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1.
PCR技术检测RH株弓形虫组织内感染的实验研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:建立敏感,特异的聚合酶链反应(PCR),以检测组织内弓形虫感染。方法:优化PCR反应关键步骤的条件。以相同的B1引物扩增相近的病原体判断其特异性,扩增倍比稀释的DNA检测其灵敏度,并以PCR法检测实验鼠肝,血中DNA的动态变化。结果与免疫组化法进行比较。评价其检测生物学样本的可行性。结果:实验建立的PCR技术的灵敏度能达到检测出一个虫体的DNA,且特异性强,不扩增鼠DNA,人DNA,隐孢子虫,卡氏肺孢子虫,鼠疟原虫的DNA,检测实验感染小鼠血,肝脏样本,在感染后2天,3只鼠血样本PCR结果阳性,3只小鼠肝标本2只阳性;感染后3天至濒死前后有小鼠检测结果均阳性;血样本阳性检出率100%(11/11),肝脏组织样本阳性检出率81.8%(9/11)。结论:PCR方法是一种敏感,特异快速的诊断方法,可用于诊断血和肝脏组织内的弓形虫。 相似文献
2.
用泰泽氏菌可疑的小鼠肝组织匀浆腹腔注射SCID鼠和 BAL B/c小鼠肝、肾、肺、脾的 DNA,PCR扩增 ,核酸杂交。根据泰泽氏菌的保守序列合成引物扩增泰泽氏菌的基因组 DNA,建立了泰泽氏菌的套式 PCR方法 ,并将此方法应用于 SCID小鼠和 BAL B/c小鼠以及可疑样品的检测 ,其中 SCID小鼠肝、肾组织和 BAL -B/c小鼠的肝组织及可疑组织得到特异性扩增带 ,其他动物样品和组织 DNA均为阴性结果。进一步对该DNA片段进行核酸杂交 ,结果证实 ,凡 PCR套式扩增为阳性的 ,均有杂交带。因此 ,泰泽氏菌套式 PCR方法在实际检测中是切实可行。… 相似文献
3.
弓形虫病基因诊断的动物实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立敏感、特异、稳定的PCR法,用于弓形虫病诊断。方法:选择与合成引物并确立最佳扩增条件,用PCR法检测实验感染鼠血液中弓形虫DNA,并与ELISA法检测循环抗原(CAg)作比较。结果:该PCR检测弓形虫DNA法特异性强,对其他7种寄生虫DNA均不扩增;敏感性高,可检测到0.2pg DNA;检测急性感染弓形虫小鼠血液最早于感染后第2天出现用性,与ELISA法查CAg比较。PCK检测弓形虫DNA法阳性出现时间早、检出率高。结论:该PCR法可应用于弓形虫感染的早期诊断。 相似文献
4.
目的探索一种快速、高效提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA的方法。方法采用Chelex-100法提取14株革兰氏阳性杆菌的基因组DNA,利用PCR技术扩增16SrRNA基因及4个单拷贝管家基因以评价提取核酸的质量。结果 Chelex-100法能够在20min内从革兰氏阳性杆菌中提取出基因组DNA,所提取的DNA可直接用于PCR扩增。所有菌株的16SrRNA基因及棒状乳杆菌的4个单拷贝管家基因均扩增成功,PCR产物经电泳检测目的条带清晰特异,与预期目的片段长度相符。结论 Chelex-100法具有快速、高效、安全、经济的特点,采用这种方法提取的革兰氏阳性杆菌的基因组DNA可直接作为PCR扩增的模板。 相似文献
5.
检测弓形虫的PCR法和ELISA法的比较 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:建立快速、敏感、特异的PCR方法,用于检测弓形虫感染。方法:选择弓形虫B1基因194bp片段作为扩增模板,优化反应条件,并测定其敏感性和特异性;以104弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠,用PCR法检测感染动物全血DNA,并与ELISA法检测血清IgM进行比较。结果:本实验中,PCR方法的检测阈值为0.2pg弓形虫DNA,并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。用PCR法检测感染动物全血DNA,感染后第2d即可测出阳性,总阳性数为1(313/15);而ELISA法检测血清IgM则到感染后第6d才测出阳性,总阳性数为2(2/15)。经统计学检验,二者存在显著差异(P<0.05)。结论:PCR是一种快速、敏感、特异的检测方法,可用于弓形虫病的早期诊断。 相似文献
6.
目的 建立小鼠弓形虫抗体检测方法。方法 制备抗原片和可溶性抗原,免疫小鼠制备阳性对照血清,确定了IFA和ELISA检测方法的最适工作条件。根据弓形虫B1基因序列,合成一对寡聚脱氧核糖核苷酸片断,建立PCR检测体系。结果 与IHA法相比较,ELISA、IFA的抗体检出率均显著高于IHA,抗体滴度分析,ELISA抗体滴度高于1FA法。对弓形虫感染鼠不同组织进行PCR检测,可检出特异性扩增条带。结论 建立的IFA和ELISA检测方法具有灵敏度高、重复性好,结果判定明确等优点,是比较有效的监测方法。建立了弓形虫PCR检测体系,经对弓形虫DNA及病鼠各组织的初步检测,证明本PCR体系具有较高的敏感性和特异性。 相似文献
7.
