FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制作用的研究

目的：探讨FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法：脂质体介导FasL基因转染TJ905胶质瘤细胞系，原位杂交，FasL免疫组化鉴定转染成功,应用MTT法、Ki-67免疫组化检测TJ905细胞的增殖变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：FasL基因转染成功后，肿瘤细胞内FasL表达增加，细胞增殖率降低，而凋亡细胞数增多。结论；FasL基因诱导的细胞凋亡可能成为胶质瘤治疗的新途径之一。     

FasL基因治疗移植于裸鼠的人脑胶质母细胞瘤的实验研究

目的 :探讨FasL基因在体内诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法 :在裸鼠皮下种植Fas表达阳性的人脑胶质母细胞瘤细胞系TJ90 5 ,成瘤后 ,利用脂质体介导FasL基因瘤内治疗 ,在 3 9d观察期间 ,用千分尺测量肿瘤生长 ,最终取出肿瘤 ,用原位杂交 ,免疫组化鉴定FasL基因和蛋白的表达 ,应用TUNEL法检测细胞凋亡 ,Ki 67免疫组化检测细胞增殖。结果 :FasL基因瘤内注射观察 3 9d后 ,治疗组瘤体积明显小于对照组 (P <0 0 1) ,肿瘤组织细胞内FasL基因表达增加 ,凋亡细胞数增多 ,细胞增殖率降低。结论 :FasL基因对Fas表达阳性胶质瘤有治疗作用。     

bFGF反义寡核苷酸诱导胶质瘤细胞的凋亡

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸对胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:将硫代磷酸修饰的bFGF反义寡核苷酸转染人脑胶质瘤细胞系TJ905,采用原位细胞死亡检测方法和电子显微镜,观察胶质瘤细胞凋亡的形态学变化,并用免疫组化法检测了增殖细胞核抗原(PCNA)的变化。结果:胶质瘤细胞呈现凋亡的形态改变,PCNA的表达明显降低。结论:bFGF反义寡核苷酸可诱导胶质瘤细胞的凋亡,抑制胶质瘤细胞的增殖。bFGF基因可作为反义治疗的目的基因。     

FasL基因转染NIH3T3细胞诱导BT325胶质瘤细胞凋亡作用的研究

目的探讨FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡的作用。方法以脂质体将FasL基因转染NIH3T3纤维母细胞,采用免疫组化染色法和RT-PCR法检测NIH3T3/FasL细胞中目的基因的表达和转录,Hochest33342荧光染色法和TUNEL法检测共培养条件下观察其对胶质瘤细胞BT325诱导凋亡的作用。结果NIH3T3/FasL细胞能有效表达FasL,与NIH3T3细胞(对照组)相比,有显著诱导BT325细胞凋亡的作用(P﹤0.05)。结论转染了FasL基因的NIH3T3细胞可诱导胶质瘤细胞凋亡。     

p53联合伽玛刀治疗抑制人脑胶质瘤细胞生长的体外研究

目的研究p53基因联合伽玛刀治疗对TJ905胶质瘤细胞系的生长抑制作用。方法野生型p53重组腺病毒载体(Ad-p53)按MOI=100感染人胶质瘤细胞系TJ905,Western蛋白印迹鉴定。感染24小时后,对转染组及对照组细胞分别进行伽玛刀治疗(边缘剂量15Gy),并进行治疗前后生物学特性检测,包括细胞增殖(MTT法、PCNA免疫组化染色)与凋亡(TUNEL法)检测。结果Ad-p53联合伽玛刀治疗TJ905细胞系,较单一治疗具有更高的肿瘤增殖抑制率(P<0.001)和肿瘤细胞凋亡诱导率(P<0.001)。结论p53基因联合伽玛刀治疗TJ905胶质瘤细胞系,能更有效的抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡,其效果显著较其中单一治疗为优。     

脂质体转染人IFN-β基因诱导胶质瘤细胞SHG44凋亡的实验研究

目的探讨人β干扰素(IFN-β)与胶质瘤细胞凋亡的关系及意义.方法利用脂质体转染方法将IFN-β真核表达载体pSV2IFN-β导入SHG44胶质瘤细胞.细胞免疫荧光和免疫组化检测IFN-β基因的稳定转染及表达,利用流式细胞仪、透射电镜观察细胞凋亡情况.结果IFN-β基因成功转染SHG44胶质瘤细胞并得以表达.转染细胞的凋亡细胞数与未转染细胞相比有显著性差异.结论IFN-β能够诱导人SHG44胶质瘤细胞凋亡.     

