重组RA538、反义c-myc腺病毒对不同细胞系转染效率与作用及其机制的研究

腺病毒载体研究的发展使基因治疗付诸于临床应用成为可能,它以遗传毒性低、致病性小、宿主范围广、滴度高、装载容量大等优势已广泛用于基因治疗。腺病毒载体能感染增生分裂细胞及非增生分裂细胞,相同的腺病毒载体对不同的靶细胞可能会产生不同的作用,阐明腺病毒载体转染效率及疗效之间存在的关系及其机制具有重要意义。我们的研究发现腺病毒（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ,Ａｄ）介导的ＲＡ５３８、反义（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ,ＡＳ）ｃ－ｍｙｃ具有抑制人胃癌细胞生长、诱导其凋亡及下调节ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达的作用（另文发表）。…     

重组腺病毒介导反义c-myc基因对人肝癌细胞系的治疗作用

目的：探讨重组腺病毒介导反义ｃ－ｍｙｃ基因（Ａｄ－ＡＳｍｙｃ）治疗人肝癌细胞的作用。方法：观察Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系的转导效率,通过细胞生长曲线、克隆形成实验、ＤＮＡ片段化分析、ＲＴ－ＰＣＲ、裸鼠皮下移植瘤治疗实验,分析Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系Ｂｅｌ－７４０２、ＱＳＧ－７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１和ＨＣＣ－９２０４细胞生长和ｃ－ｍｙｃ基因表达及裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果：Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可高效转导人肝癌细胞系,抑制细胞生长;转染细胞克隆形成能力降低,克隆成活率为对照组的５３．９％～６９．１％,ｃ－ｍｙｃ基因表达下降;Ａｄ－ＡＳｍｙｃ处理肝癌细胞,ＤＮＡ凝胶电泳出现明显的梯形条带,瘤内注射Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可抑制裸鼠皮下移植瘤生长。结论：重组腺病毒介导的反义ｃ－ｍｙｃ基因转移,有可能成为肝癌基因治疗     

重组RA538,反义c—myc腺病毒对bcl—2高表达细胞系的作用及分子 …

目的 研究重组ＲＡ５３８（Ａｄ－ＲＡ５３８）、反义ｃ－ｍｙｃ腺病毒（Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ）在ｂｃｌ－２高表达细胞系中的作用及其分析机制。方法 采用细胞形态学观察、ＭＴＴ、ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ等方法,研究ＲＡ５３８,反义ｃ０ｍｙｃ重组腺病毒在ｂｃｌ－２高表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ－ｂｃｌ２和ＳｉＨａ－ｂｃｌ２以及在其亲本细胞中的生物学作用及其分子机制。结果 以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉ     

肺癌放射免疫导向手术的动物实验研究

目的 探讨放射免疫导向手术在检测小鼠肺癌动物模型肿瘤转移的灵敏度、特异性及可靠性。方法 应用抗入肺腺癌单克隆抗体ＬＣ－１生物素化预定位技术进行肺腺癌小鼠放射免疫导向手术。结果 γ照相机体外显像和井型探测仪体内放射浓集,其原发肿瘤和肺部转移灶的Ｔ／ＮＴ比值均显著高于未进行生物素化抗体预定位的荷瘤小鼠（Ｐ〈０．０１）。应用手持型γ探测仪（ＧＤＰ）对荷瘤小鼠进行体内探测,判别小鼠肺部肿瘤转移的灵敏度为９     

