蟾毒灵介导JNK信号通路诱导人胰腺癌细胞的凋亡

目的:研究蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡以及凋亡相关基因表达的JNK信号转导通路,揭示其抗胰腺癌的部分机制.方法:MTT法观察蟾毒灵对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长抑制作用;0.16、0.32、0.64mg/L蟾毒灵分别作用人胰腺癌BxPC-3细胞48h后,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞周期和细胞凋亡;Western印迹法检测蟾毒灵作用BxPC-3细胞后SAPK/JNK信号通路的激活情况,荧光定量PCR检测Survivin基因mRNA的表达水平;并比较阻断JNK信号通路后丹参酮ⅡA对胰腺癌细胞凋亡Survivin基因mRNA的表达.结果:MTT法测得蟾毒灵对人胰腺癌BxPC-3细胞具有显著的抑制作用,其作用效果与剂量和作用时间成正相关;0.16、0.32、0.64mg/L浓度蟾毒灵作用人胰腺癌细胞后的细胞凋亡率分别为19.36%±0.39%、40.69%±0.44%、59.63%±1.14%,与对照组2.24%±0.37%比较均有显著性差异(P<0.01);蟾毒灵作用人胰腺癌细胞1h后JNK信号通路被激活,2h达峰值;阻断JNK信号通路后,凋亡率明显降低(P<0.01);0.32mg/L蟾毒灵作用人胰腺癌细胞48h后Survivin mRNA的表达明显下降;阻断JNK信号通路后,蟾毒灵作用人胰腺癌细胞的Survivin mRNA的表达明显上升.结论:蟾毒灵通过JNK信号转导通路下调人胰腺癌BxPC-3细胞Survivin mRNA的表达,可能是其诱导胰腺癌细胞凋亡的机制.     

mTOR/PKM2和STAT3/c-Myc信号通路串话调节胃癌能量代谢和酸性微环境的机制研究

背景:c-Myc和PKM2在多种肿瘤中高表达,但m TOR/PKM2和STAT3/c-Myc信号通路对胃癌调节作用的研究不多见。目的:探讨m TOR/PKM2和STAT3/c-Myc信号通路串话调节胃癌能量代谢和酸性微环境的机制。方法:PKM2和c-Myc慢病毒转染人胃癌AGS和HGC-27细胞,构建敲减PKM2、c-Myc的细胞模型。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测PKM2、c-Myc、LDHA、STAT3、p-STAT3、GLUT-1 mRNA和蛋白表达,比色法检测乳酸和葡萄糖水平。结果:PKM2和c-Myc表达在胃癌细胞中上调。敲减c-Myc可抑制胃癌细胞增殖能力,细胞迁移能力明显降低,LDHA、GLUT-1蛋白表达明显降低,葡萄糖和乳酸含量明显降低。共同敲减PKM2和c-Myc对胃癌细胞增殖能力和糖酵解代谢的抑制作用更明显。m TOR/PKM2与STAT3/c-Myc信号通路之间存在相关性。结论:PKM2联合c-Myc可能成为胃癌新的治疗靶点。     

茵陈蒿汤抑制JAK2/STAT3信号通路调控肝癌细胞增殖与凋亡

目的探索茵陈蒿汤的抗肝癌作用及其机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞,分为对照组和茵陈蒿汤低、中、高浓度(12.5、25、50μg/mL)组。通过CCK-8检测细胞活力、EdU染色观察茵陈蒿汤对HepG2肝癌细胞增殖的影响,钙黄绿素/PI细胞染色观察茵陈蒿汤对肝癌细胞存活能力的影响。通过Western blot检测茵陈蒿汤对肝癌细胞内JAK2/STAT3信号通路及其下游细胞增殖和抗凋亡相关靶蛋白的变化。结果CCK-8和EdU染色结果发现与对照组相比,茵陈蒿汤治疗降低了HepG2细胞的细胞增殖能力。钙黄绿素/PI细胞染色结果发现茵陈蒿汤减弱细胞存活能力,诱导肝癌细胞死亡。最后,Western blot结果显示茵陈蒿汤显著抑制HepG2肝癌细胞内JAK2/STAT3信号通路的激活,同时进一步抑制了JAK2/STAT3信号通路下游增殖相关蛋白Cyclin D1、c-Myc以及抗凋亡相关蛋白Mcl-1、Bcl-XL的表达水平。结论茵陈蒿汤通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