苯甲酰胺阻止N-甲基-N′-亚硝基氮亚硝基胍引起的神经胶质瘤细胞株凋亡

研究 DNA损伤所造成的神经胶质瘤细胞 TJ90 5凋亡过程中聚 ADP核糖基聚合酶 [poly( ADP-ribose) polymerase,PARP]的作用。用 N-甲基 - N′-亚硝基氮亚硝基胍 ( MNNG)和 PARP的 NAD位点特异性抑制剂苯甲酰胺 ( benzamide,BA) ,分别或同时处理神经胶质瘤细胞 TJ90 5。结果发现在 MNNG的作用下 ,细胞的增殖活性受到明显的抑制 ,细胞凋亡显著 ;单独用 BA处理细胞时 ,细胞的增殖活性及细胞的凋亡与对照组细胞相似。 BA和 MNNG共同处理下的 TJ90 5细胞的增殖活性和凋亡指数与对照组细胞及 BA组细胞相比均无明显差异。说明 PARP在诱导神经胶质瘤细胞凋亡方面起重要作用 ,该作用可被 PARP的特异性抑制剂所抑制。     

p16基因抑制脑胶质瘤细胞恶性增殖并诱导细胞凋亡

目的：探索p16基因在脑胶质瘤发生过程中的作用及其与脑胶质瘤细胞凋亡的关系。方法：采用脂质体,磷酸钙＋DMSO休克转染的方法,分别将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251,SWO,观察p16基因短暂转染与长期稳定转染对胶质瘤细胞的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化,Northern杂交检测p16基因表达,对转染后细胞生长的抑制,细胞周期,凋亡及裸鼠致瘤能力的变化进行分析,结果：外源p16基因的高水平表达显著抑制了胶质瘤U251,SWO细胞的生长,克隆形成率减少,肿瘤细胞发生了G1期阻滞,p16基因短暂转染可诱导胶质瘤细胞凋亡,而长期稳定转染无明显的凋亡诱导作用。结论：外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖并诱导细胞凋亡,肿瘤细胞的异质性特点与p16基因转染后的“自然选择”作用可能是p16基因长期稳定转染无明显凋亡诱导作用的主要机制。     

EGFR反义RNA抑制人脑恶性胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡的研究

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)反义RNA对抑制胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法:将互补于EGFR 3′端部分序列的反义cDNA转染胶质瘤细胞,检测其生长率、增殖活性、EGFR mRNA及其蛋白表达和细胞凋亡。结果:胶质瘤细胞转染EGFR反义RNA后生长率及增殖活性下降,EGFRmRNA及蛋白表达减低,出现大量细胞凋亡。结论:EGFR有可能成为胶质瘤基因治疗的候选基因。     

外源性IFN—β基因稳定转染对胶质瘤细胞凋亡的影响

目的研究外源性干扰素—β(IFN-β)基因对胶质瘤细胞系SHG-44的诱导凋亡作用，探索胶质瘤基因治疗的新途径。方法利用脂质体转染方法将IFN-β真核表达载体pSV2IFNβ导入人SHG44胶质瘤细胞。应用流式细胞仪和免疫荧光法检测IFN-β基因的稳定转染及表达，利用Hoechst染色、透射电镜观察细胞凋亡情况。结果IFN-β基因成功转染SHG44胶质瘤细胞并得以表达，并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡。结论IFN-β能够诱导入SHG44胶质瘤细胞凋亡，本实验为IFN-β基因治疗人脑胶质瘤的应用奠定了初步基础。     

