含LTR序列的psiTPTE22基因mRNA在肿瘤中的表达

目的：通过检测psiTPTE22基因编码的AK097082及BC031001的mRNA表达情况，确定其是否是基因芯片检测到的在结肠癌组织中高表达的基因，同时探讨该基因在癌症发生发展中的可能作用。方法：应用RT-PCR以及实时荧光定量．PCR法检测psiTPTE22编码的AK097082及BC031001的mRNA在肾、肝、胃、肺、结肠的癌组织和相应癌旁正常组织以及9个肿瘤细胞系和胎盘组织中的表达情况。结果：RT-PCR显示只有psiTPTE22编码的BC031001 mRNA在结肠组织中表达，但实时荧光定量PCR检测及F检验发现其在结肠癌与相应正常组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05），因此psiTPTE22并不是基因芯片检测到的在结肠癌中特异高表达的基因。实时荧光定量．PCR还发现BC031001 mRNA在肾、肝、胃和肺的正常组织中高表达，而在相应的癌组织中表达较低；该mRNA在多个肿瘤细胞系中不表达或表达量很低；在胎盘组织中表达较高。对各组癌组织与相应癌旁正常组织的表达量进行F检验发现，肾、肝、胃、肺的癌旁正常组织和相应癌组织中的表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：psiTPTE22基因编码的BC031001mRNA表达水平与多种癌症呈负相关性，但其原因及其在肿瘤发生发展过程中的作用还有待进一步研究。     

CNTN-1基因在食管鳞癌中的表达

目的研究CNTN-1基因在人食管鳞癌中的mRNA表达及其与肿瘤发生的关系。方法采用SYBR Green实时定量PCR技术和免疫组织化学技术检测20例正常食管上皮组织和60例食管鳞癌及癌旁组织中的CNTN-1基因mRNA水平。结果与正常食管上皮组织和癌旁组织相比,CNTN-1基因在食管鳞癌组织中mRNA水平较正常食管上皮组织显著上调6.7倍,较癌旁组织上调2.3倍。免疫组织化学的结果也表明CNTN-1基因在食管鳞癌组织中的mRNA表达要高于正常食管上皮组织和癌旁组织。结论CNTN-1基因在人食管鳞癌中较正常食管上皮组织和癌旁组织mRNA表达显著上调。CNTN-1基因的表达与食管鳞癌的发生可能有一定关系。     

hCLP46基因在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨hCLP46基因在乳腺癌中mRNA表达情况及其临床意义。方法 采用实时定量RT-PCR方法检测48对乳腺癌组织和癌旁正常组织中hCLP46基因的mRNA表达情况。结果 乳腺癌组织中hCLP46基因表达量高于癌旁正常组织(t=2.368,P＜0.05);癌组织中hCLP46基因表达水平仅与腋淋巴结转移有显著统计学意义(P＜0.05)。结论 hCLP46基因在乳腺癌中表达量增高,且与淋巴结转移相关,可能有助于乳腺癌的靶向治疗。     

AIF与Calpain-Ⅰ在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测胃癌组织中抑癌基因AIF与Calpain-Ⅰ mRNA水平的表达情况,探讨其在胃癌发生发展中的作用及其临床意义.方法:实时荧光定量PCR法检测64例胃癌组织及其对应的癌旁组织中AIF与Calpain-Ⅰ mRNA表达情况.结果:胃癌组织中AIF与Calpain-Ⅰ mRNA表达水平较癌旁组织上调,其阳性率分别为84％和75％,差异具有统计学意义(P＜0.05).早期胃癌中AIF与Calpain-Ⅰ mRNA表达水平增高,随着肿瘤恶性程度的增高、临床分期的变晚,逐渐表现出下调趋势.结论:在胃癌组织中,AIF与Calpain-Ⅰ mR-NA表达水平较癌旁正常组织上调,且与胃癌的临床分期显著相关.     