DNA-PKCS反义寡核苷酸转染肺腺癌细胞系A549提高放射敏感性的实验研究

目的 通过DNA-PKCS反义寡核苷酸转染肺癌细胞A549,探讨DNA-PKCS对肺癌细胞放射敏感性影响.方法 设0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0.8.0 Gy放射剂量点处理对照组(与转染无关的寡核苷酸)和实验组(转染DNA-PKCS反义寡核苷酸),用成克隆法分析细胞存活分分数,并分别用线性二次模型和多靶单击模型拟合出细胞存活曲线,求出放射生物学参数α、β、SF2、Do、Dq和N,评价细胞放射敏感性变化.结果 对照组α值为0.14,β值为0.030,SF2值为0.63,Do值为2.38,Dq值为1.43.实验组α值为0.31,β值为0.018,SF2值为0.41,Do值为2.09,Do值为0.60.实验组细胞的α值增大,β、SF2、Do、Dq值均减少.结论 DNA-PKCS反义寡核苷酸可增强A549细胞放射敏感性,DNA-PKCS是治疗肺癌的潜在靶点.     

腺病毒介导RA538基因转移及其对肿瘤的抑制作用

目的:RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因,本研究探讨了其抗癌作用.方法:利用腺病毒介导基因转移观察对肿瘤细胞的抑制效应.结果:通过重组体腺病毒将RA538基因转导到人肺腺癌细胞系(GLC-82)和人结肠癌细胞系(HCY)中,获得较高的转导效率,显示出较明显的抑制肿瘤生长作用,抑制率分别为77.2%和77.9%,并能降低两细胞系体内肿瘤形成能力.流式细胞计数、DNA片段化分析及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡.Westem blot分析表明,RA538具有明显下调c-myc基因表达的作用,结论:研究结果提示,RA538是一个较广谱的抑癌基因,可以作为肿瘤基因治疗的一个新目的基因,具有良好的应用前景.     

反义c-myc重组腺病毒的构建及其抗骨肉瘤细胞的作用

背景与目的:c-myc原癌基因在细胞的增殖调节中发挥重要作用,研究表明c-myc在骨肉瘤中常常扩增和过表达,而且具有促进细胞转化和诱导转移的特性。本文构建表达反义c-myc的重组腺病毒,并探讨其对不同p53基因型的骨肉瘤细胞系MG-63(P53缺失型)、U2OS(p53野生型)的影响。方法:应用基因重组技术构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-As-c-myc),并在体外转染MG-63、U2OS细胞,采用蛋白免疫印迹(Westernblot)、吖啶橙染色、RT-PCR、流式细胞仪(FCM)等方法检测或观察其对细胞c-mycmRNA表达、瘤细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:成功构建Ad-As-c-myc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG-63、U2OS细胞后可明显抑制细胞的体外增殖,而且对携带野生型p53的U2OS更敏感。Ad-As-c-myc转染48h后可降低c-mycmRNA表达。吖啶橙染色及FCM检测证实,转染Ad-As-c-myc可诱导骨肉瘤细胞凋亡,细胞周期分析显示转染Ad-As-c-myc的MG-63细胞出现G2/M期阻滞,而U2OS细胞出现G1期阻滞。结论:腺病毒介导反义的c-myc能以p53依赖或非依赖性途径诱导骨肉瘤细胞凋亡,并抑制骨肉瘤细胞的增殖。     

经犬肝动/静脉输入反义c-myc重组腺病毒的安全性研究

NK细胞是天然免疫系统的主要效应细胞,具有广泛的生物学功能,位于机体抵抗肿瘤和病毒感染的第一道防线;不需要预先刺激即可识别并杀伤肿瘤和病毒感染的细胞,同时又能通过早期分泌多种细胞因子和趋化因子来调节获得性免疫应答,因此,是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁[1-2].CTL的识别与杀伤功能具有高度的特异性,即只杀伤表面带有特异性抗原和相应组织相容性复合体的靶细胞,而NK细胞的杀伤不受MHC的限制,在T细胞免疫启动之前,就与Mφ一起构成了细胞免疫系统的第一道防线.     

