酶催化合成CCK-4三肽片段

目的探讨酶法合成胃泌激素CCK-4 C-末端片段三肽衍生物Phac-Met-Asp(OMe)-Phe-NH2。方法以Phac-Met- OCam为起始原料,采用三种蛋白酶,即α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶(α-chymotrypsin, papain,thermolysin),经过三步酶促反应得到目标三肽化合物;研究了酶催化条件下Met-Asp肽键的形成以及天门冬氨酸双酯中α-酯的酶催化条件下的选择性水解;对酶以及反应介质的选择等酶促合成条件进行了研究。结果三步酶促反应均可得到较合适的收率(63%~92%),产物经FAB-MS、FD-MS质谱确认。结论以α-糜蛋白酶为酶催化剂,在含有1.5% 0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液的乙酸乙酯介质中,Phac-Met-OCam和H-Asp(OMe)2缩合可得到收率大于63%的缩合产物;木瓜蛋白酶催化下可选择性水解Phac-Met-Asp(OMe)2中的α-酯而保留β-酯;嗜热菌蛋白酶能有效地催化Phac-Met-Asp(OMe)-OH与H-Phe-NH2生成肽键。     

Synthesis of Cholecystokinin Peptide CCK—4 Exclusively by Enzymatic Methods

Enzymatic techniques possess numerous ad-vantages over chemical techniques for the forma-tion of the peptide bond.Besides high regio- andstereo- selectivity under mild reaction conditionsthey are not accompanied by racemisation,reducethe need for protecting groups and typically giveenantiomerically pure products. In addition,theuse of organic solvents and dangerous reagents canbe avoided. This is importantwith respectto tech-nical applications.The aim of this investigation was to demon-strate …     

台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As203细胞毒性作用中的意义

目的筛选三氧化二砷（As203）对HL一60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法,并对其结果进行分析。方法采用台盼蓝拒染法、M1Tr法、CCK～8法测定不同浓度的As203,体外作用HL一60细胞株的细胞存活率．采用单因素方差分析其与剂量一时间依赖反应的关系。结果4．0、8．0μmol／L作用48、72h及8．0μmol／L作用24h被染细胞小于5％,其余均未观察到蓝染细胞。MTY法检测在1．0～8．0μmol／LAs20,剂量范围内培养24、48、72h（P〈0．05）,各组均能够抑制HL-60细胞活性。CCK-8法检测在0．5～8．0μmol／LAs203剂量范嗣内培养24、48、72h（P〈0．05）,各组均能够抑制HL-60细胞活性。HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低,As20,的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应。结论在研究As203的细胞毒性时,用CCK-8法优于M11’法,均比台盼蓝法更为灵敏。     

CCK-8s对急性酒精依赖大鼠的记忆与自主行为影响的研究

目的：探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8s）对急性酒精依赖大鼠记忆与自主行为的影响。方法：采用水迷宫对大鼠在产生酒精依赖前后的记忆行为进行测试。结果：CCK-8s可以减少急性酒精依赖大鼠的自主行为次数,缩短水迷宫爬台测试时间。结论：CCK-8s能够减少急性酒精依赖大鼠的自主行为次数,并对其记忆改善有作用。     

酶重氮法测定血清δ胆红素

提要黄疸血清中的部分胆红素和白蛋白共价结合形成δ胆红素(B_6)。为了测定血清中这个色素成分,我们建立了一种酶重氮法。该法测定B_6具有快速、简便、灵敏度高、准确度及重复性好等优点。对平均浓度为0.89mg/dl,2.98mg/dl和7.80mg/dl的Bδ作重复性试验,批内变异系数3.4％,2,8％和3.0％,日间变异系数为5.3％,3.7％和4.1％。在两个患者血清中(Bδ分别为0.83mg/dl和2.40mg/dl)加入已知量的Bδ平均回收率为95％和94％。与简易树脂吸附法相比较,相关系数r=0.9988,直线回归方程Y(酶重氮法)=1.02x(简易树脂吸附法)—0.02。     

柴芩承气汤对急性胰腺炎小鼠血清胆囊收缩素-8水平及胰腺腺泡钙超载的影响

目的 探讨柴芩承气汤(CQCQD)对急性胰腺炎(AP)小鼠血清胆囊收缩素(CCK)-8及胰腺腺泡细胞内钙离子浓度的影响.方法 将24只小鼠随机分成对照组、AP组、CQCQD组及siRNA组（n=6）.后3组采用腹腔内注射8％左旋精氨酸溶液(4 g/kg)制作AP小鼠模型.对照组注射相同剂量的生理盐水.造模成功后,CQC...     