Interleukin-2 expression and glioma cell proliferation following Vaceinia vector gene transfection in vivo

BACKGROUND: The effectiveness of gene therapy is closely related to the efficiency of vector transfection and expression.OBJECTIVE: This study was designed to transfect a human brain glioma cell line with recombinant Vaccinia virus expressing the interleukin-2 (rVV-IL-2) gene, and to observe IL-2 expression and glioma cell proliferation potential after transfection. DESIGN: Experimental observation. SETTING: Department of Neurosurgery, Shenyang Military Area Command of Chinese PLA. MATERIALS: The rVV-IL-2 vectors were obtained through homologous recombination and screening in the Second Military Medical University of Chinese PLA. The human brain glioma cell line and IL-2-dependent cells were produced by the Second Military Medical University of Chinese PLA. Human IL-2 was produced by Genzyme Corporation. MAIN OUTCOME MEASURES: IL-2 expression at different time points after transfection of human brain glioma cells with varying MOI of Vaccinia viral vectors; in vitro proliferation capacity of human brain glioma cells among the 4 groups. RESULTS: IL-2 expression was detectable 4 hours after Vaccinia viral vector transfection and reached 300 kU/L by 8 hours. There was no significant difference in the proliferating rate of human brain glioma cells among the 4 groups (P > 0.05).CONCLUSION: Vaccinia viral vectors can transfect human brain glioma cells in vitro and express high levels of IL-2. Vaccinia virus and high IL-2 expression do not influence the proliferation rate of human brain glioma cells in vitro.     

连接蛋白基因对人脑胶质瘤细胞生长抑制作用的实验研究

目的:探讨连接蛋白(Ｃｘ)基因对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法:以脂质体介导将Ｃｘ４３ｃＤＮＡ导入Ｃｘ４３表达缺失的ＴＪ９０５人胶质母细胞瘤细胞;Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、原位杂交及免疫组化检测Ｃｘ４３ｍＲＮＡ及蛋白表达;ＭＴＴ法和ＡｇＮＯＲ染色检测细胞增殖;ＴＵＮＥＬ法测细胞凋亡。结果:转染后ＴＪ９０５细胞有Ｃｘ４３ｍＲＮＡ及蛋白表达,高表达的克隆增殖明显下降。细胞凋亡不增加。结论:Ｃｘ４３基因可能成为恶性胶质瘤基因治疗的优选靶之一。     

垂体瘤细胞增殖与凋亡关系的研究

目的 :探讨垂体瘤细胞增殖与凋亡的关系。方法 :应用免疫组化法和TUNEL法对 2 0例复发、2 6例未复发的人脑垂体瘤增殖细胞核抗原 (PCNA)与凋亡进行检测。结果 :复发组垂体瘤增殖细胞指数 (PCNAL1)及凋亡细胞数量较未复发组明显增高 ,两组有显著性差异 (P <0 0 5)。结论 :肿瘤细胞的增殖细胞核抗原表达指数和凋亡检测是判断垂体瘤预后的指标之一 ,有临床指导意义。     

人脑胶质瘤中Fas及FasL的表达

目的　探讨Fas及FasL基因在人脑胶质瘤中的表达 ,与肿瘤的病理类型及恶性程度的关系。方法　应用Fas及FasL多抗和Ki 6 7单抗免疫组化染色检测 6例正常脑组织及 6 4例人脑胶质瘤。结果　Fas和FasL在胶质瘤中的总表达率分别为 83%和 75 % ,并随WHO分级升高而升高 ,与Ki 6 7LI呈正相关。Fas、FasL共同阳性率 (共表达率 )为 71% ,与肿瘤级别呈正相关。结论　脑胶质瘤中Fas及FasL表达与肿瘤病理类型及恶性程度密切相关     