Dishevelled2基因及其蛋白在透明细胞性肾细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨透明细胞性肾细胞癌（CCRCC）组织及其癌旁组织中Dishevelled2（DVL2）基因及其蛋白的表达情况及其临床意义。方法用半定量反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和荧光实时定量PCR方法检测22例CCRCC患者的原位肾癌组织及其配对癌旁组织DVL2基因表达情况,并检测了32例总样本中Ⅲ＋Ⅳ期与I＋Ⅱ期肾癌组织中DVL2基因的表达差异;应用免疫组织化学法回顾性研究22例CCRCC患者的原位肾癌组织及其配对癌旁组织中DVL2蛋白的表达情况,同时检测了10例无正常肾组织配对的CCRCC患者肿瘤组织。结果半定量RT—PCR结果表明,在22例CCRCC样本中,DVL2mRNA在17例（77．2％）CCRCC原发灶中的表达较其配对癌旁组织上调,其结果与实时荧光定量PCR结果基本一致（仁2．535,P=0．0197）,实时荧光定量PCR结果显示,13例Ⅲ＋Ⅳ期CCRCC中8例（61．5％）肾癌组织DVL2mRNA表达高于I＋Ⅱ期。肾癌组织;免疫组织化学分析表明,DVL2蛋白定位于CCRCC细胞的胞膜及胞质,22例CCRCC中有18例（81．8％）癌组织表达强度高于癌旁组织,但32例CCRCC的DVL2蛋白表达在不同年龄、性别、肿瘤分期间差异均无统计学意义（Fisher精确概率法,均P〉0．05）。结论在mRNA及蛋白水平上,CCRCC中DVL2表达水平显著高于癌旁组织,并且Ⅲ＋Ⅳ期肿瘤患者原位癌组织中DVL2的表达量高于I＋Ⅱ期,提示DVL2可能是一个潜在的与CCRCC发生及转移相关的分子标志物。     

口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中抑癌基因PTEN mRNA表达的定量研究

目的定量研究蛋白酪氨酸磷酸酶（PTEN）mRNA在口腔鳞状细胞癌及对应癌旁正常组织中的表达。了解PTEN基因的表达与口腔癌发生、发展的关系。材料和方法应用实时荧光定量PCR方法检测42例口腔鳞状细胞癌及对应癌旁正常组织中PTENmRNA的表达,Rotor-Gene Real-TimePCRAnalysisSoftware6．0软件进行mRNA定量分析,在SPSS14．0统计软件平台上用配对t检验方法统计检验。结果42例口腔鳞状细胞癌和对应癌旁正常组织中均有PTENmRNA表达。口腔鳞状细胞癌组织中PTENmRNA表达量[1．10±0．13（10gPTEN／logβ-actin）]低于相应癌旁正常组织（1．48±0．28）,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论口腔鳞状细胞癌的发生与PTENmRNA表达水平降低有一定关系。     

实时荧光定量PCR检测结直肠癌与癌旁正常组织中miR-145的表达

目的:比较结直肠癌组织与正常癌旁组织中microRNA-145(miR-145)的表达变化。方法:收集30例手术切除的结直肠癌组织和远离癌组织的正常结直肠黏膜组织。提取总RNA,microRNA的引物反转录后,用miR-145特异性引物做荧光定量PCR反应。结果:荧光定量PCR显示结直肠癌组织miR-145的表达量明显降低,癌组织中的表达量为正常癌旁组织的0.353倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:结直肠癌组织中miR-145的表达低于正常组织,在结直肠癌中发挥抑癌基因的作用。     

FAF1 mRNA在人胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:分析FAF1mRNA的表达水平与胃癌临床指标的关系.方法:用荧光实时定量聚合酶链反应(Real time PCR)技术定量检测40例胃癌患者癌组织、癌旁组织及正常组织中FAF1mRNA的表达情况.结果:FAF1mRNA在癌组织中的表达水平(0.27±0.12)明显低于癌旁(0.40±0.06)和正常组织(0.48±0.08)(P＜0.01).FAF1mRNA在胃癌中的表达水平与癌细胞分化程度、远处转移有关,而与年龄、性别、浸润深度、临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤大小无关.结论:FAF1可能与胃癌的发生与发展有关.FAF1异常表达在胃癌细胞分化过程中可能发挥重要作用.     

