骆驼蓬碱对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

背景:骆驼蓬碱可通过下调环氧合酶-2(COX-2)表达抑制胃癌细胞增殖,但其分子机制尚未完全明确。目的:研究骆驼蓬碱对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,探讨PTEN/Akt/MDM2信号通路在该过程中的作用。方法:以不同浓度(2、4、8、16、32μg/m L)骆驼蓬碱干预人胃腺癌细胞株SGC-7901和MKN-45 24 h、48 h和72 h,分别采用MTT法和Hoechst染色检测细胞增殖和凋亡情况;蛋白质印迹法检测PTEN、COX-2表达以及Akt、MDM2磷酸化水平。结果:骆驼蓬碱呈剂量和时间依赖性地抑制SGC-7901、MKN-45细胞增殖,并诱导其发生典型的凋亡形态学改变。骆驼蓬碱呈剂量依赖性地上调PTEN表达、抑制Akt、MDM2磷酸化以及COX-2表达。结论:骆驼蓬碱可能通过PTEN/Akt/MDM2信号通路下调COX-2表达,抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

阿霉素诱导PI3'K/Akt/FKHRL1通路激活与胃癌细胞化疗耐药性的关系

目的 探讨阿霉素诱导胃癌细胞磷脂酰肌醇3’-激酶（PI3’K）／Akt／FKHRL1通路的激活对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及二者的关系。方法 阿霉素及PI3’K／Akt抑制剂Wortmannin分别作用于胃癌细胞SGC-7901，MTT比色法检测胃癌细胞的生存率，Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平。结果 阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化。Wortmannin可明显增强阿霉索的细胞生长抑制作用，同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论 阿霉素可能通过激活SGC-7901细胞的PI3’K／Akt通路诱导FKHRL1磷酸化，从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。Wortmannin可以阻断PI3’K／Akt／FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

利用siRNA抑制环氧合酶-2对人胃癌裸鼠移植瘤的影响

目的 观察环氧合酶2(COX-2)对人胃癌裸鼠移植瘤的影响并探讨其机制.方法 构建靶向COX-2表达质粒和在BALB/c裸鼠皮下建立SGC-7901人胃癌细胞动物模型,用COX-2表达质粒基因转染治疗.结果 构建的COX-2表达质粒在体内、外均可稳定表达.COX-2基因治疗可抑制裸鼠皮下肿瘤的生长和淋巴管的生成.COX-2基因转染下调血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达.结论 通过构建靶向COX-2 siRNA真核表达载体可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长和淋巴管生成,COX-2对抑制胃癌细胞(SGC-7901)治疗有确切效果.     

环氧合酶-2、核因子(-K)_B在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶(COX)-2、核因子(NF)-kB 在胃癌及异型增生中的表达,并研究尼美舒利对人胃癌 SGC-7901细胞增殖及 COX-2、NF-kB 表达的影响。方法采用免疫组化 Power vi-sionTM 两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中 COX-2、NF-kB 的表达进行检测;在体外实验中对人胃癌 SGC-7901细胞采用细胞培养,MTT 法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌 SGC-7901细胞增殖的抑制作用,免疫组化、Western blot 方法检测药物对 COX-2、NF-kB 表达的影响。结果 COX-2、NF-kB 在胃癌中的阳性表达率分别为66.67%、59.52%,均高于异型增生(P<0.05),COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关(P<0.05),并与 NF-kB 的表达相关(P<0.05),COX-2与肿瘤浸润深度正相关(P<0.05)。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌 SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性;与阴性对照组相比,药物作用48 h 后尼美舒利100、200μmol/L 组 COX-2、NF-kB 蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性(P<0.05),COX-2、NF-kB 之间正相关(P<0.05)。结论 COX-2、NF-kB与胃癌的发生转移相关,并且 NF-kB 蛋白作为上游调控因子调节 COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌 SGC-7901细胞增殖,抑制 COX-2、NF-kB 的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法 通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果 胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。     

