PPARγ在尼美舒利影响胃癌细胞凋亡及增殖机制中的作用

目的:研究过氧化物酶增殖因子激活受体γ(PPARγ)途径在选择性COX-2抑制剂尼美舒利影响胃癌细胞凋亡和增殖机制中的作用.方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞,给予不同浓度PPARγ抑制剂GW9662及尼美舒利干预,同时设立对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测药物作用后细胞生长抑制率,流式细胞仪(FCM)观察药物作用后细胞凋亡及细胞周期的变化.结果:MTT结果显示经GW9662作用后,尼美舒利对SGC-7901细胞增殖的抑制作用减弱,且在一定范围内呈剂量依赖性;FCM检测结果显示GW9662能抑制尼美舒利的促细胞凋亡作用,使G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高.结论:PPARγ途径很可能是选择性COX-2抑制剂尼美舒利影响胃癌细胞增殖及凋亡的途径之一.     

尼美舒利对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 体外研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪(FCM)、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察细胞形态等技术,研究尼美舒利对人肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制和促进凋亡的影响.结果 MTT比色法显示塞来昔布对A549细胞有较强的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;FCM显示有凋亡峰出现,凋亡率在(12.69±0.87)%～(43.87±1.53)%;尼美舒利使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定效应关系;荧光显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学特征:细胞体积缩小、细胞核固缩,凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.结论 尼美舒利体外能够显著抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关.     

尼美舒利对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的体外研究选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法、流式细胞仪（FCM）、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察细胞形态等技术,研究尼美舒利对人肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制和促进凋亡的影响。结果MTT比色法显示塞来昔布对A549细胞有较强的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;FCM显示有凋亡峰出现,凋亡率在（12.69±0.87）%～（43.87±1.53）%;尼美舒利使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定效应关系;荧光显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学特征：细胞体积缩小、细胞核固缩,凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量和时间依赖。结论尼美舒利体外能够显著抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

尼美舒利对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及STAT3通路相关蛋白表达的影响研究

目的:探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利抑制胃癌细胞株SGC7901增殖的作用和可能的细胞内信号转导机制.方法:将选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胃癌细胞株SGC7901,MTY法检测细胞增殖状态;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;Western blot法检测STAT3通路相关蛋白的表达.结果:尼美舒利作用胃癌细胞株SGC7901后细胞增殖受到显著抑制且呈时间、剂量依赖性方式;细胞凋亡百分数增高(P<0.05);G0/G1期细胞比例升高(P<0.05);Western Blot结果显示SGC7901细胞中磷酸化STAT3(P-STAT3)、CyclinDI、Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.05).结论:尼美舒利可抑制胃癌细胞株SGC7901的增殖,阻滞细胞周期的进展,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制STAT3信号通路相关蛋白P-STAT3、CyclinDl、Bcl-2表达有关.     

舒林酸抑制结肠癌细胞株增殖诱导凋亡

目的 研究非选择性环氧化酶(COX) 抑制剂舒林酸对结肠癌细胞株HT-29 生长的影响及其参与引起细胞死亡的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT) 比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制,激光共聚焦显微镜(LSM)及荧光显微镜观察细胞凋亡,流式细胞仪( FCM) 分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 MTT 显示舒林酸能呈剂量和浓度依赖性抑制HT-29的增殖.TUNEL 染色荧光显微镜下观察凋亡细胞呈棕褐色,AnnexinV/PI染色后LSM观察凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色, FCM显示此药促进细胞的凋亡,使处于G0 /G1期的细胞比例显著降低.结论 舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长,促进其凋亡,其机制可能与其阻止细胞周期的进展有关.     

