不同浓度的续断总皂甙对成骨细胞增殖、分化和细胞周期的影响

目的通过续断总皂甙对成骨细胞的体外培养,探寻不同浓度的续断总皂甙对成骨细胞增殖、分化和细胞周期的影响及可能存在的量效关系。方法 (1)分离、培养小鼠的原代成骨细胞。(2)将续断总皂甙配制成不同浓度的培养基(10-6g/ml、10-5 g/ml和10-4g/ml 3组),并分别培养成骨细胞,采用四氮唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖能力;细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测细胞的分化;流式细胞分析细胞周期。结果与空白对照组比较,续断总皂甙能够促进成骨细胞的增殖,增加碱性磷酸酶的表达及显著提高细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数,其中10-5g/ml浓度组比10-6g/ml和10-4g/ml浓度组更加显著。结论在一定浓度范围内续断总皂甙可促进成骨细胞增殖、分化和提高细胞增殖指数,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一。     

续断苷对人成骨细胞增殖和分化作用研究

目的:观察续断苷对体外培养人成骨细胞的增殖和分化的影响。方法:取人髂骨松质骨分离培养成骨细胞,传代后用含续断苷的培养液培养,用MTT方测定成骨细胞的增殖,并测定碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:浓度为1,10,100μg/ml的续断苷培养液促进成骨细胞的增殖;浓度为10,100μg/ml的续断苷培养液促进成骨细胞碱性磷酸酶分泌。结论:续断苷在一定浓度范围内促进人成骨细胞的分化与增殖。     

新伤续断汤对成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白的影响

【目的】探讨新伤续断汤(由骨碎补、续断、地鳖虫等组成)对大鼠成骨细胞增殖以及骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响。【方法】采用血清药理学方法制备新伤续断汤含药血清,与α-MEM培养基配成细胞培养液。按酶序列消化法从SD大鼠乳鼠颅骨获取、培养成骨细胞,以碱性磷酸酯酶染色和钙结节染色鉴定细胞。取第3~4代细胞用细胞增殖—毒性(CCK-8)法检测经体积分数为5%、10%、20%新伤续断汤含药血清处理24、48、72 h后的细胞增殖情况。用含体积分数10%的新伤续断汤、续断、骨碎补、空白对照含药血清分别培养细胞,采用微量酶标法检测碱性磷酸酶的活性,酶联免疫吸附法检测BMP-2的表达。【结果】新伤续断汤对成骨细胞的影响呈时间、浓度上的依赖性,其中浓度为10%时效果明显。体积分数10%的新伤续断汤、骨碎补、续断含药血清的成骨细胞碱性磷酸酶活性较空白对照组显著升高,差异有统计学意义(P0.01);7 d时,新伤续断汤组、骨碎补组与空白对照组比较,BMP-2表达显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】新伤续断汤能促进大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性及BMP-2的表达,其中单味药骨碎补可能发挥重要作用,其促进骨折愈合机制可能与提高细胞的成骨功能有关。     

川续断总皂苷对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的研究川续断总皂苷对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法不同浓度的川续断总皂苷作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测成骨细胞增殖功能,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA。结果 20、50μg/mL川续断总皂苷可显著促进成骨细胞的增殖(P0.05或P0.01);20、50μg/mL川续断总皂苷可显著促进成骨细胞的分化(P0.05或P0.01);10、20、50μg/mL川续断总皂苷可显著上调成骨细胞中OPG/RANKL mRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P0.01)。结论川续断总皂苷对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。     

庆大霉素对兔成骨细胞增殖及超微结构的影响

目的：观察庆大霉素对兔成骨细胞增殖及超微结构的影响．方法：从出生2wk的新西兰兔颅盖骨获取成骨细胞,在含不同浓度庆大霉素的DMEM培养液中培养24h或72h,采用四唑盐比色法观察庆大霉素对成骨细胞增殖的影响,并对在含不同浓度庆大霉素的DMEM培养液中培养96h的成骨细胞进行透射电镜观察．结果：高浓度庆大霉素组（800mg／L,1600mg／L）光吸收值明显低于对照组（P＜0．01）,高浓度庆大霉素组超微结构表现为内质网扩张,胞浆内见大量的吞噬溶酶体．结论：高浓度庆大霉素明显抑制成骨细胞增殖,呈现一定的毒性作用．     