COX-2抑制剂对胃癌细胞生长及其15-PGDH表达的影响

背景:15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)是前列腺素生物降解的关键酶,环氧合酶-2(COX-2)是前列腺素合成的重要限速酶,目前两者间的关系尚不明确。目的:观察非选择性和选择性COX-2抑制剂对胃癌细胞生长、凋亡以及15-PGDH、COX-2表达的影响,探讨胃癌中15-PGDH与COX-2的关系。方法:以不同浓度吲哚美辛和塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901,MTF法检测细胞生长抑制情况,RT-PCR检测凋亡相关基因survivin、bax、bcl-xL表达,RT-PCR和蛋白质印迹法检测15-PGDH、COX-2表达。结果:吲哚美辛和塞来昔布均能抑制SGC-7901细胞生长,抑制作用呈时间/浓度依赖性。药物干预后,SGC-7901细胞的15-PGDH mRNA和蛋白表达显著升高,COX-2 mRNA和蛋白表达显著降低;同时抗凋亡基因survivin、bcl-xL mRNA表达降低,促凋亡基因bax mRNA表达升高。结论:非选择性和选择性COX-2抑制剂均可诱导胃癌细胞15-PGDH表达,抑制COX-2表达,提示胃癌中15-PGDH低表达与COX-2过表达相关。COX-2抑制剂可能通过促进15-PGDH表达、下调抗凋亡基因表达、上调促凋亡基因表达而抑制胃癌细胞生长。     

木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901作用的研究

目的探讨木黄酮对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞周期和细胞凋亡。细胞免疫化学观察木黄酮处理SGC-7901细胞后，SGC-7901细胞PCNA，FAS，C-mvc的变化。结果①MTT法证实木黄酮对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量-效应关系。②流式细胞仪分析木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④木黄酮下调PCNA及C—myc表达，上调FAS表达。结论木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过下调C-mvc基因表达，上调Fas蛋白表达，下调PCNA表达，从而多途径诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。     

塞来昔布对胃癌细胞株LRP表达的影响

目的探讨塞来昔布对胃癌细胞株LRP表达的影响。方法采用MTT法检测塞来昔布不同剂量对胃腺癌细胞株SGC-7901生长的影响,在此基础上采用免疫组化及ELISA方法检测塞来昔布在一定剂量范围内某一时间点对SGC-7901细胞COX-2、LRP表达的影响。结果不同浓度的塞来昔布均对胃腺癌细胞株SGC-7901有抑制作用,并且这种影响呈时间和剂量依赖性;胃癌细胞株LRP的表达也随着塞来昔布浓度的增加而减少。结论选择性COX-2抑制剂塞来昔布可以下调胃癌细胞株中耐药基因LRP的表达,逆转多药耐药作用。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及其对C-myc和TGF-β1表达的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法 用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察As2O3处理SGC-7901细胞后细胞周期细胞凋亡。细胞免疫化学观察As2O3处理后SGC-7901细胞TGF-β1及C-myc表达的变化。结果 ①MTT法证实As2O3对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量．效应关系。②流式细胞仪分析As2O3处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④As2O3导致C—myc表达的波动，下调TGF-β1，表达。结论As203对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过导致C—myc基因表达波动，诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。同时通过下调TGF-β1表达阻止胃癌的恶性进程。     

大鼠血管平滑肌细胞中以COX-2/JAK2/STAT3为靶向的信号转导分子调控机制的研究

目的:研究转录信号转导子和激活子3(STAT3)信号转导通路与选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂调控血管平滑肌细胞(VSMC)增殖凋亡的关系,明确COX-2抑制剂作用的细胞内信号转导机制。方法:将选择性COX-2抑制剂NS-398,作用于鼠VSMCs,运用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测药物作用前后VSMCs中COX-2mRNA表达;Westernblot检测药物作用前后STAT3通路相关蛋白JAK2、STAT3、CyclinD1、Bcl-2的表达及磷酸化活性。结果:鼠VSMCs中COX-2mRNA呈高表达,NS-398呈时间、剂量依赖性方式抑制VSMCs细胞增殖,促进其凋亡。加入NS-398的VSMCs中COX-2mRNA表达水平显著下降(P<0·01)。同时P-JAK2、P-STAT3、CyclinD1、Bcl-2表达水平随作用时间延长而下降(P<0·01)。结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对VSMCs作用与COX-2mRNA水平相关,癌基因Stat3信号转导通路调控了NS-398对VSMCs作用的细胞内信号转导机制,最终通过其下游靶基因CyclinD1、Bcl-2影响VSMCs的增殖与凋亡。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3′-激酶丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3′K/Akt/FKHRL1通路的激活,对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系。方法2004-01~2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率,Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平,同时观察PI3′K/Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响。结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化。wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用,同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K/Akt通路,呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化,从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。wortmannin可以阻断PI3′K/Akt/FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3''''-激酶丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3'K/Akt/FKHRL1通路的激活,对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系.方法 2004-01～2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率,Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平,同时观察PI3'K/Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响.结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化.wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用,同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达.结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K/Akt通路,呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化,从而影响胃癌细胞的化疗耐药性.wortmannin可以阻断PI3'K/Akt/FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性.     

