人血白蛋白及D-氨基半乳糖、脂多糖联合诱导建立大鼠慢加急性肝衰竭模型

目的建立与人慢加急性肝衰竭病理过程、生化改变相似,实用性、重复性好的动物模型,为研究慢加急性肝衰竭发生的病理生理机制、药物筛选及疗效评价提供适宜的模型。方法用人血清白蛋白免疫诱导建立肝纤维化大鼠模型,至肝纤维化达S4时予以D-氨基半乳糖与脂多糖联合攻击,计算动物病死率及生存时间,动态观察给药后4、8、12h肝功能、血浆细胞因子水平及病理变化,并以TUNEL法检测原位细胞凋亡,计算凋亡指数。结果人血白蛋白攻击6周时绝大多数大鼠形成经典肝硬化或重度肝纤维化。D-氨基半乳糖与脂多糖联合同时腹腔注射后90%大鼠死于肝衰竭,平均生存时间（16.1±3.7）h,病理表现为肝硬化再生结节内发生大块或亚大块坏死,纤维间隔保留。转氨酶及胆红素的变化符合肝细胞大片坏死时的功能改变,血清TNFα明显增高并与凋亡程度相一致。IL-10随给药时间延长而增高,与临床慢加急性肝衰竭患者变化相似。结论对人血白蛋白免疫诱导型肝硬化及肝纤维化大鼠给予D-氨基半乳糖/脂多糖联合急性攻击可建立慢加急性肝衰竭模型,本实验模拟了临床经常遇到的慢性肝病基础之上发生急性肝衰竭的部分病理生理过程。TNFα介导的肝细胞凋亡可能是该慢加急性肝衰竭重要病理机制之一。     

大鼠慢加急性肝衰竭模型建立的方法探讨

目的研究大鼠慢加急性肝衰竭模型的建立方法。方法以50％四氯化碳植物油溶液腹腔注射,每3天1次,连续3个月。其中,第1个月剂量为1.5mL／kg体重,第2、3个月剂量为2mL／kg体重。3个月后将大鼠随机分为3组,分别腹腔注射2g／kg体重D-氨基半乳糖、100μg/kg体重脂多糖联合0.5g／kg体重D-氨基半乳糖和5mL／kg体重50％四氯化碳植物油溶液。通过观察大鼠饮食和体重变化,测定大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和总胆红素（TBil）水平,以及观察大鼠肝组织病理形态改变来评价成模效果。结果大鼠腹腔注射四氯化碳植物油溶液3个月过程中,出现了不同程度的慢性肝损伤。其中,1个月后出现肝纤维化,2个月后表现为轻度肝硬化,3个月后出现明显肝硬化、腹水及黄疸症状。在前3个月的基础上再给予上述3种试剂后,短时间内诱导急性肝衰竭。结论四氯化碳腹腔注射3个月后大鼠出现明显肝硬化。在此基础上分别给予D-氨基半乳糖、脂多糖联合D-氨基半乳糖、四氯化碳,均可成功诱导肝硬化基础上的急性肝衰竭。     

内毒素性肝衰竭大鼠TLR4mRNA表达、血清肿瘤坏死因子-α及肝细胞凋亡的动态变化

目的 观察急性内毒素性肝衰竭大鼠肝组织中TLR4mRNA表达变化规律及其与血清肿瘤坏死因子-α水平、肝细胞凋亡的关系。方法雌性Wistar大鼠给予D氨基半乳糖／脂多糖同时腹腔注射，计算动物死亡率及生存时间，动态观察给药后4、8、12h肝功能、血清肿瘤坏死因子-α、肝组织TLR4mRNA表达及病理变化，以TUNEL法检测原位细胞凋亡，计算凋亡指数。结果80％大鼠死于急性肝衰竭，平均生存时间15．6h±1．8h，病理表现为肝脏大块或亚大块坏死。给药后4、8、12h血清TNF—α增高含量及肝细胞凋亡均增加，血清TNF—α变化早于肝细胞凋亡指数的增加，肝组织TLR4mRNA的表达与血清TNF—α含量呈正相关（r=0．709，P=0．000）。结论 内毒素通过单核吞噬系统TLR4介导TNF—α大量产生，激活炎症级联反应并诱导肝细胞凋亡是内毒素性肝衰竭的重要病理机制之一，阻断肝内外单核吞噬系统TLR4介导的的生理学作用，可能会对内毒素性肝衰竭起到一定防治作用。     

促肝细胞生长素颗粒剂对大鼠急性肝衰竭的防护作用(摘要)

