1,25（OH）2D3通过调节miR-146a水平抑制大鼠肝纤维化的体内和体外观察

目的 体内体外观察1,25（OH）₂D₃通过调节miR-146a水平抑制大鼠肝纤维化的作用机制。方法 建立CCl₄诱导的大鼠肝纤维化模型,体外转染肝星状细胞（HSCs）miR-146a 模拟剂/抑制剂,观察1,25（OH）₂D₃处理对动物肝组织变化和HSC增殖和凋亡的影响。采用qPCR法检测肝组织miR-146a水平,采用CCK8法检测细胞增殖,使用流式细胞术检测HSC凋亡。结果 在干预8 w末,1,25（OH）₂D₃干预组大鼠肝纤维化程度明显减轻; 1,25（OH）₂D₃干预组大鼠肝组织miR-146a水平为（0.70± 0.03）,显著高于橄榄油组【（0.33±0.17,P<0.05）】; 1,25（OH）₂D₃组细胞增殖率为58.8%,较DMSO组下降了15.9%,转染miR-146a 模拟剂组大鼠HSC增殖率为46.5%,较对照组下降了53.3%,转染miR-146a 抑制剂组HSC增殖率为132.8%,较对照物组升高了32.8%（P<0.05）,1,25（OH）₂D₃干预组细胞凋亡率为12.6%,较DMSO组增加了5.2%,转染miR-146a 模拟剂组细胞凋亡率为16.8%,较对照组细胞凋亡率增加了8.2%,转染miR-146a 抑制剂组细胞凋亡率为6.3%,较对照组细胞凋亡率减少了2.2%（P<0.05）,提示1,25（OH）₂D₃具有抑制HSC增殖、促进凋亡作用。结论 1,25（OH）₂D₃可能通过调节miR-146a水平抑制HSC活化和抑制大鼠肝纤维化。     

miR-214通过抑制TOM1表达促进肝星状细胞活化和迁移

背景:肝星状细胞(HSCs)持续激活所致的细胞外基质过度沉积是肝纤维化发生、发展的关键环节。MicroRNAs(miRNAs)是一类重要的生物调节分子,为HSC的分化、增殖、凋亡、脂肪蓄积以及胶原生成所必须。既往对HSCmiRNAs表达谱的分析显示,miR-214在HSC活化过程中表达显著增高。目的:探讨miR-214在HSC中的生物学功能及其可能机制。方法:以real time PCR检测静息和完全活化状态大鼠HSC的miR-214 mRNA表达;应用miR-214封闭慢病毒载体感染HSC以敲除miR-214表达,以Transwell细胞迁移实验、蛋白质印迹法检测感染前后HSC迁移、活化能力的变化;应用荧光质粒报告系统对TargetScan(http://www.targetscan.org/)预测的miR-214靶基因进行验证。结果:miR-214 mRNA在HSC活化过程中表达显著增高(P<0.01)。miR-214敲除组HSC Transwell小室迁移细胞数较阴性对照组显著减少(P<0.001),HSC活化标记物α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白表达显著下调(P<0.01)。预测显示TOM1为miR-214的靶基因,并得到荧光质粒报告系统证实;miR-214敲除组HSC TOM1蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:miR-214参与促进HSC的活化和迁移,进而促进肝纤维化进程;miR-214在HSC中的生物学功能至少部分是通过抑制TOM1表达实现的。     

转化生长因子-β1促进miR-181a表达诱导肝星状细胞-T6细胞活化

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对miR-181a表达的影响,以及miR-181a对体外培养的肝星状细胞(HSC)-T6细胞的作用。方法 TGF-β1处理HSC-T6细胞后,检测miR-181a和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。miR-181amimics转染HSC-T6细胞后,Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原a2链(collagenⅠa2,ColⅠA2)蛋白表达,CCK-8计数法检测细胞增殖。结果 TGF-β1处理组细胞中miR-181a和miR-181b表达量较对照组细胞明显升高,miR-181a转染组细胞中α-SMA和ColIA2表达量明显高于对照组细胞,miR-181a对HSC-T6增殖无明显影响。结论在HSC-T6中,TGF-β1促进miR-181a表达,miR-181a可促进HSC-T6细胞活化和分泌胶原,进一步明确了TGF-β1促进HSC-T6活化的机制。     

