凋亡相关基因survivin、caspase-3及cyclin-B1在胃癌发生、发展中的作用

目的 检测凋亡相关基因survivin、caspase-3和cyclin—B1在胃癌组织中的表达，探讨其表达在胃癌发生、发展中的作用。方法 采用RT—PCR方法检测survivin mRNA、caspase-3 mRNA和cyclin-B1 mRNA在30例胃癌组织、10例癌旁正常胃组织标本中的表达。结果 30例胃癌组织中有20例survivin mRNA阳性表达，10例正常胃组织中无survivin mRNA表达；30例胃癌组织和10例正常胃组织中均有caspase-3 mRNA和cyclin—B1 mRNA阳性表达；20例survivin mRNA阳性表达的胃癌组织中caspase-3 mRNA和cyclin-B1 mRNA表达水平明显低于lo例survivin mRNA阴性表达的胃癌组织（P〈0．01）和正常胃组织（P〈0．01）；10例survivin mRNA阴性表达的胃癌组织caspase-3 mRNA和cyclin—B1 mRNA表达水平亦明显低于10例正常胃组织（P〈0．01）。相关性分析表明，survivin的表达与caspase-3（r=-0．923，P〈0．01）和cyclin-B1（r=0．886，P〈0．01）表达呈负相关，caspase-3的表达与cyclin-B1表达呈正相关（r=0．892，p〈-0．01）。结论survivin促进胃癌发生、发展，caspase-3和cyclin-B1抑制胃癌发生、发展。     

syndecan-1蛋白在胃癌中的表达及其意义

目的研究syndecan-1蛋白在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达，探讨其与胃癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化ABC法检测60例胃癌及正常胃黏膜组织中syndecan-1蛋白的表达水平。结果60例正常胃黏膜组织中均有syndecan-1蛋白表达，但胃癌组织中仅有10例（16．67％）呈阳性表达，正常胃黏膜组织中syndecan-1蛋白表达阳性率明显高于胃癌组织（χ^2=65．88，P〈0.05）。syndecan-1蛋白的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关（P〈0．05），其中无淋巴结转移的胃癌组织中syndecan～1蛋白表达阳性率明显高于有淋巴结转移者（χ^2=18．62，P〈0.05）；与胃癌患者的年龄和肿瘤部位无关（P〉0.05）。结论胃癌组织中syndecan-1蛋白低表达，并与胃癌分期和淋巴结转移有关。     

FRZB基因在胃癌组织中的表达和胃癌细胞内定位及其意义

目的研究FRZB基因在胃癌中的表达和在细胞内的定位及其意义。方法通过免疫组织化学（免疫组化）链霉菌抗生物素蛋白．过氧化酶连接法（SP法）对90例胃癌组织及正常胃黏膜组织FRZB基因的表达进行分析。通过定量PCR和Western印迹检测胃癌细胞株和胃上皮细胞株GES-1的FRZB表达，并用免疫荧光技术对FRZB的细胞内定位进行研究。结果FRZB在胃癌中的表达高于正常胃黏膜，在胃癌组织中，FRZB表达阳性率为92．2％，而正常胃黏膜中除了1例（10．0％）为弱阳性表达外，其余均为阴性。FRZB在胃癌组织中的表达与分化程度（P=0．220）和Lauren分型（P〈0．01）相关，与其他的临床病理参数不相关。免疫荧光和Western印迹结果显示，FRZB在细胞核和细胞质中均有表达。定量PER结果显示，在胃癌细胞株中FRZB表达高于GES-1。结论FRZB与胃癌的分化和肠型及弥漫型的发生相关，FRZB在细胞核的定位可能与其在胃癌中的作用相关。     

肿瘤转移相关基因Ezrin在胃癌中的表达及意义

目的 探讨细胞骨架蛋白Ezrin在胃癌中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学方法（免疫组化法）检测组织芯片上90例胃癌组织及12例正常胃组织标本中Ezrin的表达，结合胃癌的临床病理特点进行分析。同时应用Western印记检测胃癌细胞株的Ezrin的表达，体外侵袭试验验证其侵袭能力。结果 90例胃癌组织中Ezrin的阳性表达率为93．3％，而12例正常组织Ezrin表达均阴性，两者比较P〈0.05，差异有统计学意义。同时，Ezrin阳性率与胃癌患者有无区域淋巴结转移相关（P〈0．05）。胃癌MKN-45细胞株中Ezrin的表达（171．72）明显高于其他4个细胞株（47.44～132．51）；同时，MKN-45细胞的侵袭能力（220．21）也强于其他4株胃癌细胞（89．23～210．35）。结论 胃癌组织中的Ezrin阳性表达显著高于正常胃组织，并与胃癌的转移相关。     