目的 了解承德市部分县区鼠中3种病原体(莫氏立克次体、恙虫病东方体、无形体)的自然感染状况,为承德地区鼠传疾病监测和防控提供参考依据。方法 采用粘鼠板和鼠笼在承德市6个县区捕获鼠(野鼠、家鼠),取鼠肝、脾、肾和肺脏器标本提取总DNA。通过实时荧光定量PCR进行莫氏立克次体和恙虫病东方体检测。利用巢氏PCR对标本进行无形体16S rRNA基因片段扩增,并对产物进行测序,应用生物软件Mega 6.0进行分析。结果 承德市6个县区共检测鼠脏器标本59份,检出无形体片段1份,阳性率为1.7%。未检测到莫氏立克次体和恙虫病东方体。1份PCR阳性产物测序成功,序列分析结果显示检出的序列为沃尔巴克体,与已知序列进行同源性比对,显示与序列号为AY335931株同源性高达88%。结论 初步认定承德市部分县区鼠中存在无形体科病原体,未发现莫氏立克次体和恙虫病东方体病原体。 相似文献
8.
目的建立藻类16SrDNA特异性片段扩增方法,探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法35只实验兔随机分组:生前入水
组(溺死组)15只,死后入水组(空气栓塞致死后入水)15只,对照组(空气栓塞死后不作处理)5只;微波消解-真空抽滤-电镜扫描
法检测过的20例水中尸体肝脏样本20份(硅藻阳性14份,阴性6份)。7种已知藻(直链藻、菱形藻、针杆藻、舟形藻,铜绿微囊
藻,小环藻,小球藻)作为对照。提取组织样本及藻类DNA,扩增产物银染显带。结果生前入水组肺、肝、肾检出率分别为
100%,86%,86%;死后入水组肺、肝、肾检出率分别为13%,0%,0%。对照组肺、肝、肾藻类未检出。生前入水组与死后入水组各
种脏器中藻类检出率差异显著(P<0.05)。20份经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测的水中尸体肝脏样本中,使用本方法15
份样本结果为阳性(包括1份硅藻阴性样本)。7种藻类DNA扩增结果为阳性。结论本文所建立的PCR法检测藻类16SrDNA
灵敏度高,可对多种溺死藻类同时检测,有较好的应用前景。
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组(溺死组)15只,死后入水组(空气栓塞致死后入水)15只,对照组(空气栓塞死后不作处理)5只;微波消解-真空抽滤-电镜扫描
法检测过的20例水中尸体肝脏样本20份(硅藻阳性14份,阴性6份)。7种已知藻(直链藻、菱形藻、针杆藻、舟形藻,铜绿微囊
藻,小环藻,小球藻)作为对照。提取组织样本及藻类DNA,扩增产物银染显带。结果生前入水组肺、肝、肾检出率分别为
100%,86%,86%;死后入水组肺、肝、肾检出率分别为13%,0%,0%。对照组肺、肝、肾藻类未检出。生前入水组与死后入水组各
种脏器中藻类检出率差异显著(P<0.05)。20份经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测的水中尸体肝脏样本中,使用本方法15
份样本结果为阳性(包括1份硅藻阴性样本)。7种藻类DNA扩增结果为阳性。结论本文所建立的PCR法检测藻类16SrDNA
灵敏度高,可对多种溺死藻类同时检测,有较好的应用前景。
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9.
目的:构建含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒,为基于该基因的弓形虫病分子生物学诊断建立标准阳性对照品。方法:以弓形虫RH株基因组DNA为模板,对529 bp的基因片段进行扩增,将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转入大肠埃希菌DH-5α中,提取重组质粒PCR及测序鉴定。以弓形虫529 bp基因为靶基因设计的检测引物,扩增弓形虫基因组DNA及质粒DNA。结果:PCR产物序列与GENBANK中弓形虫529 bp基因序列完全一致。以弓形虫基因组DNA和质粒DNA为模板,成功扩增出预期的249bp基因片段。结论:成功构建可作为标准阳性对照品的含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒pMD-18-Tox,为经济实用的弓形虫诊断试剂盒的研制奠定了基础。 相似文献
10.
弓形虫(Toxoplasma gondii)的PCR检测方法在笼养猕猴群中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的建立快速、灵敏、特异及检测结果易判断的PCR方法,并应用于大规模猕猴种群的弓形虫常规检测中。同时比较巢式PCR和单一PCR的一致性。方法根据弓形虫保守基因p30(SAG1)设计了内、外两对进行巢式PCR扩增以及B1基因设计一对引物进行单一PCR扩增,将DNA样本进行10倍倍比稀释,以检测巢式PCR反应的灵敏度;并对医学生物学研究所自繁猕猴共150只进行了弓形虫检测。结果巢式PCR检测法检测限度可达10^-3ng/uL,而且方法特异。两种PCR法检测结果基本一致,其中巢式PCR检测阳性率(10%)稍高于单一PCR检测阳性率(8.67%)。结论巢式PCR和一次PCR方法都可应用于猕猴弓形虫的常规检测中,并提示巢式PCR比单一PCR更敏感、检出率更高。 相似文献