活性维生素D3联合LY294002体外抑制大鼠肝星状细胞增殖作用研究

目的探究维生素D的活性形式—1,25-(OH)2D3联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的特异抑制剂LY294002对体外培养大鼠肝星状细胞的抑制作用。方法将HSC-T6细胞分为正常对照、DMSO组、1,25-(OH)2D3、LY294002组和1,25-(OH)2D3+LY294002联合组,采用MTT法检测细胞增殖;在倒置显微镜下观察细胞形态变化;使用流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡;采用Western blotting法检测Phospho-Akt(Ser473)、AKT(PAN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白表达。结果体外干预肝星状细胞48 h后,两药联合干预组细胞抑制率为87.5%,显著高于1,25-(OH)2D3组的50.3%或LY294002组的40.3%(P0.05);联合组细胞凋亡率为92.12%,显著高于1,25-(OH)2D3组的71.0%或LY294002组的34.0%(P0.05);在显微镜下观察,两药处理组细胞形状由星形变为不规则形,凋亡数量增多,表现为正常活细胞数目明显减少,胞间隙增宽,细胞体积缩小,胞浆浓缩,胞核固缩,可见空泡及细胞碎片,有的细胞出现数量不等的凋亡小体;与单药干预组比,联合组细胞Bax/Bcl-2比值上升明显(P0.05),活化的凋亡蛋白caspase-3表达显著增加(P0.05)。结论 1,25-(OH)2D3可协同LY294002共同诱导HSC-T6细胞凋亡,增强其抗肝纤维化的效果。     

miR-26b通过信号通路Wnt调控肝癌细胞分化、增殖、凋亡

目的探讨miR-26b对肝癌细胞分化增殖凋亡的影响及机制。方法以qRT-PCR方法检测肝癌细胞SMMC-7721、HuH-7、HepG2和正常肝细胞HL-7702中miR-26b的表达水平。在肝癌细胞中转染miR-26b mimic、mimic control,qRT-PCR测定转染后细胞中miR-26b水平。CCK-8测定细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western印迹测定细胞中β-连环蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果 HL-7702细胞中miR-26b表达水平显著高于SMMC-7721、HuH-7、HepG2细胞(P0.05)。SMMC-7721细胞中miR-26b表达水平显著低于HuH-7、HepG2细胞(P0.05)。选用SMMC-7721细胞作为研究对象。转染miR-26b mimic后的细胞中miR-26b水平显著升高(P0.05)。高表达miR-26b后的肝癌细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著提高,细胞中促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Bax水平也显著升高,细胞中Wnt关键蛋白β-catenin、CyclinD1水平显著降低(均P0.05)。结论 miR-26b诱导肝癌肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制与抑制Wnt信号通路有关。     

酒精性肝纤维化的发病机制

Purohit V…//Hepatology,2006,(Epub ahead of print)2005年6月在加州举行的Ron Thurman座谈会强调了饮用酒精单一因素亦可导致肝纤维化。乙醛,酒精的第一个代谢物,与TGF-β1一样,可直接上调I型胶原的合成。肝细胞酒精代谢所产生的活性氧(ROS)可以旁分泌的方式活化肝星状细胞(HSC)并产生大量的胶原蛋白。酒精诱导的肝细胞凋亡小体可被HSC和Kupffer细胞吞噬,并导致TGF-β1表达的上调以及随后的HSC活化。Kupffer细胞可能通过释放ROS及TGF-β1活化HSC。固有免疫可能会通过杀伤活化的HSC细胞及阻断TGF-β1的表达来抑制肝纤维…     

miR-142-5p靶向调控TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡

目的探讨miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中的表达及对人巨噬细胞凋亡的作用。方法构建动脉粥样硬化大鼠模型,qRT-PCR检测动脉粥样硬化组织中miR-142-5p的表达水平。50μg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人巨噬细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)、内皮细胞24 h后,提取细胞RNA,qRT-PCR检测细胞中miR-142-5p的表达水平。靶基因预测软件预测miR-142-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因鉴定靶基因的正确性。细胞转染miR-142-5p mimic、mimic control、miR-142-5p inhibitor、inhibitor control,Western blot和qRT-PCR检测miR-142-5p对靶基因的调控作用,流式细胞仪检测miR-142-5p和靶基因对巨噬细胞凋亡的作用。结果 miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中表达上调,与正常组织相比差异显著(P0.01)。血管平滑肌细胞和内皮细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平与刺激前没有明显变化,而巨噬细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平较刺激前明显升高(P0.01)。预测miR-142-5p的靶基因为转化生长因子β2(TGF-β2)。miR-142-5p mimic与TGF-β2共转染后荧光素酶活性最低;miR-142-5p mimic组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与mimic control组相比明显下降,miR-142-5p inhibitor组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与inhibitor control组相比明显升高(P0.01);miR-142-5p mimic组细胞凋亡率明显高于mimic control组,TGF-β2 siRNA组细胞凋亡率明显高于siRNA control组(P0.01)。结论 miR-142-5p在动脉粥样硬化中过度表达,miR-142-5p通过下调靶基因TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡。     