TNF-α and IL-8 of the patients with allergic asthma

Summary The levels of serum TNF-α and IL-8 in the patients with allergic asthma during acute attack period and remission period, and the effects of glucocorticoid (GC) on them were investigated. By using ELISA, the levels of TNF-α and IL-8 were detected in the healthy volunteers (group C,n=40), the patients with allergic asthma (n=40) during acute attack period (group A) and remission period (group B) and those taking GC for a week (n=28). The results were compared among them. It was found that the levels of TNF-α and IL-8 in group A were higher than in group B and group C. In the patients subject to GC therapy, the levels of TNF-α and IL-8 were decreased as compared with those in group A. In group B, the level of TNF-α was higher than in group C, but there was no significant difference in the level of IL-8 between group B and group C. It was concluded that the inflammatory cytokines, TNF-α and IL-8, played important roles in the bronchus allergic inflammation. GC could reduce the levels of serum TNF-α and IL-8 to exert the anti-inflammatory effects. LIU Guanghui, male, born in 1952, Associate Professor     

全酶法测定血浆1,5-脱水葡萄糖醇在全自动生化分析仪上的应用

目的:利用全自动生化分析仪Hitachi7170A检测糖尿病血糖控制指标1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-Anhydrogluci-tol,简称1,5-AG)。方法:利用全酶法对112例正常成人血浆中1,5-AG水平进行测定。结果:1,5-AG平均水平是(135.80±15.30)μmol/L。结论:1,5-AG可利用全自动生化分析仪进行监测。     

Kinetic method for enzymatic analysis by predicting background with uricase reaction as model

Objective：To investigate the reliability for kinetic assay of substance with background predicted by the integrated method using uricase reaction as model. Methods： Absorbance before uricase action （Δ0） was estimated by extrapolation with given lag time of steady-state reaction. With Km fixed at 12.5μmol/L, background absorbance （Δb） was predicted by nonlinearly fitting integrated Michaelis-Menten equation to Candida utilis uricase reaction curve. Uric acid in reaction solution was determined by the difference （ΔA） between Δ0 and Δb. Results .Ab usually showed deviation 〈3% from direct assay with residual substrate done fifth of initial substrate for analysis. ΔA showed CV 〈5% with resistance to common interferences except xanthine, and it linearly responded to uric acid with slope consistent to the absorptivity of uric acid. The lower limit was 2.0 μmol/L and upper limit reached 30 μmol/L in reaction solution with data monitored within 8 min reaction at 0. 015 U/ml uricase. Preliminary application to serum and urine gave better precision than the direct equilibrium method without the removal of proteins before analysis. Conclusion .This kinetic method with background predicted by the integrated method was reliable for enzymatic analysis, and it showed resistance to common interferences and enhanced efficiency at much lower cost.     

胆囊收缩素对抗维生素B_(12)的镇痛作用

本文报道了胆囊收缩素(CCK)对抗维生素B_(12)(VitB_(12))的镇痛作用。结果表明,采用小剂量(ng级)侧脑室注射CCK-8,可明显对抗VitB_(12)的镇痛作用,而且表现有剂量效应关系。从而证明小剂量CCK-8在痛觉调制中,有较强的抗阿片的镇痛作用;从另一角度证明,VitB_(12)的镇痛作用是通过与脑内阿片受体结合而实现的。     

仿生酶解法提取蜈蚣的工艺研究

目的 研究仿生酶解法提取蜈蚣的工艺条件.方法 以水解度为指标,单因素考察了仿生酶解法提取蜈蚣的工艺条件;以APTT法、纤维蛋白原平板法为考察指标,对仿生酶解法提取蜈蚣的工艺进行验证.结果 仿生酶解法凝血时间长,抗血栓效果明显.酶解的条件为:蜈蚣先用37℃人工胃液加入4.0%(酶底比)胃蛋白酶酶解4 h,残渣转入37 ℃人工肠液加入5%(酶底比)胰蛋白酶酶解4h.结论 仿生酶解法适于提取蜈蚣抗凝血和溶栓的有效部分.     

