首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 203 毫秒
1.
反义寡核苷酸转染对胆管癌细胞侵袭能力的实验研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
陈长宏  王曙光  李大江  刘利 《重庆医学》2002,31(11):1053-1055
目的 探讨层粘连蛋白受体反义寡核苷酸 (AS OD)对胆管癌细胞体外侵袭和转移能力的影响。方法 以层粘连蛋白受体反义寡核苷酸片段转染胆管癌细胞高转移性亚群 ,RT PCR和流式细胞仪检测转染前后细胞层粘连蛋白受体mRNA和蛋白的表达差异 ,体外粘附实验和侵袭实验检测转染前后细胞粘附和侵袭能力的改变。结果 反义寡核苷酸转染后可在mRNA水平和蛋白水平下调层粘连蛋白受体的表达 ,且下调作用呈剂量依赖性。与空白对照组及顺义寡核苷酸转染组比较相差均显著 (P<0 0 5 )。体外粘附和侵袭实验显示转染后细胞粘附和侵袭能力均较之转染前有显著下降 ,两者间相差均显著 (P <0 0 5 )。结论 层粘连蛋白受体反义寡核苷酸可降低胆管癌细胞体外侵袭和转移能力。  相似文献   

2.
杨晓鲲  杨亚东  杨桂红  唐书谦  伍津津 《重庆医学》2013,(29):3465-3467,3471
目的建立人皮肤鳞癌细胞体外三维培养模型,分离高侵袭性细胞亚群,并比较其生物学特性。方法利用复方壳多糖组织工程皮肤,成功建立人皮肤鳞癌细胞体外三维培养模型,消化分离得到高侵袭性鳞癌细胞亚群,比较肉桂醛和干扰素作用后对不同侵袭特性细胞亚群的增殖抑制效果,同时比较不同侵袭特性细胞亚群在裸鼠中成瘤效果的不同。结果不同浓度的肉桂醛和干扰素对皮肤鳞癌细胞的增殖抑制差异有统计学意义(P<0.01),不同侵袭特性的皮肤鳞癌细胞亚群之间的增殖抑制差异也有统计学意义(P<0.01),另外,两种不同侵袭特性的细胞亚群的成瘤特性差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功建立人皮肤鳞癌体外三维培养模型,同时运用此种三维培养模型能够筛选得到侵袭特性更强的细胞亚群。  相似文献   

3.
目的以穿透人工基底膜的能力大小为依据筛选具有体外高侵袭能力的胃癌细胞亚系。方法用体外培养法收集扩增能侵袭穿透人工基底膜的胃癌细胞亚系;比较母亚两系的侵袭能力;流式细胞术检测母亚两系细胞周期;免疫组织化学SP法观察母亚两系细胞Flt-4蛋白表达情况。结果从母系MKN-28中成功筛选出高侵袭力胃癌细胞亚系MKN-28S;显微镜下细胞计数示亚系侵袭至膜背面的数量较母系明显增多(P〈0.05),细胞侵袭力增强;亚系中Flt-4蛋白表达同母系相比显著增高;亚系增殖指数(PI)高于母系。结论MKN-28S细胞较MKN-28细胞具有更强体外侵袭力和增殖能力。  相似文献   

4.
目的筛选与人胶质瘤侵袭及转移密切相关的miRNA的表达谱。方法用Transwell侵袭小室,从人胶质瘤T98G细胞中筛选出高侵袭性的癌细胞。通过这一体外筛选过程获得3个高侵袭性的细胞亚群,命名为T98G-4M-1、T98G-4M-2和T98G-4M-3。这些细胞亚群已被证明在软琼脂上有更强的集落形成能力,我们用miRNA芯片技术分析与转移相关的miRNA表达谱,并与对照组比较,以期了解这些细胞亚群间侵袭能力显著差别的原因。结果高侵袭性细胞亚群中有11个与转移相关的miRNA差异表达:其中let-7b、miR-200A、miR-222、miR-106和miR-193的表达上调;而mir-199B、mir-26A、mir-34、miR-29、mir-15A和mir-16的表达下调。结论这些差异表达的miRNA可能显著影响肿瘤转移及恶性转化。  相似文献   