大黄提取物激活p38MAPK促进HepG2肝癌细胞凋亡

目的 探讨中药大黄提取物对HepG2肝癌细胞增殖与凋亡的影响和作用机制。方法 采用MTS、平板克隆形成实验、钙黄绿素/PI染色观察大黄提取物对HepG2肝癌细胞活性的影响,然后通过Hoechst33342/PI染色观察大黄提取物对肝癌细胞凋亡的影响,最后采用蛋白印迹检测大黄提取物对肝癌细胞内p38MAPK以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的影响。结果 MTS、平板克隆形成实验、钙黄绿素/PI染色提示大黄提取物显著抑制肝癌细胞的活性。Hoechst33342/PI染色提示大黄提取物能够浓度依赖性地促进肝癌细胞凋亡。此外,大黄提取物处理后显著增加肝癌细胞内p38MAPK的磷酸化水平,上调凋亡相关蛋白Bax的表达水平并下调Bcl-2表达。使用p38MAPK抑制剂能部分减弱大黄提取物的抗肝癌作用。结论 大黄提取物具有抑制肝癌细胞活性的作用,其作用机制可能是通过激活p38MAPK信号通路诱导肝癌细胞凋亡发挥的。     

丹参酮ⅡA介导p38MAPK信号转导诱导人肝癌细胞凋亡

目的: 研究丹参酮ⅡA诱导人肝癌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的p38MAPK信号转导通路, 揭示其抗肝癌的部分机制.方法: 4、8、16 mg/L丹参酮ⅡA分别作用人肝癌SMMC-7721细胞48 h后, 免疫荧光染色观察细胞凋亡情况; 琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞特征性DNA条带; 流式细胞仪法(Flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡和细胞周期; 荧光定量PCR检测Fas和Caspase-3基因mRNA的表达水平; 并比较阻断p38MAPK信号通路后丹参酮ⅡA对肝癌细胞凋亡和Fas和Caspase-3基因mRNA的表达.结果: 丹参酮ⅡA作用48 h后, 荧光显微镜下观察到经Hoechst染色的典型凋亡细胞. 琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞DNA呈规律性的梯状条带. 4、8、16 mg/L浓度丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞后的细胞凋亡率分别为12.83%±1.51%, 17.86%±2.70%和29.24%±7.58%, 与对照组6.30%±2.08%比较均有显著性差异( P<0.01); 阻断p38MAPK信号通路后, 凋亡率和G0/G1期细胞比例明显降低( P<0.01). 8 mg/L丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞48 h后Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显上升; 阻断p38MAPK信号通路后, 丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞的Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显下降.结论: 丹参酮Ⅱ A 能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡, 阻滞肝癌细胞于G0/G1期. 通过p38MAPK信号转导通路上调Fas、Caspase-3 mRNA的表达可能是其诱导肝癌细胞凋亡的重要机制.     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

三氧化二砷通过Akt信号通路抑制HGC-27细胞的增殖并促进其凋亡

目的探讨三氧化二砷对HGC-27细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法用1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷作用于胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901,同时以只加入二甲基亚砜(DMSO)溶液的细胞作为对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,筛选出受到抑制作用最大的细胞继续研究,并计算三氧化二砷半数抑制浓度。用三氧化二砷半数抑制浓度作用于人胃癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平。用50 ng/ml的Akt信号通路激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及半数抑制浓度的三氧化二砷联合作用于人胃癌细胞作为联合组,以半数抑制浓度的三氧化二砷作用组作为对照,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测Cleaved Caspase-3、Akt、p-Akt表达水平。结果 1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷能够抑制胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901的生长,抑制作用从强到弱依次为:HGC-27、MKM28、SGC7901,半数抑制浓度依次为:(9.34±1.57)μmol/L、(12.92±1.08)μmol/L、(13.24±1.34)μmol/L,后续实验选用9μmol/L的三氧化二砷作用于HGC-27细胞。9μmol/L的三氧化二砷作用后细胞凋亡率从(6.35±2.14)%提高到(39.32±6.54)%,细胞中Cleaved Caspase-3升高,p-Akt水平降低。联合组细胞较单用三氧化二砷组细胞增殖能力增强,细胞凋亡数量减少,细胞中Cleaved Caspase-3水平降低,p-Akt水平升高。结论三氧化二砷能够抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,激活Akt信号通路能够部分逆转三氧化二砷对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。     