活性维生素D3联合LY294002体外抑制大鼠肝星状细胞增殖作用研究*

目的探究维生素D的活性形式—1,25-(OH）2D3联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt）信号通路的特异抑制剂LY294002对体外培养大鼠肝星状细胞的抑制作用。方法将HSC-T6细胞分为正常对照、 DMSO组、1,25-(OH）2D3、LY294002组和1,25-(OH）2D3+ LY294002 联合组,采用MTT法检测细胞增殖;在倒置显微镜下观察细胞形态变化;使用流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡;采用Western blotting法检测Phospho-Akt（Ser473）、AKT（PAN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3蛋白表达。结果体外干预肝星状细胞48 h后,两药联合干预组细胞抑制率为87.5%,显著高于1,25-（OH）2D3组的50.3%或LY294002组的40.3%（P<0.05）;联合组细胞凋亡率为92.12%,显著高于1,25-(OH）2D3组的71.0%或LY294002组的34.0%（P<0.05）;在显微镜下观察,两药处理组细胞形状由星形变为不规则形,凋亡数量增多,表现为正常活细胞数目明显减少,胞间隙增宽,细胞体积缩小,胞浆浓缩,胞核固缩,可见空泡及细胞碎片,有的细胞出现数量不等的凋亡小体;与单药干预组比,联合组细胞Bax/Bcl-2比值上升明显（P<0.05）,活化的凋亡蛋白caspase-3表达显著增加（P<0.05）。结论1,25-（OH）2D3可协同LY294002 共同诱导 HSC-T6 细胞凋亡,增强其抗肝纤维化的效果。     

miR-136调控FDZ4通过WNT信号通路抑制非小细胞肺癌的增殖和诱导凋亡

目的探讨微小RNA-136(miR-136)是否靶向调控FDZ4及其是否通过调控WNT信号通路进而抑制非小细胞肺癌的增殖及促进细胞凋亡。方法运用qRT-PCR与Western印迹分别检测miR-136和FDZ4在不同非小细胞肺癌细胞株及正常肺上皮细胞中的表达;将miR-136 mimic、miR-con分别转染SPC-A-1细胞,分别将pcDNA-FDZ4、pcDNA与miR-136 mimic共转染于SPC-A-1细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)与流式细胞仪分别检测SPC-A-1细胞的增殖与凋亡。双荧光素酶报告基因检测miR-136与FDZ4的相互作用。采用Western印迹法检测SPC-A-1细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-9、Bax、Bcl-2及WNT信号通路相关蛋白表达。结果 qRT-PCR结果显示,miR-136在非小细胞肺癌细胞中的表达均明显低于正常肺上皮细胞,而FDZ4 mRNA表达显著上调,其中以SPC-A-1细胞变化最为明显(均P0.05);MTT结果显示,转染miR-136 mimic后SPC-A-1细胞OD值与miR-con组比较明显减小,而共转染pcDNA-FDZ4后SPC-A-1细胞OD值明显增加(均P0.05);流式细胞仪检测结果显示,转染miR-136 mimic后SPC-A-1细胞凋亡率显著高于miR-con组,而共转染pcDNA-FDZ4后细胞凋亡率显著降低(均P0.05);miR-136能与FDZ4的3′UTR特异性结合,并可调控FDZ4的表达活性;Western印迹结果显示,不同非小细胞肺癌细胞中FDZ4表达均明显高于正常肺上皮细胞,miR-136过表达后CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达明显下调,而Caspase-9、Bax、GSK-3β表达明显上调(均P0.05),共转染pcDNA-FDZ4后促进CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达,抑制Caspase-9、Bax、GSK-3β表达。结论 miR-136可调控FDZ4并可能通过抑制WNT信号通路活化进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖与诱导细胞凋亡。     

熊去氧胆酸抑制人肝星状细胞活化和NIX蛋白表达的实验研究

目的研究NIX蛋白的表达变化与熊去氧胆酸(UDCA)抑制人肝星状细胞(HSC)活化作用的关系。方法人肝星状细胞-LX2细胞实验分为四组:溶媒对照组、UDCA(0.5μM)组、TGF-β1(5 ng/ml)组、TGF-β1(5 ng/ml)+UDCA(0.5μM)组。通过Western blot检测比较各组间α-SMA、NIX的表达差异。结果TGF-β1刺激LX2细胞后,α-SMA、NIX表达分别较对照组增加60.9%、51.0%;UDCA抑制TGF-β1活化LX2细胞后,α-SMA的表达抑制率达55.6%,与其显著下调NIX的表达呈正相关。结论 UDCA下调HSC细胞NIX蛋白的表达,可能为UDCA抗肝纤维化的药理新机制。     

柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1和胶原的影响

[目的]观察柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)和胶原的影响.[方法]采用血清药理学方法处理HSC,以貂肺上皮细胞(Mv1Lu)生长抑制MTT法检测培养上清液中TGF-β1活性,免疫细胞化学染色检测HSC TGF-β1和胶原的表达.[结果]经柔肝冲剂处理的HSC培养上清液中TGF-β1的生物活性和细胞内TGF-β1的表达受到显著抑制,其中对纤维肝HSC的作用更明显,抑制作用优于秋水仙碱.柔肝冲剂能显著抑制纤维肝HSC表达胶原,对Ⅳ型和Ⅰ型胶原具有较高的抑制率.[结论]柔肝冲剂能抑制HSC产生TGF-β1和胶原,阻断肝纤维化时HSC合成胶原等细胞外基质的自分泌放大过程.     

转化生长因子β1与肝纤维化的基因治疗

肝纤维化是一个极为复杂的病理过程,其形成的关键环节是肝脏星状细胞(HSC)的活化并转化成为肌纤维样母细胞(MFB),进而合成、分泌大量细胞外基质(ECM),导致ECM代谢失衡.在人们所发现的哺乳动物转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)超家族中,TGF-β1是其中的主要成员,它既能抑制肝细胞、内皮细胞、上皮细胞的增殖,诱导细胞外基质的形成,又可以诱导肝细胞凋亡,是HSC向MFB转化进程中最重要的促进因子.因此,抑制TGF-β1生成,从分子水平阻断TGF-β1的信号转导,才有可能从"源头"上中止肝纤维化的形成.本文将从抑制TGF-β1的产生,阻断其与受体结合以及调控其胞内信号转导过程三个方面对近年来转化生长因子β1与肝纤维化的实验性基因治疗研究状况作一综述.     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.     

1,25-(OH)_2D_3通过调节miR-146a表达抑制大鼠肝纤维化发生发展机制的研究

目的本研究旨在探讨1,25(OH)_2D_3是否能通过调节肝脏内miR-146a的表达阻碍肝纤维化的进展。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、药物对照组、药物治疗组,采用皮下肌注CCl_4方式建立肝纤维化模型,药物治疗组同时给予同剂量的CCl4皮下肌注及3 mL/kg的1,25(OH)_2D_3灌胃,药物对照组给予同剂量的CCl_4皮下肌注及3 mL/kg的橄榄油灌胃。于第8周处死大鼠,采用心脏取血法行肝纤维化四项的检测,留取肝脏相同部位行石蜡切片HE染色,qreal-time PCR法检测比较各组肝组织内miR-146a的表达差异。结果与正常对照组相比,模型组SD大鼠肝纤维化程度明显增加,即肝纤维化四项中ColⅣ、PⅢNP、HA、LN明显上升(P0.05),病理切片示模型组肝组织周围血管炎症细胞浸润,肝组织中可见大量的脂滴空泡,而药物治疗组两者程度均有明显减轻。结论 1,25(OH)_2D_3可明显减轻肝损伤,可能通过调节肝组织内miR-146a的表达量从而达到改善肝功能、阻碍肝纤维化发生发展的目的。     

肝细胞凋亡在肝纤维化中的作用

肝纤维化系肝组织内细胞外基质(ECM)过度增生与异常沉积,导致肝脏结构和/或功能异常改变的病理变化。过去20年,对肝纤维化的病理机制研究取得了长足进步,如明确了肝纤维化的细胞学基础在于肝星状细胞(HSC)活化,生化学基础在于ECM代谢紊乱,尤其是近年来基本明确了转化生长因子β(TGF-β)等促纤维化细胞因子刺激HSC活化。但是治疗学进展缓慢,治疗策略主要针对HSC活化与ECM代谢降解等,而这些方法尚未取得理想的临床疗效。肝细胞约占肝脏细胞总量的80%,数量最多,功能重要。肝细胞损伤尤其是肝细胞凋亡、细胞支架结构完整性在肝纤维化中…     