miR-137调控人脑胶质瘤细胞增殖侵袭能力的体内外研究

目的探讨miR-137调控人脑胶质瘤细胞的增殖侵袭性生长能力及其机制。方法采用实时PCR分析miR-137在不同品系胶质瘤细胞及不同级别胶质瘤样本中的表达;脂质体介导miR-137模拟物转染胶质瘤细胞,实时PCR检测转染后miR-137的表达;应用MTT法、流式细胞术评价细胞生长和增殖的生物学特征变化;划痕实验、transwell细胞体外迁移实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力;动物实验评价体内条件下肿瘤生长能力变化;Western blot、免疫组织化学染色检测肿瘤细胞Ki-67、MMP9表达水平。结果实时PCR分析显示：miR-137在胶质瘤中低表达。miR-137模拟物转染LN229和U87细胞后,实时PCR显示：miR-137表达上调;MTT法及流式细胞术显示细胞生长受抑,出现G0/G1期阻滞;划痕实验及transwell实验证实：细胞迁移侵袭能力下降;进一步Western blot、免疫组织化学染色显示：增殖侵袭相关蛋白Ki-67、MMP9表达降低;动物实验反映：肿瘤细胞生长受抑制。结论 miR-137高表达可抑制胶质瘤细胞生长和侵袭能力,提示miR-137可作为基因治疗脑胶质瘤的候选靶点。     

PCNA反义脱氧寡核苷酸体外抑制BT325细胞增殖的实验研究

目的 观察增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义脱氧寡核苷酸对人多形性胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。方法 采用人工合成的PCNA反义和正义脱氧寡核苷酸经阳离子脂质体包裹后转染人多形性胶质母细胞瘤细胞BT325。用MTT比色法检测转染后瘤细胞的生长抑制率;~3H-TdR法检测细胞DNA合成速率;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR检测PCNA mRNA表达;免疫组化方法检测PCNA蛋白表达水平。结果 PCNA反义寡核苷酸可明显抑制BT325细胞的生长;明显减慢其DNA合成速率,阻滞细胞由GO/G1期→S期,PCNA mRNA及其蛋白质表达也同时受到抑制。抑制效应在转染后12h即出现,24h达到高峰,48h后逐渐减弱。抑制作用随反义寡核苷酸浓度的升高而增强,0.8μM PCNA反义寡核苷酸的细胞生长抑制率达84.6％。同样浓度的正义寡核苷酸和脂质体则无明显的细胞生长抑制作用。结论 PCNA反义寡核苷酸在体外能明显抑制人脑多形性胶质母细胞瘤细胞BT325生长、DNA合成、mRNA和PCNA蛋白表达。PCNA基因可望成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

Up-regulation of a growth arrest and DNA damage protein (GADD34) in the ischaemic human brain: implications for protein synthesis regulation and DNA repair

GADD34 is a growth arrest and DNA damage inducible gene up-regulated in response to DNA damage, cell cycle arrest and apoptosis. It is thought that GADD34 may play a crucial role in cell survival in ischaemia. GADD34 expression was assessed immunohistochemically in post-mortem human hippocampal tissue obtained from patients surviving for defined periods (0-24 h; 24 h-7 days) after a cardiac arrest and in age-matched control subjects. In control brain, cytoplasm staining in GADD34 immunopositive cells was faint but present throughout the hippocampus and cortex. There was minimal change in GADD34 expression in the group surviving 0-24 h after cardiac arrest. However GADD34 immunostaining was markedly increased in selectively vulnerable regions in the 24 h-7 day survival group. Increased GADD34 staining was present in ischaemic neurones and in some morphologically normal neurones after cardiac arrest. Extensive ischaemic damage was found to correlate with elevated GADD34 immunostaining in the CA1 layer of the hippocampus (**P < 0.0016). In addition, GADD34 was found to colocalize with proliferating cell nuclear antigen in some neurones. The up-regulation of GADD34 in response to global ischaemia in the human brain plus its influence on protein synthesis and DNA repair suggests that this protein may have the potential to influence cell survival.