尼美舒利对人胃癌细胞株SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的:体外研究尼美舒利对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用MTT法、流式细胞仪(FCM)、电镜等技术,体外研究尼美舒利对人胃癌细胞株SGC-7901增殖和影响及可能的机制.结果:MTT显示尼美舒利(12.5～400μmol/L)呈时间-剂量依赖方式抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖.FCM显示,DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰".S期、G2/M期细胞比例升高,G1期细胞比例下降,阻止细胞周期的进展.电镜下见典型的细胞凋亡形态特征:细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成等.结论:尼美舒利体外能显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901生长,可能与诱导细胞凋亡阻止细胞周期进展有关.     

尼美舒利对三阴性乳腺癌干细胞体外增殖和凋亡的影响

目的体外研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对三阴性乳腺癌(TNBC)干细胞体外增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中分别加入不同浓度的尼美舒利,作用24、48、72 h后,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,电镜观察细胞形态,Western blot法检测Cox/Bax/Bcl-2蛋白表达。结果尼美舒利能显著抑制TNBC干细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;并使G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,引起明显的细胞凋亡。电镜可见典型的细胞凋亡形态学特征:细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量依赖。Western blot分析显示,尼美舒利作用细胞后,随着浓度的增加细胞COX-2和Bcl-2表达水平降低,但Bax表达水平增高。结论尼美舒利体外能够显著抑制TNBC干细胞增殖,诱导其凋亡,COX-2、Bcl-2及Bax等凋亡相关基因可能参与了尼美舒利诱导的TNBC干细胞凋亡过程。     

尼美舒利对人结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29、HCT-116为对象,用体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果（1）尼美舒利对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞;（2）尼美舒利可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布,明显降低增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制COX2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖,诱导其凋亡,干预结肠癌的发展。     

尼美舒利、阿司匹林对COX-2不同表达水平的食管鳞癌细胞株的抑制作用

目的比较选择性和非选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法选取食管鳞癌细胞株EC109和TE-1,采用Western blotting法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增生以及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡(PI标记),观察阿司匹林及尼美舒利对2株细胞增生、凋亡的作用。结果 Westernblotting结果显示,EC109细胞表达COX-2,TE-1细胞不表达COX-2。选择性COX-2抑制剂———尼美舒利可抑制EC109细胞的增生,抑制率为(17.5±3.3)%~(80.1±3.9)%。尼美舒利仅在0.4 mmol/L时对TE-1细胞有抑制作用,抑制率为(16.2±7.0)%。尼美舒利可使EC109细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。非选择性COX-2抑制剂———阿司匹林在0~4 mmol/L浓度区间对EC109和TE-1均有抑制作用,并呈剂量依赖关系。阿司匹林作用后,EC109与TE-1的细胞周期均被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(10.55±0.01)%及(8.52±6.65)%。结论食管鳞癌(esophagealsquamous cell carcinoma,ESCC)细胞株中COX-2的表达水平影响了选择性COX-2抑制剂的抑制作用,而对非选择性COX-2抑制剂影响较小。阿司匹林可能通过非COX-2依赖途径从而发挥对肿瘤的抑制作用。     

选择性环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞Bgc-823增殖的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂——美洛昔康、塞来昔布对胃癌细胞Bgc-823增殖与凋亡的影响。方法四唑盐比色实验法（MTT法）检测Bgc-823细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果美洛昔康、塞来昔布呈剂量和时间依赖性抑制Bgc-823细胞的增殖;塞来昔布的作用强于美洛昔康。塞来昔布可诱导Bgc-823细胞凋亡,将细胞阻滞在G0/G1期;随着药物浓度的增加,凋亡率增加,G0/G1期细胞比例增加。结论选择性COX-2抑制剂呈剂量和时间依赖性抑制胃癌细胞生长,这种作用可能依赖于对COX-2表达的抑制。选择性COX-2抑制剂呈剂量依赖性影响细胞周期,诱导胃癌细胞凋亡。     