miR-146a调控人脐静脉内皮细胞的衰老及机制

目的探究miR-146a在人脐静脉内皮细胞衰老中的调节作用,并初步探究其机制。方法以人脐静脉内皮ECV-304细胞为研究对象,连续传代建立ECV-304细胞复制性衰老模型,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中衰老细胞比例,实时定量PCR法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中miR-146a表达。靶基因预测软件预测miR-146a靶基因。细胞转染建立miR-146a表达上调的P12代细胞(Pre-miR146a组)和miR-146a表达下调的P12代细胞(Anti-miR146a组),并建立相应对照组,SA-β-gal法检测衰老细胞比例,Western blot检测NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达。结果 P6、P9、P12和P15代细胞的衰老细胞比例明显高于P2代细胞(P0.05),miR-146a表达则明显低于P2代细胞(P0.05)。靶基因预测miR-146a的靶基因为NOX4;转染后,Pre-miR146a组衰老细胞比例明显低于对照组(P0.05),Anti-miR146a组衰老细胞比例明显高于对照组(P0.05); Pre-miR146a组NOX4蛋白表达明显低于对照组(P0.05),Anti-miR146a组NOX4蛋白表达明显高于对照组(P0.05)。结论 miR-146a在衰老的人脐静脉内皮细胞ECV-304中表达下降,上调miR-146a表达能够抑制ECV-304衰老,其机制与调节NOX表达有关。     

白细胞介素7对转化生长因子β1诱导的大鼠肝星状细胞的影响

肝星状细胞(HSC)的活化和增殖是肝纤维化形成的关键环节[1].转化生长因子(TGF)β1可通过HSC内的TGFβ/Smads信号通路促进纤维化的发生发展,被认为是调控肝纤维化的核心物质.抑制TGFβ1合成或其信号传导已证明能拮抗HSC活化与细胞外基质的产生,成为抗肝纤维化的主要目标[2].IL-7是在骨髓中最早发现的一种细胞因子,以往研究证实其能通过上调成纤维细胞Smad7的表达抑制TGFβ/Smads信号通道,具有抗纤维化的作用[3-5].本实验旨在了解IL-7在肝纤维化中的作用,并探讨其作用的分子机制.     

miR-21对肝星状细胞的增殖和成纤维化的影响

目的研究miR-21对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的增殖和成纤维化的影响。方法将大鼠HSC-T6传代分为四组,分别为正常组、酒精组、miR-21模拟物组、miR-21抑制剂组。其中正常组不做处理;miR-21模拟物组和miR-21抑制剂组分别将miR-21模拟物和miR-21抑制剂瞬时转染入细胞;然后,再用含有酒精的培养基诱导酒精组、miR-21模拟物组、miR-21抑制剂组的HSC的活化;48 h后,分别做两部分实验,一部分是细胞增殖测试实验(cell counting kit-8,CCK8);另一部分是提取各组细胞蛋白,Western blotting检测因子增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Smad3、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscles actin,α-SMA)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达变化。结果CCK8结果显示,miR-21模拟物能够促进HSC的增殖与活化,从而促进纤维化的进展;而miR-21抑制剂能够抑制HSC的活化,降低HSC的活力值,缓解纤维化的进展。Western blotting检测结果显示,PCNA、TGF-β1、Smad3、α-SMA、CTGF在酒精组的表达量明显比正常组高(P<0.05),而在miR-21模拟物组则比酒精组高(P<0.05),miR-21抑制剂组比酒精组明显降低(P<0.05)。结论miR-21能够促进HSC的增殖,促进HSC成纤维化的进展。     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以0.85%氯化钠溶液和秋水仙碱为对照.免疫细胞化学分析TGF-β1的蛋白合成;半定量RT-PCR法检测TGF-β1mRNA的表达量.结果抗纤软肝冲剂组TGF-β1蛋白表达量为108.41士4.50,mRNA相对表达量为54.41±5.57,明显低于0.85%氯化钠溶液组和秋水仙碱组(P＜0.01)..结论抗纤软肝冲剂能抑制HSC的TGF-β1的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

外源性转化生长因子β1对大鼠原代肝星状细胞活化的影响

目的探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7 d时予TGF-β15 μg/L处理24 h,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用Western blot法检测处理前后细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的变化,及活化过程中TGF-β1Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的表达.结果HSC在体外培养过程中,不同培养时间对TGF-β1的刺激活化作用反应不同.TGF-β1处理后,对培养2,3,4,5 d HSC的活化有促进作用,以对培养第3天的细胞作用最明显,其α-SMA表达增加78.05%,而培养6,7 d的HSC的形态和α-SMA变化不明显.培养第7天的HSC比培养第3天的细胞TβR-Ⅱ表达增高(3.30±0.83 vs 1.55±0.38,P＜0.05).结论TGF-β1对处部分活化状态中某阶段细胞的活化具有促进作用.完全活化的细胞对TGF-β1的刺激活化作用不敏感,原因与TβR-Ⅱ的表达量无关.