己酮可可碱对肾小管上皮细胞转分化抑制作用的实验研究

目的:探讨己酮可可碱(PTX)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,并在体外研究其对肾小管上皮细胞转分化及其对Smad 7表达的作用.方法:将实验大鼠分为假手术组、UUO对照组和UUO PTX治疗组.用免疫组化法测定各组动物肾组织α-SMA表达.体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),经TGF-β1及PTX干预后,用蛋白印迹检测α-SMA和Smad 7表达,用ELISA检测培养上清中Ⅰ型胶原含量.结果:假手术组大鼠肾组织仅血管壁α-SMA免疫染色阳性.UUO对照组第3 d、第7 d、第14 d,α-SMA表达程度分别为(2.90±0.71)%、(8.50±0.97)%、(17.9±2.70)%,PTX治疗组则分别为(2.70±0.62)%、(6.90±0.83)%、(13.8±1.9)%,术后第7 d(P<0.05)、第14 d(P<0.01)两组有统计学差异.TGF-β1(8 ng/ml)刺激HK-2细胞72 h后,α-SMA表达强度为(87.7±7.0)%,培养上清中Ⅰ型胶原浓度为(2 560.49±95.03) ng/ml;而加入PTX 10、50、100、300、500 μg/ml干预72 h后,α-SMA表达强度(F＝174.998,P<0.001)和培养上清中的Ⅰ型胶原(F＝460.883,P<0.001)呈浓度依赖性减少.在TGF-β1刺激前24 h、TGF-β1刺激后0 h、12 h、24 h、36 h或48 h后分别加入PTX(500 μg/ml),α-SMA表达强度(F＝144.131,P<0.001)和培养上清中的Ⅰ型胶原(F＝444.557,P<0.001)则呈时间依赖性减少.TGF-β1刺激的同时,分别加入PTX 10、50、100、300、500 μg/ml干预72 h后,Smad 7表达强度分别为(50.6±3.1)%、(49.4±2.9)%、(48.9±2.5)%、(51.4±1.8)%、(49.5±3.0)%,与阳性对照组(46.9±3.5)%比较无统计学差异(P＞0.05).结论:(1)PTX可减少UUO大鼠肾间质α-SMA表达;(2)在体外,PTX可抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化,该作用与Smad 7表达无关,其机制有待于进一步研究.     

肾纤康对肾间质纤维化大鼠Smad信号通路的影响

目的：研究肾纤康对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3、Smad7表达的影响,探讨肾纤康防治肾间质纤维化的作用机制。方法：将40只大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、肾纤康组、苯那普利组,采用左侧输尿管梗阻方法造模,用免疫组织化学方法作肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7检测,并观察肾脏病理学变化。结果：模型组和各治疗组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3面积比增加,Smad7面积比减少,与假手术组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。与模型组相比,药物治疗组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3面积比减少,Smad7面积比增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。肾纤康组与苯那普利组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7面积比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：肾纤康通过下调TGF-β1、Smad2、Smad3在肾间质的表达及增加Smad7的表达而抑制单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化,与肾纤康可调节TGF-β1/Smad信号转导通路有关,其作用与苯那普利差异无统计学意义。     

蛋白尿致肾小管间质纤维化的机制及防治

肾间质纤维化是各种不同病因的慢性肾脏病进展到终末期肾病（ESRD）的共同病变过程。动物实验和临床试验表明，各种肾脏疾病进行性肾功能恶化主要取决于肾间质损伤的严重程度。蛋白尿是肾小球疾病的共同临床表现，长期蛋白尿不仅引起肾小球硬化，而且可以直接导致肾小管间质损伤，后者与肾小球疾病进展的关系更为密切。我们的研究发现，在血压、肾功能均正常且其他各项临床指标相近的条件下，显著蛋白尿IgA肾病患者的肾小球及肾小管间质损害程度更为严重，蛋白尿可作为独立的致病因子，直接造成IgA肾病患者肾小管间质损害。因此，研究肾间质纤维化的分子机制，探索有效的防治措施，对延缓ESRD的进程意义重大。本文重点阐述蛋白尿致肾小管间质损伤的机制及防治现况。     

