卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。     

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

[目的]观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育.[方法]昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞.成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况.[结果]卵子去核存活率为75.9%(362/477),注核存活率为39.8%(143/359),D1存活率为38.4%(138/359).39.9%(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核,其卵裂率为80.7%(46/57).大部分重构胚发育到2～3细胞停滞,其中2个分裂至4细胞,无囊胚形成.[结论]将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中,可以诱导极体排出,形成2原核 1极体的重构胚胎.重构胚胎大部分发育到2～3细胞即发生停滞,最多到达4细胞期,发育潜能差.     

转线粒体小鼠的研究进展

线粒体转移技术的发展和成熟使得我们业已成功的建立了转线粒体小鼠动物模型。目前常用的方法主要有:一是直接应用显微注射技术将活的线粒体转入小鼠胚胎;二是通过脱核胞质体与胚胎干细胞融合,再将胚胎干细胞显微注入小鼠囊胚,从而形成嵌和鼠;三是将脱核胞质体与小鼠胚胎直接融合而产生的转线粒体小鼠。随着越来越多线粒体相关疾病的发现,各种不同线粒体疾病的转线粒体小鼠的开发具有十分重要的应用价值和广阔的研究前景。     

灯盏花素对小鼠乳腺癌术后转移和复发的预防作用

目的:观察灯盏花素对小鼠乳腺癌手术切除后转移和复发的影响。方法:将小鼠4 T1乳腺癌细胞植入雌性BALB/c小鼠乳房脂肪垫下。乳腺癌直径达10 mm时手术切除,次日治疗开始,包括灯盏花素治疗、阿霉素化疗及放射治疗。治疗效果通过小鼠术后转移和复发率、小鼠血清干扰素λ(IFN-λ)和白细胞介素2(IL-2)、及小鼠存活时间评价。结果:对照组、阿霉素化疗组、放射治疗和灯盏花素组乳腺癌复发率分别为50%、100%、100%和20%;肺内出现转移灶率分别为70%、100%、100%和20%。与对照组比较,阿霉素化疗组和放射治疗组小鼠有明显较低的血清IFN-λ和IL-2,而灯盏花素组小鼠血清IFN-λ和IL-2均升高。结论:乳腺癌手术切除后机体的免疫功能恢复对控制转移和复发十分重要。灯盏花素能促进机体免疫功能的恢复,因此可以用于预防乳腺癌术后转移和复发。     

罗勒多糖对肝癌H22淋巴道转移模型小鼠生存期的影响

目的 :观察罗勒多糖对肝癌H22淋巴道转移模型小鼠生存期的影响,进一步探讨罗勒多糖抗肿瘤转移的作用机制。方法:建立肝癌H22淋巴道转移小鼠模型,实验共做3批次,每批动物同一性别,每批实验均分3组,即阴性对照组、罗勒多糖组和丝裂霉素组。观察并计算小鼠平均存活天数和生命延长率、半数死亡时间、中位生存时间以及体质量增长值。结果:罗勒多糖可使模型小鼠平均存活天数明显延长,并使生命延长率大于30%;可延长模型小鼠半数死亡时间和中位生存时间,可使中位生存天数延长率大于125%;罗勒多糖还可使模型小鼠体质量增长明显,且使体质量减轻作用走势平缓。结论:罗勒多糖能明显延长肝癌H22淋巴道转移模型小鼠的生存期,且使小鼠体质量增长明显,可改善动物的生存质量。     

线粒体转移在脑卒中后认知障碍中的研究进展

脑卒中常导致持续性脑卒中后认知障碍（PSCI），主要表现为学习、记忆等方面的障碍。目前，PSCI发病机制尚不完全清楚，但与线粒体功能障碍密切相关，健康线粒体对神经元存活至关重要。近年来研究表明，细胞间线粒体转移可通过增加神经元活力、增强线粒体代谢、调控神经炎症等过程与脑卒中联系，从而改善认知障碍。本文概述了线粒体转移的机制以及细胞间线粒体转移在PSCI中的关键作用，并探讨了线粒体移植作为PSCI的新型治疗干预措施的效果，为其临床防治提供参考。     