S-腺苷蛋氨酸对人胃癌细胞系增殖及c-myc、uPA基因甲基化的影响

目的 观察S-腺苷蛋氨酸(SAM)对体外培养的人胃癌细胞的细胞周期、凋亡以及侵袭力的影响,及对细胞中c-myc基因和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因甲基化状态及表达的影响.方法 用不同浓度(0、2、4 mmol/L)SAM处理体外培养的MKN-28、SGC-7901和MKN-45细胞72h,用流式细胞仪检测各组细胞周期分布和细胞凋亡率;Transwell法检测各组细胞侵袭力的改变;RT-PCR法检测各组细胞c-myc基因和uPA基因mRNA表达的变化;甲基化特异性PCR法检测各组细胞中c-myc基因和uPA基因的甲基化状态.结果随SAM浓度增加,3种细胞凋亡率均明显增加(P值均<0.01),侵袭力均受到明显抑制(P值均<0.01).与对照组相比,SGC-7901细胞G0/G1期细胞明显增加[(56.67±1.18)%比(74.53±2.49)%,P<0.01],细胞增殖指数(PI)明显降低[(43.33±1.18)%比(25.50±2.46)%,P<0.01].随SAM浓度增加,SGC-7901细胞c-myc和uPA基因及MKN-45细胞的uPA基因mRNA表达明显减弱(P值分别<0.05和<0.01),经SAM 4mmol/L处理的MKN-28细胞的uPA基因mRNA表达亦明显减弱(P<0.01).经SAM处理的SGC-7901细胞c-myc基因和3种细胞的uPA基因均部分甲基化或完全甲基化.结论 SAM可通过逆转SGC-7901细胞c-myc基因和3种细胞uPA基因的低甲基化状态,从而调控基因的表达,并可通过提供甲基,改善基因的低甲基化状态,达到抑制胃癌细胞生长、增殖和侵袭的作用.     

氯化两面针碱对人胃癌细胞增殖、迁移的抑制作用

目的探讨氯化两面针碱(NC)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移的作用及其机制。方法 MTT实验检测NC对SGC-7901细胞的增殖作用;Transwell小室实验检测NC对SGC-7901细胞迁移和侵袭的影响;Western印迹检测NC对人胃癌SGC-7901细胞中Bax,Bcl-2,PCNA,MMP2,MMP1和GAPDH表达的影响。结果 MTT实验表明NC抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);此外,NC显著抑制SGC-7901细胞中PCNA表达,呈剂量依赖性(P<0.05);Transwell小室实验表明NC显著抑制SGC7901细胞迁移和侵袭,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);Western印迹表明NC上调凋亡蛋白Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制MMP1以及MMP2的表达(均P<0.05)。结论 NC通过诱导细胞凋亡抑制SGC-7901细胞增殖,通过降解MMP1和MMP2从而抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移。     

IL-6/STAT3通路对THP-1单核细胞环氧化酶2表达的影响

目的探讨人THP-1单核细胞中白细胞介素6(IL-6)/信号转导与转录激活子3(STAT3)通路与环氧化酶2(COX-2)表达之间的关系。方法以人THP-1单核细胞株作为研究对象,分别设置0至48 h不同时间点,检测IL-6对STAT3磷酸化和COX-2表达的时效性影响。用100μmol/L S3I-201(STAT3通路选择性抑制剂)对THP-1单核细胞预处理24 h,再经10μg/L IL-6作用相应时间,将THP-1单核细胞分为4组:对照组、S3I-201组、IL-6组及IL-6+S3I-201组,检测STAT3磷酸化及COX-2表达水平变化。采用实时荧光定量PCR方法检测THP-1单核细胞COX-2的mRNA表达量,Western blot方法检测THP-1单核细胞STAT3磷酸化水平与COX-2的蛋白表达量。结果THP-1单核细胞经IL-6作用后STAT3的磷酸化及COX-2的表达均出现时效性激活,IL-6刺激5 min后STAT3磷酸化水平即显著增加(P0.001),同时COX-2 mRNA和蛋白水平均明显上调,分别于1 h和2 h达到峰值(P0.001)。与对照组相比,S3I-201组COX-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P0.01);与IL-6组相比,IL-6+S3I-201组STAT3磷酸化水平下降(P0.001),COX-2 mRNA表达水平降低(P0.001),同时COX-2蛋白表达受到明显抑制(P0.05)。结论 IL-6能够激活THP-1单核细胞STAT3通路,其可能通过催化下游COX-2的表达影响动脉粥样硬化性疾病进程。     