5.
目的 从低转移性人成骨肉瘤细胞系 SOSP- 96 0 7中筛选出高转移亚群 ,并且建立人成骨肉瘤裸鼠转移模型 .方法 采用裸鼠腹腔传代的方法 ,获得腹水型自发性肺转移细胞 ,经体外培养和体内再次接种后获得高转移亚群 .应用细胞计数法、染色体显示法、流式细胞术及裸鼠体内实验法研究细胞的生物学特性 .结果 筛选出的高转移亚群 SOSP- M在转移分析实验中达到10 0 %肺转移率 ,除肺转移外还出现其他器官的转移 .其染色体为 5 0余条 ,保持人类染色体核型 .细胞周期中 S期细胞所占比例为 48.5 % . SOSP- M的细胞形态、染色体数目、体外及体内…  相似文献   

6.
目的建立BIU-87、EJ和T24 3株膀胱癌细胞的高侵袭力亚系,并对侵袭过程进行观察。方法通过构建侵袭小室,以穿透人工基底膜、聚碳酸脂膜能力为依据筛选具有体外高侵袭能力的膀胱癌细胞亚系。运用扫描电镜观察细胞侵袭的过程,通过生长曲线、细胞周期、体外侵袭力对母代与子代细胞体外增殖及侵袭能力进行对比。通过裸鼠膀胱灌注不同侵袭力的肿瘤细胞,对侵袭力与种植转移的关系进行初步研究。结果通过扫描电镜观察到了细胞的侵袭运动。筛选后的各子代细胞,经16代以上传代后,细胞形态与母代无明显变化,细胞增殖速度较母代有明显加快(P<0.05),体外侵袭能力较母系明显提高(P<0.001)。结论运用改良的侵袭实验筛选膀胱癌细胞系的高侵袭力亚系的方法是可靠的,建立的高侵袭力亚系细胞为今后对膀胱癌侵袭及转移的研究提供了较为可靠的细胞模型。  相似文献   

7.
目的 筛选B16M高低转移株,以探讨B16M的转移异质性及机制.方法 通过B16M自发肺转移模型筛选出转移性能不同的细胞株,并用实验性和自发性肿瘤转移模型验证其在体内生长、转移性. 通过细胞增殖、3H-TdR参入实验、流式细胞技术、细胞侵袭离散实验研究了高、低转移B16M细胞株体外增殖能力、侵袭能力以及对离散因子的反应的差异,Western印迹实验研究细胞c-met表达及活化水平. 结果在所筛选出的3株可疑高转移B16M细胞株中,H3 B16M细胞接种于同系C57BL/6小鼠体内所形成的原发瘤重量、实验和自发性肺转移结节数明显高于其他细胞株;该细胞株增殖能力、侵袭性及对离散因子的反应能力的也明显高于其他细胞株.c-met表达及磷酸化水平也升高.结论成功的筛选出B16M 高、低转移细胞株,两者在细胞增殖、侵袭能力、离散能力等方面有差别.这种差异可能与c-met有关.  相似文献   

8.
目的:建立具有高侵袭力及稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的膀胱癌细胞株. 方法:通过构建侵袭小室,以穿透人工基底膜、聚碳酸脂膜能力为依据,筛选从人膀胱癌细胞系EJ中筛选具有体外高侵袭能力的膀胱癌细胞亚系(EJ-m3).用pEGFP-C1转染人膀胱癌细胞系EJ及其高侵袭力亚系,经G418抗性筛选和96孔板有限稀释获得稳定高表达EGFP的单克降细胞株.并用流式细胞术检测EGFP表达率,通过细胞周期、生长曲线和体外侵袭实验,对转染和未转染EGFP的细胞生物学行为进行综合分析. 结果:筛选出了具有高侵袭力的膀胱癌细胞EJ-m3,并获得了稳定高表达EGFP的细胞株EJ- GFP和EJ-m3-GFP.该两株细胞EGFP的表达率均为99.9%,增殖指数、生长曲线和体外侵袭力与未转染前相似(P>0.05). 结论:用改良侵袭实验筛选膀胱癌细胞系的高侵袭力亚系的方法是可靠的.转染EGFP的细胞其生物学行为并未发生改变.所获得的具有高侵袭力和稳定高表达EGFP的膀胱癌细胞为膀胱癌侵袭及转移的研究提供了良好的实验平台.  相似文献   