白细胞介素18对促进肾小管萎缩和间质纤维化的影响

目的:探讨白细胞介素18(IL-18)对肾小管萎缩和间质纤维化的作用.方法:在体外实验中应用不同浓度的IL-18处理人类近端肾小管上皮细胞株(HK-2).应用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;应用流式细胞技术和免疫组化技术检测细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达和细胞形态学的变化.结果:低浓度短时间 IL-18作用对细胞凋亡无影响,而较高浓度IL-18作用可促使肾小管上皮细胞凋亡;IL-18具有显著促进肾小管上皮细胞表达α-SMA作用,并呈剂量和时间依赖关系,而且表达α-SMA的细胞具有肌成纤维细胞的形态学特征.结论:肾病状态下IL-18可能具有促进肾小管萎缩和肾间质纤维化的作用.     

天生饮对肾血管性高血压大鼠肾Smad3和Smad7表达的影响

目的：研究天生饮对肾血管性高血压大鼠肾Smad3和Smad7表达的影响。方法：将清洁级SD大鼠随机分成正常组、假手术组、手术组。实验大鼠适应性喂养1周,采用二肾-夹法复制肾血管性高血压大鼠模型,手术组均在无菌条件下进行左侧肾动脉夹窄术,假手术组只分离左侧肾动脉不夹,正常组不作任何处理。术后第4周,将造模成功的手术组大鼠随机分为模型组和天生饮组。天生饮组每天给予天生饮灌胃,模型组、假手术组和正常组以蒸馏水灌胃,连续灌胃4周后处死所有动物。用HE方法观察左肾组织形态学改变,用免疫组化法分别检测大鼠左肾组织中Smad3和Smad7的表达。结果：模型组大鼠与正常组、假手术组比较：血压、BUN及Scr升高,肾纤维化程度增加,Smad3的表达量上调,Smad7的表达量下调,以上组间的差异均具有统计学意义（P〈0.01）;经天生饮治疗4周后,天生饮组大鼠与模型组比较：肾纤维化程度减轻,Smad3的表达量下调,Smad7的表达量上调,组间差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论：天生饮能够减轻两肾-夹肾血管性高血压大鼠肾纤维化程度,且其疗效机制可能是通过降低Smad3的表达和促进Smad7的表达。     

肾小管间质纤维化中转化生长因子β1的表达特征

目的 研究大鼠肾小管间质纤维化中转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）的表达特征。方法 以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化实验模型,应用免疫组织化学（组化）、逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、原位杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测６只正常及３０只模型大鼠肾组织ＴＧＦ－β１蛋白及基因表达。结果 ６只正常大鼠肾组织ＴＧＦ－β１主要位于皮髓交界处肾小管上皮细胞,ＴＧＦ－β１免疫组化平均阳性表达率为（     

低氧与肾小管间质纤维化

各种肾脏疾病进展到一定程度，尽管原发病因各不相同，也不管原发病因治疗控制效果差异，慢性肾脏疾病总是一致性地向终末期肾脏疾病（end—stage rendal disease，ESRD）方向进展。这些疾病的同向转化，即使原发病控制良好（如高血压肾病控制血压后、或者糖尿病肾病控制血糖后），疾病转归仍然符合这个规律。这些结果提示：慢性肾脏疾病的进展、恶化，存在共同的发病机制。同时，肾间质纤维化是各种不同病因的慢性肾病进展到ESRD共同病变过程。     

苦参碱对肾小管间质MMP-3和TIMP-1的影响

目的:观察苦参碱对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾小管间质MMP-3和TIMP-1表达水平的影响,初步探讨其对小管间质纤维化的作用机制.方法:实验分为正常组(A组)、假UUO组(B组)、UUO组(C组)、苦参碱低剂量治疗组(D组)、苦参碱高剂量治疗组(E组)和福辛普利对照组(F组).运用免疫组化技术观察第7 d、14 d各组大鼠的MMP-3和TIMP-1表达水平,采用Pearson分析方法分析二者在C组中的相关性.结果:在C组和各药物组中,MMP-3表达水平在第7 d、14 d均显著低于A组和B组(P<0.05),但各药物组的表达水平明显高于C组(P<0.05);TIMP-1在A组和B组的表达最低,各药物组的表达水平显著低于C组(P<0.05);MMP-3 和TIMP-1在E组与F组间均无统计学差异(P>0.05);MMP-3与TIMP-1在C组的免疫组化半定量分析呈显著负相关(P<0.01).结论:苦参碱可部分恢复肾小管间质MMP-3的表达,降低TIMP-1的表达,延缓肾小管间质纤维化的进程.     

