醛固酮对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测试细胞的生长曲线,检测不同浓度的醛固酮对人脐静脉内皮细胞的增殖,流式细胞仪检测醛固酮对人脐静脉内皮细胞的凋亡,半定量RT-PCR及Western印迹分别检测人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA水平及蛋白水平的表达。结果①MTT比色法显示,醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖具有抑制作用且呈浓度依赖性;②当醛固酮浓度增加到800μg/L后,其增殖抑制率不再升高,而此浓度时人脐静脉内皮细胞的凋亡率达到峰值的26.5%±3.3%;③经过醛固酮处理,人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA及蛋白水平的表达量均显著下降。结论醛固酮通过降低人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子表达抑制人脐静脉内皮细胞增殖并促进人脐静脉内皮细胞凋亡。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot方法，观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对体外培养人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响，并以辛伐他汀干预，观察其对上述过程的影响。结果发现，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β显著促进人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子及其受体的表达，在不同水平辛伐他汀对促炎症因子的上述作用具有一定的抑制效应，由此推断辛伐他汀可能具有一定的抗炎症反应及抗动脉粥样硬化的作用。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激原代培养的HUVECs,检测HUVECs表达VEGF的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,VEGF蛋白及VEGF mRNA的表达也随之升高,经统计学检验有相关性;在相同瘦素浓度下, 随着作用时间的延长,VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达也随之升高,且有相关性。结论:瘦素可以刺激HU- VECs表达VEGF而且呈时间和剂量相关性。     

核仁素对血管内皮生长因子介导的人脐静脉内皮细胞管型形成的影响

目的核仁素是细胞核仁中含量最多的一种多功能磷酸蛋白质和RNA结合蛋白,其主要功能涉及核糖体RNA的合成、核糖体的装配、细胞生长、凋亡、炎症免疫等生理病理过程。然而细胞内核仁素在血管内皮生长因子(VEGF)诱导的血管新生中有何作用,尚不清楚。本研究拟探讨VEGF在诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管型形成过程中对核仁素蛋白表达的影响及核仁素在这一过程中的作用。方法采用免疫印迹和定量聚合酶链反应(PCR)技术检测VEGF对核仁素表达的影响;采用基质胶、细胞划痕试验分析核仁素过表达和抑制表达对VEGF诱导的HUVEC管型形成、迁移能力的影响;采用生物信息学分析血管新生相关基因mRNA序列中含核仁素特异性结合基序的数量和位点。采用RNA免疫沉淀结合RT-PCR分析核仁素与靶基因mRNA的结合。结果 VEGF促进HUVEC中核仁素蛋白和mRNA的表达,其表达量在100μg/L VEGF处理24 h时增加约3.5倍,并维持至48 h。核仁素过表达显著增强50μg/L VEGF介导的HUVEC形成管型的能力以及细胞迁移能力,而核仁素抑制表达则显著削弱100μg/L VEGF介导的HUVEC管型形成与细胞迁移能力。生物信息学分析发现,环氧合酶2(COX-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、endoglin(ENG)、整合素αV和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)等12个血管新生相关基因mRNA中含有核仁素结合基序"(T/G)CCCG(A/G)"。进一步采用RNA免疫沉淀结合RT-PCR分析初步发现核仁素可以与ENG、MMP-9和COX-2的mRNA结合。结论核仁素正性调节VEGF介导的血管新生,其机制可能是核仁素与血管新生相关基因mRNA结合,维持后者的稳定性,从而发挥在转录后水平对血管新生相关靶基因表达的调节作用。     

间歇低氧对人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子的影响

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)的主要病理生理过程是间歇低氧,即反复短暂缺氧继之再氧合过程,与众多心血管疾病相关.其中,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发挥了重要作用.本研究通过建立间歇低氧细胞模型,测定间歇低氧条件下内皮细胞中VEGF含量的变化,探讨OSAS相关心血管疾病的发病机制.     

