粘多糖贮积症Ⅰ型的分子遗传学研究进展

粘多糖贮积症Ⅰ型（MPS－Ⅰ）是由于溶酶体内α-L艾杜糖苷酶（IDUA）缺乏而引起的一种,常染色体隐性遗传病。IDUA基因定位于4p16.3,长约19kb,含14个外显子,迄今发现的IDUA基因突变达51种。突变在不同种族,不同民族的患中发生率不同。严重型突变基因的纯 合子引起MPS－ⅠH,轻型突变基因的纯合子引起MPS－ⅠS,严重型突变基因与轻型突变基因的杂合子引起MPS－ⅠH／S。     

11例中国人粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者的基因突变检测

目的 对经酶学确诊的粘多糖贮积症Ⅰ型患者进行α-L-艾杜糖苷酸酶(α-L-iduronidase,IDUA)基因突变检测,了解中国北方地区粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者基因突变特点.方法 应用PCR扩增技术及直接测序技术对11例中国北方地区经酶学确诊的粘多糖贮积症Ⅰ型患者IDUA基因14个外显子及相邻区域进行突变筛查,同时进行亲本来源分析.结果 11例患者中检测出7种基因突变:A79V、R89Q、R89w、E178K、G197S、L346R和W626X.7种突变均为已报道过子,11例中6例患者为纯合改变,1例为无义突变杂合子;发现了9种已知多态性位点.结论 中国北方地区粘多糖贮积症Ⅰ型轻型患者IDUA基因的突变特点可能不同于其他国家和地区.

Abstract：

Objective Mucopolysaccharidosis type Ⅰ (MPS Ⅰ ) is an autosomal recessive diseaseresulting from the deficiency in the lysosomal enzyme α-L-iduronidase (IDUA). The present study was conducted to identify IDUA gene mutations in attenuated (MPS Ⅰ H/S and MPS Ⅰ S) patients with MPS Ⅰin northern China. Methods Fourteen exons with adjacent intronic sequences of the IDUA gene in 11 MPS Ⅰ patients were amplified by polymerase chain reaction (PCR), and the PCR products were sequenced directly and origin analysis was conducted. Results Seven mutations were detected in the 11 MPS Ⅰ patients, i.e., c. 236 C＞T(p. A79V), c. 266 G＞A(p. R89Q), c. 265 C＞T(p. R89W), c. 532G＞A(p.E178K), c. 589G＞A(p. G197S), c. 1037T＞G(p. L346R), and c. 1877 G＞A(p. W626X). All of them were known mutations. Six patients were homozygotes and 1 was heterozygote with nonsense mutation. In addition, 9 reported single nucleotide polymorphism (SNP) were detected, i. e., p. A8, p. A20, p. H33Q,p. R105Q, p. A314, p. A361T, p. T388, p. T410 and p. V454I. Conclusion The mutation spectrum of the IDUA gene in attenuated MPS Ⅰ Chinese patients may be different from that in patients from other countries.     

芳基硫酸酯酶A活性降低对神经精神异常的影响——大量病例的调查

芳基硫酸酯酶A(ASA)是一种溶酶体酶,能分解硫酸酯产生脑苷酯和无机硫。至少有五个不同的等位基因决定了ASA的产生和活性,正常人为正常基因的纯合子,另有三种不同的突变基因纯合子(ASA-/AS     

新疆回族中苯丙酮尿症基因的突变鉴定

目的探讨新疆回族中苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变特点。方法采用PCR产物直接测序的方法,测定7例回族苯丙酮尿症(PKU)患者PAH基因全部外显子及其启动子区域序列。结果在14个回族PAH等位基因中,共检出突变基因10个,包括错义突变5种、无义突变1种、剪切位点突变1种、缺失突变1种,其中的R243Q和R176X为种纯合子突变,这些突变分布于六个外显子,均系在回族中首次发现。检出的突变基因中包含2种新的突变基因类型,即R155H和A300S基因突变,通过查阅国内外文献、查询PAH专业网站及www.pahdb.mcgill.ca国际PAH数据库,证实是国内未见报道的新突变。结论新疆回族PKU患者中PAH基因突变具有明显的异质性特点,我们的研究丰富了PAH基因突变研究的内容,是我国PKU研究中民族资料的重要补充。     