梗阻性肾病大鼠肾小管间质进行性纤维化的监测

目的:探讨梗阻性肾病肾小管间质进行性纤维变性的发展过程。方法:建立大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO),采用免疫组化染色方法测其双侧肾形态学改变及胶原Ⅳ蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的沉积;应用RT-PCR定性和半定量的方法测其金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)mRNA、胶原ⅣmRNA的表达。结果:随着梗阻时间延长,梗阻侧肾脏肾小管间质变宽,肾小球无明显变化。梗阻肾内的胶原Ⅳ蛋白和α平滑肌肌动蛋白沉积增加,差异有统计学意义(P<0.05)。胶原ⅣmRNA、TIMP-1mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);对侧肾脏各项指标变化差异无显著性。结论:该模型稳定可靠,能较好地体现梗阻性肾病中肾小管间质纤维化进行性发展过程。     

上调Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜间皮细胞转分化的影响

目的 探讨上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠模型腹膜间皮细胞转分化的影响，为进一步研究防止腹膜纤维化的措施提供依据。 方法 将24只体重180~200 g SD雄性大鼠随机分为4组:A组(6只):正常对照组；B组(6只):腹膜纤维化模型组，每日按100 ml/kg腹腔注射4.25%透析液，并于造模后第8、10、12、22、24、26天按0.6 mg/kg腹腔注射脂多糖(LPS)；C组(6只):空白载体组，在建立模型的第1、14天转染空白载体和pEF purop-Tet-on质粒；D组(6只):Smad7转染组，在建立模型第1、14天转染Smad7和pEF purop-Tet-on质粒。各组均在每日饮水中加入强力霉素(200 mg/L)诱导基因表达。所有动物于实验第28天杀检，取脏层腹膜组织行光镜及电镜检查。用RT-PCR、间接免疫荧光和Western印迹方法检测α-SMA、E-钙黏蛋白(cadherin)、Smad7、磷酸化(P)-Smad2/3 mRNA和蛋白表达。 结果 与正常对照组比较，腹膜纤维化模型组和空白载体组p-Smad2/3蛋白水平显著升高，α-SMA mRNA和蛋白表达上调，但E-cadherin mRNA和蛋白水平明显下调。电镜结果显示，腹膜纤维化模型组和空白载体组腹膜间皮细胞微绒毛脱落，基底膜断裂，并向间皮下组织迁徙，胞浆中有密体、密斑和肌丝出现。与上述2组比较，Smad7基因转染组Smad7蛋白表达明显增加，p-Smad2/3蛋白水平明显下调，α-SMA mRNA和蛋白水平也明显降低，而E-cadherin mRNA和蛋白水平无明显变化。电镜结果显示，Smad7基因转染组腹膜间皮细胞微绒毛明显增多，细胞连接和基底膜趋于完整。 结论 基因转染上调Smad7表达可通过部分抑制TGF-β受体调控信号通路(Smad2/3)，抑制腹膜间皮细胞向肌成纤维细胞的转分化。     