目的:探讨促肝细胞生长素颗粒剂(促肝康)对大鼠急性肝衰竭的防护作用。方法:用D-氨基半乳糖(D-GalN)和内毒素脂多糖(LPS)制备大鼠急性肝衰竭模型,检测血清ALT、AST、TBil及肿瘤坏死因子α(TNFα)、内毒索(ET)的变化,并观察光镜下肝组织的病理改变。结果:模型组ALT、AST、     

大鼠慢加急性肝衰竭模型肝脏组织病理学特征研究

目的 探讨大鼠慢性肝病基础上诱导的急性肝衰竭(慢加急性肝衰竭)模型肝脏组织病理学动态特征.方法 购入雄性SD大鼠,以50%四氯化碳植物油溶液腹腔注射,每3天1次,连续3个月(第一个月1.5 mL/kg体质量,第2、3个月 2.0 mL/kg体质量),建立大鼠肝硬化模型,对照组腹腔注射植物油溶液.肝硬化模型成立后,腹腔注射2 g/kg体质量D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-Gal),建立肝硬化基础急性肝衰竭模型,并动态进行病理染色及电镜观察.结果 大鼠慢加急性肝衰竭模型制备良好,所有大鼠出现明显的腹水及黄疸症状,出现假小叶结构及细胞凋亡等.D-Gal急性攻击后,短时间内出现组织水肿、脂肪变性明显,大片嗜酸性变性.电镜上开始胞浆疏松、亚细胞器变形、糖原减少等,逐渐出现细胞器变少、异性结构、核固缩等现象.最终整个细胞器形态结构破坏,碎屑样小体出现及细胞溶解坏死.结论 肝硬化基础上药物急性攻击时除了细胞凋亡外,中毒所引起的溶解坏死后期参与大量肝细胞死亡.     

糖皮质激素对慢加急性肝衰竭大鼠CD163及细胞因子的影响及意义

目的:研究糖皮质激素(地塞米松)对慢加急性肝衰竭大鼠模型CD163分子及促炎与抗炎因子的影响。方法:将30只无特殊病原体(SPF)级雄性Wistar大鼠分为3组,正常组与模型组各6只,治疗组18只。除正常组外,其余各组大鼠通过腹腔注射50%四氯化碳植物油溶液8周及D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS)联合冲击制备慢加急性肝功能衰竭模型。治疗组按地塞米松治疗时间不同分为不同3个时段:造模后0小时、造模后4小时、造模后8小时。各组于造模后24小时处死大鼠,用自动生化仪检测其血清ALT、AST、TBil,常规HE染色观察大鼠肝脏病理改变;实时定量PCR检测其肝组织中CD163分子水平;ELISA法检测其血清TNF-α及IL-10水平。结果:大鼠慢加急性肝衰竭模型复制成功,其肝组织纤维化基础上出现片状坏死,炎细胞浸润明显,肝脏生化指标显著升高,血清TNF-α及IL-10水平明显升高。造模后0小时地塞米松治疗后大鼠肝组织学明显好转,生化指标及血清TNF-α水平比模型组大鼠下降,而血清IL-10及肝组织中CD163分子表达水平升高,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);造模后4小时与8小时治疗组大鼠上述指标与模型组相比,差异无统计学意义。结论:慢加急性肝衰竭大鼠早期应用地塞米松可平衡促炎因子与抗炎因子,同时也促进了肝组织CD163分子的表达,对肝脏有保护作用。     

乙型肝炎肝硬化基础上慢加急性肝衰竭及失代偿终末期患者肝内细胆管反应特点对比研究

目的比较乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)及乙型肝炎肝硬化终末期患者肝组织内胆管增生的特点。方法选择20例HBV-ACLF和25例乙型肝炎肝硬化终末期患者移植前肝脏的病理标本,制成石蜡切片后进行HE染色和细胞角蛋白-7(CK-7)单克隆抗体免疫组织化学染色,显微镜下观察肝组织病理形态并作对比分析。结果 HBV-ACLF组在大块或亚大块坏死带四周的汇管区有大量CK-7阳性的细胆管增生并向坏死带中心扩延,在增生的细胆管中可见较多已分化的中间型肝细胞。乙型肝炎肝硬化终末期组的肝组织内可见少量细胆管环绕在肝硬化结节表面,在灶状炎症坏死区域可见局部轻度的细胆管增生,中间型肝细胞则罕见或少见。结论 HBV-ACLF组和乙型肝炎肝硬化终末期组患者肝组织胆管增生的表现形式截然不同,进一步阐明了二者肝组织病理学改变的差异。     