VEGF-C和MMP-7的表达与胃癌侵袭转移的关系

目的 探讨胃癌中血管内皮生长因子C（VEGF-C）和基质金属蛋白酶7（MMP-7）的表达及两者与胃癌侵袭和淋巴结转移的关系。方法 采用SP免疫组化技术，分别检测60例胃癌组织、癌旁组织及30例癌周区域淋巴结中VEGF-C及MMP-7的表达水平。结果 VEGF-C和MMP-7在胃癌组织中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜及癌旁组织；在区域淋巴结癌转移组中的阳性表达率明显高于无癌转移组（P〈0．01）；伴有淋巴结转移的胃癌组织中VEGF-C，MMP-7的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（P〈0．05）；VEGF-C，MMP-7表达与淋巴结转移、淋巴管侵犯、浸润深度、TNM分期有密切关系（P〈0．05）。结论 VEGF-C和MMP-7在胃癌中的高表达与胃癌浸润侵袭程度、淋巴结转移有密切关系。     

MAT2A 基因在胃癌中的表达及临床意义

目的：探讨甲硫氨酸腺苷转移酶2A（MAT2A）在胃癌组织及癌旁组织中的表达及意义。 方法：分别应用real-time PCR及Western blot技术检测48例胃癌组织和30例癌旁正常胃组织中MAT2A mRNA与蛋白的表达。 结果：real-time PCR与Western blot结果显示,胃癌组织中MAT2A mRNA相对表达量明显高于癌旁正常胃组织（3.99±2.52 vs. 1.17±1.04）;MAT2A蛋白相对表达量明显高于癌旁正常胃组织（0.62±0.05 vs. 0.20±0.02）,差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论：MAT2A在胃癌组织中表达上调,提示其在胃癌发病机制中起了重要的作用,其作用机制值得进一步研究。     

血红素氧合酶-1及Toll样受体2/4在直肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨血红素氧合酶-1（hemeoxyenase-1，HO-1）和Toll样受体2／4（Toll-like receptor 2／4，TLR2，4）在直肠癌中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学法和RT—PCR检测30例直肠癌组织中HO-1蛋白以及HO-1mRNA、TLR2／4mRNA的表达。结果：直肠癌组织中HO-1蛋白表达（13／30）明显高于正常组织（3/30）（P〈0．05），HO-1mRNA表达也明显高于正常组织（t=15．24，P〈0．05）；直肠癌组织中TLR2／4mRNA的表达高于正常组织（P〈0．05），且HO-1 mRNA与TLR2／4mRNA表达之间存在相关性（P〈0．05）。结论：HO-1和TLR2／4在直肠癌组织中高表达且呈正相关，提示参与直肠癌的发生、发展。     

TFPI-2基因在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨TFPI-2基因在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集临床胃癌患者术后大体标本64例,采用免疫组织化学方法检测TFPI-2蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达,采用RT-PCR法检测TFPI-2 mRNA在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达。结果:TFPI-2蛋白在正常胃黏膜组织中的表达高于胃癌组织(P0.05),无淋巴结转移胃癌组织的TFPI-2蛋白表达高于有淋巴结转移的胃癌组织(P0.05)。TFPI-2 mRNA在正常胃黏膜组织中的表达明显高于胃癌组织(P0.05),无淋巴结转移胃癌组织的TFPI-2 mRNA表达高于有淋巴结转移的胃癌组织(P0.05)。结论:TPFI-2基因是胃癌发生、侵袭和转移的重要调节因子,其低表达与胃癌淋巴结转移的生物学行为密切相关。     

黏着斑激酶的高表达与人胃癌侵袭和转移的关系

目的 探讨胃癌侵袭和转移过程中黏着斑激酶（FAK）的表达与其生物学行为的关系。方法 用免疫组化SABC法检测10例行胃癌根治术所收集的癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织和胃区域淋巴结标本中FAK的表达情况。结果FAK表达强阳性率在胃癌组织中（78．0％）明显高于正常胃黏膜组织（10．0％）及癌旁组织（20．0％），P〈0．01，正常胃黏膜组织与癌旁组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。FAK表达强阳性率在淋巴结有转移和无转移患者中分别是68．8％（22／32）和33．3％（6／18），前者明显高于后者（P〈0．05）；在有转移的淋巴结中和无转移的淋巴结中分别是87．2％（136／156）和40．9％（18／44），前者明显高于后者（P〈0．01）；FAK表达强阳性率与胃癌浸润深度和分化程度有关，浸润深度越深，细胞分化越低，表达强阳性率越高（P〈0．05）；与Borrmann分型、肿瘤部位及大小无关（P〉0．05）。结论 FAK表达与胃癌发生、发展有关，FAK表达增高是胃癌细胞浸润和转移的重要原因之一，检测癌组织中FAK表达水平，有助于进一步了解胃癌的生物学行为，有利于治疗与预后判断。     

Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达水平及其意义

目的研究Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌临床病理特征的关系。方法采用Real—time PCR和Western blotting检测胃癌肿瘤组织和相应正常组织内Notchl和NUMB的表达。结果Notchl mRNA在胃癌中的平均表达水平是正常胃组织的1．67倍（P〈0．05）,且与肿瘤的分化程度和淋巴转移有关。NUMB mRNA在胃癌中的平均表达水平仅是正常胃组织的0．597倍（P〈0．05）,与肿瘤分化程度有关。Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达呈负相关关系（r=-0．459,P〈0．05）。胃癌肿瘤组织中Notchl蛋白的相对含量为（0．348±0．133）,明显高于正常组织中Notchl蛋白的相对含量（0．208±0．140）（P〈0．05）,胃癌肿瘤组织中NUMB蛋白的相对含量为（0．490±0．440）,明显低于正常组织中NUMB蛋白的相对含量（0．746±0．390）（P〈0．05）。结论在胃癌中存在Notch信号转导通路的过度活化,Notchl的上调和NUMB的下调在胃癌发生、发展中可能发挥重要的作用。     

ABCG2和OCT4在胆囊癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨ABCG2和OCT4在胆囊癌组织中的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR法检测新鲜的胆囊良、恶性组织中ABCG2和OCT4 mRNA中的表达。采用Western印迹法检测新鲜的胆囊良、恶性组织中ABCG2和OCT4蛋白的表达。采用免疫组化法检测40例胆囊癌组织和8例慢性胆囊炎组织石蜡切片中ABCG2和OCT4的表达水平。对ABCG2和OCT4表达情况进行统计学处理,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果:①实时荧光定量PCR显示,胆囊癌组织中ABCG2和OCT4 mRNA中的表达分别为(117.9±10.5)和(86.2±13.2),均高于慢性胆囊炎组织[(27.1±7.9)和(2.1±1.0)]的表达,各组间有统计学差异。②Western印迹法检测显示,ABCG2蛋白在胆囊癌组织中的表达水平较强,而在慢性胆囊炎组织表达较弱;在慢性胆囊炎组织中未见OCT4蛋白表达,而在肿瘤中都有表达。③免疫组化实验结果显示,ABCG2的阳性表达率在胆囊癌和慢性胆囊炎组分别为60.0%和37.5%,两组间有统计学差异(P0.05),但与周围脏器侵犯与否、癌组织分化程度及病理TNM分期有关(P<0.05)。结论:与慢性胆囊炎组织相比,ABCG2和OCT4在胆囊癌组织中的转录和翻译水平都有过表达。ABCG2和OCT4的表达水平与胆囊癌侵袭能力、分化程度及TNM分期有关,且两者表达呈正相关;提示ABCG2和OCT4是反映胆囊癌生物学行为的重要指标。     

Na^＋-H^＋换泵1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织中Na^＋-H^＋交换泵1（NHE1）的表达水平及其与临床病理资料的关系.方法 分别应用RT-PCR和Western blot方法检测60例胃癌组织及其相匹配的癌旁胃黏膜组织中NHE1 mRNA及蛋白的表达情况,并进一步分析其表达与胃癌临床病理资料的关系.结果 本组60例患者胃癌组织中NHE1 mRNA及蛋白表达的相对表达量分别为0.786±0.291和1.442±0.175,高于癌旁组织的0.369±0.052和0.348±0.029,差异均有统计学意义（均P〈0.01）.胃癌组织中NHE1 mRNA表达和NHE1蛋白表达显著相关（r=0.264,P〈0.05）.NHE1 mRNA和蛋白表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关（均P〈0.05）,而与年龄、性别及分化程度无关（P〉0.05）.结论 胃癌组织中的NHE1 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高,可能参与了胃癌的发生发展进程.     

肝细胞癌Period1 表达与预后的关系

目的：探讨Period1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及意义。 方法：用RT-PCR与Western blot法检测30例HCC组织与其癌旁肝组织及5例正常肝组织中Period1 mRNA与蛋白表达;甲基化特异性PCR检测HCC组织与癌旁肝组织中Period1启动子甲基化水平;免疫组化检测67例HCC组织及其癌旁肝组织石蜡切片中Period1蛋白的表达;分析Period1的表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。 结果：HCC组织Period1 mRNA和蛋白的表达水平均较癌旁肝组织与正常肝组织明显降低（均P<0.05）,而两者在癌旁肝组织与正常肝组织间差异无统计学意义（均P>0.05）;HCC组织Period1启动子甲基化水平较其癌旁肝组织明显增高（均P<0.05）。HCC组织石蜡切片中Period1阳性表达率为47.8%,而癌旁肝组织阳性表达率为83.6%,差异有统计学意义（P<0.05）;Period1表达与HCC分化程度、结节数目、有无静脉浸润有关（均P<0.05）;Period1阳性表达HCC患者中位复时间与中位生存时间均明显短于阳性者（均P<0.05）。 结论：Period1在肝癌中表达下调可能与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关;启动子甲基化可能是Period1表达下调的重要机制。     