骨碎补提取液对成骨细胞增殖的影响

目的:观察骨碎补提取液对体外培养成骨细胞增殖的影响。方法:实验药物与体外培养成骨细胞共同培养3、5、7、10d后,分别采用免疫组化染色和放免法测定I型胶原蛋白和碱性磷酸酶的含量,检测成骨细胞的增殖情况。结果:骨碎补提取液对成骨细胞的增殖有促进作用,且和药物剂量有密切关系。1000mg/L的骨碎补提取液对成骨细胞有明显的促进作用,在1000~1500mg/L的浓度范围内,其促进作用随浓度升高而增加,并于1500~1600mg/L时达到最大效应。结论:骨碎补提取液对成骨细胞的增值分化有促进作用。     

检测药物细胞毒性及增殖状况的比色定量方法

在医学领域中常常要观察各种因素引起的细胞毒和细胞生长抑制效应。目前使用的方法有台盼蓝排斥法和同位素参入法。这些方法均存在操作繁琐、周期长、误差较大等缺点。因此需要一个能处理大量样品的迅速简便的定量检测方法。噻唑蓝能在短时间内进入细胞,并在活细胞的线粒体中被脱氢酶还原成紫色甲?(formazan)。Mosman和Michael等相继报道了噻唑蓝比色法在生物学中的应用。本文将噻唑蓝比色法用于定量检测抗癌药对人癌细胞株的细胞毒性及细胞生长抑制的影响。并与台盼蓝和~3H-leu释放法进行了比较。     

人参总皂甙对白血病细胞KG1α增殖、凋亡的影响

目的探讨人参总皂甙(total saponins of panax ginseng,TSPG)对人急性髓系白血病细胞株KG1α增殖的影响。方法取对数生长期的KG1α细胞,调整密度为5×108/L,空白对照组予以常规培养;人参总皂甙TSPG组分别加入0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 g/L TSPG。采用MTT比色法测定细胞存活率,瑞氏染色法以及光电镜观察细胞形态学改变。流式细胞仪测定细胞周期分布的变化以及细胞的凋亡率。免疫细胞化学的方法检测细胞中β-catenin、NF-κB p65蛋白表达的变化。RT-PCR半定量检测细胞中β-catenin mRNA和NF-κB p65 mRNA水平的变化。结果人参总皂甙TSPG在体外对KG1α增殖具有明显抑制作用。在0.1~0.8 g/L TSPG浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,在浓度0.4 g/L处达到细胞的半数抑制率,且在48 h抑制率达到高峰。0.4 g/L TSPG作用48 h后,可见细胞分散生长,数量明显减少;细胞明显分化或凋亡,产生核分裂象,胞质中产生凋亡小体以及空泡;与对照组相比,加药组KG1α细胞周期分布无明显变化(P>0.05);与对照组相比...     

静磁场对成骨细胞增殖活性和细胞表面超微结构的影响

目的观察不同强度和作用时间的静磁场对体外培养成骨细胞的增殖活性及其表面超微结构的影响,探索静磁场加载对成骨细胞增殖等功能活性影响的机制。方法将体外培养成骨细胞分别于静磁场加载装置0、8、50、160 mT磁场强度下给予24、48、72 h的静磁场加载。应用MTT法检测成骨细胞的增殖活性;应用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞形态及其表面超微结构的变化。结果与不给予静磁场加载对照组比较,培养成骨细胞分别于8、50、160 mT静磁场加载24、48、72 h后,其增殖活性出现不同程度的增加;其细胞形态、数量及分布上无差异;而随加载时间延长,细胞表面变得凹凸不平,微绒毛增多增粗增大,可见融合成囊泡及大囊泡,且8 mT和50 mT静磁场的作用明显。结论 8、50、160 mT静磁场随加载时间延长,体外培养成骨细胞增殖活性出现不同程度增加,细胞表面超微结构出现不同程度改建。     