9.
目的 建立人前列腺癌小鼠转移模型,筛选前列腺癌高转移细胞亚系.方法 采用DU145细胞悬液原位注射法接种BNX小鼠,建立前列腺癌小鼠COI模型,取肺转移灶体外培养并采用侵袭小室体外筛选高侵袭性细胞,扩增后进行原位注射,如此将肺转移灶癌细胞在小鼠体传代2次,筛选高转移细胞亚系.结果 (1)原位细胞悬液注射法接种10只小鼠均成瘤,并都伴有肠系膜、腹股沟淋巴结,其中3只发现肺转移.(2)获得高转移前列腺癌细胞亚系DU145-M3,其侵袭能力强,肿瘤转移相关基因MAPK4和TIPM-2低表达,MMP-2高表达.结论 COI法是有效的前列腺癌转移模型制作方法;体内外连续筛选可获得高转移细胞亚系.  相似文献   

10.
CXCR4在不同转移潜能肝癌细胞中的表达及意义   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
  目的研究趋化因子受体CXCR4在高、低转移潜能肝癌细胞中的表达,并探讨其在肝癌细胞增殖和侵袭转移过程中的作用。方法 利用3B肝癌细胞株对人工基底膜穿透能力的差异获得不同转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验比较两细胞亚系的侵袭能力从而对其进行验证, 应用RT-PCR和Western Blot检测CXCR4在两细胞亚系中的表达。CCK8法检测两细胞亚系生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两细胞亚系细胞周期和凋亡率。结果成功筛选出高、低转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验证实高转移潜能肝癌细胞的侵袭能力高于低转移潜能肝癌细胞;RT-PCR和Western Blot均显示高转移潜能肝癌细胞在基因水平和蛋白水平的CXCR4表达均显著高于低转移潜能肝癌细胞;且两细胞亚系体外生长速度、倍增时间、细胞周期和凋亡率均具有明显差异。结论上述结果表明CXCR4在肝癌进展中发挥了重要的作用,可能为未来肝癌的诊疗提供理论依据。  相似文献   

11.
目的:探讨甘草酸二铵对腹膜透析的腹膜纤维化大鼠腹膜结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法:将50只SD大鼠随机分成空白对照组、0.9%氯化钠注射液组、模型组、已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组,各10只,建立大鼠腹膜透析模型,己酮可可碱治疗组同时给予己酮可可碱,甘草酸二铵治疗组同时给予甘草酸二铵进行干预,连续28 d,于第30天行4 h腹膜平衡实验测定腹膜功能,并留取壁层腹膜,观察病理形态,测量腹膜厚度,检测腹膜组织CTGF的表达.结果:光镜下,HE染色可见空白对照组和0.9%氯化钠注射液组腹膜表面覆盖着一层扁平间皮细胞,模型组、已酮可可碱治疗组和甘草酸二铵治疗组显示腹膜间皮细胞变形成为柱状、圆形,间皮细胞可见部分脱落,基质增厚,发现大量成纤维样细胞及巨噬、单核细胞浸润,且有纤维素样物质沉积.Masson染色显示有明显的胶原沉积,模型组比已酮可可碱治疗组和甘草酸二铵治疗组胶原沉积更明显.各组大鼠腹膜厚度为:模型组>已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组>空白对照组、0.9%氯化钠注射液组(P<0.01);各组腹膜超滤量和D4/D0为:空白对照组、0.9%氯化钠注射液组>已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组>模型组(P<0.01);各组腹膜Durea/Purea值和CTGF表达水平为:模型组>已酮可可碱治疗组、甘草酸二铵治疗组>空白对照组、0.9%氯化钠注射液组(P<0.01).结论:4.25%腹膜透析液会使大鼠腹膜纤维化,甘草酸二铵可以减轻腹膜纤维化及腹膜功能恶化.  相似文献   