大肠癌组织A3AR蛋白表达及A3AR mRNA基因扩增临床意义的探讨

目的:检测大肠癌组织中A3AR蛋白表达和A3AR mRNA基因扩增,并探讨其与临床病理特征的关系.方法:分别用免疫组化和实时荧光定量PCR方法检测31例大肠癌组织和10例癌旁正常组织中A3AR蛋白表达及其A3AR mRNA扩增.结果:大肠癌及癌旁正常组织中A3AR的阳性率分别为61.29%(19/31)和10.00%(1/10).差异有统计学意义,P<0.05.大肠癌及癌旁正常组织中A3AR mRNA扩增分别是0.0348±0.0195和0.0214±0.0145,两组差异有统计学意义,P<0.05.两组的表达均与大肠癌的临床分期和淋巴结转移密切相关.结论:大肠癌组织A3AR在蛋白和基因水平均升高,与临床分期和淋巴结转移相关,提示可能参与了大肠癌的侵袭和转移.     

BCYRN1对结直肠癌转移表型的影响及其机制探讨

目的:探究长链非编码RNA脑细胞质RNA1(BCYRN1)在结直肠癌组织中的表达特征及其与细胞侵袭转移的关系。方法:35例结直肠癌组织及相应的癌旁正常组织收集于2016年3月至2017年12月期间经我院普外科行结直肠癌根治术的患者，采用实时荧光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）技术检测结直肠癌及癌旁正常的组织中BCYRN1、Snail及E-cadherin的mRNA表达水平；比较不同来源组织中BCYRN1、Snail及E-cadherin表达差异并分析BCYRN1与Snail及E-cadherin表达的相关性；分析BCYRN1表达与患者病理资料间的关系。采用过表达载体慢病毒转染技术外源性上调结直肠癌细胞SW480中BCYRN1的表达以此作为实验组细胞，转染空白对照载体的SW480作为对照组细胞，Transwell侵袭及迁移实验检测细胞转移能力；RT-qPCR技术检测Snail及E-cadherin mRNA表达的变化；Western Blot实验检测Snail及E-cadherin蛋白表达水平的变化。结果:实验组Transwell基底膜侵袭及迁移细胞数显著高于对照组，实验组BCYRN1及Snail mRNA表达显著高于对照组，E-cadherin mRNA表达显著低于对照组，Snail蛋白表达显著高于对照组，E-cadherin蛋白表达显著低于对照组。BCYRN1及Snail mRNA在结直肠癌组织中表达显著高于癌旁正常的组织，E-cadherin mRNA在结直肠癌组织中表达显著低于癌旁正常的组织，结直肠癌组织中BCYRN1与Snail mRNA表达显著正相关，与E-cadherin mRNA表达显著负相关，结直肠癌组织中BCYRN1高表达患者TNM分期及浸润深度显著高于低表达患者。结论:BCYRN1可通过Snail/E-cadherin途径促进结直肠癌侵袭转移能力。     

Quantification of C13orf19/P38IP mRNA expression by quantitative real-time PCR in patients with urological malignancies

Quantitative real-time PCR was performed for C13orf19, a gene located on chromosome 13q and previously described to be down-regulated in prostate carcinoma, on different cancer cell lines, on matched prostate tissues from 61 patients with prostate carcinoma and on matched kidney tissues from 23 patients with renal clear cell carcinoma. All data were normalized to glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), porphobilinogen deaminase (PBGD) and hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (HPRT) mRNA expression. A C13orf19 quantitative PCR (QPCR) showed the mRNA to be down-regulated in matched prostate tissues (P=0.007 and lower, paired Student's t-test). However, an at least 1.5-fold C13orf19 mRNA downregulation was observed in samples from 28 patients (46%) and an at least 1.5-fold upregulation was observed in samples from 17 patients (28%). In contrast, C13orf19 mRNA alterations in expression seemed to be random events in kidney cancers.     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中PRL-2基因的表达