仙人掌提取物对荷瘤S180小鼠的抑瘤作用研究

目的 观察仙人掌提取物在不同时间内对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法 用野生仙人掌进行乙醇提取且制成受试溶液,并给予昆明小鼠灌胃，1次/日,0.2ml/次/只。给药6天后，皮下种植S180肉瘤建立动物模型，分别在给药7、14、21天后处死小鼠取瘤体，称瘤体重量，结果 仙人掌提取物在接种后给药7、14天对S180荷瘤小鼠的抑瘤率各为84.11%、76.37%,分别高于其在接种后给药21天的抑瘤率（46.37%）（P〈0.01）。结论 仙人掌提取物对肿瘤发生早期具有较好的抑瘤作用。     

分次小剂量放射免疫治疗预防和控制荷瘤小鼠肺转移的实验研究 *

目的：探讨ＨＥＲ２／ｎｅｎ的癌基因胞外区片段ＤＮＡ免疫诱导的特异性细胞免疫应答及其在体内的抗瘤效应。方法：克隆并构建人ＨＥＲ２／ｎｅｎ原癌基因及其胞外区片表达载体,分别转染ＳＰ２／０细胞以制备样伤靶细胞。将质粒ＤＮＡ免疫小鼠,观察其诱导的细胞免疫应答,同时分析免疫动物体内抗瘤效应。结果：体外获得稳定表达ＨＥＲ２／ｎｅｎ基因的ＳＰ２／０靶细胞。目的基因ＤＮＡ免疫后,免疫鼠脾细胞在体外可检测到特异性杀     

小剂量放射免疫治疗的可行性及安全性的实验研究

目的　研究多次小剂量放射免疫治疗 (RIT )对肿瘤小体积转移灶的预防和治疗作用及使用安全性。方法　采用高转移率的LA 795肺腺癌小鼠模型。比较在第 8天或第 15天施行肿瘤原发灶切除后分别给予分次小剂量RIT、化疗、单次大剂量RIT的抑瘤效果。观察正常小鼠放射免疫治疗后体重、外周血白细胞和血小板的改变及主要器官组织病理改变。结果　不同手术时间的综合治疗均显示 ,分次小剂量RIT组小鼠生存期延长 ,肺转移灶数减少 (分别有 3例和 2例无转移 ) ,疗效优于其它各组 (P<0 .0 5 )。提早手术并分次小剂量放射免疫治疗的疗效更佳 (P <0 .0 5 )。大、小 2种剂量131I C5 0对小鼠的白细胞、血小板的数量无显著影响 ;对骨髓及其它重要器官无明显的抑制和辐射损伤。结论　分次小剂量RIT优于化疗 ;提前手术加分次小剂量RIT疗效更优 ;131I C5 0小剂量放射免疫治疗是安全的。     

^131I标记凝集素PNA在荷人胃癌裸鼠体内的分布

采用Ｉｏｄｏｇｅｎ法将放射性１３１Ｉ与花生凝集素（ＰＮＡ）进行标记，经腹腔注射１３１Ｉ－ＰＮＡ标记物到荷人胃癌裸鼠体内，在不同时间测定组织放射分布和γ照相。给药后第３天，肿瘤组织放射性强度是血液的４．３０倍，是正常肝组织的３．７６倍，是肌肉组织的３．８９倍；给药后第７天，肿瘤组织浓集１３１Ｉ－ＰＮＡ是正常胃组织的４．２１倍，是小肠组织的６．０５倍，是大肠组织的５．１３倍。４８小时可见肿瘤显像，７２小时显像清晰。本实验结果表明，凝集素ＰＮＡ在胃癌定位诊断和导向治疗中有着潜在的应用价值，对于人体某些表达Ｔ抗原的腺癌都可能具有作为导向治疗载体的研究前景。     

rBCG-IL-2对小鼠肿瘤局部和全身免疫功能的影响

目的：将ｒＢＣＧ－ＩＬ－２应用于动物实验,观察其对肿瘤生长和免疫功能的影响。方法：采用基因工程技术构建ｒＢＣＧ－ＩＬ－２,用黑色素瘤细胞株Ｂ１６接种于小鼠小腿外侧皮下,再用ｒＢＣＧ－ＩＬ－２局部治疗,２周后处死小鼠,用ＥＬＩＳＡ法检测脾淋巴细胞培养上清中ＩＬ－２,ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ的含量和肉眼及镜下观察肿瘤生长和局部免疫效应细胞浸润情况。结果：ｒＢＣＧ－ＩＬ－２对肿瘤生长的抑制作用明显优于对     