12.
目的:观察中药悬饮宁方抑制人肺腺癌细胞SPC-A-1浸润的作用及对S180腹水瘤小鼠腹膜病理形态学变化的影响.方法:在进行小鼠腹膜间皮细胞分离培养的基础上,将SPC-A-1人肺腺癌细胞调整加入复层培养,观察形成的克隆数.取出S180腹水瘤小鼠腹膜,用透射电镜观察悬饮宁方各剂量组小鼠腹膜病理形态学的变化.结果:体外实验显示加入含有悬饮宁生药的培养液(50 μg/ml)后,SPC-A-1在琼脂培养皿背面形成的癌细胞克隆数明显减少.用悬饮宁治疗S180腹水瘤小鼠后,取出腹膜,在电镜下可观察到,从低剂量开始即可见小鼠腹膜间皮细胞排列整齐,随着剂量的递增这种现象更明显,间皮细胞排列更加整齐,增厚;而生理盐水组小鼠腹膜间皮细胞排列疏松,坏死.结论:中药悬饮宁方有抑制SPC-A-1细胞浸润的作用,悬饮宁还可以改变S180腹水瘤小鼠排列疏松的腹膜间皮细胞,从而控制腹水瘤小鼠癌性积液生长.  相似文献   

13.
目的通过椎痛消胶囊药效学实验,评价炎性细胞在腰椎间盘突出症中的作用及椎痛消胶囊对其的影响。方法将健康雄性Wistar大鼠60只随机分为椎痛消胶囊高、中、低剂量组及阳性对照组、模型对照组、正常对照组,每组10只。采用自体髓核植入,模拟腰椎间盘突出症模型。各组连续给药30d,正常对照组、模型对照组灌服等量蒸馏水。对各组大鼠的背根神经节、神经根进行组织学观察,计数炎性细胞。结果模型组神经节、神经根均出现明显的炎性细胞漫润;椎痛消胶囊高、中、低剂量组及阳性对照组的背根神经节、神经根术后的炎性细胞漫润数目明显减少,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001),相应的神经根损害明显减轻。结论髓核组织介导的炎性细胞浸润及炎症反应在腰椎间盘突出症中起重要作用;椎痛消胶囊能有效减少炎性细胞浸润、减轻炎症反应和神经组织的损伤,对促进突出物的吸收有重要意义。  相似文献   

14.
目的:探讨黄芪甲苷对肾性高血压大鼠肾脏的影响。方法将70只SD雄性大鼠分为2K1C组(n=60)与假手术组(n=10),2K1C组按照经典两肾一夹(2K1C)型肾性高血压大鼠模型方法建模,建模成功后随机分为模型组、低剂量黄芪甲苷组、高剂量黄芪甲苷组,每组20只。低剂量黄芪甲苷组和高剂量黄芪甲苷组分别给予黄芪甲苷200 mg/(kg·d)、800 mg/(kg· d),模型组和假手术组给予生理盐水200 mg/(kg· d)替代治疗,用药8周。处死大鼠,取右肾组织匀浆检测NO、NOS、肾素和AngII活性。手术前,各组大鼠尾动脉收缩压比较差异无显著性意义( P>0.05)。结果(1)术后8周,低剂量黄芪甲苷组、高剂量黄芪甲苷组大鼠尾动脉收缩压(134.2±8.2和128.3±7.8) mmHg明显低于模型组的(152.4±8.5)mmHg,但仍高于假手术组的(106.9±4.2)mmHg(P <0.05)。(2)光镜下可见模型组肾小球毛细血管塌陷,肾小球萎缩、硬化、坏死,部分肾小球代偿性肥大,肾间质可见大量炎症细胞和红细胞浸润等;高剂量黄芪甲苷组,可见肾小球肥大减轻,平均直径减小,未见肾小球萎缩、坏死,肾间质仍偶见炎症细胞浸润。(3)模型组、低剂量黄芪甲苷组、高剂量黄芪甲苷组右肾组织匀浆 NO、NOS明显低于假手术组( P<0.05);AngII含量显著高于假手术组(P<0.05)。低剂量黄芪甲苷组、高剂量黄芪甲苷组与模型组间上述指标比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷能够有效降低肾性高血压大鼠肾脏损伤。  相似文献   

