非小细胞肺癌患者外周血与组织中EGFR基因突变的研究

目的 检测非小细胞肺癌患者外周血与肿瘤组织EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血EGFR基因突变的临床应用价值.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测453例非小细胞肺癌组织,229例非小细胞肺癌外周血,其中132例外周血标本和组织标本配对,检测其中EGFR基因突变,比较外周血和组织标本突变一致性,分析EGFR基因突变和患者临床特征相关性.结果 外周血标本中检测出66例突变(28.82％),组织中185例突变(40.84％),两种标本一致性为84.09％,差异有统计学意义(Kappa=0.652,P=0.000).结论 非小细胞肺癌患者外周血与组织EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为非小细胞肺癌的临床诊疗提供帮助.     

EGFR基因突变在非小细胞肺癌胸水细胞块中的检测分析

目的 分析表皮生长因子受体(epidermal growth factor,EGFR)基因突变在非小细胞肺癌阳性胸水中的表达情况.方法 将胸水内查见非小细胞肺癌的病例其阳性胸水离心沉渣制作细胞块.分离细胞块样品DNA,使用实时荧光检测PCR(ARMS-PCR)检测215例非小细胞肺癌细胞块和404例非小细胞肺癌组织块中EGFR的29种突变类型,并检测细胞块同时送检组织块的患者74例的一致性.结果 细胞决EGFR基因突变型102例,突变率47.44％(102/215);组织块EGFR突变型172例,突变率42.57％(172/404);74例有组织块对照的细胞块EGFR结果一致性有53例,一致率达71.62％(53/74),其中细胞块EGFR的突变率44.59％(33/74),组织块突变率70.27％(52/74).结论 可以应用非小细胞肺癌阳性胸水细胞块代替肿瘤组织检测EGFR基因突变,对指导晚期肺腺癌患者靶向药物治疗具有重要指导意义.     

23例非小细胞肺癌患者肺癌组织和血浆中EGFR外显子21的基因突变检测

目的证明可以从非小细胞肺癌患者血浆中检测到表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)突变,且与肿瘤组织的突变情况相一致,建立一种从外周血液中快速、经济、准确检测EGFR外显子21基因突变的方法。方法同时取得23例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和血浆,采用突变富集PCR方法检测外周血液中EGFR外显子21的基因突变,并将检测结果与肺癌组织的检测结果进行对比。结果 23例非小细胞肺癌患者的肺癌组织中共检测到8例EGFR外显子21突变,其中7例突变可以从患者的外周血液中检测到。结论可以从非小细胞肺癌患者外周血液中检测到EGFR突变,通过本方法,可以从外周血液中检测EGFR外显子21基因突变。     

非小细胞肺癌胸腔积液与小活检标本中EGFR基因突变检测的比较

目的：探讨非小细胞肺癌胸腔积液与小活检标本中EGFR基因突变检测结果的一致性,评价胸腔积液标本检测EGFR基因突变的应用价值。方法：收集中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院非小细胞肺癌患者胸腔镜下活检标本46例,配对收集相同患者胸腔积液43例,抽提肿瘤细胞DNA,采用焦磷酸测序的方法,对DNA中EGFR基因第18～21外显子突变进行检测。结果：活检标本和胸腔积液标本中EGFR基因突变检出率分别27．9％（12／43）和25．6％（11／43）,两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：恶性胸腔积液可以作为无法获得肿瘤组织的晚期非小细胞肺癌EGFR基因检测的替代标本。     

T790M突变与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂继发耐药的相关性

目的:探讨表皮生长因子本酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗晚期非小细胞肺癌继发耐药的机制。方法:用富集突变PCR(Mutation–enriched PCR)分析46例初治有效且维持≥6个月的晚期非小细胞肺癌患者的外周血和石蜡包埋组织标本的EGFR20外显子T790M突变,分析其与病理特征、疗效、无疾病进展生存时间(PFS)的相关性。结果:46例患者进展期外周血标本中,T790M突变率为39.13%(18/46例),明显高于治疗前标本中5.88%(2/34例)。T790M突变阳性者中位PFS为16.4个月(95%CI:10.83～17.47),野生型患者中位PFS10.2个月(95%CI:10.2～13.47)(P=0.6139)。结论:研究表明T790M突变与EGFR-TKIs继发耐药相关,在非小细胞肺癌患者中存在动态变化,与疗效和生存可能有一定相关性。     