酶法测定血清钾离子试剂改进及评估

目的建立一种酶法测定血清钾离子液体试剂的方法,并评估该液体试剂的重复性（批内精密度）、抗干扰能力、线性、热稳定性,与离子选择电极法fISE）的相关性。方法对原有酶法测定血清钾离子方法进行了改进,并参考临床和实验室标准协会（CLSI）相关文件对试剂进行评估。结果批内精密度0.846％～1．338％;线性范围0.～10mnl01／L（γ=0.999）;干扰物浓度总胆红素（TBil）600mg／L,直接胆红素（DBil）600.mg／L,维生素C（Vc）60.0.mg／L,乳糜15mg／L,血红蛋白10g／L时对试剂干扰不明显（≤±10％）,抗钠离子干扰为249;该液体试剂与ISE法的回归方程Y=1．0345X＋0.0753,相关系数1为0.984（P〈0．001）,显著相关;试剂热稳定性在37℃下放置7d后初始吸光度值降低15．43％。结论试剂改良后线性、批内精密度、抗干扰能力、热稳定性、与ISE显著相关。     

酶解法分离犬肺静脉肌袖和心房肌细胞

目的:探索简单实用重复性好的犬肺静脉肌袖和心房肌细胞的分离方法。方法:采用两步酶解法,分离得到犬肺静脉肌袖细胞和心房肌细胞,用形态学和台盼蓝染色鉴别分离的心肌细胞,使用倒置显微镜观察和摄像记录。结果:分离心肌细胞的存活率为30%～60%,形态呈杆状、折光性好、横纹清晰,膜状态良好。结论:使用两步酶解法能获得存活率高,数量较多的心肌细胞,是一种简单实用的分离心肌细胞的方法。     

PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞生物学效应的影响

目的 探讨PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞株CNE-1生物学行为的影响.方法 采用脂质体介导质粒pcDNA3.1-PCDH8(实验组)与质粒pcDNA3.1(对照组)转染至鼻咽癌细胞株CNE-1,RT-PCR、Western blot检测转染后CNE-1细胞的PCDH8 mRNA及蛋白表达;通过CCK-8细胞生长曲线、流式细胞技术、Transwell侵袭实验及CCK-8细胞药物敏感实验,进一步对转染PCDH8基因质粒的细胞株CNE-1的增殖能力、生长周期、细胞侵袭能力及对化疗药物的敏感性进行了分析,并与转染对照质粒的细胞株进行比较.结果 RT-PCR、Western blot检测结果表明转染质粒pcDNA3.1-PCDH8的实验组细胞株中PCDH8 mRNA及蛋白成功表达并明显高于转染质粒pcDNA3.1的对照组细胞株.CCK-8细胞生长曲线结果表明实验组细胞株的生长速度明显低于对照组.流式细胞仪检测结果表明实验组细胞株G0/G1期较对照组增加,S期细胞较对照组减少;Transwell侵袭实验结果表明实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组;CCK-8细胞药物敏感性实验结果表明PCDH8基因的高表达能显著提高鼻咽癌细胞株CNE-1对顺铂化疗药物的敏感性.结论 PCDH8基因的表达能降低鼻咽癌细胞的增殖、侵袭能力,延缓细胞分裂周期,提高对顺铂化疗药物的敏感性.     

酶法测定糖化血红蛋白的方法评价及标本前处理对结果的影响

目的：探讨酶法测定糖化血红蛋白（HbA1c）方法学性能及其影响因素。方法采用酶法测定 HbA1c,评价该方法学的精密度、抗干扰性、回收率、准确性以及标本前处理（抗凝、保存、离心）对结果的影响,分析与高效液相法（HPLC）相关性及偏倚程度。结果酶法批内高、中、低值变异系数（CV）为1．04％、1．26％、1．37％,批间为1．83％、2．24％、2．64％,与 HPLC 法呈线性相关（r ＝0．996,P ＜0．01）;HbA1c 靶值浓度为5．20％、6．40％、7．60％、8．80％、10．00％、11．20％,其回收率分别为100．15％、98．91％、98．84％、98．20％、103．62％、99．82％;当葡萄糖小于15．50 mmol／L、尿酸小于516．00μmol／L、胆红素小于217．00μmol／L、三酰甘油小于10．20 mmol／L、尿素小于11．50 mmol／L、清蛋白小于50 g／L、球蛋白小于50 g／L 时,对结果无明显干扰。肝素钠、乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）、枸橼酸钠抗凝标本 HbA1c 结果在－20～20℃保存3 d 无明显改变（P ＞0．05）;标本500、1000 r／min（R＝15 cm）离心不同时间（1、2、5、10 min）以及2000 r／min 离心1 min,其检测结果与3000 r／min 离心5 min 比较,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论酶法测定 HbA1c 其精密度、抗干扰性、准确性、线性范围均符合临床要求,与常规方法相比其相关性良好且偏差较小,可完全满足临床对 HbA1c 检测需求。     