The Effects of ASMase Mediated Endothelial Cell Apoptosis in Multiple Hypofractionated Irradiations in CT26 Tumor Bearing Mice

Background: To investigate the effects of ASMase mediated endothelial cell apoptosis in multiplehypofractionated irradiations in CT26 tumor bearing mice. Materials and Methods: Thirty-five CT26 tumorbearing mice were subjected to single ionizing radiation (IR) of 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 Gy. Eight hours after IR,the mice were sacrificed and tumor tissues were used for CD31 immunohistochemistry staining, TUNEL andCD31 double staining, ASMase activity assay. Then 6 and 12 Gy were chosen for multiple hypofractionated IRexperiments according to the above results. Each time after IR, 5 mice were sacrificed and assayed as above.Results: The ASMase activities were increased significantly after a single IR of 12 Gy or higher which wasaccompanied with remarkable increased endothelial cell apoptosis and decreased MVD. For 6 Gy which was nothigh enough to trigger ASMase activation, after 2 or more times of IR, the ASMase activities were significantlyincreased accompanied with remarkable increased endothelial cell apoptosis and decreased MVD. While for12 Gy, after 2 or more times of IR, the ASMase activities and endothelial cell apoptosis rates were maintainedwithout remarkable increase; however, the MVD was significantly decreased. What’s more, the cancer cellapoptosis rates were significantly increased after multiple IR for both 6 Gy and 12 Gy. Conclusions: ASMasemediated endothelial cell apoptosis may play an important role in the process of multiple hypofractionated IRfor CT26 colorectal carcinoma.     

~(131)碘全身显像、甲状腺球蛋白测定及颈部超声检查在分化型甲状腺癌~(131)碘治疗随访中的意义

目的:探讨131I-全身显像(131I-WBS)、甲状腺球蛋白(Tg)测定及颈部B超检查在分化型甲状腺癌术后131I治疗随访中的意义.方法:31例分化型甲状腺癌术后131I治疗患者,治疗前后及随访中行甲状腺吸131I率、颈部B超、131I显像及甲状腺球蛋白测定.结果:治疗剂量131I-WBS较诊断剂量131I-WBS多发现3例转移灶;64人次Tg与131I-WBS检查结果:Tg与131I-WBS均阳性者19/64,均阴性者35/64,Tg阳性而131I-WBS阴性者5/64,Tg阴性而131I-WBS阳性者5/64;B超发现颈部淋巴结增大者为80.6%.结论:131I治疗分化型甲状腺癌转移灶效果突出,131I-WBS、Tg测定与颈部B超在其随访中联合应用可以相互补充,具有重要意义.     

激光对荷瘤小鼠免疫系统影响的实验研究

 目的: 借助于低能量的He-Ne激光激活免疫机制, 抑制肿瘤的生长。方法: 采用双抗体夹心ELISA法及MTT法对荷瘤小鼠激光照射前后细胞因子（TL-1、IL-6、IL-8）的含量进行检测, 并对其抑制肿瘤作用进行研究。结果: 激光照射瘤鼠脾区具有促进IL-1、IL-8产生, 抑制IL-6及瘤细胞增殖的作用。与对照组相比有非常显著差异(P<0.01)。结论: 低能量激光照射具有调节患瘤鼠白细胞介素产生及抗肿瘤作用。     

