异烟肼在电化学预处理玻碳电极上的电化学行为及其痕量测定

目的:研究异烟肼在电化学预处理玻碳电极上的电化学响应。方法:采用三电极系统,以电化学预处理玻碳电极为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂电极为对电极,用循环伏安法研究异烟肼的电化学行为。结果:异烟肼在预处理的玻碳电极上产生两个不可逆的还原峰,电位分别为-0.80V和-0.90V,其过程是一个表面吸附过程。发现在-0.90V出现的还原峰的峰电流与异烟肼的浓度在1.2×10-10~1.3×10-3mol/L的范围内成线性关系。异烟肼的检测限低达1.2×10-11mol/L(ta=40 s,S/N=3),平行8次测定1.2×10-6mol/L异烟肼的相对标准偏差为4.5%。在B ritton-Rob inson(B-R)缓冲溶液和在模拟尿样中的回收率分别为(101.7±3.8)%和(96.3±3.3)%。结论:该方法可灵敏测定微量异烟肼,可用于临床结核病患者药物浓度的监测。     

纳米金修饰玻碳电极测定痕量邻苯二酚

目的:建立纳米金修饰玻碳电极(AuNPs/GC)测定痕量邻苯二酚的新型检测方法.方法:采用循环伏安法研究了邻苯二酚在该电极上的电化学行为.考察了支持电解质的pH、沉积电位对邻苯二酚响应值的影响.结果:AuNPs/GC电极对邻苯二酚有很强的电催化作用.在优化的实验条件下,邻苯二酚的氧化峰电流在1.0×10-6~1.0×10-4 mol/L浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9997,检出限为3.0×10-8 mol/L.相对标准偏差为2.7%(5.0×10-5 mol/L邻苯二酚,n=10).结论:该修饰电极制备简便,具有良好的稳定性,将其用于环境水样中邻苯二酚含量检测结果满意.     

尿酸在活化玻碳电极上的电化学行为及其分析应用

目的探讨利用微分脉冲伏安技术测定全血中尿酸的电化学分析方法。方法玻碳电极在1mol/LNaOH溶液中活化,用循环伏安法研究尿酸在活化玻碳电极上的氧化还原特性,用微分脉冲伏安法直接测定尿酸的含量。结果在0.1mol/L的醋酸缓冲溶液中(pH5.0),尿酸在活化玻碳电极上于0.484V处产生一个灵敏的氧化峰。微分脉冲伏安法测定其氧化峰电流与尿酸的浓度在5.0×10-6～2.0×10-4mol/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9989,检出限为1.0×10-6mol/L。能在抗坏血酸存在下同时测定尿酸。结论方法操作简单方便,重现性较好,用于人血中尿酸的测定,结果令人满意。     

氧化石墨烯/壳聚糖修饰玻碳电极同时测定己烯雌酚和辛基酚

目的:建立同时测定己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)和辛基酚(octylphenol,OP)的电化学方法。方法:通过自组装技术将氧化石墨烯(graphene oxide,GO)组装到壳聚糖修饰的玻碳电极表面,构建GO-壳聚糖修饰玻碳电极,用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究DES和OP在该修饰电极上的电化学行为及其测定,利用Origin8软件多峰曲线拟合分析实验数据。结果:在p H 7.0磷酸盐缓冲溶液中,同时测定DES和OP的线性范围分别为3.31×10-7~1.24×10-5 mol/L和2.89×10-7~9.50×10-6mol/L,检测限为7.56×10-8 mol/L。且该修饰电极具有良好的重复性和稳定性。结论:GO/壳聚糖修饰玻碳电极测定酚类环境刺激素具有简单、快速等优点,可同时测定DES和OP的混合样品。     

多巴胺在聚刚果红修饰电极上的伏安行为及其测定

目的　研究多巴胺 (DA )在聚刚果红修饰电极上的伏安行为 ,建立 DA含量测定方法。　方法　用循环伏安法制备聚刚果红修饰玻碳电极 ,以循环伏安法与差示脉冲伏安法研究 DA在修饰电极上的电化学行为及其含量测定方法。　结果　聚刚果红修饰电极对 DA有明显的电催化作用。在 p H 3.0磷酸盐缓冲液中 ,氧化峰电流与 DA浓度在 5× 10 - 6 ～ 1.2 5× 10 - 4mol/ L范围内呈良好的线性关系 ,检测限为 2× 10 - 6 mol/ L。　结论　聚刚果红修饰电极可有效消除抗坏血酸对 DA测定的干扰 ,能用于实际样品中 DA的含量测定。     