氧氟沙星等药物联合应用对创伤弧菌感染小鼠的保护作用

目的探讨氧氟沙星等药物联合治疗对创伤弧菌(Vv)感染小鼠的保护作用及对小鼠肝细胞超微结构的影响。方法清洁级ICR小鼠80只,随机分4组:阴性对照组10只,阳性组25只,氧氟沙星单独治疗组20只,氧氟沙星与其他药物联合治疗组25只。阴性对照组腹腔注射0.9%氯化钠注射液0.2ml,阳性组与药物治疗组腹腔注射Vv增菌液0.2ml(约107CFU/ml),1h后单独治疗组注射氧氟沙星,联合治疗组注射氧氟沙星、肝素钠、地塞米松、异丙嗪、间羟胺和多巴胺。比较阳性组和治疗组小鼠腹腔注射Vv后12h存活率及小鼠肝组织各时段超微结构的动态改变。结果12h后,阴性对照组存活率100%;阳性组小鼠全部死亡,存活率为0;单独治疗组小鼠存活10只,存活率50%;联合治疗组小鼠存活24只,存活率96%。联合治疗组小鼠存活率与阳性组及单独治疗组相比差异均具有统计学意义(均P<0.01)。经电镜观察,阳性组3h后即出现肝内皮细胞扩张、肿胀,细胞核固缩,线粒体肿胀、嵴模糊或消失;5h肝细胞核进一步固缩,线粒体空泡样变性,肝细胞内质网空泡样改变。单独治疗组3h、5h时肝细胞存在不同程度的线粒体肿胀,内质网空泡样改变,并见核固缩。联合治疗组肝细胞病变轻于阳性组及单独治疗组。结论氧氟沙星等药物联合治疗在一定程度上能改善Vv所致的肝细胞进行性损伤,对Vv感染小鼠有一定的保护作用。     

3种玻璃化冷冻小鼠生发泡期卵母细胞效果比较

目的:比较3种玻璃化冷冻对小鼠生发泡期卵母细胞的存活及胚胎发育潜能的影响.方法:将小鼠生发泡期卵丘复合物(n=175、177、190)和裸卵(n=150、149、150)分别随机分为3组:采用一步乙二醇法、乙二醇加二甲基亚砜法、三步乙二醇法进行冷冻保存.解冻存活体外培养成熟后行卵胞浆内单精子显微注射受精,进一步评价胚胎发育潜能.结果:冻融小鼠生发泡期卵丘复合物,三步乙二醇法与一步乙二醇法的存活率、成熟率、受精率均高于乙二醇加二甲基亚砜组(P均<0.05);三步乙二醇法的优质胚胎和囊胚率均高于一步乙二醇法和乙二醇加二甲基亚砜法(P均<0.05).冻融小鼠生发泡期裸卵,三步乙二醇法的存活率及三步乙二醇法、一步乙二醇法的受精率及卵裂率均高于乙二醇加二甲基亚砜法(P均<0.05).三步乙二醇法中,卵丘复合物组的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及优质胚胎率均高于裸卵组(P均<0.05).结论:3种玻璃化冷冻中,三步乙二醇法可以获得高质量的冻融小鼠生发泡期卵母细胞,是一种理想的冷冻方法;带完整卵丘颗粒细胞的生发泡期卵母细胞的冻融效果更佳.     