我国粘多糖贮积症IH型患者α-L艾杜糖苷酶基因的一种同义突变

目的：探讨我国粘多糖贮积症IH型（MPS-IH）患者α-L艾杜糖苷酶（IDUA）基因的突变类型。方法：采用荧光分光光度计检测临床疑似MPS患者及其家属白细胞中IDUA活性；对IDUA活性为零的患者及其家属扩增其IDUA基因外显子VII并对其进行单链构象多态（SSCP）分析；根据SSCP结果进行基因序列分析。结果：酶学检查发现10例MPS-IH型患者，其白细胞中IDUA活性均为0；SSCP分析发现在这10个MPS-IH家系中有7个家系出现同一种泳动变位；基因序列分析结果显示这7个MPS-IH家系均出现一种同义突变，该突变在正常人群中未检测到。结论：我国MPS-IH型患者IDUA基因外显子VII出现一种高发的同义突变。     

广西京族硫嘌呤甲基转移酶突变基因研究

目的 对广西京族硫嘌呤甲基转移酶(thiopurine S—methyltransferase，TPMT)突变基因进行研究。方法 用聚合酶链反应—单链构象多态性技术对京族标本TPMT基因第5、7、10外显子进行检测。结果 在103名京族中发现了两例TPMT*3C(A719G)杂合子，没有发现TPMT*2(G238C)、TPMT*3A(A719G／G460A)、TPMT*3B(G460A)和其他有害突变基因；发现了27例沉默突变TPMT*1S(T474C)，其中纯合子5例、杂合子22例。结论 建立的聚合酶链反应—单链构象多态性技术灵敏可靠，可以用予TPMT突变基因多态性的检测；TPMT*3C突变基因在广西京族中的发生频率较低(1.0％)，它可能是京族唯一的TPMT基因有害突变类型。     

广东地区汉族人群的hGSTP1Ile105Val基因多态性的研究

目的:对广东地区汉族人群的hGSTP1Ile105Val基因多态性进行研究。方法:应用PCR-RFLP(基因体外扩增限制性片段长度多态性分析)的技术方法进行研究。结果:该人群中GSTP1基因在105位点的野生型纯合子(AA)基因型的分布频率为57.4%,突变型纯合子(GG)基因型为6.7%,杂合子(AG)基因型为35.9%。结论:GSTP1纯合突变基因型在广东地区汉族人群中的分布频率为6.7%。     

Mutation analysis of 11 Chinese patients with attenuated mucopolysaccharidosis type Ⅰ

Objective Mucopolysaccharidosis type Ⅰ (MPS Ⅰ ) is an autosomal recessive diseaseresulting from the deficiency in the lysosomal enzyme α-L-iduronidase (IDUA). The present study was conducted to identify IDUA gene mutations in attenuated (MPS Ⅰ H/S and MPS Ⅰ S) patients with MPS Ⅰin northern China. Methods Fourteen exons with adjacent intronic sequences of the IDUA gene in 11 MPS Ⅰ patients were amplified by polymerase chain reaction (PCR), and the PCR products were sequenced directly and origin analysis was conducted. Results Seven mutations were detected in the 11 MPS Ⅰ patients, i.e., c. 236 C＞T(p. A79V), c. 266 G＞A(p. R89Q), c. 265 C＞T(p. R89W), c. 532G＞A(p.E178K), c. 589G＞A(p. G197S), c. 1037T＞G(p. L346R), and c. 1877 G＞A(p. W626X). All of them were known mutations. Six patients were homozygotes and 1 was heterozygote with nonsense mutation. In addition, 9 reported single nucleotide polymorphism (SNP) were detected, i. e., p. A8, p. A20, p. H33Q,p. R105Q, p. A314, p. A361T, p. T388, p. T410 and p. V454I. Conclusion The mutation spectrum of the IDUA gene in attenuated MPS Ⅰ Chinese patients may be different from that in patients from other countries.     

Mutation analysis of 11 Chinese patients with attenuated mucopolysaccharidosis type Ⅰ

Objective Mucopolysaccharidosis type Ⅰ (MPS Ⅰ ) is an autosomal recessive diseaseresulting from the deficiency in the lysosomal enzyme α-L-iduronidase (IDUA). The present study was conducted to identify IDUA gene mutations in attenuated (MPS Ⅰ H/S and MPS Ⅰ S) patients with MPS Ⅰin northern China. Methods Fourteen exons with adjacent intronic sequences of the IDUA gene in 11 MPS Ⅰ patients were amplified by polymerase chain reaction (PCR), and the PCR products were sequenced directly and origin analysis was conducted. Results Seven mutations were detected in the 11 MPS Ⅰ patients, i.e., c. 236 C＞T(p. A79V), c. 266 G＞A(p. R89Q), c. 265 C＞T(p. R89W), c. 532G＞A(p.E178K), c. 589G＞A(p. G197S), c. 1037T＞G(p. L346R), and c. 1877 G＞A(p. W626X). All of them were known mutations. Six patients were homozygotes and 1 was heterozygote with nonsense mutation. In addition, 9 reported single nucleotide polymorphism (SNP) were detected, i. e., p. A8, p. A20, p. H33Q,p. R105Q, p. A314, p. A361T, p. T388, p. T410 and p. V454I. Conclusion The mutation spectrum of the IDUA gene in attenuated MPS Ⅰ Chinese patients may be different from that in patients from other countries.     