反义寡核苷酸抑制肝癌血管内皮生长因子表达

目的 探讨不同序列的反义寡核苷酸对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制效果。 方法 SMMC7721细胞于正常氧和缺氧条件下培养24 h,观察缺氧对VEGF mRNA表达的影响;SMMC7721细胞接种于6孔板后,各加入不同的反义寡核苷酸(反帽子结构A06513、反翻译起始部位A06514、反第三外显子A06515、反翻译终止部位A06516和空白组),缺氧培养24 h,然后收集细胞提取总RNA并作逆转录聚合酶链反应分析,同时以管家基因GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)表达为内对照。 结果 缺氧条件下,SMMC7721细胞VEGF mRNA表达明显增强,而有氧条件下未见表达;反义寡核苷酸具有明显抑制VEGF mRNA表达,和空白对照组相比,A06513、A06514、A06515及A06516的VEGF/GAPDH值分别为0.49±0.08、0.71±0.12、0.72±0.11及0.86±0.12(F=12.21,P<0.05)。帽子结构的反义基因表现最强的抑制作用(P<0.0 1)。 结论 与VEGF帽子结构作用的反义寡核苷酸,有望成为肝癌反义基因治疗的新选择。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道。目的探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制。方法将 HUVEC 随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α+PDTC 干预组(PI)TC 系核因子 kB 的特异性活性抑制剂),TNF-α+NS398干预组(NS398是 COX-2的特异性活性抑制剂)。TNF-α+阿司匹林0.02 mol/L 干预组,TNF-α+阿司匹林0.2 mol/L,干预组,TNF-α+阿司匹林1 mol/L 干预组,TNF-α+阿司匹林5 mol/L 干预组,共8组,每组3例。分别用 RT-PCR 法和 Western blot 法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子 kB p65(NF-kBp65)的 mRNA 水平和蛋白表达。结果 1)4μg/L TNF-α使 HUVEC 的分形趋化因子 mRNA 水平和蛋白表达明显增加(P<0.01)。2)阿司匹林浓度依赖性抑制 TNF-α诱导的 HUV...     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景 分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道.目的 探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制.方法 将HUVEC随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α PDTC干预组(PDTC系核因子κB的特异性活性抑制剂),TNF-α NS398干预组(NS398是COX-2的特异性活性抑制剂).TNF-α 阿司匹林0 02 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林0 2 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林1 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林5 mol/L干预组,共8组,每组3例.分别用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平和蛋白表达.结果 1)4 μg/L TNF-α使HUVEC的分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达明显增加(P<0 01).2)阿司匹林浓度依赖性抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(P<0 01);阿司匹林浓度依赖性地抑制HUVEC的NF-κB p65 mRNA水平和蛋白表达(P<0 01).3)PDTC抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(均P<0 01).结论 阿司匹林通过NF-κB p65途径抑制TNF-α诱导的HUVEC 分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达,并可能借此发挥抗动脉粥样硬化作用.     

腺苷对人脐静脉内皮细胞中肝细胞生长因子合成表达的影响

将人脐静脉内皮细胞(HUEVC)按加入腺苷浓度的不同分为A组(10-4mmol/L)、B组(10-8mmol/L)和空白对照组,48 h后检测各组肝细胞生长因子(HGF)合成,RT-PCR方法检测HGF mRNA表达。结果对照组HGF染色阳性细胞少,染色程度轻;A组HGF染色阳性细胞多,染色深,平均吸光度与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组平均吸光度与对照组比较无显著差异(P>0.05);RT-PCR分析A组中HGF mRNA表达含量与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。表明HUEVC中存在HGF表达,腺苷可部分通过促进内皮细胞中HGF合成表达而实现其促进内皮细胞生长和血管新生的作用。     

反义基因对肝癌血管内皮生长因子表达的抑制

原发性肝细胞癌(HCC)的生长很大程度上依赖新生血管的形成。抑制肿瘤血管的形成，特别是肿瘤血管形成调控因子血管内皮生长因子(VEGF)的基因治疗是近年HCC治疗研究的新方向。本文通过实验方法探讨不同序列的反义寡核苷酸(ODN)对VEGF表达的抑制效应，为今后肝癌VEGF的基因治疗提供实验基础。     

血管内皮细胞生长因子及生长抑制因子4在大肠癌中的表达

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)及生长抑制因子4(ING-4)在大肠癌中的表达及其与患者临床病理特征的关系。方法选择经手术病理证实的68例大肠癌、20例大肠腺瘤及20例正常的肠黏膜组织,采用免疫组化法检测并比较各组VEGF及ING-4表达情况,分析二者与大肠癌患者临床病理特征及生存期的关系。结果 VEGF蛋白在大肠癌组、大肠腺瘤组及正常组中的阳性表达率依次下降(P<0.05、P<0.01),ING-4蛋白在大肠癌组、大肠腺瘤组及正常组中的阳性表达率依次升高(P<0.05)。VEGF蛋白在浸润浆膜外层的大肠癌组阳性率显著高于浸润肌层及浆膜层者(P<0.05),在Dukes C、D期大肠癌患者中的阳性率高于A、B期者(P<0.05),在发生淋巴结转移的大肠癌组阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05);ING-4蛋白在高、中分化大肠癌组阳性率显著高于低分化组(P<0.05),在Dukes A、B期大肠癌患者中的阳性率高于C、D期(P<0.05),在发生淋巴结转移的大肠癌组阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。VEGF阳性大肠癌患者3年生存率及5年生存率均显著低于阴性患者(P<0.05),ING-4阳性大肠癌患者3年生存率及5年生存率较阴性患者无显著差异(P>0.05)。结论 VEGF高表达与大肠癌浸润程度、Dukes分期、淋巴结转移及预后有关,ING-4低表达与大肠癌分化程度、Dukes分期及淋巴结转移有关,可以作为大肠癌的术前诊断、制订手术方案的及预测转移的重要指标。     