JAK/STAT3信号通路及其在胃肠道疾病中作用的研究进展

JAK/STAT3信号通路广泛存在于机体各个组织中,介导细胞增殖、分化、迁移、凋亡、免疫调节等多种生物学过程。近年研究发现该通路激活在胃肠道疾病中起重要作用,可促进胃癌、结直肠癌生长和肿瘤血管生成,并抑制肿瘤细胞凋亡,同时参与炎症性肠病的发生。针对JAK/STAT3信号通路的抑制剂在一些疾病模型中显示出良好的疗效。本文就相关研究进展作一综述。     

PI3K/AKT信号转导系统在土槿皮乙酸诱导胃癌细胞凋亡中的作用

以不同浓度的土槿皮乙酸(PAB)分别处理BGC823细胞24 h,采用MTT法检测PAB对细胞增殖抑制作用,PI染色检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blot法检测PAB对Caspase-3剪切片断及PI3K与Akt通路相关蛋白表达的影响.结果 发现,PAB对BGC823细胞的增殖具有显著的抑制作用,呈剂量及时间依赖性.Caspase-3蛋白出现断裂片断,并随着浓度的增加断裂更明显,磷酸化PI3K/AKT开始降低,72 h降低最明显,而非磷酸化的PI3K/AKT无明显改变.认为PAB具有明显的细胞毒作用,通过PI3K/AKT途径激活Caspase-3诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖.     

AG490对胃癌细胞株SGC-7901细胞周期、凋亡和STAT3表达的影响

背景：JAK2酪氨酸激酶特异性抑制剂AG490可抑制胃癌细胞生长,但目前对其作用机制还知之甚少。目的：探讨AG490对胃癌细胞株SGC-7901细胞周期、凋亡和STAT3 mRNA表达的影响。方法：以不同浓度AG490处理胃癌细胞株SGC-7901,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,RT-PCR法检测STAT3 mRNA表达。结果：胃癌细胞株SGC-7901经AG490作用48 h后,100μmol/L组的S期、G2/M期细胞比例显著增加（P〈0.01）,1μmol/L组和10μmol/L组仅G2/M期细胞比例显著下降（P〈0.05）。AG490作用48h后,各浓度组的细胞凋亡率均显著增加（P〈0.01）。AG490作用24 h和48 h后,各浓度组的STAT3 mRNA表达均无明显变化（P〉0.05）。结论：AG490可影响胃癌细胞株SGC-7901的细胞周期并诱导细胞凋亡,但不影响STAT3 mRNA的表达。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法 MGC-803细胞增殖抑制率测算采用MTT法;EGCG作用后,MGC-803细胞凋亡变化采用AO/EB荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测,细胞有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族3个主要信号分子JNK、ERK、p38的磷酸化水平用Western blot法检测。结果 EGCG对MGC-803细胞生长具有明显的抑制作用,呈时间和剂量依赖性效应(P均<0.05),并可见明显的细胞凋亡特征。100、200μmol/L的EGCG作用24 h后,其细胞DNA在琼脂糖凝胶上可见特征性的阶梯状条带。50、100、200μmol/L的EGCG作用于MGC-803细胞24 h后,细胞DNA出现明显的亚二倍体峰。EGCG抑制人胃癌MGC-803细胞中ERK的活性,并在一定程度上提高p38和JNK的活性。结论 EGCG可抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,并诱导其凋亡。其机制与EGCG抑制MGC-803细胞中ERK活性、提高p38和JNK的活性有关。     