骨成形蛋白-7在大鼠肾小管间质损害中的作用

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠中骨成形蛋白-7(BMP-7)在肾小管间质中的表达部位、动态变化及其与肾小管间质损害的关系。方法60只Wistar大鼠随机分为正常大鼠组、假手术组和单侧输尿管梗阻组,分别于术后1d、3d、7d、14d处死。采用RT-PCR方法检测BMP-7mRNA、TGF-β1.mRNA表达水平,免疫组化方法检测肾小管间质中BMP-7、TGF-β1、α-SMA的蛋白定位、表达及其与输尿管梗阻后肾小管间质损害的关系。结果与对照组相比,BMP-7mRNA于术后第1天即出现表达下降并随梗阻时间延长递减;而TGF-β1mRNA则随梗阻时间延长而递增(P均<0.05)。BMP-7蛋白在对照组中高度表达,主要分布在肾小管及肾间质,肾小球内基本无表达。在梗阻组随着肾间质损害的加重,BMP-7蛋白表达呈进行性下降,第14天表达量最弱,几乎没有明显的阳性表达,而TGF-β1、α-SMA蛋白表达则逐渐增加(P均<0.01)。BMP-7与TGF-β1蛋白表达阳性面积成显著负相关(r=-0.875,P<0.05)。BMP-7与α-SMA蛋白表达阳性面积亦成显著负相关(r=-0.843,P<0.05)。结论BMP-7于肾小管间质病变早期即出现表达下调,早于肾间质纤维化的出现,其表达量与肾间质TGF-β1、α-SMA表达负相关且随间质病变进展进行性下降。BMP-7表达下调可能参与介导肾小管间质损害的发生发展。     

Triptolide inhibits the tubulointerstitial fibrosis in rats of unilateral ureteral obstruction by up-regulating Ski expression

Objective To investigate the effects of triptolide on tubulointerstitial fibrosis in rats kidneys with the unilateral ureteral obstruction (UUO) by examining the expression of collagen type Ι (Col-Ι), Ski, Smad3, TGF-β1. Methods Sixty male SD rats were divided into three groups: Sham operation group (Sham group), UUO group and triptolide (0.2 mg•kg-1•d-1) treatment group. The levels of blood urea nitrogen (BUN), serum creatinine (Scr), pathological changes were measured. Col-Ι, Ski and Smad3 expressions were assessed by immunohistochemistry. Protein and mRNA expressions of Ski, Smad3, TGF-β1 were assessed by Western blotting and real-time PCR. Results Compared with Sham group, Scr and BUN increased significantly in UUO group (P＜0.05). Interstitial fibrosis was prominent and renal interstitial injury score increased significantly in UUO group (P＜0.05). The expressions of Col-Ι and Smad3 were increased in UUO group (P＜0.05). Compared with Sham group, the protein expressions of TGF-β1 and Smad3 were increased, the Ski protein was decreased in UUO group (P＜0.05). In triptolide group, the morphological changes were notably reduced (P＜0.05). Comparison with UUO group, triptolide could increase the protein and mRNA expressions of Ski significantly, and decreased the protein and mRNA expressions of Smad3 and TGF-β1 (P＜0.05). Conclusion Triptolide can reduce the tubulointerstitial fibrosis by up-regulating Ski, and down-regulating TGF-β1 and Smad3.     

红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

肾间质纤维化几乎是所有慢性肾脏疾病发展至终末期肾衰竭(ESRD)的共同通路.梗阻性肾病的病理变化主要表现为肾小管萎缩和间质纤维化,而肾小管上皮细胞凋亡是肾小管萎缩和肾实质丧失的主要原因[1,2].红细胞生成素(EPO)能调节红细胞生成以增加组织供氧,除此之外,EPO也是一种抗凋亡因子,介导多种细胞抗凋亡作用.Koury等[3]报道EPO调节红细胞生成的一种主要机制就是防止红系祖细胞凋亡.而EPO对肾间质纤维化的影响及其机制尚未见阐明.本研究旨在观察EPO对肾间质纤维化的影响并初步探讨其可能的作用机制.     

小鼠单侧输尿管梗阻诱导肾脏纤维化模型中Cadherin6的表达变化

目的研究钙黏蛋白6(cadherin6,CDH6)在肾脏纤维化中表达的变化。方法建立单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠模型,术后21天收获肾脏组织,HE染色观察肾间质纤维化程度,RT-q PCR检测肾组织FSP-1、TGF-β1、CDH6 m RNA表达量,免疫组化染色检测肾组织FSP-1、CDH6蛋白表达量;TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞HK-2,RT-q PCR及Western Blot分别检测FN1、PAI-1、CDH6 m RNA表达量及CDH6蛋白表达量。结果 HE染色显示UUO组小鼠肾脏出现肾小管萎缩、大量基质沉积,与Sham组相比,UUO组小鼠肾脏组织FSP-1、TGF-β1、CDH6 m RNA表达量及FSP-1、CDH6蛋白表达量均上调;细胞实验结果显示,与空白对照组相比,TGF-β1诱导的HK-2细胞形态向成纤维细胞转变,FN1、PAI-1m RNA表达水平上调,CDH6 m RNA及蛋白表达水平上调。结论 TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞CDH6及纤维化相关因子表达上调,伴随上皮细胞向间质表型转化,可能参与单侧输尿管梗阻诱导的小鼠肾脏纤维化的发展。     