肝细胞核因子4α和3β在人主要器官中的表达

目的:观察肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor 4α,HNF-4α)和HNF-3β在人主要组织器官中的表达情况,为进一步探索这两个因子与慢性乙型肝炎患者HBV复制之间的可能关系提供理论基础．方法:采用免疫组织化学染色方法检测HNF- 4α和HNF-3β在14例尸解标本的主要器官(肝、脑、肺、肾、心、脾、肠、胰腺、胃和甲状腺)中的表达情况．结果:HNF-4α和HNF-3β在10个器官的表达情况不同(HNF-4α:F=22．479,P<0．01;HNF- 3β:F=13．021,P<0．01)．HNF-4α在肝、肾、心、脾和肠中呈高水平表达,在肺和甲状腺呈低水平表达;HNF-3β在肝、肾、心和胰腺中呈高水平表达,在脾、肺、肠和甲状腺中呈低水平表达;HNF-4α和HNF-3β在脑、胃、阑尾、胸腺、肾上腺和扁桃体中均不表达:上述HNF-4α和HNF-3β高表达组和低表达组的表达水平差异有统计学意义(P<0．05),而高表达组各器官之间的表达水平差异无统计学意义(P>0．05)．结论:人体各组织中HNF-4α与HNF-3β的表达水平不同,在肝脏的表达水平较高,这提示二者有可能参与了HBV的组织特异性复制．     

不同转移潜能肝癌细胞株血管内皮生长因子及其受体的表达和意义

目的 探讨血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达及其意义.方法 应用半定量RT-PCR、酶联免疫吸附试验和(或)Western blot检测4株不同转移潜能的肝癌细胞株及一株正常肝细胞中VEGFR-1、VEGF-A、VEGF-B及VEGFR-2的mRNA和(或)蛋白质表达.结果 MHCC97-H、MHCC97-L和SMMC-7721细胞均有VEGFR-1 mRNA和蛋白质表达,且VEGFR-1 mRNA和蛋白质在MHCC97-H中的表达高于MHCC97-L、SMMC-7721的表达,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而其配体VEG-A和VEGF-B在检测的4种肝癌细胞株和正常肝细胞株L-02中均有表达.同时在检测的四种肝癌细胞株和正常肝细胞株L-02中均能检测到VEGFR-2 mRNA和蛋白质表达,但各组间表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 具有转移潜能的肝癌细胞株有VEGFR-1表达,而且其表达强弱与肝癌细胞株的转移潜能呈正相关,VEGFR-1的表达可能促进了肝细胞癌的侵袭转移.     

培养人脐静脉内皮细胞血管内皮舒张因子释放及对血小板聚集的影响

直接观察体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）上清液中血管内皮舒张因子（EDRF／NO）的释放变化及对血小板聚集的抑制作用。发现：（1）缓激肽（BK）或细菌脂多糖（LPS）能刺激（EDRF／NO增加到原来的2倍，并且以孵育第1h增长最多。（2）L-精氨酸（L－Arginine）作为EDRF／NO合成原料，可以提高HUVEC上清液中EDRF／NO量，但是EDRF／NO合成酶抑制剂L－NG－nitro－arginine（L－NNA）与L－Arginine同时存在时则降低这个合成量。（3）经消炎痛处理过并含有EDRF／NO的HUVEC上清液对血小板有抑制作用、这种抑制作用由于L－NNA的存在而减弱。     

血小板因子4促进人脐静脉内皮细胞Toll样受体2的表达

目的 探讨血小板因子4对人脐静脉内皮细胞Toll样受体2表达的影响.方法 采用人重组细胞因子血小板因子4刺激人脐静脉内皮细胞株ECV304,通过RT-PCR和Western Blotting分别检测ECV304中Toll样受体2 mRNA和蛋白表达.细胞免疫组织化学法检测血小板因子4刺激后ECV304中Toll样受体2的表达量.结果 血小板因子4刺激人脐静脉内皮细胞株后能促进Toll样受体2 mRNA和蛋白表达.与空白组相比,100μg/L血小板因子4处理人脐静脉内皮细胞株能在基因及蛋白水平促进其Toll样受体2表达并呈现一定的时间依赖性(n=5,P<0.05),且肝素不能抑制血小板因子4的这种作用.细胞免疫组织化学法也显示与空白组(0.001 385±0.000 953)相比,血小板因子4处理后人脐静脉内皮细胞Toll样受体2表达显著增多(0.060 399±0.020 998,P<0.05).结论 血小板因子4促进人脐静脉内皮细胞株表达Toll样受体2,此效应可能与血小板在动脉粥样硬化中的作用有关.