ARG1基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路的影响

目的观察ARGl基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路表达的影响,探讨其在肿瘤细胞耐药中的作用。方法取pcDNA3．1-ARG1．293T细胞（观察组）、pcDNA3．1-293T细胞（空白组）、293T细胞（对照组）,均以0、1、4、8μmol／L的NaAsO,染毒处理48h,采用Westernblot检测JNK、ERK蛋白。结果JNK表达量在转染前后各组均随着NaAsO,浓度的升高而增加,但观察组JNK明显低于空白组、对照组（P均〈0．05）;观察组ERK表达量在NaAsO：浓度1、4μmol／L随浓度升高而增加,在8μmol／L表达量有所下降,但各浓度仍均高于空白组、对照组（P均〈0．05）。结论ARG1基因可能通过参与ERK信号通路的激活,抑制JNK信号通路的表达,破坏MAPK信号通路对细胞增殖凋亡的精确调节,参与肿瘤细胞耐药的产生。     

基于STAT3信号通路探讨槲皮素对宫颈癌HeLa细胞的体外抗肿瘤机制

目的 基于信号转导子与转录激活子(STAT)3信号通路探讨槲皮素对宫颈癌HeLa细胞的体外抗肿瘤机制。方法 取0、20、40、60、80μmol/ml浓度的槲皮素分别分为对照组、A组、B组和C组,以适宜的条件培养人宫颈癌Hela细胞48 h,检测细胞增殖、凋亡、侵袭和细胞中STAT3。结果 随着槲皮素浓度的增加细胞增殖率逐渐减小;凋亡率升高、侵袭数减少,STAT3蛋白及磷酸化水平下调,各组两两比较差异显著(P<0.05)。结论 槲皮素可能通过调控Janus激酶(JAK)2/STAT3信号通路来抗肿瘤的。     

小干扰RNA抑制胃癌细胞环氧合酶-2的表达

目的 观察瞬时转染环氧合酶-2特异性小干扰RNA(COX-2 siRNA)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响,探讨COX-2在胃癌发生中的作用和RNA干扰方法 对肿瘤的治疗作用.方法 以胃癌细胞系SGC7901为研究对象,瞬时转染COX-2 siRNA,转染后72 h用RT-PCR方法 分别检测COX-2siRNA组、无意义siRNA组及空白对照组的COX-2 mRNA表达;免疫组化法与Western blot检测3组细胞的COX-2蛋白质的表达;流式细胞仪检测3组的细胞周期和凋亡情况.转染后1周内每天同一时间用噻唑蓝比色分析法(MTr)检测3组癌细胞的活力并计算癌细胞的相对生存率.结果 COX-2siRNA对胃癌细胞中COX-2 mRNA及蛋白表达均有明显抑制作用,胃癌细胞增殖受到抑制,凋亡增加,但细胞周期分布无明显变化.结论 在胃癌细胞中,COX-2表达的抑制可降低胃癌细胞的增殖速度,促进肿瘤细胞凋亡,COX-2在胃癌的发生中可能具有重要作用.     

大蒜素促进人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的机制

目的探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的相关机制。方法人子宫内膜癌细胞株RL-952经大蒜素或Janus激酶/信号传导及转录液活因子(JAK/STAT3)通路抑制剂AG490共培养后,MTT比色法检测药物对TL-952肿瘤细胞的抑制率;采用Real-time PCR和酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞中JAK/STAT3信号转导通路相关蛋白或mRNA及细胞凋亡蛋白的表达情况。结果大蒜素能够剂量和时间依从性地抑制人子宫内膜癌细胞株RL-952的增殖;且大蒜素和AG490孵育人子宫内膜癌RL-952细胞株后细胞内JAK/STAT3转导通路相关蛋白JAK和STAT3的表达明显减弱,同时促细胞凋亡蛋白Bax、P53的表达明显增高、抑制凋亡蛋白Bcl2表达明显降低,且与对照组细胞差异显著(P0.01)。结论大蒜素能够有效抑制肿瘤细胞增殖的作用,且其可能的机制是通过抑制JAK/STAT3信号转导通路实现。     

