HPLC测定口服养阴通脑颗粒方后大鼠血清中阿魏酸含量

目的:建立HPLC法测定口服养阴通脑颗粒方后大鼠血清中阿魏酸浓度的方法。方法:健康SD大鼠ig养阴通脑颗粒水溶液后,制备含药大鼠血清。HPLC法测定大鼠含药血清中阿魏酸的含量。采用phenomenex GEMINI C18柱色谱柱,甲醇-3%乙酸(32∶68,v∶v)为流动相;流速1.0 mL.min-1;检测波长323 nm。结果:阿魏酸0.33~10.56μg.mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.999 2),平均回收率为96.41%,RSD 2.36%(n=6);平均日内精密度RSD2.04%,平均日间精密度RSD5.04%,以信噪比S/N=3时测得的最低检测限为2.6 ng,血浆中的最低检测浓度为0.075μg.mL-1。结论:该方法简便,灵敏度高,稳定性及精密度较好,可用于大鼠血清中阿魏酸的含量测定。     

基于药动学与药效学相关联的养阴通脑颗粒主要有效部位正交配伍研究

目的探讨养阴通脑颗粒主要有效部位(总生物碱、总黄酮、总皂苷、总酚酸)配伍后在脑缺血再灌注模型大鼠体内药物浓度及其药动学与药效学变化。方法采用正交试验法组成上述主要有效部位用量配比不同的9个组方,供脑缺血再灌注模型大鼠ig给药,高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定不同时间点血浆中的葛根素、阿魏酸和川芎嗪血浆药物浓度。DAS 3.2.6软件以非房室模型拟合药动学参数,并运用总量统计矩法和综合评分法对整体药动学特征进行评价。同时采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定大鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的含量。最后进行药动学-药效学(PK-PD)模型研究,获得各药物浓度与药效之间的定量方程。结果葛根素、阿魏酸和川芎嗪在模型大鼠体内的药动学特征有所差异。总量统计矩和综合评分研究表明不同配伍对总量零阶矩、总量平均滞留时间、综合评分等参数影响不一。主要有效部位正交配伍给药后,一定程度上会抑制脑缺血再灌注大鼠血浆中SOD和CAT的降低。各PK-PD模型均采用Sigmoid-Emax模型,拟合结果与实测数据之间相关性良好,R值均大于0.85。结论养阴通脑颗粒主要有效部位配伍对模型大鼠体内的药动学行为和抗氧化指标具有一定影响;中药复方多成分药物代谢动力学可采用总量统计矩和综合评分法进行研究;PK-PD结合模型可用于中药复方多成分药动学与药效学之间相关性的评价与预测。     

HPLC与紫外-可见分光光度计对养阴通脑颗粒有效部位的质量控制

目的:利用紫外-可见分光光度计(UV-VIS)检测养阴通脑颗粒中有效部位总黄酮含量。并利用梯度洗脱,建立高效液相色谱法(HPLC)测定养阴通脑颗粒中总黄酮有效部位中葛根素、芒柄花素、毛蕊异黄酮含量的方法。方法:以芦丁为对照品UV-VIS测定养阴通脑颗粒有效部位中总黄酮含量。采用HPLC,色谱柱为EclipseXDB-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)和0.04%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,流速1.00mL/min,检测波长250nm。结果:养阴通脑颗粒有效部位总黄酮含量70%以上,葛根素的线性范围为0.530-296.300mg/L(r=0.9998),平均回收率为99.80%,RSD=0.40%,毛蕊异黄酮的线性范围为0.064-44.440mg/L(r=0.9994),平均回收率为99.70%,RSD=1.10%,芒柄花素的线性范围为0.064-43.110mg/L(r=0.9994),平均回收率为99.40%,RSD=1.50%。结论:本方法操作简便,测定结果准确可靠,为养阴通脑颗粒有效部位黄酮的质量控制提供方法。     

灌胃养阴通脑颗粒大鼠血浆中川芎嗪的HPLC法测定

目的建立HPLC测定大鼠灌胃养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中川芎嗪质量浓度的方法。方法以乙腈提取处理血浆,以安眠酮为内标,甲醇-水(55∶45)为流动相,ODSC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)为固定相,体积流量为1.0mL/min,以紫外检测器在279nm波长下测定血浆中川芎嗪。结果川芎嗪在0.11~22μg/mL线性关系良好,平均回收率为102.98%,RSD<10%,最低检测限为0.21ng,血浆中最低检测质量浓度为0.042μg/mL。结论此法灵敏、可靠,可较好地用于口服养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中的川芎嗪的测定,为测定中药复方体内有效成分提供方法。     