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）与肾癌干细胞关系的初步研究

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在肾癌组织中的表达及其与肾癌干细胞之间的关系。方法采用免疫组化方法检测65例手术切除肾癌组织（透明细胞癌）和15例癌旁正常组织中ABCG2的表达情况。结果ABCG2阳性染色主要定位于癌细胞的细胞膜,胞质中也有部分表达。ABCG2在肾癌组织中呈较高表达,其中ABCG2在低分化肾癌组织中的表达高于中、高分化者（P〈0．05）;ABCG2的表达与肾癌患者的临床分期无关（P〉0．05）。癌旁正常组织中ABCG2呈弱表达或无表达,与肾癌组织相比差异有显著性（P〈0．05）。结论ABCG2在肾癌组织中表达较高,其可能参与了肾癌的发生和发展,可以作为肾癌干细胞研究的重要标志物。     

NDRG2基因在原发性肝细胞肝癌及正常肝组织中的表达研究

目的探讨NDRG2基因在人原发性肝细胞肝癌及正常肝组织中的表达及其临床意义。方法收集原发性肝细胞肝癌及正常肝组织标本,采用免疫组化ABC法、Western blot法及Real-time PCR法检测原发性肝细胞肝癌及正常肝组织标本中NDRG2蛋白和mRNA的表达情况,并结合图像分析,比较两者表达的差异。结果 NDRG2蛋白在肝癌组织及正常肝组织中的表达阳性率分别为16.67%(5/30)和100%(30/30),2组差异有统计学意义(P<0.05),且阳性表达呈现在细胞质中,细胞核中未见有表达。图像分析结果显示,NDRG2蛋白在肝癌组织中表达的相对含量为0.029 0±0.005 9,在正常肝组织中为0.109 2±0.002 8,前者低于后者,其差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot法检测结果与免疫组化染色结果相一致,在肝癌组织及正常肝组织中均检测到NDRG2蛋白,肝癌组织中NDRG2蛋白相对表达量为1.13±0.15,低于正常肝组织的1.57±0.18(P<0.05)。Real-time PCR分析结果显示肝癌组织中NDRG2 mRNA表达量为0.89±0.15,低于正常肝组织的1.48±0.17(P<0.05),但肝癌Edmondson-Steiner分级的各级肝癌组织之间NDRG2 mRNA表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 NDRG2基因在原发性肝细胞肝癌及正常肝组织中可能存在差异性表达,提示该基因可能参与了肝细胞肝癌的发生和发展,但其具体作用及调控机理有待进一步研究。     

胃癌淋巴管生成与淋巴结转移的关系

目的:研究胃癌淋巴管生成与淋巴结转移的关系。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)mRNA及其蛋白在5株胃癌细胞株和3对伴有淋巴结转移的胃癌组织及相应的正常黏膜中的表达。此外,还应用免疫组织化学方法检测86例胃癌标本的淋巴管密度(LVD)和VEGF-C蛋白的表达。结果:VEGF-C mRNA和蛋白高表达于3株胃癌细胞,而VEGFR-3 mRNA和蛋白在上述3个细胞株中均呈弱表达。VEGF-C和VEGFR-3 mRNA均表达于3对伴有淋巴结转移的胃癌和相应的正常黏膜组织中,但在正常组织中的表达水平低于肿瘤组织。VEGF-C蛋白在66.3%(57/86)的病例中呈阳性表达。在伴淋巴结转移的胃癌中,VEGF-C表达较无淋巴结转移者更显著(P<0.001),其表达与淋巴管浸润(P<0.001)和TNM分期(P<0.01)均密切相关,但与病人的年龄和性别、肿瘤大小、位置、组织学类型、浸润深度及远处转移均无明显相关。LVD则与VEGF-C蛋白表达(P<0.001)、淋巴结转移(P<0.01)、淋巴管浸润(P<0.01)、TNM分期(P<0.05)及组织学类型(P<0.05)密切相关,但与病人的年龄和性别、肿瘤大小、位置、浸润深度及远处转移无明显相关。结论:在胃癌中,VEGF-C可能通过VEGFR-3信号通道促进淋巴管生成,从而增加胃癌淋巴结转移率。因此,肿瘤淋巴管生成可能成为治疗胃癌的一个新靶点。