异基因造血干细胞移植治疗两例粘多糖累积症患儿

目的 探索造血干细胞移植治疗粘多糖累积症(mucopolysaccharidosis,MPS)的效果.方法 两例MPS患儿分别为MPS-Ⅰ H型和MPS-Ⅵ型,移植时年龄为23个月和18个月,均采用白舒菲20 ms/kg+环磷酰胺200 ms/ks进行预处理,干细胞分别来自9/10相合的无关供体和全相合同胞供体.结果 移植后11 d中性粒细胞达到0.5×109/L,14 d短串联重复序列.聚合酶链反应证实100%血细胞来自供体,移植后3个月疾病相关的酶活性分别达到70 mnol/h·mg和66 nmol/h·mg,移植后2年酶活性仍然维持在50.9nmoL/h·mg和44.5 nmol/h·mg.MPS-Ⅵ型患儿移植过程相当顺利,目前已随访28个月,健康状况良好.尽管MPS-Ⅰ H患儿移植中曾两次因肺炎合并急性心功能衰竭,但经紧急气管插管、机械通气等综合治疗后好转,随访至今也已25个月,目前心肺功能明显改善,肝脏缩小至正常大小,角膜混浊明显减轻,手指僵硬也有所改善.结论 异基因造血干细胞移植可用于治疗MPS-Ⅰ、MPS-Ⅵ;尽早移植可望减少移植相关并发症;移植所产生的临床效果需要更长时间的随访.     

H型高血压患者血管紧张素转化酶基因多态性对其活性及血脂水平影响的探究

目的 探究H型高血压患者和普通高血压患者中不同基因型的血管紧张素转化酶的活性差异以及其对血脂水平的影响.方法 实验采用了聚合酶链式反应的方法,分别鉴定68例H型高血压患者和64例普通型高血压患者血管紧张素转化酶的基因型,并且对不同基因型的血管紧张素转化酶的活性和对应的血脂水平进行了检测.结果 利用SPSS19.0对数据进行分析,H型高血压和普通高血压患者的不同基因型的血管紧张素转化酶活性的差异均具有统计学意义(P＜0.01),但血管紧张素水平的差异无统计学意义.血管紧张素转化酶基因多态性对血脂水平影响的研究表明,H型高血压组中缺失型纯合子(DD型)与插入型杂合子(ID型)和插入型纯合子(Ⅱ型)相比较,DD型血脂水平明显偏高,其中胆固醇(TC)(P＜0.01),高密度脂蛋白(HDLD),低密度脂蛋白(LDLC)和载脂B的水平的差异均具有统计学意义(P＜0.05).普通高血压组仅HDLC,LDLC和载脂B的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 在H型高血压和普通型高血压患者中,血管紧张素转化酶的基因多态性与血管紧张素转化酶的活性及血脂含量有关.H型高血压患者的DD型的血管紧张素转化酶的活性最高,并且血脂水平偏高,其中胆固醇含量增高最为明显,更加容易患高血脂症.     

与Huntington舞蹈症连锁的D4S111位点揭示出α-L-艾杜糖醛酸酶基因

Huntington 舞蹈病(HD)是由常染色体显性缺陷引起的一种迟发性疾病。这种病由于纹状体神经元缺失而显示进行性舞蹈、精神错乱和智力低下,一般在中年出现症状,然后在10～20年内死亡,无良好的治疗手段。最近,Scott 等提供证据表明,编码α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)的基因定位在4p16.3,与 HD 基因紧密连锁。而先前人们是把 IDUA 定位在22号染色体。本实验为了进一步验证 Scott 等的正确性,采用了人     