氟化钠对成骨细胞增殖及分化影响的实验研究

观察不同剂量氟化钠(NaF)对大鼠成骨细胞增殖分化的影响。成骨细胞经酶消化法从新生24hSprague-Dawlev(SD)种乳鼠头盖骨分离得到。在10-7mol／L～5×10-4mol／LNaF中培养。用MTT测定细胞增殖,并经生化法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)及放免法测定培养液中骨钙素含量反映细胞分化。结果表明NaF对成骨细胞增殖率的影响呈双向调节,表现为小剂量NaF(10-mol／L,10-6mol／L,10-5mol／L)刺激细胞增殖,其提高增殖率分别达到11．3％、10．9％、10.6％,(P<0.05),大剂量反之,与对照组相比,10-4mol／L及5×10-4mol／LNaF降低细胞增殖率为9．6％与9．7％。细胞分化对NaF的反应表现为多样性。ALP活性的改变基本与细胞增殖率的变化相同,即小剂量刺激,大剂量抑制。然而骨钙素分泌的改变则呈单向作用,各浓度NaF均刺激细胞骨钙素分泌,其中5×10-4mo1／L组骨钙素水平最高达67.14％(P<o.05)。NaF对大鼠颅骨成骨细胞增殖的影响呈双向调节,但对细胞分化的作用成多样性。     

素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 研究中成药素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响.方法 应用不同浓度素尔松处理大鼠成骨细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,并计数绘制生长曲线;免疫组织化学染色碱性磷酸酶活性变化;茜素红S染色观察成骨细胞钙化灶的形成和变化:透射电镜观察细胞内部结构的变化.结果 镜下观察成骨细胞数量与对照组相比,随素尔松浓度加大而增多,碱性磷酸酶表达增强,钙化灶增多.电镜下观察细胞器未见明显变化.结论 素尔松能促进成骨细胞的增殖、分化;增强成骨细胞的合成代谢,促进成骨活动增加,钙盐的分泌增加.     

孕激素对成骨细胞增殖和凋亡的影响

绝经后骨质疏松症（osteoporosis，OP）采用孕激素替代治疗可促进骨形成，减少骨丢失，其机制尚未完全阐明。研究发现，成骨细胞的增殖和凋亡在骨重建过程中起重要作用。我们观察了孕酮（progesterone，P）对人成骨细胞（human osteoblast cells，hOB）增殖和凋亡的影响，旨在探讨孕激素治疗绝经后OP的作用机制。     

rhBMP-4对大鼠成骨细胞增殖及分化能力的影响

目的 探讨rhBMP-4对大鼠成骨细胞生长增殖及分化的影响.方法 取大鼠颅盖骨组织块,采用改良组织块混合酶消化法培养成骨细胞,将不同浓度的rhBMP-4加入第4代成骨细胞的培养基继续进行细胞培养,用MTT法测定细胞在第1,3,5 天的增殖情况,用碱性磷酸酶试剂盒检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性.结果 第1,3,5 天,5～40 ng/ml的rhBMP-4对成骨细胞的生长增殖能力的影响与对照组比较差异均有显著性(P＜0.05);第1,3 天,5～40 ng/ml的rhBMP-4对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响与对照组比较差异均有显著性(P＜0.05),第5天,rhMP-4各浓度组与对照组比较无统计学意义.结论 在一定时间范围内,rhBMP-4对成骨细胞生长增殖及分化有促进作用.     

氟在体外对成骨细胞增殖能力及细胞周期的影响

目的 :建立成骨细胞体外培养模型 ,并观察不同浓度的氟对成骨细胞的影响 ,为氟中毒的机制研究提供实验依据。方法 :用幼兔肋骨培养成骨细胞 ,并纯化、鉴定。用不同浓度的氟化钠处理 (2 0 ,16 0 ,2 4 0 ,4 0 0μmol/L)成骨细胞 ,MTT法测定氟对成骨细胞增殖活性的影响 ;流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡情况。 结果 :低浓度的氟化钠 (2 0 μmol/L)在体外可显著促进成骨细胞增殖 (P <0 0 1) ,不引起成骨细胞的凋亡 ,可使S期和G2 /M期的细胞明显增多 ;高浓度的氟化钠 (16 0 ,2 4 0 ,4 0 0 μmol/L)则抑制成骨细胞的增殖 (P <0 0 1) ,引起成骨细胞的凋亡 (P <0 0 1和P <0 0 5 ) ,G2 /M期细胞明显减少。结论 :(1)成功建立了氟中毒的体外细胞模型 ;(2 )低浓度的氟化钠可以促进成骨细胞的增殖。高浓度的氟化钠抑制成骨细胞的增殖 ,诱导细胞的凋亡 ,抑制细胞由S期向G2 /M期转化。氟对成骨细胞的作用具有双向性     