玻碳汞膜电极吸附溶出伏安法测定人发中锗

本文报道了锗-连苯三酚体系在玻碳汞膜电极上的吸附伏安法。该法采用电化学沉积和吸附富集两个步骤,灵敏度好,检测限可达3.4×10~(-9)mol/L。选择了测定痕量锗的实际可用的条件。初步探讨了反应机理,认为该体系的极谱波是一种由配体吸附所产生的吸附波。实测人发中锗,回收率为92.6±3.5％((?)±s),变异系数CV=3.82％。     

羧基化多壁碳纳米管修饰电极伏安法测定多巴胺

目的 :研究用羧基化多壁碳纳米管修饰电极伏安法测定痕量多巴胺 (DA)的效果。方法 :采用涂布法制成羧基化多壁碳纳米管修饰电极 ;在pH =5 .4的KH2 PO4 Na2 HPO4缓冲溶液中 ,采用该修饰电极伏安法测定DA。结果 :该修饰电极对DA有着显著的电催化作用 ,与裸玻碳电极相比较 ,其灵敏度大大提高 ,在2 .0× 10 -7～ 6 .0× 10 -4mol/L浓度范围内 ,DA的氧化峰电流与浓度成良好的线性关系 ,检测限为 5 .0× 10 -8mol/L。将该修饰电极用于盐酸多巴胺针剂的测定 ,相对平均偏差为 1.4 % ,平均回收率为 99.2 %。结论 :该修饰电极响应快 ,灵敏度高 ,稳定性好 ,寿命长 ,适合于具有电活性生物分子的测定     

丁二酮肟碳糊化学修饰电极溶出伏安法测定人发中微量镍、钴的研究

研究了在丁二酮肟碳糊化学修饰电极上测定人发中微量镍、钴的可行性,经化学富集Ni(Ⅱ)和电化学富集Co(Ⅱ),阴极溶出伏安法测定,Ni(Ⅱ)、Co(Ⅱ)在该电极上均有良好的响应,探讨了有关实验条件。该法对镍、钴的检测限分别可达1.0×10~(-9)mol/L和4.2×10~(-10)mol/L,应用于头发中微量镍,钴的测定,结果满意。     

槐定碱的电化学反应机制与分析

目的:探讨槐定碱在玻碳电极上的电化学反应机制及分析方法.方法:在硼酸-氯化钾-碳酸钠(A-P)缓冲溶液(pH 7.4)中,采用循环伏安、计时电量、恒电位电解并结合紫外光谱法研究槐定碱在玻碳电极上的电化学反应机制,利用差示脉冲伏安法建立槐定碱的电化学分析方法.结果:槐定碱在玻碳电极上产生一不可逆的氧化峰,峰电位为0.875 V,是两电子两质子的不可逆扩散氧化波,电荷转移系数为0.44,电极表观电子传递速率常数为7.12 × 10-3s-1;扩散系数为2.16 × 10-5 cm2/s;其峰电流与槐定碱浓度在8.0 × 10-6～3.0 × 10-4 mol/L范围内呈线性关系,检出限为2.0 × 10-6mol/L.结论:推导出了槐定碱的电极反应机制,可用于模拟生物样品中槐定碱的含量测定,结果满意.     

诺氟沙星的电化学行为及其含量分析

目的:研究诺氟沙星在玻碳电极上的电化学行为并对其含量进行测定.方法:在氨-氯化铵底液中,以扫描电压范围为0～-1.2V,扫描速度为50mV·s-1,在电化学工作站上进行循环伏安实验和本体电解.结果:诺氟沙星在玻碳电极上产生一灵敏的还原峰,峰电位为-1.1V(vs.Ag/AgCl).诺氟沙星在玻碳电极上的还原是一个两电子的不可逆过程.诺氟沙星在1×10-4～5×10-6mol·L-1浓度范围内与还原峰电流呈良好的线性关系,检测限为6×10-7mol·L-1.结论:对诺氟沙星样品进行测定,获得满意结果,为NFLX提供了一种简单有效的检测方法.     