药物性急性肝衰竭动物模型的建立

目的建立用于人工肝实验研究的急性肝衰竭大动物模型。方法应用中国实验小型猪13头随机分为3组,低剂量组(n=3)给予1.0g/kg的D-氨基半乳糖;中剂量组(n=6)给予1.2g/kg的药物;大剂量组(n=4)给药剂量为1.5g/kg。观察比较每组动物的一般状况、生存时间、生理生化指标、颅内压、组织病理等方面的变化,从中得出建立急性肝衰竭动物模型的较稳定方法。结果低剂量组动物在给药后均出现一过性的肝功能损害,未出现肝昏迷表现,在给药后3～4d肝功能开始恢复,约1周后指标基本恢复正常,所有动物均存活;高剂量组的动物肝损害出现时间早,损伤剧烈,存活时间短(24.8±5.3h),均死于严重的肝衰竭。中等剂量组的动物在给药后12h各项指标开始变化明显,在给药48h时损伤达高峰,存活时间为67.9±9.4h,最终死于严重的肝衰竭。结论应用药物方法能建立急性肝衰竭动物模型,其中D-氨基半乳糖1.2g/kg的给药剂量建立的模型稳定性好,且能较好模拟临床急性肝衰竭发生、发展的病理、生理过程,可作为人工肝治疗的实验平台。     

肝衰竭的临床病理基础

肝衰竭是由严重的合成和代谢紊乱导致的一组肝细胞功能障碍性疾病,病死率高。组织病理学对肝衰竭的诊断、分型及预后判断临床意义重大。广泛的肝细胞死亡与肝细胞再生贯穿肝衰竭的临床病理过程,肝细胞的死亡方式以坏死为主,且与细胞凋亡、焦亡及自噬等细胞死亡方式并存。各型肝衰竭有其相对的病理学特征,急性肝衰竭强调的是一次性打击导致的一致性大块性或亚大块性坏死,亚急性肝衰竭系多次打击引起的新旧病变交杂的亚大块或杂以大块性肝坏死,慢加急性肝衰竭是在慢性肝病背景基础上发生的一次或多次打击导致的广泛肝细胞坏死,慢性肝衰竭组织学上呈小结节或大小结节混合性肝硬化,纤维间隔以Ⅰ型胶原为主的致密宽隔,Laennec分期多为F4c,肝实质细胞数量及功能显著下降,并呈现明显的肝内血管结构异常及血循环紊乱,肝脏易见炎症活动病变。肝细胞死亡引发大量炎细胞在肝脏内募集和Kupffer细胞过激活,刺激免疫介导的肝脏病理损伤,及炎症激活后引发的全身炎症反应综合征,是肝衰竭致多器官衰竭的主要病理生理机制。     

乙醇大剂量快速干预对急性肝衰竭小鼠预后的影响及机制

目的探讨乙醇大剂量快速干预对急性肝衰竭小鼠的保护作用及机制。方法采用D-氨基半乳糖/细菌脂多糖（GalN/LPS）诱导制作急性肝衰竭小鼠模型。制模前30 min予乙醇大剂量（4g/kg）快速（一次性腹腔注射）干预,制模后1、8 h采集血清和肝脏样本,测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、谷丙转氨酶（ALT）;肝组织切片HE染色观察肝衰竭,实时反转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）分析肝组织中5个促炎症细胞因子基因表达。结果乙醇干预后TNF-α、ALT水平明显降低,肝组织损伤程度减轻,炎症细胞因子TNF-α、MIP-2、mKC、IL-1β在肝脏的基因表达水平明显降低。结论乙醇可降低D-氨基半乳糖/细菌脂多糖诱导的急性肝衰竭小鼠的死亡率以及肝衰竭程度。其机制可能为抑制TNF-α等促炎因子水平。     