15.
Eighty-eight patients with abdominal tuberculosis were studied for the diagnostic value of peritoneal biopsy. Peritoneum for biopsy was obtained during laparotomy in 41 cases and by making a small incision in the right iliac fossa, under local anaesthesia, in 47 cases. In 80% histopathological examination revealed caseation or giant cells and epithelioid cell infiltration. In 20% non-specific inflammatory changes were present. Thus, histopathological examination of the peritoneum was helpful in the diagnosis of abdominal tuberculosis in all the 88 patients.  相似文献   

16.
目的:探讨人结直肠癌组织CD4+、CD8+ T淋巴细胞与患者预后的关系,并评估其预测价值。方法:收集2012年1月至2014年1月浙江中医药大学附属杭州第三医院肛肠科收治的行手术切除并经病理证实的109例结直肠癌患者临床病理资料及术后标本。免疫组织化学检测结直肠癌组织中的CD4+、CD8+ T淋巴细胞水平,并依此高低分组。运用Kaplan-Meier生存曲线分析比较其临床特征和预后。同时,采用Cox比例风险回归模型对可能影响患者预后的临床因素进行单因素和多因素分析。结果:免疫组织化学结果显示,CD8+ T细胞浸润高水平78例,低水平31例;CD4+ T细胞浸润高水平56例,低水平53例。结直肠癌组织中CD4+、CD8+ T淋巴细胞水平与肿瘤分期、浸润深度密切相关(P<0.05)。随访分析显示,高水平CD8+及CD8+/CD4+结直肠癌患者的DFS和OS预后较好(P<0.05)。高水平CD4+结直肠癌患者的DFS、OS与低水平组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Cox回归模型分析示肿瘤分期、淋巴结转移、CD8+及CD8+/CD4+均为结直肠癌患者术后DFS和OS预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论:CD8+及CD8+/CD4+水平对判断结直肠癌患者的预后有较好的参考价值。  相似文献   

17.
目的 为子宫内膜异位症治疗新方法的研究提供理想的动物模型。方法 取64只性成熟、未孕、动情周期规律的SD大鼠,于动情期在腹膜、皮下利用"刀划法"行自体子宫内膜移植,术后4周比较两移植部位建模情况。结果 大鼠动情期自体子宫内膜移植总体成功率为93.3%,其中腹膜移植成功率为51.7%,皮下移植成功率为88.3%,两者比较差异有统计学意义;比较两部位异位病灶的体积,差异无统计学意义。结论 利用"刀划法"建立大鼠子宫内膜异位症模型成功率较高,皮下移植比腹膜移植成功率高。  相似文献   

18.
[摘要] 目的 利用生物信息学技术分析筛选出与肝癌复发相关的核心基因及信号通路,为探索肝癌复发的分子机制提供理论依据。方法 从TCGA和GEO数据库下载肝癌相关数据集,利用edgeR算法筛选差异表达基因。选择关键基因后,应用LASSO-Logistic回归分析构建复发预测模型。 ssGSEA、CIBERSORT和MCP算法用于评估免疫浸润细胞。结果 共筛选出343个复发相关差异表达基因。富集分析表明,大多数基因富集于细胞分化、跨膜转运蛋白、转运乙酰胆碱复合物。蛋白质-蛋白质相互作用网络分析确定了 12 个关键基因。然后,通过 Lasso-logistic 回归分析确定了一个独立的风险评分模型,其中包括3个基因 SST、CALB2 和 DRD2。该风险评分显示出较好的预测能力,并且还构建了基于风险评分的临床列线图。此外,证明了CALB2在肿瘤组织中低表达,与肿瘤微环境中的免疫浸润细胞呈正相关。结论 复发相关基因模型可以提供较好的预测患者复发的能力,其中的核心基因CALB2 可以在肝癌复发中发挥关键作用。  相似文献   