不同基因型地中海贫血患儿全血元素的分析

目的了解不同基因型地中海贫血儿童全血中Cu、Zn、Ca、Mg、Fe等5种元素含量,为今后对各种地中海贫血儿童采取合理治疗提供科学依据。方法对选取的12例静止型、58例标准型α地贫,7例H病,32例β地贫杂合子,6例β地贫双重杂合子(或纯合子)以及70例健康儿童全血的微量元素进行检测和统计学分析。结果所有分组全血Cu含量差异没有统计学意义。各贫血组的Fe均低于健康对照组(P0.05)。β地贫双重杂合子(或纯合子)组的全血Zn含量低于对照组(P0.05),Ca明显高于健康对照组(P0.01)。标准型α地贫组、β地贫杂合子组和β地贫双重杂合子(或纯合子)的全血Mg低于健康对照组(P0.05)。结论地中海贫血儿童的元素平衡失调,提示地中海贫血儿童应尽早采取营养监测与干预措施。     

白细胞介素1α基因单核苷酸多态性与甲型H1N1流感易感性的关系

目的 探讨白细胞介素1d(IL-1α)基因单核苷酸多态性(SNP)与甲型H1N1流感易感性的关系.方法 从IL-1α基因启动子区域中选取4个SNP位点rs1800587、rs2856836、rs2856838、rs3783525,针对以上位点建立基于飞行时间质谱分析技术(TOF-MS)鉴定SNP的方法,对167例H1N1流感患者(H1N1组)和192例健康对照人群(对照组)进行检测.确定各SNP位点的等位基因和基因分型;对比两组等位基因和各基因型的频率.结果 rs1800587、rs2856836、rs2856838位点具有T和C两种等位基因,包括TT、TC、CC 3种基因型.rs3783525具有A和T两种等位基因,包括AA、AT和TT3种基因型.H1N1组和对照组rs 1800587位点的等位基因频率差异有统计学意义(x2=12.69,P=0.000,OR=2.424,95％CI=1.472 ～ 3.993),rs2856836,rs2856838,rs3783525等位基因频率在H1N1组和对照组中差异则无统计学意义.H1N1组rs1800587位点CC纯合子频率低于对照组[72.5％(121/167)比87.0％(167/192),P＜0.05],杂合子(TC)频率高于对照组[25.1％(42/167)比12.5％(24/192),P＜0.05],而两组TT纯合子频率差异则不具有统计学意义.H1N1组rs2856836位点杂合子(TC)频率高于对照组[25.7％(43/167)比17.2％(33/192),P＜0.05],TT基因型与CC基因型频率在两组间差异均没有统计学意义.rs2856838位点对照组TT纯合子频率低于H1N1组[4.2％(8/192)比10.8％(18/167),P＜0.05],其余2种基因型TC与CC在两组间差异没有统计学意义.H1N1组rs3783525位点TTT纯合子频率高于对照组[21.0％ (35/167)比13.0％(25/192),P＜0.05],两组间的另两种基因型TC与CC差异也没有统计学意义.结论 IL-1α基因多态性位点rs1800587、rs2856836、rs2856838、rs3783525与甲型H1N1流感易感性相关.     

特发性肺纤维化患者血硫化氢水平下降

目的探讨特发性肺纤维化(IPF)患者疾病过程中内源性硫化氢(H2S)的变化和意义,及其与IPF疾病严重程度的关系。方法将研究对象分为IPF组和对照组,检测各组血浆H2S含量。对IPF组行动脉血氧分压、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肺功能及高分辨CT(HRCT)检查;测定IPF组患者在症状急性加重和缓解时血浆H2S含量。结果(1)IPF组血浆H2S含量明显低于对照组(P<0.01);(2)IPF组血浆H2S含量在急性加重时明显高于症状缓解时(P<0.01);(3)随影像学病变进展,IPF组患者血浆H2S含量无明显下降。结论内源性H2S可能参与了IPF的疾病过程,可能与疾病的严重程度相关。     

新疆维吾尔族家系中PAH基因R111X纯合子突变研究

目的鉴定维吾尔族苯丙酮尿症（PKU）家系的苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因突变,并讨论突变基因的分布和频率。方法采用单链构象多态性（SSCP）分析技术和PCR产物直接测序方法确定PAH基因突变类型。结果对患者及其父母PAH基因第3、5、6、7、11、12外显子分别进行了SSCP实验筛检,在外显子3中,发现患者SSCP电泳行为既与正常对照不同,又与父母双亲相异。测序结果显示,患者的PAHcDNA第331位发生了C→T突变,是R111X突变型纯合子,其父母也分别在同一位点发生了相同突变,但为R111X突变型杂合子。结论国内在少数民族中报道R111X纯合子突变尚属首次。根据新疆维吾尔族PKU患者与汉族患者的比例,以及形成纯合子的几率,估计R111X突变基因在维吾尔族群体中会有较高的发生频率。综合分析国内外R111X突变基因的分布及频次位置,本文认为R111X突变基因频率的高处在我国北方地区。并推测,以我国天津为中心的北方地区是R111X突变基因的建立者（founder）。     