慢性乙型肝炎患者凝血功能和血小板参数检测结果分析

目的探索慢性乙型肝炎患者凝血功能和血小板参数变化的临床意义。方法收集慢性肝炎重度42例、慢加急肝衰竭24例、慢性肝衰竭35例、肝硬化32例和健康人群50例,检测血小板参数（PLT、MPV、PDW、P-LCR）和凝血功能指标（PT、APTT、TT、Fig）。结果与对照组比,各型慢性肝炎组MPV、PDW、P-LCR升高,PLT降低（P〈0.01）;慢加急肝衰竭、慢性肝衰竭和肝硬化组MPV、PDW、P-LCR高于慢性肝炎重度组,PLT低于慢性肝炎重度组（P〈0.01）;慢加急肝衰竭组PLT、MPV、PDW和慢性肝衰竭组MPV高于肝硬化组（P〈0.05,P〈0.01）;慢加急肝衰竭组与慢性肝衰竭组PLT差异有统计学意义（P〈0.01）;与对照组比较,各型慢性肝炎组PT、APTT、TT升高,Fig降低（P〈0.01）;慢加急肝衰竭组、慢性肝衰竭组、肝硬化组PT、APTT、TT高于慢性肝炎重度组（P〈0.01）,Fig低于慢性肝炎重度组（P〈0.01）;慢加急肝衰竭组和慢性肝衰竭组Fig低于肝硬化组,慢性肝衰竭组APTT高于肝硬化组（P〈0.01）;慢加急肝衰竭组与慢性肝衰竭组APTT差异有非常显著性意义（P〈0.01）。结论凝血功能和血小板参数反映了患者肝脏损害程度和出血倾向。     

恩替卡韦治疗慢加急性乙型肝炎肝衰竭近期疗效评价

目的探讨恩替卡韦治疗慢加急性乙型肝炎肝衰竭近期疗效。方法 68例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者被分成治疗组(42例)和对照组(26例),对照组采用常规内科治疗,治疗组在常规内科治疗基础上加用恩替卡韦0.5mg/d,比较两组治疗后血生化指标、凝血酶原活动度、HBV DNA水平、MELD分值变化及病死率。结果在治疗后12周,治疗组总胆红素和HBV DNA分别为89.7±42.5μmol/L和3.16±2.04log10copies/mL,显著低于对照组患者(145.6±64.2μmol/L和6.28±3.95log10copies/mL,P<0.01),凝血酶原活动度和白蛋白分别为48.5±15.6%和34.8±4.8g/L,显著高于对照组(40.5±12.4%和30.2±4.1g/L,P<0.05或P<0.01);治疗组早中期患者MELD分值和病死率分别为17.6±3.5和20.0%,显著低于对照组(22.4±4.1和52.9%,P<0.05或P<0.01),两组晚期患者MELD分值和病死率差异无统计学意义(P>0.05);治疗组有1例HBeAg阴转,1例HBeAg血清学转换,对照组HBVM无变化。结论恩替卡韦能有效抑制HBV复制,改善慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者肝功能,降低早中期患者MELD分值和病死率。尽早抗病毒治疗可提高慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者的生存率。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝组织核因子-κB基因表达的影响

目的观察中药抗纤软肝颗粒对四氯化碳加乙醇诱导肝纤维化大鼠的肝组织核因子-κB（NF-κB）p65 mRNA表达的影响。方法 SD雄性大鼠40只,随机分为模型对照组（M）15只,抗纤软肝颗粒组（K）15只,正常对照组（N）10只。M组、K组分别以40%四氯化碳橄榄油液腹腔注射,每周2次,并以5%乙醇为唯一饮水。造模同时,K组即予抗纤软肝颗粒20 g.kg-1.d-1（中等剂量）灌胃,每天一次。7周末,各组取肝右叶分别作肝组织病理观察及检测肝组织NF-κB p65 mRNA表达。结果抗纤软肝颗粒组肝细胞变性坏死及肝纤维化水平较模型对照组明显减轻（P〈0.05）,肝组织NF-κB p65 mRNA表达较模型对照组明显减弱（P〈0.05）。结论抗纤软肝颗粒能下调肝纤维化大鼠肝组织NF-κB p65 mRNA表达,抑制肝纤维化的形成和发展,其机制可能是通过调控NF-κB p65 mRNA转录过程实现的。     