ATRA诱导肺癌细胞株A549分化与凋亡

目的:体外研究维甲类化合物的衍生物ATRA对A549肺癌细胞株作用,探讨ATRA对肿瘤防治作用的可能机制。方法:取对数生长期的常规培养的肺癌A549细胞用于试验,试验分1×10-5mol/L,1×10-6mol/L,1×10-7mol/L三组药物浓度和对照及空白对照5组,加药48h进行MTT测定,第6 d对1×10-5mol/L,1×10-6mol/L及对照组细胞进行流式细胞检测,并对1×10-5mol/L,1×10-6mol/L浓度进行电镜观察。结果:不同浓度ATRA对细胞增殖有明显地抑制作用,与阴性对照组比较,有统计学意义(P<0.01)。增殖抑制有良好剂量效应关系,(r=0.968),细胞阻滞于G0/G1期,高浓度组电镜下见凋亡细胞。结论:ATRA可诱导A549细胞分化及凋亡,为临床应用ATRA化学预防肺癌提供理论依据。     

碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及其信号机制。方法:全骨髓贴壁法培养MSCs,流式细胞仪分析其表面MSCs标记(CD45、CD34、CD90、CD29)以及成骨、成脂肪等多向诱导分化潜能,鉴定其特征。MTT法分析不同浓度bFGF对MSCs增殖的影响,确立最佳浓度bFGF诱导MSCs增殖的时间特征,分别以磷脂酰肌醇3-激酶、促分裂素原活化蛋白激酶、磷脂酶C、蛋白激酶C、钙通道和钙泵选择性抑制剂等处理P3MSCs后,观察其对bFGF介导MSCs增殖的影响。结果:培养的MSCs表现CD90、CD29强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;bFGF诱导MSCs增殖呈时间和剂量依赖特征,5.4×10-4mol/L bFGF作用48 h时MSCs增殖达峰值;磷脂酶C阻断剂U73122、钙通道阻断剂和选择性蛋白激酶C阻断剂等明显抑制了bFGF所介导的MSCs增殖效应;尤其是非选择性PKC抑制剂Straurosporine、钙泵选择性抑制剂thapsigargin以及蓝尼定受体抑制剂Ryandoine均抑制bFGF所诱导的MSCs增殖。结论:bFGF通过Ca2+/PKC/Erk1/2途径促进MSCs的增殖。     

香草醛缩氨基均三唑席夫碱对肝癌细胞分化相关酶和蛋白的影响

目的:研究香草醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用。方法:用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与SMMC-7721细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;镜下观察细胞形态改变;采用酶联免疫法检测细胞甲胎蛋白含量,金氏法检测细胞碱性磷酸酶活性的变化。结果:LH-37在1×10-5~1×10-3mol/L的浓度范围均能抑制细胞增殖且抑制率随浓度的的增加而增高(P<0.05或P<0.01),细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转,1×10-5mol/L和1×10-6mol/L的LH-37均可使细胞甲胎蛋白含量明显下降,碱性磷酸酶活性明显升高。结论:香草醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌SMMC-7721细胞具有抗增殖、促分化作用。     

蟾蜍灵对高糖诱导大鼠系膜细胞过表达纤维连接蛋白和结缔组织生长因子的影响

目的:观察不同浓度蟾蜍灵对高糖诱导的大鼠系膜细胞(MC)过表达FN及CTGF的影响,拟探讨其防治糖尿病肾病的可能作用?方法:体外培养MC,将细胞分为5组:正常对照组?高糖组?高糖 + 低浓度蟾蜍灵(5 × 10-9 mol/L)组?高糖 + 中浓度蟾蜍灵(5 × 10-8 mol/L)?高糖+高浓度蟾蜍灵组(5 × 10-7 mol/L)?以台盘兰拒染法检测蟾蜍灵对MC的毒性作用,48 h后,采用RT-PCR法和Western-blot法检测各组MC中FN?CTGF mRNA和CTGF蛋白的表达及其变化?结果:蟾蜍灵在5 × 10-9 ~5 × 10-7 mol/L浓度间对MC无明显细胞毒作用?48 h后,与对照组相比,高糖组CTGF mRNA和蛋白以及FN mRNA表达均显著增加(P < 0.05);高?中?低浓度蟾蜍灵干预能显著降低高糖诱导的上述指标表达,且呈浓度依赖效应(P < 0.05)?结论:蟾蜍灵能部分抑制高糖诱导的MC过表达FN,呈浓度依赖效应,其作用可能部分是通过降低促纤维化因子CTGF合成而实现,提示蟾蜍灵在DN纤维化防治领域具有进一步研究的价值?     

