用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系

为探讨柯萨奇Ｂ病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７－８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。     

用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记ＣｏｘＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针与慢型克山病１４例尸检心肌组织及１０例脑外伤，ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及１０例非病区７￣８个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交，１４例慢克中有９例检测到柯萨奇Ｂ组病毒的ＫＮＡ，阳性率达６４％，而对照组均为阴性。提示柯萨奇Ｂ组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与云南慢型克山病的关系，本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与云南慢型克山病尸检心肌组织１５例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织１０例石腊切片及引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克１６例中有１１例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）ＲＮＡ存在，阳性率达７３．３％。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与黑龙江慢型克山病的关系

克山病是原因未明的地方性心肌病，慢型克山病有关病毒病因的研究未见有关报道，作者用生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与黑龙江病区慢型克山病尸检心肌组织及非正常死亡成人心肌组织和非病区７￣８个月引产胎儿心肌组织进行了原位杂交，以检测柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ。结果１３例慢型克山病中有９例呈现阳性杂交信号，阳性率达６９．２％，两对照组均为阴性。表明黑龙江慢型克山病心肌组织中有柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ的存在，     

原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南亚急型克山病的关系

用光敏生物素标记的柯萨奇 B_3病毒 cDNA 探针,与云南病区20例经临床和病理检查确诊为亚急型克山病的心肌组织切片进行原位核酸杂交,以检测柯萨奇 B 组病毒 RNA。结果有18例出现阳性杂交信号,阳性率达90%。说明云南亚急型克山病心肌组织中有柯萨奇 B 组病毒 RNA 的存在。提示云南亚急型克山病的发生与柯萨奇 B 组病毒的持续感染密切相关。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。     

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的 探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法 用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸捡心肌组织12例及病区与非病区尸捡正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果 吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号，即有肠道病毒RNA存在，阳性率为91．66％，对照组均为阴性。结论 吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染，提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。     

柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌中形态特征及其与发病的关系

目的：探讨柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌细胞中的特征及病毒感染与发病的关系。方法：以65例不同型别克山病尸检心肌组织蜡块为研究对象，用寡核苷酸探针与组织切片进行原位核酸杂交，以检测柯萨奇B组和A组病毒RNA。结果：急型、亚急型及慢我山病的阳性杂交信号检出率分别为83．0％、87．9％及80．0％。阳性信号在急型、亚急型克山病心肌中颗粒粗大，境界较清晰，但分布比较局限；在慢型克山病中阳性信号多散在分布于各部位心肌细胞内，但颗粒较细小，境界不清。结论：心肌组织蜡块长期保存不影响杂交结果；吉林省各型克山病均与柯萨奇病毒感染密切相关，提示病毒感染是克山病复合病因的重要组成部分。     

克山病尸检心肌标本柯萨奇B组病毒RNA片段的序列分析

目的通过原位核酸杂交技术和RT-PCR技术探讨柯萨奇B组病毒感染与吉林亚急型克山病的关系.方法以柯萨奇B组病毒基因组的一段共同序列做寡核苷酸探针,于5′端行生物素标记,检测亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中柯萨奇病毒的感染率;选取阳性标本做RT-PCR,并对PCR产物进行核苷酸序列分析,比较其与柯萨奇B组病毒各血清型之间的差异.结果 9例亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中有7例原位核酸杂交结果阳性,阳性率为77.78%;所选3例原位核酸杂交结果阳性标本RT-PCR均有长541 bp的DNA条带出现,测序结果表明该片段与柯萨奇病毒B3同区域序列一致,与B1、B4、B5的同源性较大.结论亚急型克山病患者体内有柯萨奇B组病毒RNA存在,柯萨奇病毒可能在克山病的发生发展中扮演重要的角色.     

原位RT-PCR法检测柯萨奇B病毒RNA的实验研究

目的建立定位检测细胞或组织中柯萨奇Ｂ病毒ＲＮＡ的原位ＲＴ－ＰＣＲ方法（直接法）。方法对柯萨奇Ｂ病毒（１～６型）感染ＨｅＬａ细胞,经核酸酶（ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ）处理后的病毒感染ＨｅＬａ细胞以及非感染的ＨｅＬａ细胞进行原位ＲＴ－ＰＣＲ检测。结果经扩增后,病毒感染的ＨｅＬａ细胞呈蓝黑阳性信号;并且这种阳性信号经ＲＮａｓｅＡ作用而消失,却不受ＤＮａｓｅ作用的影响;而非感染的ＨｅＬａ细胞则不着色。结论原位ＲＴ－ＰＣＲ法可特异地检测柯萨奇Ｂ病毒感染ＨｅＬａ细胞中的病毒ＲＮＡ,是一种特异和敏感的定位检测方法,可应用于研究该病毒的持续性感染及其与克山病等相关疾病的关系     