大鼠慢加急性肝功能衰竭模型的制备

目的：探索建立大鼠慢加急性肝功能衰竭模型的方法。方法SD 大鼠40只,随机分为正常对照组、模型1组、模型2组和模型3组,每组各10只。模型1组：每周二、五腹膜内注射40％ CCl41 mL/kg;持续4周;模型2组：每周二、五腹膜内注射40％ CCl41 mL/kg,每周三腹膜内注射猪血清0．5 mL,持续4周;模型3组：每周二、五腹膜内注射40％CCl40．7 mL/kg,每周三腹膜内注射猪血清0．3 mL,持续4周,以5％乙醇代水,自由饮用;正常对照组：不注射任何药物。实验第29天,各模型组大鼠均腹膜内注射脂多糖（LPS）30μg/kg＋犇-氨基半乳糖（犇-Gal ）0．3 g/kg。以全自动生化分析仪检测大鼠血清 ALT、AST 和 TBil 水平。肝组织切片 HE 染色后光学显微镜镜下观察病理学变化。结果造模4周后各模型组大鼠血清 ALT、AST 和 TBil 水平均明显高于正常对照组（均P＜0．01）,以模型3组最高、模型2组其次,3组间差异均有统计学意义（均P＜0．01）。注射 LPS＋犇-Gal 后24 h,模型3组中有3只动物死亡,3个模型组大鼠的 ALT、AST和 TBil 水平均较注射前明显升高（均P＜0．01）,3组间差异均有统计学意义（均P＜0．01）。注射 LPS＋犇-Gal 后72 h,各模型组大鼠 ALT、AST 和 TBil 水平均较前明显降低（均P＜0．01）,但仍明显高于正常对照组（均P＜0．01）,3组间差异仍均有统计学意义（均P＜0．01）。注射 LPS＋犇-Gal 后24 h,肝窦明显扩张、充血,大量炎性细胞浸润于汇管区,小叶内见肝细胞坏死。结论采用40％ CCl4＋猪血清诱导慢性肝损伤后,再以 LPS 30μg/kg＋犇-Gal 0．3 g/kg 攻击,可成功制备大鼠慢加急性肝功能衰竭模型。     

D-氨基半乳糖/脂多糖诱导急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的电镜观察

目的通过透射电镜观察急性肝衰竭大鼠肝脏超微结构,以了解肝细胞凋亡的形态学变化。方法给予雌性Wistar大鼠D-氨基半乳糖/脂多糖联合腹腔注射,计算其死亡率及生存时间,动态观察给药后4、8、12小时肝功能和组织病理学变化,并以TUNEL法检测和电镜观察原位细胞凋亡。结果实验组80%大鼠死于急性肝衰竭,平均生存时间为15.6±1.8小时。给药后4小时电镜观察,发现肝细胞线粒体肿胀、内质网扩张,胞浆包含体形成,部分细胞核呈早期凋亡表现,细胞内凋亡小体形成;8小时时,肝细胞凋亡明显增多并呈不同阶段表现,凋亡肝细胞内线粒体病变程度不一;TUNEL检测给药后8小时肝细胞,凋亡指数达高峰,与电镜观察结果一致。结论肝细胞凋亡为D-氨基半乳糖/脂多糖致急性肝衰竭大鼠肝细胞的主要病理形态学表现,这可能为该类型肝衰竭的主要病理学变化基础。     

TNF-α在对乙酰氨基酚所致大鼠药物性肝损伤中的作用

目的探讨TNF-α在对乙酰氨基酚所致大鼠急性药物性肝损伤中的作用。方法 40只SD大鼠随机分成空白对照组、益赛普对照组、对乙酰氨基酚组、对乙酰氨基酚+益赛普组,每组10只。单次给药,24 h后采集血液测定生化指标,之后处死大鼠,取肝脏组织做病理检查以及应用ELISA试剂盒检测血清TNF-α。结果对乙酰氨基酚组肝损伤明显,阻断TNF-α后肝损伤减轻。对乙酰氨基酚组肝功生化值及TNF-α水平较空白对照组升高,差异有统计学意义(P0.05),对乙酰氨基酚+益赛普组肝功生化值及TNF-α水平较对乙酰氨基酚组下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TNF-α的表达在对乙酰氨基酚所致大鼠急性肝损伤肝组织中明显升高,阻断TNF-α后肝损伤减轻,TNF-α可能参与对乙酰氨基酚所致肝损伤。     

肝泰对高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝保护作用的研究

目的探讨肝泰对实验性脂肪肝的保护作用及其可能机制。方法SD雄性大鼠53只，随机分为4组，即模型组（n=15）、肝泰组（n=15）、易善复对照组（n=15）、正常对照组（n=8）。利用高脂饮食建立大鼠脂肪肝模型，肝泰组给予肝泰（755mg/kg）干预，易善复对照组给予易善复（550mg／kg）干预，10周后处死所有大鼠。采用光镜及电镜观察肝脏组织学改变，检测大鼠血清总胆同醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）及免疫组化法检测肿瘤坏死因子（TNF-α）在肝组织中表达。结果病理所见：模型组出现重度水变性和脂肪变性及点、灶状坏死；肝泰组未见重度水变性和脂肪变性，可见极少数点状坏死。肝泰组肝组织TNF-α与模型组肝组织TNF-α比较，肝泰组TNF-α蛋白含量显著减少（P〈0．05）。肝泰组血浆TC和肝匀浆GSH与模型组比较，肝泰组血浆TC较模型组显著减低，肝泰组GSH比模型组显著升高，均有显著性差异（P〈0．05）。结论肝泰对实验大鼠脂肪肝有保护作用。