非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测方法及其临床意义。方法收集200例肺癌组织,通过聚合酶链反应扩增DNA直接测序法检测肺癌DNA中EGFR基因突变和扩增,重点是检测肺癌中EGFR外显子19～21在性别不同中的突变和扩增情况以及在分化不同的癌症中的突变和扩增情况,同时分析其在临床中的意义。结果经聚合酶链反应扩增DNA直接测序法检测发现,非小细胞肺癌中EGFR基因总的突变和扩增数为68例,突变和扩增率为34%,肺癌中EGFR外显子20无明显突变和扩增情况发生,外显子19突变和扩增情况最多有49例,占总数的72.1%,外显子21突变和扩增情况较多有19例,占总数的27.9%,其中女性肺癌患者的EGFR基因突变和扩增情况多于男性肺癌患者,同时基因突变和扩增在腺癌和腺鳞混合癌中发生情况最多,其他次之。结论非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增多发生于女性肺癌患者,其中又以外显子19和21发生较多,多发生伴有腺癌和腺鳞混合癌的情况下,同时聚合酶链反应扩增DNA直接测序法技术稳定可靠,为临床研究提供有效的依据。     

痰脱落细胞ras基因突变在肺癌诊断中的意义

目的 探讨痰脱落细胞中ras基因突变在肺癌诊断中的价值及危险度.方法 收集66例肺癌患者痰液,分离痰脱落细胞,并抽提脱落细胞DNA,用PCR-SSCP-AgNO3染色法快速分析ras基因点突变情况.结果 66例肺癌患者痰液中癌细胞检出率为66.7%(44/66),ras基因点突变检出率为71.2%(47/66),二者检出率差异无显著性(P＞0.0 5).肺癌细胞类型:腺癌24例、鳞癌18例和未分化癌24例,其K-ras基因点突变率分别为:66.7%、27.8%和50.0%,腺癌的突变率最高(P ＜0.05);H-ras基因点突变率分别为:26.1%、21.1%和16.7%(P＞0.05);K-ras和H-ras基因累计突变阳性率为91.7%、50.0%和66.7%,也以腺癌的突变率为最高(P＜0.05).结论 肺部疾病患者痰脱落细胞K-ras和H-ras基因突变检测阳性结果可能有助于肺癌的早期诊断.     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因的分子病理检测分析及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌中EGFR、ALK、ROS1、RET、KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF、HER-2和MET 10个基因的突变情况,分析其与临床病理的关系,探索10种基因突变联合检测的临床应用价值。方法收集2020年1月至2021年7月在该院确诊为非小细胞肺癌患者83例,提取DNA和RNA后,采用探针扩增阻碍突变系统PCR(ARMS-PCR)法对标本进行基因突变检测。结果 非小细胞肺癌10种基因联合检测的总突变频率为74.70%(62/83),各基因突变分布为EGFR 49.40%(41/83)、KRAS 13.25%(11/83)、ALK融合4.82%(4/83)、ROS1融合4.82%(4/83)、HER-2 3.61%(3/83)、MET 14号外显子跳跃2.41%(2/83)、PIK3CA 1.20%(1/83),RET融合、NRAS及BRAF均未检测出。肺腺癌EGFR突变频率高于肺鳞癌;女性患者EGFR突变频率高于男性,男性患者KRAS突变频率高于女性;年龄≥60岁的患者EGFR和KRAS突变频率高于60岁以下的患者。结论 在10种基因突变中,EGFR突变、KR...     

实时荧光PCR检测非小细胞肺癌外周血EGFR基因突变的临床应用

目的 分析非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的特征,为EGFR基因检测及靶向治疗提供指导.方法 选取本院2018年7月至2019年6月收治并行外周血EGFR突变检测的46例晚期非小细胞肺癌患者,采用突变阻滞扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)法检测其血浆EGFR基因突变的特征,并应用SPSS 19.0软件进行统计学分析.分析其外周血EGFR突变与临床病理特征的关系.结果 46例非小细胞肺癌患者中EGFR突变11例,总体突变率为23.9％.突变类型以19号外显子缺失(19Del)(3例,27.2％)和21号外显子突变(L858R)(4例,36.3％)为主.腺癌突变率为33.3％,女性突变率为47.10％,不吸烟患者突变率为32.2％,分别与非腺癌突变率(6.2％)、男性突变率(10.3％)、吸烟患者突变率(6.6％)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);EGFR基因突变与年龄无明显相关性(P>0.05).结论 非小细胞肺癌中,腺癌、女性和不吸烟患者EGFR基因突变率较高,临床特征可作为EGFR基因突变的预测指标.     