风疹病毒感染与先天性心脏病关系的研究

目的 :为寻求诊断风疹病毒 ( RV)感染敏感、特异的方法 ,进一步确定 RV与先天性心脏病 ( CH D)的关系。方法 :以 RV特异的糖蛋白 E1编码的基因保守序列设计引物 ,采用 RT- PCR技术 ,对 30例 CH D及 2 0例非先天畸形 (对照组 )尸体的心肌组织标本进行 RV基因的检测。结果 :1成功地提取了 RV的 RN A,反转录合成 c DN A经扩增得到 42 3bp c DNA区带。 2 30例 CH D阳性7例 ( 2 3.3 ) ,与对照组相比有显著性差异 ( P =0 .0 32 8)。结论 :建立的 RV RT- PCR方法具有良好的敏感性和特异性 ,从分子水平进一步证实 RV感染为 CH D发病的重要因子。     

克山病患者血清细胞间粘附分子1的变化及与柯萨奇B组病毒感染的关系

目的 探讨克山病患者血清可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）的水平变化及与柯萨奇B组病毒（Coxsackievirus B，CVB）感染的关系。方法 利用酶联免疫吸附法及间接酶联免疫吸附法分别测定22例慢型克山病患者、27例潜在型克山病患者、28例健康对照者血清中sICAM-1和CVB—IgM特异性抗体。结果 潜在型、慢型克山病患者血清中sICAM-1水平均明显高于健康对照者（q值分别为9．00、18、75，P〈0．01），慢型高于潜在型（q=10．15，P〈0．01）。慢型克山病患者心功能越差，血清中sICAM-1水平越高；克山病患者组CVB—IgM阳性率显著高于健康对照组（χ^2=5．13，P〈0．05）；克山病CVB—IgM（＋）患者血清sICAM-1水平显著高于CVB—IgM（-）患者（t=2．87，P〈0．01）。结论 sICAM-1在克山病的发生与发展中起重要作用，其升高可能与柯萨奇B组病毒感染有关：sICAM-1水平可作为评价慢型克山病患者心功能程度的重要指标。     

Demonstration of the tick-borne encephalitis virus in ticks by means of nucleic acid hybridization

The method of molecular hybridization of nucleic acids (MHNA) is compared to the traditional bioprobe technique in the study of virus carriership of I. persulcatus ticks collected in the South and in the North of the area of coniferous and broad-leaved forests in the Khabarovsk Territory. Higher sensitivity of the MHNA method than that of the bioprobe was demonstrated by studying the tick pools: 4.9% versus 1.6% (1985), 18.2% versus 3.6% (1986). Virus carriership studied by MHNA in isolated ticks comprised 8.6% (1985) and 10.8% (1986) in the south of the region and 20.0% (1985)--in the north; average content of RNA of the tick-borne encephalitis virus comprised 10 pg. MHNA allows massive studies of individual ticks and better indication of the virus to be carried out; the response can be obtained in 24-48 hours.     

Incidence of Coxsackie virus infection in patients with dilated cardiomyopathy

A total of 127 patients, divided into two groups, were examined; one was made up by patients with dilated cardiomyopathy (D-CMP) (n: 32), the other one by patients with myocarditis and pericarditis ("other cardiopathies") (n: 95). A control group of healthy subjects (n: 278) consisted of blood donors. Infection with Coxsackie viruses (B1, B2, B3, B4, B5, B6, A7, A9) was followed up serologically using virus-neutralizing antibodies and/or IgM class virus-specific antibodies. Actual Coxsackie virus infection was demonstrated in almost half of patients. Seventeen (53.1%) out of the 32 D-CMP patients (with a negative history of Coxsackie virus infection) had a positive serological finding. The most frequently isolated Coxsackie virus was, B4. In the group of "other cardiopathies", a positive serological finding was in 42 patients (44.2%) with the incidence of B1 and B4 viruses being the highest and identical. Compared with data obtained in healthy controls, the incidence of Coxsackie virus infection in the two follow-up groups of patients was statistically highly significant (p less than 0.001).