补骨脂素对酒精诱导的成骨细胞增殖的影响

【目的】观察补骨脂素对酒精诱导的成骨细胞增殖的影响,探讨补骨脂素防治酒性性骨质疏松的机制。【方法】采用碱性磷酸酶(ALP)染色法鉴定从大鼠乳鼠头盖骨分离的成骨细胞。将鉴定成功的成骨细胞随机分为4组:空白对照组、酒精组(即模型组)、补骨脂素组、补骨脂素+酒精组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况。【结果】与空白对照组比较,酒精组24、48、72、96 h各时间点成骨细胞增殖活性均显著降低(P0.05),补骨脂素组各时间点成骨细胞增殖活性虽升高,但差异均无统计学意义(P0.05)。与酒精组比较,补骨脂素+酒精组24 h成骨细胞增殖活性显著升高(P0.05),2组48、72、96 h细胞增殖活性差异均无统计学意义(P0.05)。【结论】补骨脂素对体外酒精诱导的成骨细胞增殖有促进作用。     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的　观察瘦素 (leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法　培养人成骨细胞 ,并观察其形态及功能变化。采用 MTT比色法检测不同浓度的 L eptin对人成骨细胞增殖的影响 ,同时观察不同浓度 L eptin条件下骨钙素浓度的变化 ,并用细胞总蛋白较正。结果　体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型 ,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性、培养液中加入 β-甘油磷酸及 L-抗坏血酸后钙茜素红染色阳性。在加入不同浓度 L eptin后第 1、2、3天 ,人成骨细胞增殖无显著变化。L eptin可刺激骨钙素分泌 ,呈浓度依赖性 (P<0 .0 5 ) ,但无时间依赖性 (P>0 .0 5 )。结论　 L eptin对人成骨细胞增殖无影响 ,但可刺激人成骨细胞功能。     

ESW对兔成骨细胞增殖影响的实验研究

目的 观察体外冲击波疗法(ESWT)对兔缺血坏死股骨头内成骨细胞增殖的影响.方法 选取体重2.5～3.5kg健康新西兰大白兔36只,雌雄不限,采用脂多糖和甲基强的松龙制造股骨头缺血坏死模型,造模成功后再随机分成对照组(A) 和实验组(B).在ESW干预后4、8、12周处死动物取双侧股骨头进行HE染色观察组织学改变,测定空骨陷窝率、成骨细胞数来评价成骨细胞增殖及骨再生的情况.结果 在实验组,冲击波干预后4周成骨细胞数开始增多,空骨陷窝数开始减少,8周成骨细胞数达到高峰,空骨陷窝数明显减少,12周成骨细胞仍很密集,空骨陷窝稀少;而在对照组,只有少量的成骨细胞出现,而空骨陷窝仍就弥漫.与对照组相比,实验组股骨头成骨细胞计数在ESW干预后4周增高(P<0.05),8周和12周显著增高(P<0.01),而空骨陷窝率在ESW干预后4周已降低,干预后8周和12周明显降低(P<0.05).结论 ESW可以诱导并加强兔缺血坏死股骨头内成骨细胞增殖进而促进骨质的再生.     

高血糖对成骨细胞增殖分化影响的实验研究

目的观察糖尿病大鼠股骨成骨细胞的病理改变以及高糖对成骨细胞增殖分化能力的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松症提供一定的实验基础。方法 2月龄雄性SD大鼠20只,随机分正常对照组和糖尿病骨质疏松组(n=10),糖尿病组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素造模,同时体外分离培养成骨细胞,随机分为正常培养基组和高糖培养基组。成模6周麻醉后处死大鼠,分离各组大鼠的左侧股骨,于小动物放射成像系统上,测其近段骨密度,HE染色右侧股骨,观察比较两组大鼠股骨成骨细胞、破骨细胞的形态。同时两组成骨细胞各自培养48h后检测其形态及ALP阳性率。结果糖尿病组大鼠股骨骨密度显著低于对照组,同时骨皮质下成骨细胞显著减少,骨细胞呈扁平或星形,少见新骨形成。而高糖培养组成骨细胞其碱性磷酸酶(ALP)阳性率明显低于正常培养组,增殖分化能力减弱。结论高血糖状态下成骨细胞减少及增殖分化能力减弱,造成成骨细胞和破骨细胞的失衡,从而影响了骨组织的代谢,可能是造成糖尿病骨质疏松症的一个原因。