19.
陈星宇  姚辉华  徐荣华  李媛媛  司超  赵春   《四川医学》2017,38(10):1120-1124
目的探讨术前外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、肿瘤间质炎症反应与胃癌患者根治术后总体生存时间(OS)的相关性。方法收集67例患者资料,按NLR是否大于3分为低NLR组及高NLR组。高倍镜下评估肿瘤间质中性粒细胞、单个核细胞浸润程度和浸润细胞的主要类型,分别按浸润程度及类型分组。分析NLR、肿瘤间质炎症细胞浸润特点与临床病理特征的关系,以Kaplan-Meier生存曲线分析各指标与患者预后关系。结果 NLR与肿瘤标准物CA199、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期密切相关,肿瘤间质以中性粒细胞浸润为主与肿瘤浸润较深、伴淋巴结转移显著相关(P<0.05),肿瘤间质中性粒细胞浸润程度与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关,但中性粒细胞/淋巴细胞比值与局部炎症反应无显著联系(P>0.05)。高NLR组患者OS较低NLR组明显缩短,中性粒细胞浸润程度高的患者OS明显缩短(P<0.05)。结论 NLR和肿瘤间质中性粒细胞浸润程度对胃癌患者预后有预测价值。  相似文献   

20.
Han X  Zhang P  Wang J  He B 《中华医学杂志》2011,91(14):956-960
目的 探讨肺癌组织中嗜酸细胞浸润与白细胞介素5(IL-5)表达的意义.方法 采用组织化学变色酸2R特殊染色法标记45例肺癌患者癌及癌旁组织中的嗜酸细胞,观察嗜酸细胞浸润情况;同时应用免疫组化的方法检测IL-5的表达;研究其与临床及病理分型的关系.结果 45例患者肺癌组织中17例(37.8%)存在嗜酸细胞的高浸润,在嗜酸细胞高浸润病例肺癌组织中的嗜酸细胞计数较癌旁组织明显增高(P<0.05),NSCLC较SCLC癌组织中嗜酸细胞高浸润的比例明显增高(P<0.05);45例肺癌组织中41例(91.1%)IL-5强阳性表达,4例(8.9%)阳性表达,且均为癌细胞胞质表达,在癌旁组织中呈阴性或低表达,肺癌组织与癌旁组织中的IL-5表达差异有统计学意义(P<0.05);肺癌组织中嗜酸细胞浸润的数量与癌细胞中IL-5的表达无明显相关性(r=0.026,P>0.05).结论 部分肺癌患者肿瘤组织内存在嗜酸细胞高浸润,在NSGLC更为多见.肺癌细胞内普遍存在IL-5高表达,肺癌细胞内IL-5高表达与肺癌组织中嗜酸细胞的浸润量无明显相关性.
Abstract:
Objective To study the correlation of the eosinophilic infiltration with the expression of Interleukin-5 (IL-5) in tissue specimens from the patients with lung cancer. Methods Eosinophilic infiltration was detected by chromotrope-2R histochemical staining. And the level of IL-5 was detected by immunohistochemistry in 45 lung cancer tissues and 36 corresponding normal lung tissues. Results Highlevel tissue eosinophilic infiltration was found in 17 of 45 (37. 8% ) cases of lung cancer. In cases with high-level tissue eosinophilic infiltration, the count of eosinophil in tumor tissues was significantly higher than that in corresponding normal lung tissue ( P <0. 05 ). In non-small cell lung cancer (NSCLC), the rate of high-level tissue eosinophilic infiltration cases was significantly higher than that of small cell lung cancer (SCLC) (P < 0. 05 ). IL-5 was expressed at a high level in all 45 cases of lung cancer and at a low level in corresponding normal lung tissues. Eosinophilic infiltration was not correlated with the expression of IL-5 in lung cancer tissues (r = 0. 026, P > 0. 05). Conclusion High-level eosinophilic infiltration of tumor tissues is found in some cases of lung cancer. Compared with SCLC, the rate of high-level tissue eosinophilic infiltration cases of NSCLC is significantly elevated. There is no correlation between the eosinophilic infiltration and the expression of IL-5 in lung cancer tissues.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号