非小细胞癌组织和血清中表皮生长因子受体突变一致性

目的对非小细胞癌(NSCLC)组织和血清中表皮生长因子受体(EGFR)突变的一致性进行分析研究。方法抽取90例NSCLC患者的肿瘤组织及匹配的血清标本,采用直接测序法检测EGFR基因中第19和21外显子的突变状态,分析肿瘤组织和EGFR中基因突变的一致性。结论肿瘤组织总突变检测率为32.2%,血清总突变检出率5.6%。直接测序法检测血清EGFR活化性突变的特异度为100%,灵敏度为17.2%,血清和肿瘤组织EGFR活化性突变的一致率为5.6%。结论血清的突变检出率明显低于肿瘤组织,肿瘤组织可作为评价NSCLC患者EGFR基因突变状态的依据。     

高分辨率熔解曲线分析法检测非小细胞肺癌／结直肠癌患者KRAS和EGFR基因突变

目的采用高分辨率熔解曲线分析法检测非小细胞肺癌／结直肠癌中KRAS、EGFR基因突变,探索其应用于临床检测的可行性。方法首先采用高分辨率熔解曲线分析法检测5例非小细胞肺癌和5例结直肠癌患者KRAS基因第2外显子及EGFR基因第18-21外显子的突变情况,并以直接测序法对结果进行验证。结果通过高分辨率熔解曲线分析法,确认5例非小细胞肺癌和5例结直肠癌患者中有1例非小细胞肺癌发生了EGFR19外显子突变,其余检测均为野生型。突变患者的基因型为2236-2250del。经直接测序对以上10例标本进行验证,证实所有患者的突变情况与高分辨率熔解曲线分析法的结果一致。结论应用高分辨率熔解曲线分析法检测临床样本KRAS和EGFR突变与直接测序法相比较具有操作简便、快速、结果准确的优点,适合在临床开展。     

肺腺癌患者GSTM1基因型与K-ras突变相关性分析

目的探讨肺腺癌患者谷胱苷肽-S-转移酶μ1（GSTM1）基因型与癌基因K-ras突变的相关关系。方法收集45例肺腺癌患者标本,抽提基因组DNA,PCR扩增GSTM1基因和K-ras基因的第12位密码子,利用PCR法来检测肺癌组织中GSTM1基因型和K-ras基因的突变情况,分析两者之间的相关性。结果在人的肺腺癌组织中,K-ras基因突变率为43．2％,GSTM1基因的缺失率迭52．6％,其中GSTM1基因缺失者与非缺失者的K-ras突变率分别为65．6％和13％,二者之间有显著性差异（P〈0．05）。结论在人肺癌组织中,GSTM1基因的多态性与K-ras基因突变明显相关,这些发现提示GSTM1基因的缺失导致肺腺癌易感性部分是K-ras基因的突变引起。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织与外周血中BRCA1表达的相关性研究

目的检测非小细胞肺癌患者肿瘤组织和外周血中BRCA1 mRNA的表达及相关性,探讨其临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测35例未经化疗的非小细胞肺癌患者肿瘤组织与外周血中BRCA1 mRNA的表达水平。并以表达水平的中位值作为截断值,将BRCA1的表达程度划分为高表达、低表达。结果肿瘤组织中BRCA1 mRNA的相对表达量为4.00±4.05,中位值为2.3;外周血中相对表达量为2.40±2.33,中位值为1.7。肿瘤组织的相对表达量明显高于外周血,具有统计学意义(P=0.047)。肿瘤组织与外周血中BRCA1 mRNA相对表达量具有相关性(相关系数r=0.245,P=0.041),同时高表达或同时低表达的表达程度相符率达到80%。结论未经化疗的非小细胞肺癌患者外周血在一定程度上可以替代肿瘤组织进行BRCA1表达检测。     

外周血K-ras基因突变和血清唾液酸联合检测在胰腺癌早期诊断中的意义

目的：研究外周血K-ras基因突变和血清唾液酸联合检测在胰腺癌早期诊断中的意义。方法：选择术前的36例胰腺癌胰腺良性病变患者,及20例正常人,同时行外周血K-ras基因突变和唾液酸血清水平的检测,利用统计学方法t检验和2χ检验进行数据分析。结果：胰腺癌中K-ras基因12密码子点突变率为69.4%,较胰腺良性病变的8.3%显著升高（P〈0.05）,外周血K-ras基因突变和血清唾液酸联合检测诊断胰腺癌的敏感性、特异性,比单独检测均有提高,且胰腺癌组和对照组之间差具有显著性意义（P〈0.05）。结论：提示该基因点突变检测对胰腺癌有诊断价值。K-ras基因点突变在某些良性病变中出现（如慢性胰腺炎）,这些良性病例突变列为胰腺癌发生的高危因素,对K-ras基因突变阳性者随访,有助于早期胰腺癌的发现。     

非小细胞肺癌中MGMT基因启动子过甲基化状况及k-ras表达的相关性

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的过甲基化状况、K-ras的表达及其相关性。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)及免疫组化的方法 ,检测术后98例NSCLC组织MGMT基因过甲基化状况、K-ras的表达。结果 98例NSCLC组织中MGMT基因启动子甲基化率为31.6%(31/98),K-ras的阳性表达率为46.9%(46/98),对照组10例正常肺组织中MGMT基因启动子甲基化率及K-ras蛋白的阳性表达率均为0(0/98)。在伴有吸烟史、淋巴结转移、P-TNM分期Ⅲ期的NSCLC患者中,MGMT基因过甲基化率及K-ras的阳性表达率均高于不伴有吸烟史、淋巴结转移及Ⅰ～Ⅱ期的患者(P均<0.05),MGMT基因过甲基化率与K-ras的阳性表达率呈正相关(Rs=0.591,P(0.05)。结论在NSCLC中,MGMT基因启动子过甲基化导致K-ras基因的激活,共同参与非小细胞肺癌的发生、发展。     