熊果酸通过AMPK/STAT3/COX-2信号通路抑制胃癌细胞增殖

背景:前期研究发现,熊果酸通过下调环氧合酶2(COX-2)表达抑制胃癌细胞增殖,但熊果酸抑制COX-2表达的分子机制尚未完全明确。目的:探讨单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/信号转导与转录活化因子3(STAT3)/COX-2信号通路在熊果酸抑制胃癌细胞增殖中的作用。方法:构建AMPK-pLVX、AMPK-shRNA、STAT3-pLVX、STAT3-shRNA质粒,分别转染胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45,并给予不同浓度或不同培养时间的熊果酸进行培养。以蛋白质印迹法检测磷酸化AMPK、磷酸化STAT3和COX-2表达,CCK-8法检测胃癌细胞增殖。结果:在SGC-7901和MKN-45细胞中,熊果酸呈剂量和时间依赖性地促进AMPK磷酸化、抑制STAT3磷酸化和COX-2表达。敲除AMPK基因能阻断熊果酸抑制STAT3磷酸化和COX-2表达的作用,过表达STAT3基因能逆转熊果酸抑制COX-2表达的作用。敲除AMPK基因和过表达STAT3基因均可逆转熊果酸抑制胃癌细胞增殖的作用。结论:熊果酸可能通过AMPK/STAT3通路下调COX-2表达而抑制胃癌细胞增殖。     

质子泵抑制剂抑制糖酵解和谷氨酰胺代谢影响胃癌细胞增殖、凋亡机制的研究

背景:已有研究发现质子泵抑制剂(PPI)可抑制空泡型质子泵(V-ATPases)表达、影响胃癌细胞糖酵解水平。V-ATPases对肿瘤恶性生物学行为具有重要意义。目的:探讨PPI通过抑制糖酵解和谷氨酰胺代谢作用于胃癌的机制。方法:在细胞实验部分,对胃癌细胞株进行PPI加药处理并沉默相关分子,以CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,定量PCR和蛋白质印迹法分别检测mRNA和蛋白表达。在动物实验部分,将裸鼠分为空白对照组、0.9%Na Cl溶液灌胃组、泮托拉唑钠溶液灌胃组、PKM2干扰组,观察小鼠体质量、摄食行为、肿瘤大小以及肿瘤组织内相关通路分子表达情况。结果:PPI可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡; PPI可抑制胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢相关分子表达;干扰PKM2或PI3K均可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;沉默V-ATPases可抑制胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢相关分子表达。PPI灌胃治疗荷瘤小鼠可延缓肿瘤生长、缓解小鼠恶病质情况。结论:PPI可抑制V-ATPases和PI3K信号通路表达,进而影响胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢水平,影响胃癌细胞增殖和凋亡水平,从而发挥抗肿瘤作用。     

JNK MAPK信号通路在食管癌细胞系Eca-109细胞中的作用机制

目的探讨c-jun氨基末端激酶1/2（c-jun N-teuninal kinase,JNK 1/2）信号通路在食管癌细胞系Eca-109细胞中的作用。方法体外培养Eca-109细胞,以特异性JNK信号转导通路抑制剂SP600125处理Eca-109细胞;RT-PCR的方法检测JNK1和JNK2基因的表达,Western blot法检测JNK和p-JNK蛋白的表达,MTT（3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2,5-di-phenyltetrazolium bromide）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Eca-109细胞经SP600125分别处理24h和48 h后,分别与对照组比较,JNK1 mRNA的表达无统计学差异（均P〉0.05）,JNK2 mRNA的表达也无统计学差异（均P〉0.05）,但活化的JNK即P-JNK1/2蛋白的表达显著减少,细胞的增殖显著被抑制,细胞的凋亡率有统计学差异（均P〈0.05）。结论 JNK信号通路可能在Eca-109细胞的发生发展中发挥重要作用。     