人血清蛋白与两种天然抗癌有效成分的相互作用

本文应用平衡透析法在pH7.4,振动频率为140～160次/min,25℃恒温条件下,研究了喜树碱和秋水仙碱两种天然抗癌有效成分与人血清蛋白的相互作用.实验结果表明,喜树碱和秋水仙碱均能透过Viskisg纤维素膜.秋水仙碱与人血清蛋白二者的浓度均为1×10~(-5)～5×10~(-5)mol/L时,其结合率几乎为零,而喜树碱与人血清蛋白则有较强的结合力;当喜树碱的浓度为1×10~(-5)～2×10~(-5)mol/L,人血清蛋白浓度条5×10~(-6)～1×10~(-4)mol/L时,结合常数为9.58×10~4mol~(-1),并且喜树碱在人血清蛋白分子上有唯一的结合部位,经荧光光法测知,该结合部位在人血清蛋白分子的U部位.     

高效液相 (HPLC) 荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度

 目的  建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)。方法  血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2-羧乙基)膦盐酸盐［tris-(2-carboxyethyl)-phosphine hydrochloride,TCEP］还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7-氟苯呋咱-4-硫酸铵盐(7-fluorobenzofurazan-4-sulfonic acid ammonium salt,SBD-F)进行衍生化反应,荧光检测器检测。色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温29 ℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5∶96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱。激发波长385 nm,发射波长515 nm。采用外标法定量。结果  Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50~800 μmol/L、4~64 μmol/L、10~160 μmol/L和2.5~40 μmol/L。Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L。各组分日内、日间精密度RSD均<12 %。平均回收率为95.01 %~116.17 %。结论  该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测。     

Effect of acetylcholine on membrane potential in toad dorsal root ganglion neurons and its underlying ionic basis

Intracellular recordings were made to investigate the responses of membrane potential to acetylcholine (ACh) on neurons in isolated toad dorsal root ganglion (DRG). In the 73 neurons examined, 67 were of type A, and the remaining 6 of type C cell. The resting membrane potential of these two types of cells was −67.5±1.3 mV (× ±SE). During the application of ACh (4 × 10^-4–6 × 10^-4 mol/L), the changes in membrane potential were as follows: 1) hyperpolarization, with amplitude of 9.1±3.0 mV (X ± SE; n = 23); 2) depolarization, with amplitude of 12.9 ±2.2 mV (X ±SE; n = 20); 3) biphasic response, i.e., hyperpolarization with amplitude of 8.0±2.4 mV (X±SE) followed by depolarization with amplitude of 10.9±2.1 mV (X±SE) (n=24); no effect (n=6). The hyperpolarization induced by ACh was blocked by superfusion with atropine (1.3 × 10^-5 mol/L; n = 23), while ACh depolarization was blocked by the mixture of d-tubocurarine (1.4 × 10^-5 mol/L) and hexamethonium (1.4 ×10^-5 mol/L) (n = 18). When ACh caused hyperpolarization, the membrane conductance wascin reased by 13.8% and the reversal potential was about -96 mV (n=3). TEA (20 mmol/L) superfusion enhanced ACh depolarization amplitude by 48.2 ±3.2 % (× ± SE;n = 6), and depressed ACh hyperpolarization amplitude by 79.4 ±4.3 % (× ± SE; n= 8).MnCl₂ (4 mmol/l) superfusion decreased the amplitudes of ACh depolarization and hyperpolarization by 54.2 ±7.2 % (X ±SE; n= 5) and by 69.2±6.4 % (X±SE; n = 14) respectively. These results suggest that the depolarization and hyperpolarization induced by ACh are mediated by nicotinic and muscarinic receptors on the soma of toad DRG neurons separately, and it seems that ACh hyperpolarization involves activation of calcium-activated potassium conductance.     