大黄素对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨大黄素对人胰腺癌细胞株Panc-1增殖和凋亡的影响。方法 人胰腺癌细胞株Panc-1经不同浓度大黄素（10、20、40、80、160 μmol/L）分别作用 24、48、72 h后,应用CCK-8法检测细胞增殖,光学显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 大黄素对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性,20、40、80 μmol/L大黄素作用Panc-1细胞24 h后凋亡率分别为7.1%、15.2%、21.4%。结论 大黄素可显著抑制人胰腺癌Panc-1细胞生长,大黄素对人胰腺癌Panc-1细胞株的增殖抑制作用可能以诱导细胞凋亡方式为主。     

不同程度的脂血和黄疸对酶法测定血清钾干扰的分析

目的:探讨不同程度的脂血及黄疸对酶法测定血清钾结果的影响.方法:对不同程度的脂血及黄疸标本的血清钾分别采用酶法及离子选择电极(ISE)法进行检测.结果:当血清甘油三酯(TG)水平＞10.0 mmol/L时,有部分标本不能用酶法测定,而当血清TG水平＞15.0 mmol/L时,大部分标本不能用酶法测定.酶法与ISE法的相关性良好(r=0.926 6),但测定结果有明显差异(P＜0.01).而黄疸对酶法测定血清钾无明显干扰,两法的相关性良好(r=0.990 3),测定结果也有明显差异(P＜0.01).结论:黄疽及中度脂血(TG＜10.0 mmol/L)对酶法测定血清钾无明显干扰,但酶法不适用于严重脂血标本(TG＞10.0 mmol/L).     

酶联合消化法分离犬心房肌成纤维细胞及其生物学特性的研究

目的探讨适用于犬心房肌成纤维细胞(CAF)体外分离培养及鉴定的技术方法。方法无菌手术取犬左心耳,应用木瓜蛋白酶、Ⅰ型胶原酶联合消化法分离心房肌成纤维细胞并进行体外培养。在倒置显微镜下观察原代心房肌成纤维细胞生长特点;苏木精-伊红(HE)染色观察细胞形态,并对细胞进行纤维连接蛋白、波形蛋白、盘状结构域受体2蛋白免疫荧光染色;通过绘制生长曲线法、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2-四唑单钠盐(WST-8)法观察细胞的增殖情况;流式细胞仪分析比较各代细胞DNA周期特点;观察不同培养体系对第3代(P3)CAF生长的影响。结果酶联合消化法分离培养的细胞1 d后,可见细胞贴壁呈长椭圆形生长,3 d后生长迅速呈长梭形,7 d后细胞排列成单层,连接紧密;HE染色显示细胞长梭形呈螺旋状排列;免疫荧光检测纤连蛋白、波形蛋白、盘状结构域受体2表达阳性;P1、P2、P3细胞生长曲线近似"S"形,WST-8法显示P1、P2、P3细胞生长于第3天至第5天光密度值变化较明显,增殖迅速;P1、P2、P3G0/G1的百分率分别为(56.83±1.72)%、(68.10±1.33)%、(68.23±1.33)%,各代之间G0/G1的百分率比较差异无统计学意义(P>0.05);P1、P2、P3(S+G2)/M的百分率分别为(43.17±1.72)%、(31.90±1.33)%、(31.77±1.33)%,各代之间(S+G2)/M的百分率比较差异无统计学意义(P>0.05);杜尔伯克改良伊格尔/F12培养基培养的P3细胞增殖力明显高于RPMI-1640培养基培养的细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论酶联合消化法可以高效快速分离和稳定培养CAF,为研究犬心房纤维化提供了充足的种子细胞。     

全蝎的酶解工艺研究

目的以全蝎为研究对象,优选胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解全蝎的工艺条件,用抗肿瘤药效验证提取工艺的可行性.方法以丙氨酸含量为指标,以酶解温度、时间和酶底比为考察因素,用正交试验设计法筛选酶解的最佳工艺条件,并用凯氏定氮法测定此条件下的蛋白质的水解率.结果确定酶解工艺为:全蝎先用40℃人工胃液加入2.5%(酶底比)胃蛋白酶酶解4 h,残渣转入53℃人工肠液加入5.0%胰蛋白酶酶解4 h.用凯氏定氮法测得此条件下的蛋白质的水解率可达80.7%.结论经抗肿瘤药效验证,全蝎酶解提取物对肝癌H22有明显的抑癌活性,酶提物的抑瘤作用强于全蝎原粉.     

八年制医学生考核方法改革的调查分析

将撰写小专论引入八年制医学生药理学课程的考核方法的改革中,并自行设计编写《八年制学生药理学教学情况反馈问卷调查表》,对于小专论学习（包括能力及学习兴趣调查、合作调查、题目调查）和考试与成绩评定等相关问题进行了调查。较为全面客观地讨论、分析了调查中发现的问题,并提出切实可行的改进措施,以更好地适应构建科学、规范的考核体系的需要。