Objective: To quantitatively detect the expression level of PRL-2 in primary hepatocellular carcinoma using real-time fluorescence quantitative PCR. Methods: Total RNA isolated from human HCC and liver tissue adjacent to the tumor was reversely transcribed into cDNA. Real-time fluorescence quantitative PCR (Q-PCR) method was used to analyze the expres-sion level of PRL-2 gene. Results: The Q-PCR method was performed successfully to precisely detect RNA level. PRL-2 was expressed in all portal vein tumor thrombosis (PVTT) and HCC, but only in some paratumor tissue. The highest expression level of PRL-2 gene was recorded in PVTT; meanwhile expression level of PRL-2 was higher than that in paratumor liver tis-sues and in HCC (P<0.01), and it was higher in HCC than that in paratumor liver tissues. Conclusion: The Q-PCR may be the most precise method to quantitatively detect RNA level and can be used in gene expression changes. The PRL-2 gene has higher expression in PVTT than that in HCC and in paratumor liver tissue cells, indicating that it plays an important role in the development and metastasis of the HCC.     

胃腺癌和相应癌旁组织中共信号分子ICOS/ICOSL mRNA表达的研究

目的:采用实时荧光定量PCR 技术的方法检测共信号分子ICOS及其配体ICOSL 在胃腺癌患者癌组织及相应癌旁组织中的基因表达量,以探讨共信号分子ICOS/ICOSL在胃腺癌发生、发展过程中所发挥的作用。方法:选择42例（年龄39～85岁）未接受放、化疗等抗癌治疗,并经病理切片确诊的胃腺癌初诊患者,收集患者手术切除的癌变组织及相应癌旁组织。提取每个组织标本中总RNA后,采用RT-PCR 法逆转录为cDNA ,再以cDNA 为模板,经Taqman探针PCR 方法扩增每个标本的ICOS/ICOSLcDNA 目的片段,得到组织标本中ICOS/ICOSL mRNA的绝对表达量（copies/mL）。 结果:胃腺癌及癌旁组织中ICOS及ICOSLmRNA 表达量在患者不同性别（2 组:男31例,女11例）、年龄（3 组:<60岁19例,60～70岁14例,>70岁9 例）、癌细胞分化程度（2组:高分化、中分化11例,低、中低分化31例）、肿瘤分期（4 组:Ⅰ期4 例,Ⅱ期5 例,Ⅲ期24例,Ⅳ期9 例）及淋巴结肿瘤转移（2 组:无转移7 例,有转移35例）等分组比较中均无统计学意义（P>0.05）;胃腺癌患者癌组织ICOSL mRNA 的表达量（4.39± 0.54Log copies/mL ）和癌旁组织ICOSL mRNA 的表达量（4.55± 0.47Log copies/mL ）相比无统计学意义（P>0.05）,但胃腺癌癌组织中ICOS mRNA表达量（4.44± 0.62Log copies/mL ）和相应癌旁组织ICOS mRNA 表达量（4.76± 0.66Log copies/mL ）比较有显著统计学意义（P=0.005）。结论:胃腺癌组织中ICOS mRNA表达量明显低于相应癌旁组织,这可能与肿瘤的免疫逃逸有关。      

spp1基因在肺癌组织中表达的定量检测及其意义

目的:探讨定量检测骨桥蛋白编码基因在原发性肺癌中的表达及其意义。方法: 制备24例肺癌患者癌及癌周正常肺组织中总RNA，采用RTPCR及实时荧光定量PCR技术分析spp1基因的mRNA表达水平。结果:在所有24例肺癌中肺癌组织的骨桥蛋白表达高于相邻的癌周正常肺组织，并且全部在6倍以上，其中7例在100倍以上。结论: 肺癌组织中骨桥蛋白的表达明显升高，是肺癌诊断的重要标志物。     

荧光定量PCR法检测食管癌中Livin基因的临床研究

目的探讨食管癌发生、发展过程中凋亡抑制基因Livin的表达及其与食管癌临床病理的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法,检测Livin在正常食管黏膜、不典型增生、原位癌及浸润癌组织中的表达强度。结果Livin在正常食管黏膜、不典型增生、原位癌及浸润癌组织中呈渐进性高表达,分别为1．0、2．26±0．79、7．24±1．06、12．21±2．47,各组Livin mRNA表达水平总体均数不等（F=52．66,P〈0．01）。结论Livin与食管癌的发生、发展密切相关。实时荧光定量PCR法检测食管癌中Livin基因,可作为食管癌早期诊断的可靠方法。     