雌激素对人正常皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨雌激素对人正常皮肤成纤维细胞的影响,为进一步探讨雌激素抗皮肤衰老的机制和开发抗衰老护肤品提供新思路。方法:采集正常成人皮肤标本,分离培养真皮成纤维细胞;以流式细胞术检测17β-E2作用前后成纤维细胞内活性氧(ROS)水平的改变,以及检测丙二醛(MDA)含量和三种抗氧化酶(SOD,GSH-px,Cat)的活性。结果:①雌激素浓度为1×10-6-1×10-10mol/L(生理浓度至药理浓度范围之内)时,可促进人皮肤成纤维细胞的增殖;②雌激素浓度为1×10-7-1×10-10mol/L时,可以减少人正常皮肤成纤维细胞内MDA的生成,加速三种抗氧化酶的产生;③1×10-6-1×10-10mol/L雌激素作用于人皮肤成纤维细胞后,可以降低细胞内活性氧(ROS)的产生。结论:雌激素在一定浓度时具有改善人正常皮肤成纤维细胞生物学特性的作用,且药物浓度与对人皮肤成纤维细胞的作用密切相关。     

Effect of propyl gallate on activity of cyclooxygenase 1 and 2 in mice??s peritoneal macrophages

Objective: To investigate the effect of Red Peony 801 (propyl gallate,PrG) on cyclooxygenase (COX) activity in murine peritoneal macrophages.Methods: A screening model for COX inhibitors in vitro based on murine peritoneal macrophages was used. COX-1 activity was reflected by the level of 6-ketoprostaglandin F_1α(6-keto-PGF_1α) in supernatants of cultured macrophages which were stimulated with calcium ionophore A23187 for a short-term, while COX-2 activity was reflected by the level of prostaglandin E₂ (PGE₂) in supernatants of cultured macrophages which were stimulated with lipopolysaccharide (LPS) for a long-term.Results: PrG did not affect A23187-induced, COX-1-derived 6-keto-PGF_1α synthesis at the concentrations of 1 × 10^-6, 5 × 10^-6 mol/L (P>0.05), but enhanced 6-keto-PGF_1α synthesis at the concentrations of 1 × 10^-6, 5 × 10^-7, 1 × 10^-7 mol/L (P<0.01) in vitro, and showed a good dose-dependent manner. It inhibited LPS-induced, COX-2-derived PGE₂ synthesis at the concentrations of 1 × 10^-6, 1 × 10^-6 mol/L (P< 0.05).Conclusion: Within the range of 1 × 10^-5 to 1 × 10^-7 mol/L, PrG activated COX-1 at lower concentrations and inhibited COX-2 at higher concentrations in murine peritoneal macrophages. This work is supported by the National Natural Science Foundation (item number: 90209054)     

冬虫夏草提取液对肾小管上皮细胞Klotho表达和凋亡的影响

目的：研究冬虫夏草(cordyceps sinensis, CS)提取液及氯沙坦(losartan, Los) 对血管紧张素II (Ang II) 刺激后的大鼠肾小管上皮细胞 NRK-52E中Klotho（Kl）,P53,P21表达和凋亡的影响,探讨CS对Ang II诱导肾小管上皮细胞凋亡影响的机制。方法：CS（0, 5,10,20,40,80 mg/L）单独或与Ang II (1×10-8 mol/L) 共同培养24 h。确定CS的最佳干预浓度后设立对照组,Ang II (1×10-8 mol/L) 组,Ang II (1×10-8 mol/L) +CS (40 mg/L) 组,Ang II (1×10-8 mol/L) + Los (1×10-5 mol/L) 组和Ang II (1×10-8 mol/L) +CS (40 mg/L) + Los (1×10-5 mol/L) 组,培养24 h后进行实验。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞的增殖;分别用RT-PCR和Western 印迹法检测Kl,P53和P21 mRNA及蛋白的表达;分光光度法检测caspase-3的活性;Annexin V-FITC双染法及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：一定浓度范围的CS单独作用可促进NRK-52E细胞增殖,还能拮抗Ang II对其增殖的抑制(P＜0.01或P＜0.05);Ang II可下调Kl mRNA及蛋白表达,上调P53和P21 mRNA及蛋白表达,增加caspase-3活性和细胞凋亡率 (均P＜0.01);加入CS或/和Los后,Kl mRNA及蛋白表达明显上调,P53和P21 mRNA及蛋白表达下调,caspase-3活性和细胞凋亡率明显降低(均P＜0.05),各药物干预组间的作用差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：CS可逆转Ang II诱导的Kl低表达,并抑制P53及P21的表达,从而抑制Ang II诱导的肾小管上皮细胞凋亡,可能是其对高血压肾损害起保护作用的机制之一。