雷公藤甲素干预C5b-9诱导足细胞损伤的体外研究

目的:体外观察雷公藤甲素对膜攻击复合物C5b-9介导的足细胞损伤的影响,探讨雷公藤甲素治疗膜性肾病的疗效机制. 方法:以纯化的C5b6及C7～C9体外组装C5b-9,建立足细胞亚溶破模型.免疫荧光染色分析C5b-9对足细胞骨架相关蛋白F-actin表达和分布的影响;在观察雷公藤甲素对C5b-9导致的足细胞损伤的治疗机制研究中,免疫荧光观察和流式细胞仪定量分析雷公藤甲素对C5b-9在足细胞膜上组装和活性的影响.并进一步在C5b-9组装完成后加入雷公藤甲素,观察雷公藤甲素对C5b-9诱导的足细胞内活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.流式细胞仪分析荧光探针CM-H2DCFDA标记的细胞内ROS,MAPK信号通路的活性采用Western blot检测p-38,ERK 1/2和JNK MAPK磷酸化水平,以及MAPK信号通路选择性阻断剂SB202190,U0126和SP600125对C5b-9作用的影响. 结果:免疫荧光和LDH释放试验显示C5b-9在足细胞膜组装成功,亚溶解剂量C5b-9对足细胞膜完整性没有明显影响,但可呈时间依赖性的破坏足细胞骨架结构,表现为细胞骨架的极性消失,排列紊乱,部分足细胞F-actin的丝状结构完全消失.C5b-9可诱导足细胞内ROS的明显增加,激活p-38 MAPK信号通路,但C5b-9对ERK MAPK和JNK MAPK信号通路没有明显的影响.抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、p-38 MAPK通路特异性抑制剂SB202190均能够拮抗C5b-9对足细胞的损伤,而ERK MAPK和JNK MAPK通路抑制剂U0126和sp600125对C5b-9诱导的足细胞损伤没有明显的保护作用.雷公藤甲素(10ng/ml)对C5b-9复合物在足细胞膜上组装量和活性没有明显的影响.当C5b-9在足细胞膜上组装完成后加入雷公藤甲素,雷公藤甲素对C5b-9诱导的细胞内ROS的产生没有明显的抑制作用,但能够有效遏制p-38 MAPK信号通路的活化,p-38 MAPK的磷酸化水平显著降低. 结论:雷公藤甲素的疗效机制除了免疫抑制和抗炎作用外,还可通过抑制C5b-9激活的细胞内p-38 MAPK信号通路发挥直接的足细胞保护作用.雷公藤甲素对足细胞的上述作用可能部分参与了其对膜性肾病的疗效.     

曲古霉素A对人胃癌细胞的抑制作用及其机制探讨

背景：组蛋白去乙酰基酶抑制剂（HDACi）是一类新型抗肿瘤药物。曲古霉素A（TSA）是目前研究最为广泛的HDACi之一,已发现其对多种肿瘤细胞具有明显抑制作用,但关于TSA对胃癌作用的研究尚少。目的：观察TSA对人胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期以及相关基因表达的影响,探讨其抑制人胃癌细胞的可能作用机制。方法：以不同浓度TSA（0—1μmol／L）处理人胃癌细胞株AGS和HGC-27。CCK-8实验检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,realtimeRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡、细胞周期相关基因mRNA和蛋白水平的表达。结果：TSA能剂量依赖性地抑制AGS、HGC-27细胞增殖（P=0．000）,对两者的半数致死浓度分别约为0．25μmol／L和0．5μmol／L。TSA能诱导AGS、HGC-27细胞发生G0／G1期和G2／M期阻滞,以G0／G11期阻滞更为明显。TSA对AGS细胞的诱导凋亡作用强于HGC-27细胞（P〈0．05）。TSA尚能上调p21、p53、BaxmRNA和蛋白表达,下调Bel-2、CDK2、cyelinD1mRNA和蛋白表达,作用均呈时间依赖性（P〈0．05）。结论：TSA抑制人胃癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用可能是通过调节细胞凋亡、细胞周期相关分子、激活多种肿瘤相关信号通路实现的。