨细胞数目随PTHrP剂量的增高而增加。培养后4d有破骨细胞形成，6—8d破骨细胞数达到高峰，14d时几乎消失。结论：PTHrP可诱导破骨细胞形成，破骨细胞形成数目与甲状旁腺素相关肽呈剂量依赖，破骨细胞寿命少于两周。     

大剂量地塞米松在心肺复苏后对脑保护作用的观察

心脏停搏导致缺血缺氧性脑损害是影响心肺复苏后患者康复的重要因素。我们对部分心肺复苏患者加用大剂量地塞米松治疗,观察大剂量地塞米松对脑的保护作用。１临床资料我院ＩＣＵ科自１９９６年１月～１９９８年１月共收治心跳呼吸骤停患者５０例,抢救成功１５例,分为Ａ...