131I标记抗肺癌单克隆抗体1 E2在荷瘤小鼠体内分布及对小鼠移植瘤作用

目的:分析碘-131(131I)标记抗肺癌单克隆抗体IE2在荷Lewis肺癌小鼠体内分布,评估瘤内注射碘-131标记抗肺癌单克隆抗体1E2(131I-1E2)对小鼠Lewis肺癌的生长抑制作用.方法:C57BL/6小鼠右后腿皮下接种Lewis肺癌细胞(LLC)l×106只,建立荷Lewis肺癌小鼠模型,免疫组化检测Lewis肺癌细胞(LLC)膜上1E2抗原-氨甲酰磷酸合成酶1(CPS1)的表达.131I标记1E2单抗(氯胺T法),检测标记率、放化纯度、放射性比活度.荷瘤小鼠尾静脉注射标记抗体131I-1E2 18.5 MBq,观察其不同时间点在小鼠体内的分布.成瘤后小鼠随机分为4组,分别瘤内注射生理盐水0.1ml(空白对照),1E2单抗3μg(阳性对照),131I-IGg 18.5 MBq(阴性对照),131I-1E2 18.5 MBq.治疗后每周2次测定肿瘤大小,21天后处死小鼠观察肿瘤组织病理学改变,检测肿瘤体积、重量,计算抑瘤率.结果:1E2抗原-CPs1主要在肿瘤细胞膜表达,131I-IE2标记率为67.73%,放化纯度为95.63%.131I-1E2主要分布在肿瘤组织,治疗后3周试验组肿瘤体积为(0.75±0.15)cm3,重量为(1.60±0.19)g,抑瘤率78.30%,与对照组间比较差异有统计学意义(P<0.01),对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).治疗组与对照组间病理学差异显著.结论:131I-1E2瘤内注射可抑制肿瘤的生长,具有潜在的临床应用价值,有可能成为新的肿瘤治疗靶向药物.     

Endostar Combined with Cisplatin Inhibits Tumor Growth and Lymphatic Metastasis of Lewis Lung Carcinoma Xenografts in Mice

Objective: To investigate the effects of endostar, a recombined humanized endostatin, plus cisplatin on thegrowth, lymphangiogenesis and lymphatic metastasis of the Lewis lung carcinoma (LLC) in mice. Methods: Atumor model were established in C57BL/6 mice by intravenious transplantation of LLC cells. Then the mice wererandomized to receive administration with NS, endostar, cisplatin, or endostar plus cisplatin. After the mice weresacrificed, tumor multiplicity, tumor size and lymph node metastasis were assessed. Then the expression of vascularendothelial growth factor-c (VEGF-C) and podoplanin were determined by immunohistochemical staining.Results: Endostar plus cisplatin significantly suppressed tumor growth. lymphatic metastasis and prolongedsurvival time of the mice without obvious toxicity. The inhibition of lymphatic metastasis was associated withdecreased microlymphatic vessel density (MLVD) and expression of VEGF-C. Conclusions: Endostar combinedwith cisplatin was more effective to suppress tumor growth and lymphatic metastasis than either agent alone.Thus this may provide a rational alternative for lung carcinoma treatment.     

鼻咽癌自发性高淋巴道转移细胞亚群裸鼠体内筛选的研究

将低分化鼻咽癌细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）克隆株Ｈ５接种裸鼠皮下，待裸鼠发生转移后，取其部分淋巴结转移灶癌组织回复培养，并将回复培养的癌细胞再次接种裸鼠背部皮下，如此连续四代用淋巴结转移灶癌细胞接种传代，观察裸鼠自发性转移情况。结果显示：当淋巴结转移灶癌细胞连续接种传至第四代时，裸鼠淋巴结的转移率为１００％，肺转移率为９％。结果表明：鼻咽癌克隆株通过四代淋巴结转移灶癌细胞的体内筛选，已成为一鼻咽癌自发性高淋巴道转移的细胞亚群，这一细胞亚群的获得为鼻咽癌淋巴道转移机理的研究提供了极好的实验材料。