养阴通脑颗粒中黄芪甲苷含量的HPLC-ELSD测定

目的确定养阴通脑颗粒中黄芪甲苷含量HPLC测定方法及最佳提取工艺。方法用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量,色谱柱为Kromasil C18;乙腈-水(34∶66),流速1.0 ml/min,漂移管温度100℃,载气流速为2.0 L/min。采用微波辅助提取,通过正交设计考察溶媒用量、微波功率、微波时间,乙醇体积百分数对黄芪甲苷得率的影响。结果方法学考察结果表明,在0.28～4.20μg(r=0.999 4)范围内,黄芪甲苷呈良好的线性关系;精密度RSD为0.35%;加样回收率为97.43%,RSD为2.59%。最佳提取条件为:微波功率70 W,溶媒用量6倍,微波时间20 min,乙醇体积百分数60%。结论该方法测定结果准确稳定,精密度高,最佳提取工艺下黄芪甲苷的得率高。     

不同中药复方有效部位组合对脑缺血大鼠血浆中葛根素代谢变化的研究

目的：建立HPLC测定血浆中的葛根素的方法,观测养阴通脑颗粒中主要有效部位的不同组合对脑缺血大鼠血浆中葛根素代谢变化的影响。方法：以乙腈提取处理血浆,以对羟基苯甲酸为内标,流动相甲醇-0.5%醋酸水(28∶72),ODS C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)为固定相,以紫外检测器在248 nm测定血浆中葛根素的吸收。结果：葛根素在0.025～3.2 μg·mL^-1线性关系良好,RSD<10%,平均回收率为97.6%；有效部位配伍不同,血浆中葛根素的代谢变化不同。结论：此法灵敏、可靠,可较好地用于口服中药复方养阴通脑颗粒主要有效部位组合后血浆中葛根素的测定,可为有效成分的体内分析提供方法；不同配伍可影响成分的体内变化。     

脑脉通有效部位中阿魏酸的含量测定

目的：建立脑脉通有效部位中的阿魏酸的含量测定方法。方法：采用大连依利特Hypersil ODS2 C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-0．1％磷酸溶液（15：85），流速：1．0ml／min，检测波长：316nm。结果：阿魏酸平均回收率为99．12％，RSD为2．08％。结论：所建立的方法简便、准确，可作为有效部位的质量控制方法。     

鲜姜有效部位HPLC指纹图谱研究

目的:研究建立鲜姜有效部位HPLC色谱指纹图谱,提供较完整的质量信息,更有效地监控质量。方法:采用RP-HPLC,色谱柱:Inertsil(ODS-3柱(100 mm×2.1 mm,3μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,柱温为30℃,检测波长为230 nm与190 nm~400 nm,分析时间为100 min,流速为0.2 ml/min,进行了鲜姜有效部位指纹图谱研究。结果:运用梯度洗脱法得到的色谱图各色谱峰分离较好,达到指纹图谱要求。结论:采用该法可为控制鲜姜有效部位的内在质量提供依据。     

HPLC法测定脑通颗粒中丹酚酸B

目的 建立HPLC法测定脑通颗粒中丹酚酸B.方法 采用迪马色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以甲醇-乙腈-甲酸-水溶液(30:10:0.5:59.5)为流动相;检测波长286 nm;体积流量1.0 mL/min:柱温40℃;进样量10μL.结果 丹酚酸B在0.441 6～2.208 0 μg线性关系良好(r=0.999 7),样品的平均回收率为98.65%,RSD为1.71%.结论 本法重现性好、稳定可靠,可作为脑通颗粒的质量控制方法.     

复方脑脉通有效部位与药材指纹图谱相关性研究

目的:建立脑脉通(大黄、人参、葛根)有效部位的HPLC指纹图谱,研究复方与组方药材指纹图谱色谱峰相关性。方法:采用HPLC-PDAD方法,建立脑脉通有效部位及各药材在203nm检测波长下的指纹图谱,以色谱峰保留时间为考察指标,对复方指纹图谱色谱峰归属进行分析。结果:建立了脑脉通复方有效部位的HPLC对照指纹图谱,标示出36个共有指纹峰,对复方特征峰进行了归属分析,确定了14个特征峰的药材归属。结论:该指纹图谱有助于提高脑脉通有效部位的质量控制水平。     

基于调脂抗氧化有效部位的降脂宁HPLC指纹图谱研究

目的:建立基于调脂抗氧化有效部位的降脂宁颗粒(山楂、制首乌、决明子和荷叶)HPLC指纹图谱.方法:HPLC方法采用Agilent Te-C18色谱柱,流动相为0.01%甲酸水溶液-乙腈.梯度洗脱模式,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm,参照物2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D葡萄糖苷,并对指纹峰进行归属.结果:降脂宁调脂抗氧化有效部位指纹图谱有29个共有色谱峰,其中峰1～4,8,9来自山楂;峰20～29来自决明子;峰5,6,11～13,15,17～19来自荷叶;峰7,10,14,16来自制首乌.同批次药材和不同批次药材制备的降脂宁调脂抗氧化有效部位指纹图谱相似度分别均在0.99和0.90以上.结论:建立基于调脂抗氧化有效部位的降脂宁HPLC指纹图谱是可行的,该方法准确,稳定,重复性好,能够以调脂抗氧化活性为基础,有效控制降脂宁质量.     