舒林酸抑制胃癌BGC-823细胞生长的实验观察

目的:观察舒林酸对胃癌BGC-823细胞生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法:将舒林酸设置不同的作用浓度和作用时间于人胃癌BGC-823细胞共培养.采用MTT比色法检测胃癌细胞抑制率,流式细胞术检测胃癌细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组化检测细胞增殖(ki-67)、凋亡抑制基因(survivin)及还氧合酶(COX-2)蛋白的表达.结果:舒林酸使胃癌BGC-823细胞的生长受抑制,出现G0/G1期比例增高,S期比例降低,同时使细胞凋亡率显著上升;而ki-67、survivin及COX-2蛋白表达阳性率显著降低,上述作用均呈时间和剂量依赖性(P＜0.01).结论:舒林酸可抑制胃癌BGC-823细胞生长,其机制涉及影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡及抑制COX-2、ki-67及survivin蛋白的表达.     

尼美舒利对脱氧胆酸诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖的抑制作用的研究

目的观察尼美舒利对脱氧胆酸(DCA)诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用,探讨其可能的机制。方法200μmol/L DCA加到HT-29细胞培养液中,同时给予不同浓度尼美舒利(50、75和100μmol/L),采用MTT法测定细胞增殖;RT-PCR法检测环氧合酶-2(COX-2)mRNA,免疫组化染色法检测细胞COX-2表达,放免法检测前列腺素E2(PGE2)含量。结果DCA作用HT-29细胞6h,COX-2蛋白表达阳性率较对照组明显升高(64.2%±6.2%比7.1%±1.9%),PGE2合成增加(23.9ng/L±1.3ng/L比10.5ng/L±0.9ng/L),尼美舒利对DCA诱导的HT-29细胞作用6h可抑制细胞增殖,并可抑制DCA诱导的COX-2mRNA表达,并抑制PGE2合成,上述作用均呈浓度-时间依赖性。结论尼美舒利可抑制DCA诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖,抑制COX-2mRNA表达和蛋白表达及PGE2合成,这可能是尼美舒利抑制HT-29细胞增殖的机制之一。     

JMJD2B通过ERK-MAPK途径影响人结直肠癌细胞的恶性表型

目的:探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B影响人结直肠癌细胞恶性表型所介导的信号通路?方法:以RNA干扰技术靶向沉默人结直肠癌细胞HCT116和SW480中JMJD2B的表达,采用蛋白质印迹法检测人结直肠癌细胞ERK-MAPK信号通路的变化,并分别采用CCK-8?流式细胞分析检测细胞增殖和细胞周期分布?凋亡情况?结果:转染JMJD2B siRNA能特异性抑制JMJD2B的表达并导致ERK2表达下调,其磷酸化水平也降低,肿瘤细胞发生G2/M或G0/G1期阻滞,细胞凋亡比例增加,增殖显著受抑(P<0.05)?结论:抑制JMJD2B可通过阻断ERK-MAPK信号转导而抑制人结直肠癌细胞的恶性表型?     

草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的调控

目的：探讨草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的影响。方法：以不同浓度的草分枝杆菌制剂（商品名乌体林斯，Utilin S）体外处理人结肠癌细胞株Lovo，48h后以流式细胞仪检测细胞周期动力学指标的变化。结果：4种不同浓度的药物均能调控Lovo细胞的细胞周期，使G0－G1期细胞数率非常显著地上升（P＜0．01），G2－M期细胞数率显著地上升（P＜0．05），同时使S期细胞数率非常显著地下降（P＜0．01）。结论：乌体林斯能直接抑制结肠癌细胞株Lovo增殖，并可能通过G2－M期细胞阻滞而促进Lovo癌细胞凋亡的发生。     