5-羟色胺转运蛋白基因多态性与脑卒中后抑郁的关联

目的:探讨5-羟色胺转运体连锁启动区(5-hydroxytryptamine transporter linked promoter region,5-HTTLPR)基因多态性与脑卒中后抑郁发病、自杀行为是否相关。方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增技术测定中国汉族脑卒中抑郁(poststroke depression,PSD)患者90例(PSD组)和无抑郁脑卒中患者90例(非PSD组)的5-HTTLPR基因型及等位基因,分别验证各种基因型与脑卒中抑郁症发病及自杀行为的相关性。结果:PSD组SS基因型及S等位基因频率(64.4%,75.6%)明显高于非PSD组(38.9%,58.3%),S等位基因携带者PSD患病率为LL型纯合子的1.29倍(OR=1.29,P<0.001,95%CI:1.11～1.50);对PSD组自杀行为分层比较,有自杀行为组SS基因型及S等位基因频率(76.8%,75.6%)明显高于无自杀行为组(44.1%,58.3%),PSD患者中,S等位基因携带者自杀行为发生概率为LL纯合子的1.3倍(OR=1.3,P<0.01,95%CI:1.08～1.6)。结论:5-HTTLPR基因可能是PSD的易感基因,S等位基因可能与PSD及自杀行为相关。     

血小板活化因子乙酰水解酶基因994(G→T)突变与脑梗塞的关联性

目的 研究血浆型血小板活化因子乙酰水解酶（platelet-activating factor-acetylhydrdase，PAF-AH）基因994（G→T）点突变与脑梗塞常见类型的相关性。方法 应用聚合酶链反应技术，检测108例脑梗塞患者（分为动脉粥样硬化性脑梗塞组、腔隙性脑梗塞组和心源性脑梗塞组）和215名正常对照中，血浆型PAF-AH基因该突变的基因型频率和等位基因频率。结果 对照组994（G→T）突变的基因型频率为20．46％（杂合子：18．60％；纯合子：1．86％）。全部脑梗塞患者人群中，突变基因型频率为35．19％（杂合子：32．41％；纯合子：2．78％），明显高于对照组（P〈0．01）；其中动脉粥样硬化性脑梗塞组该突变基因型频率为38．10％（杂合子：34．92％；纯合子：3．18％），与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。腔隙性脑梗塞组和心源性脑梗塞组的该突变基因型频率分别为t32．35％（杂合子：29．41％；纯合子：2．94％）和27．27％（杂合子：27．27％；纯合子：0）；与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 血浆型PAF-AH基因994（G→T）T点突变与中国人脑梗塞的发生显著相关，其相关性主要来源于动脉粥样硬化性脑梗塞。而与腔隙性脑梗塞可能无明显关联。     

肝红细胞生成性血卟啉症和迟发型皮肤血卟啉症中281位(Gly→Glu)突变的流行率

人类遗传性尿卟啉原(uroporphyr-inogen,URO)脱羧酶缺陷是引起家族性(Ⅱ型)迟发型皮肤血卟啉症(PCT)和肝红细胞生成性血卟啉症(HEP)的原因。家族性PCT(一种常染色体显性疾病)中的无交叉反应免疫物质(CRIM)被认为是突变基因的产物。这种血卟啉症的分     

高效液相色谱法在异常血红蛋白病筛查中的应用

目的 应用高效液相色谱法(HPLC)检测人群中异常血红蛋白病发生情况.方法 收集2009年10月至2011年9月本院住院及门诊患者6297例,采用HPLC检测各种异常血红蛋白,缺口-PCR(gap-PCR)检测缺失型α地中海贫血基因型,反向斑点杂交法(RDB)分析非缺失型α地中海贫血和β地中海贫血基因型.结果 应用HPLC检测6297份标本,共发现68例11种异常血红蛋白,分别为血红蛋白(Hb)E 37例(其中2例为Hb E合并β-地中海贫血)、Hb Q 10例(其中Hb Q-Hb H 2例)、Hb S 3例(1例Hb S纯合子和2例Hb S杂合子)、Hb D-Iran 4例、Hb Manitoba 4例、Hb J-Bangkok 5例、Hb C 1例、Hb Lepore 1例、Hb J-Mexico 1例、Hb Osu-Christiansborg 1例和Hb K(o)ln 1例.异常血红蛋白病的发病率为1.08％(68/6297).结论 HPLC能快速、准确地鉴定各种异常血红蛋白,是一种筛查异常血红蛋白病的理想工具.