R语言多目标优化养阴通脑颗粒组方中3种黄酮类指标成分提取工艺

目的 多目标优化养阴通脑颗粒组方中3种黄酮类指标成分的提取工艺.方法 以养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的提取率为检测指标,采用4因素3水平的正交试验设计方法进行提取工艺考察.通过R语言结合熵权法赋予权值,建立BP神经网络模型,再利用遗传算法对网络进行目标寻优,从而得到养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的最佳提取工艺.结果 养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的最优工艺条件为乙醇体积分数85%、提取时间1.5 h、提取温度80 ℃、乙醇用量25倍,模型综合评价预测值为0.389,而实验所得的平均综合评价值为0.394,相对误差为1.27%,表明具有良好的网络预测性.结论 结合所得3个指标成分的提取率和提取工艺的可操作性、可重复性,建立的数学模型可用于对养阴通脑颗粒组方中葛根素、毛蕊异黄酮和芒柄花素的提取工艺进行分析和预测,为实现中药有效成分多目标寻优提供了新的参考.     

活血养阴颗粒提取纯化工艺研究

目的研究活血养阴颗粒制备工艺,优选最佳提取、纯化工艺条件。方法以葛根素含量、含固量为检测指标,用正交试验考察了3种因素(加水量、煎煮时间、煎煮次数)对其水煎煮工艺的影响;然后比较了不同的醇沉浓度的去杂效果。结果活血养阴颗粒最佳水提工艺条件为先加12倍量水,煎煮1.5 h,再加10倍量水,煎煮1 h,煎煮2次;去杂工艺以60%乙醇沉为佳。结论制备工艺合理。     

活血养阴颗粒质量标准研究

目的:建立活血养阴颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱法对活血养阴颗粒中的葛根、益母草进行定性鉴别;采用HPLC对制剂中葛根素进行了含量测定,高效液相色谱条件Alltima C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.3%磷酸溶液(26∶74),流速1.0 mL.min-1,检测波长250 nm,柱温35℃,以外标法计算含量。结果:TLC色谱中能检出葛根、益母草;高效液相色谱测定葛根素在0.041 8～1.002 2μg呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率99.4%,RSD 1.4%(n=6)。结论:该法可准确地进行定性、定量,可有效地控制活血养阴颗粒的质量。     

HPLC同时测定养阴清肺颗粒中芍药苷、甘草苷和肉桂酸含量

目的:建立以高效液相色谱法同时测定养阴清肺颗粒中芍药苷、甘草苷和肉桂酸含量的方法。方法:采用双波长切换-高效液相色谱法对养阴清肺颗粒中芍药苷、甘草苷和肉桂酸进行定量分析。Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相0.2%磷酸水-乙腈梯度洗脱,检测波长276,230 nm,柱温28℃,流速1.0 mL·min-1。结果:芍药苷、甘草苷和肉桂酸分别在0.236 8~4.736 mg·L-1(r=0.999 9),0.170 8~3.416 mg·L-1(r=0.999 9),0.035 2~0.704 mg·L-1(r=0.999 9)线性关系良好;平均回收率分别为99.74%,98.82%,98.40%。RSD分别为0.78%,0.97%,1.04%。结论:该方法简便、快速、准确,可用于养阴清肺颗粒的质量控制。     

HPLC考察和厚朴酚在Caco-2细胞模型的转运特征

目的:研究和厚朴酚在Caco-2细胞模型中的转运机制.方法:Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.5 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈.水(70:30),检测波长203 nm.以Caco-2细胞模型研究和厚朴酚的双向转运,考察时间、药物浓度、抑制剂、pH、温度对和厚朴酚转运的影响.运用HPLC检测药物浓度,计算其表观渗透系数.结果:和厚朴酚标准曲线为Y=24 044X-3 763.6(r=0.999 8),检测限0.04 μmol·L-1.和厚朴酚在Caco-2细胞模型中,从细胞层底端到顶端的转运量小于顶端到底端的转运,在相同浓度条件下和厚朴酚在AP→BP和BP→AP方向的转运量随时间呈增长趋势;维拉帕米可以显著提高和厚朴酚AP→BL的转运量;pH对和厚朴酚在AP→BL方向的转运影响不明显;和厚朴酚在AP→BL和BL→AP方向对温度有依赖性.结论:和厚朴酚在Caco-2细胞模型中的转运主要为被动转运,兼有载体介导的主动转运,同时还受到P-gp糖蛋白的外排作用.