螺内酯对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的防治作用

肾小管间质纤维化是进行性肾损害的主要病理特征,阻抑肾间质纤维化的进展意义重大。醛固酮在肾脏病进展中起重要作用,然而拮抗醛固酮的作用对肾间质纤维化的影响及其机制仍未阐明。在本研究中我们观察了醛固酮受体拮抗剂螺内酯对肾间质纤维化的影响并初步探讨了其可能的作用机制。一、材料与方法     

替普瑞酮对大鼠梗阻性肾病间质纤维化的影响

目的探讨替普瑞酮（GGA）对大鼠梗阻性肾病模型（UUO）肾间质纤维化的影响和可能机制。方法15只SD大鼠随机分成3组：假手术组、UUO模型组和GGA治疗组，每组5只。从建立UUO模型前1d开始，GGA治疗组和模型组分别给予400mg／kgGGA和溶媒（0．05％阿拉伯树胶＋0．008％维生素E）灌胃，每天1次，术后第7天处死大鼠。常规染色观察肾脏组织病理改变。间接免疫荧光和Western印迹检测肾脏E-钙黏蛋白（E—cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的水平。TUNEL染色和PCNA免疫组织化学染色分别观察肾小管上皮细胞的凋亡和增生情况。结果GGA能诱导肾脏特异性高表达热休克蛋白72（HSP72）。与UUO模型组相比，GGA治疗组肾小管损伤和肾问质纤维化的程度明显减轻『肾小管损害百分比（48．7％±1．3％比65．8％±7．3％）；肾间质损害分值（0．40±0．08比1．36±0．50），P均〈0．05】；E—cadherin蛋白水平增加，α-SMA蛋白水平降低（P均〈0．05）；每高倍视野中TUNEL阳性和PCNA染色阳性的细胞数显著减少（分别为6．78±1．25比2．81±0．63，57．61±5．42比17．66±1．38，P均〈0．05）。结论GGA可能通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡，延缓大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的进程。     

螺内酯对肾间质纤维化中细胞增殖凋亡失衡的影响

螺内酯是醛固酮受体拮抗剂，传统认为是弱效利尿剂，新近发现它能改善单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化病变程度，但作用机制尚不清楚。本研究从细胞增殖凋亡失衡角度来探讨醛固酮受体拮抗剂对UUO大鼠肾间质纤维化的作用。     

维甲酸抑制大鼠单侧输尿管梗阻模型肾间质纤维化

目的探讨维甲酸对大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响。方法建立大鼠UUO模型前2d治疗组和对照组分别每天给予10mg/kg全反式维甲酸或溶媒皮下注射。观察模型第3、7和12天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质巨噬细胞数、肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅲ和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达。结果维甲酸显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.01)。治疗组肾间质巨噬细胞数和肾间质α-SMA表达显著低于对照组(P<0.01)。维甲酸显著抑制胶原Ⅲ和MCP-1mRNA表达(P<0.01)。结论维甲酸减少大鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低胶原Ⅲ和MCP-1mRNA表达、抑制α-SMA蛋白的表达,从而减轻肾间质纤维化。     

细胞增殖与凋亡在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化发病中的意义

目的 了解细胞增殖与凋亡在肾小管间质纤维化中的意义。方法 动态观察单侧输尿管梗阻（ＵＵＯ）大鼠模型中梗阻侧肾脏及假手术组肾脏肾小管细胞及间质细胞的增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达及细胞凋亡情况,以及间质α平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）表达水平。结果 ＵＵＯ大鼠梗阻肾从第３天至第１１天,均可见较大量的细胞凋亡,以肾小管上皮细胞居多,其中亦有间质细胞。无论肾小管或间质细胞,ＰＣＮＡ的表达在第３天已达高峰,