COX-2抑制剂Nimesulide抗肺癌作用及其机制研究

目的：流行病学资料显示,非甾体类抗炎药物阿司匹林能降低肺癌的发病率。我们的目的是探讨Nimesulide-一种选择性COX-2抑制剂对肺癌A549细胞增殖的影响及其机制。方法：采用MTT比色法观察Nimesulide对A549细胞生长的影响,采用放射免疫法（ELISA）测定Nimesulide对肺癌A549细胞上清液中前列腺E2（PGE2）释放的影响,免疫细胞化学法测定肺癌A549细胞中COX-2、PCNA、bcl-2基因蛋白表达水平。结果：Nimesulide呈时间、剂量依赖性抑制A549细胞增殖,抑制率最低22.73%,最高72.04%;以剂量依赖性方式抑制A549细胞PGE2释放;Nimesulide可抑制A549细胞PCNA、bcl-2的蛋白表达,而对COX-2蛋白表达无影响。结论：Nimesulide以时间、剂量依赖性方式抑制肺癌A549细胞增殖,其机制可能与抑制肺癌A549细胞PGE2释放,并下调A549细胞PCNA、bcl-2的蛋白表达有关,而对COX-2的蛋白表达无影响。选择性COX-2抑制剂Nimesulide有可能在肺癌防治中发挥重要作用。     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS-398抗结肠癌机制及对5-氟尿嘧啶化疗的辅助作用

目的 研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398的抗结肠癌作用机制及其在5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗中的辅助作用。方法 (1)用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测结肠癌HT-29、SW480细胞COX-2 mRNA表达后,将NS-398作用于两株细胞,用ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)水平。(2)将NS-398、5-Fu、NS-398 5-Fu分别作用于两株细胞,24、48和72h后用MTT法检测细胞增殖状态。以流式细胞技术观察药物对细胞凋亡的影响。结果 (1)HT-29细胞中COX-2 mRNA呈高表达,NS-398作用后PGE2表达水平明显降低;SW480细胞中COX-2 mRNA表达呈阴性,NS-398作用后PGE2水平无明显变化。(2)NS-398、5-Fu呈剂量依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡;NS-398 5-Fu抗增殖的作用较单一用药时更明显,而凋亡诱导作用与单一用药差异无显著意义。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398具有抗结肠癌作用;NS-398抗结肠癌作用可能不依赖于COX-2和PGE2的表达水平;NS-398与5-Fu具有协同的抗增殖作用。     

小RNA干扰MMP-2基因表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨小RNA干扰基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响。方法收集结直肠癌病人的结直肠癌组织及正常的癌旁组织,Western blotting检测MMP-2表达水平。取结直肠癌细胞SW620作为对照组,将MMP-2 siRNA、siRNA control转染至结直肠癌细胞中,Western blotting检测转染48 h后MMP-2 siRNA组、siRNA control组和对照组细胞中MMP-2水平,MTT法检测各组细胞存活情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡变化,Western blotting检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、β-连环蛋白（β-catenin）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、下游靶基因C-myc、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）水平。结直肠癌细胞与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535作用后,测定抑制剂组和未处理组（不加抑制剂）细胞增殖、凋亡变化,同时检测细胞中Bcl-2、β-catenin、Bax、C-myc、cyclin D1蛋白变化。结果结直肠癌组织中MMP-2蛋白表达水平明显高于癌旁组织（P < 0.01）。MMP-2 siRNA组MMP-2水平均低于对照组和siRNA control组（P < 0.05）,细胞存活率低于对照组（P < 0.05）,细胞凋亡率均高于对照组和siRNA control组（P < 0.05）。Bcl-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1水平均低于对照组和siRNA control组（P < 0.05）,Bax水平均高于对照组和siRNA control组（P < 0.05）。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂作用后,抑制剂组细胞存活率低于未处理组（P < 0.05）,细胞凋亡率高于未处理组（P < 0.05）,Bcl-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1水平均明显低于未处理组（P < 0.01）,Bax水平明显高于未处理组（P < 0.01）,与转染MMP-2 siRNA的结直肠癌细胞一致。结论MMP-2在结直肠癌组织中表达上调,抑制MMP-2的结直肠癌细胞增殖受到抑制,凋亡增多,其作用机制与Wnt/β-catenin信号通路有关。