非小细胞肺癌患者外周血及胸腔积液表皮生长因子基因突变的对比研究

<正>肺癌是目前发病率和病死率最高的肿瘤之一,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的80%,恶性程度高[1]。外周血和胸腔积液作为检测晚期NSCLC患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的标本来源,相较传统的组织标本方便、快捷,给患者带来的创伤更少。以往的研究中,都是采用单一方法对比外周血及胸腔积液中EGFR基因突变的情况[2],由于受检测技术本身的限制,     

突变体富集PCR法检测非小细胞肺癌病理组织EGFR基因突变

目的：建立突变体富集PCR法检测非小细胞肺癌病理组织中的EGFR基因突变。方法：选取55例细支气管肺泡癌和59例非小细胞肺癌病理组织蜡块，提取基因组DNA，采用不同的突变体富集PCR法（PCR-PAGE和PCR-RLFP）检测EGFR基因常见的19和21外显予突变，并经过直接测序验证。结果：在59例非小细胞肺癌中共检测出EGFR基因突变22例,突变率为37．3％（22／59）。55例细支气管肺泡癌中共检测出24例基因突变，突变率为43．6％（24／55）。经直接测序验证，EGFR19外显予有3种类型缺失突变。EGFR21外显予的错义突变为L858R。结论：突变体富集PCR法准确、快速、经济，便于临床筛查非小细胞肺癌病理组织中的EGFR基因突变。     

非小细胞肺癌FHIT基因表达研究

目的　研究FHIT(fragilehistidinetriad)基因在人类非小细胞肺癌中的表达下调及与临床病理特征的关系。方法　应用免疫组织化学 (S-P)法检测了 80例非小细胞肺癌组织标本和 40例肺良性病变组织中FHIT基因的表达水平。结果　非小细胞肺癌组织中FHIT基因表达水平 (57. 5% )显著低于肺良性病变组织(90. 0% ),P< 0. 01;非小细胞肺癌组织中FHIT基因表达水平降低与肺癌组织学类型、细胞分化程度、患者P-TNM分期、是否有淋巴结转移存在相关性(P<0. 05);非小细胞肺癌组织中FHIT基因表达水平降低与患者是否长期大量吸烟存在相关性(P<0. 05)。结论　FHIT基因表达下调与肿瘤的发生、发展关系密切。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变的结果分析

目的回顾性分析301例非小细胞肺癌(NSCLC)组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测结果,比较三种实验方法检查EGFR突变的差异。探讨肺癌临床靶向个体化治疗进行EGFR分子病理检查的最佳方法。方法应用聚合酶链反应(PCR)结合直接测序法检测171例肺癌DNA样本;TaqMan探针荧光定量PCR法检测88例肺癌DNA样本;扩增阻碍突变系统(ARMS)法检测42例肺癌DNA样本。结果 PCR直接测序法、TaqMan探针荧光定量PCR法、ARMS法的阳性总检出率分别是31.58%、27.27%、42.86%。结论 PCR直接测序法和TaqMan探针荧光定量PCR法阳性总检出率差异无统计学意义(P>0.05),ARMS法阳性总检出率高于PCR直接测序法和TaqMan探针荧光定量PCR法(P均<0.01)。对于不同来源的肺癌组织标本,不同方法检测EGFR突变具有各自的优点和不足。     

某市蒙古族与汉族肺腺癌EGFR基因突变的分析

目的研究内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变与汉族肺腺癌EGFR突变表达是否存在差异。方法收集临床肺腺癌患者石蜡包埋组织标本108例,包括53例蒙古族和55例汉族肺腺癌的样本,采用ARMS(amplification refractory mutation system,ARMS)PCR扩增方法检测非小细胞肺癌EGFR基因外显子18、19、20及21的突变,χ2析对比内蒙古地区蒙古族和汉族肺腺癌EGFR基因突变差异。结果108例肺腺癌患者中有46例EGFR基因突变,总突变率为42.59%,其中蒙古族突变22例,突变率为41.51%,汉族突变24例,突变率为43.64%,内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较无明显差异(P<0.001),突变以外显子19核苷酸缺失起始位2 235为主要突变点。结论内蒙古包头市蒙古族中肺腺癌EGFR基因突变率为41.51%,汉族中EGFR基因突变率为43.64%,内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较无明显差异,都适宜靶向药物治疗。