实时定量PCR 2-△△Ct法检测非小细胞肺癌HER2基因的过表达

背景与目的正确评价HER2基因表达的状况对于肿瘤的施治具有重要的指导意义。以往的评价大多基于免疫组织化学法,但结果变异性大。本研究旨在探讨实时定量PCR 2^-△△Ct法检测非小细胞肺癌（non-small celllung cancer,NSCLC）HER2基因表达的可行性。方法采用实时定量PCR 2^-△△Ct法同时检测212例肺癌组织和与其匹配的非肿瘤组织HER2基因的表达,评价过表达水平。结果肺癌组织中HER2基因的表达水平高于非肿瘤组织（T=67,P<0.05）,HER2基因的过表达率为34.0%。结论实时定量PCR2^-△△Ct法用于检测NSCLCHER2基因的表达是可行的     

大肠癌中MAD2的表达及意义

目的了解大肠癌中MAD2表达情况,探讨其在大肠癌、腺瘤及正常大肠黏膜组织中的表达差异,分析其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测大肠癌、腺瘤及正常大肠黏膜组织中MAD2表达,并对大肠癌组织中MAD2扩增产物进行测序。结果免疫组化方法结果显示大肠癌组织中MAD2的阳性表达明显高于腺瘤和正常大肠黏膜组织（66.7%vs39.6%vs22.9%）,三者比较差异有统计学意义（P〈0.001）。MAD2表达与肿瘤分化和无瘤生存时间有关（P〈0.05）。实时荧光定量PCR提示肠癌组织中MAD2的表达量明显高于正常大肠黏膜组织,大肠癌组织中未见MAD2基因突变。结论基因MAD2表达异常是大肠癌产生的机制之一,与大肠癌的发生、发展有关,MAD2可能是大肠癌预后的一项重要预测指标。     

肿瘤干细胞标记物CD133在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究干细胞标记物CD133在鼻咽癌及其声带息肉中的表达及其临床意义.方法:纤维鼻咽镜取30例鼻咽癌组织和10例声带息肉.Trizol法提取的总RNA进行逆转录,实时荧光定量PCR检测组织中CD133的表达.并对鼻咽癌病人予诱导时间调节化疗+同步放、化疗进行治疗.用SPSS 13.0医学统计学软件对结果和疗效进行分析.结果:鼻咽癌组织中CD133表达高于声带息肉组织(P＜0.05),CD133在鼻咽癌组织中的表达与年龄、性别、病理分型以及疗效之间均无统计学关联.结论:CD133在鼻咽癌组织中明显阳性表达,与年龄、性别、病理学类型及疗效之间的联系,还需进一步扩大病例数加以研究.     

乳腺癌Metadherin基因表达的实时荧光定量方法的建立及初步应用

Objective: The aim of this study was to detect the expression level of Metadherin (MTDH) in peripheral blood of the breast cancer patients by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR), and to explore the relationship between expression of Metadherin gene in the patients peripheral blood and the clinic-pathological features in breast cancer. Methods: Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction was employed to determine the ex-pression level of Metadherin gene in 80 peripheral blood samples of breast cancer patients and healthy donors. Results: The expression of Metadherin gene in breast cancer patients peripheral blood were positive, in which 34 breast cancer patients were highly expressed, accounting for 55.7%, while the expression of Metadherin gene in normal females peripheral blood were negative, there was statistical significance (Ratio = 2.02±0.81, P < 0.05); Ratio of the Metadherin expression in breast cancer patients peripheral blood and the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase expression was 1.15±0.36. REST software analysis showed that the expression of Metadherin gene was significantly up-regulated in breast cancer. Conclu-sion: The SYBR Green Ⅰ quantitative real-time polymerase chain reaction method can successfully detect the expression level of Metadherin gene. Expression level of Metadherin gene in breast cancer patients peripheral blood is closely related to survival, and it maybe involved in the development of breast cancer and used as an indicator of prognosis.