环氧合酶-2、核因子-κB在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶（COX）-2、核因子（NF）-κB在胃癌及异型增生中的表达，并研究尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响。方法采用免疫组化Powervi-sionTM两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中COX-2、NF-κB的表达进行检测；在体外实验中对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养，MTT法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用，免疫组化、Western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响。结果COX-2、NF-κB在胃癌中的阳性表达率分别为66．67％、59．52％，均高于异型增生（P〈0．05），COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关（P〈0．05），并与NF-κB的表达相关（P〈0．05），COX-2与肿瘤浸润深度正相关（P〈0．05）。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性；与阴性对照组相比，药物作用48h后尼美舒利100、200 μmol／L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P〈0．05），COX-2、NF-κB之间正相关（P〈0．05）。结论COX-2、NF-κB与胃癌的发生转移相关，并且NF-κB蛋白作为上游调控因子调节COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖，抑制COX-2、NF-κB的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

胃泌素对胃癌细胞EMT和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响

目的探讨高表达胃泌素(gastrin)对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法用gastrin过表达质粒pcDNA3-gastrin及空载体pcDNA3.1转染胃癌细胞SGC-7901、MKN45,48 h后收集细胞蛋白,Western印迹检测鉴定gastrin表达,检测EMT相关标志物E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、Snail及wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路相关基因wnt3α、β-catenin、c-myc的蛋白表达变化。结果在SGC-7901、MKN45细胞中成功过表达gastrin。与pcDNA3.1空载体转染组相比,pcDNA3.1-gastrin转染SGC-7901、MKN45细胞中上皮标志蛋白E-cadherin表达下调,间质标志蛋白N-cadherin、Snail表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);同时Wnt/β-catenin通路蛋白相关蛋白wnt3α、β-catenin及其下游基因c-myc的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达gastrin能够激活Wnt/β-catenin信号通路和促进胃癌细胞SGC-7901和MKN45发生EMT。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3′-激酶 丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3′K／Akt／FKHRL1通路的激活，对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系。方法2004-01-2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率，Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平，同时观察PI3′K／Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响。结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化。wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用，同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K／Akt通路，呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化。从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。wortmannin可以阻断PI3′K／Akt／FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

PFKFB3基因增强阿帕替尼对胃癌凋亡的影响及机制

[目的]探讨沉默PFKFB3基因对阿帕替尼处理的胃癌细胞凋亡的影响及机制。[方法]通过Western blotting检测人胃黏膜上皮细胞株GES1及SGC-7901、BGC823和MKN45胃癌细胞PFKFB3蛋白表达。将PFKFB3特异性siRNA(si-PFKFB3)转染SGC-7901细胞,Western blotting检测转染效果。MTT法检测转染siPFKFB3或不同浓度(10、20、30、40μmol/L)阿帕替尼处理SGC-7901细胞48h的细胞活力。流式细胞术检测转染si-PFKFB3或/和40μmol/L阿帕替尼处理SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率,Western blotting检测Bcl-2、Bax、PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达。[结果]与对照GES1细胞相比,PFKFB3在SGC-7901、BGC823和MKN45胃癌细胞中的表达均明显升高(P0.05)。si-PFKFB3转染SGC-7901细胞后,PFKFB3蛋白表达明显降低(P0.05)。转染si-PFKFB3及不同浓度阿帕替尼均可抑制SGC-7901细胞活力,阿帕替尼对细胞活力抑制呈现浓度依赖性(P0.05)。转染si-PFKFB3及阿帕替尼均可诱导SGC-7901细胞凋亡,下调Bcl-2、PI3K和p-AKT表达,上调Bax表达,二者合用对SGC-7901细胞凋亡诱导更明显(P0.05)。[结论]沉默PFKFB3基因表达可明显增强阿帕替尼对胃癌细胞的凋亡诱导作用,机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。