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

【目的】观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育。【方法】昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞。成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入，观察其受精和胚胎发育情况。【结果】卵子去核存活率为75．9％(362／477)，注核存活率为39．8％(143／359)，D1存活率为38．4％(138／359)。39．9％(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核，其卵裂率为80．7％(46／57)。大部分重构胚发育到2-3细胞停滞，其中2个分裂至4细胞，无囊胚形成。【结论】将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中，可以诱导极体排出，形成2原核 1极体的重构胚胎。重构胚胎大部分发育到2-3细胞即发生停滞，最多到达4细胞期，发育潜能差。     

PINK1-Parkin线粒体自噬在创伤性脑损伤小鼠中的作用

目的探讨PINK1-Parkin线粒体自噬在创伤性脑损伤(TBI)中减轻神经细胞线粒体功能障碍及凋亡的保护作用。方法 36只小鼠随机分为野生对照组(野生小鼠接受假手术)(n=6);基因对照组(Parkin-/-小鼠接受假手术)(n=6);野生模型组(野生小鼠接受TBI)(n=18),并将其分为TBI 1、3、5 d组,各6只小鼠;基因模型组(Parkin-/-小鼠接受TBI)(n=6)。采用控制性皮层损伤法建立TBI模型。Western blot检测线粒体自噬相关蛋白(PINK1表达、Parkin移位)及凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3);JC-1法检测线粒体膜电位;TUNEL法检测神经细胞凋亡;干湿重比法检测脑水肿;mNSS评分评价小鼠神经功能缺损。结果与野生对照组比较,野生模型组PINK1及线粒体Parkin表达显著增加,细胞质Parkin表达显著下降,其中在第3天最为明显,分别为(326.0±21.9)%、(300.0±23.1)%及(57.0±6.6)%;与野生对照组比较,野生模型组第3天脑组织含水量、mNSS评分、神经细胞线粒体JC-1单体含量、凋亡率、cleaved caspase-3及Bax表达显著增加为(77.3±3.5)%、(9.7±1.5)分、(143.5±22.6)%、(16.3±3.9)%、(184.0±19.5)%及(201.0±21.7)%,Bcl-2表达显著下降为(77.0±5.1)%。与野生模型组比较,基因模型组第3天脑组织含水量、m NSS评分、神经细胞线粒体JC-1单体含量、凋亡率、cleaved caspase-3及Bax表达进一步显著增加为(83.0±4.3)%、(13.8±1.9)分、(194.5±26.1)%、(34.2±6.9)%、(297.0±15.0)%及(303.0±28.5)%,Bcl-2进一步显著下降为(57.0±7.0)%。结论在TBI小鼠中,PINK1-Parkin线粒体自噬通过减轻神经细胞线粒体功能障碍及凋亡发挥神经保护作用,针对PINK1-Parkin线粒体自噬的干预可能作为治疗TBI的潜在治疗靶点。     

人骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性观察

目的：观察体外培养的人骨髓间充质干细胞(MSCs)部分生物学特性。方法：自健康人骨髓中分离出MSCs,进行原代培养,第5d首次更换培养液,以去除未贴壁细胞,以后每周换液2次,细胞铺满整个培养瓶底90％时开始传代培养。倒置相差显微镜下观察原代及传代细胞形态及生长特性,并绘制传代细胞的生长曲线。流式细胞仪检测第3代MSCs细胞表面分子CD29、CD44,以进行MSCs鉴定。结果：MSCs体外培养为贴壁生长。MSCs原代培养约18～21d才达传代要求;传代培养细胞生长潜伏期仅24～36h,对数增长期约3～5d,之后为平台期,4～6d传1代。传至第8代,出现凋亡征象。第3代MSCs细胞表面CD29、CD44的表达率分别为90．6％和91．5％,MSCs均一性较高。结论：从人骨髓中分离出的MSCs在体外环境中具有很强的自我更新和分裂增殖能力。     

人ApoE转基因小鼠与TGE_（7－2） TGE_（7－3）转基因鼠系的建立

用含小鼠金属硫蛋白（ＭＴ－１）基因启动子与突变的人ＡｐｏＥ７基因的６．０ＫｂＤＮＡ片段作为目的基因制备转基因小鼠，利用显微注射法将目的基因导入４４１枚受精卵，移植于２０只假孕鼠，其中１５只受孕，共产仔鼠８０只，经ａ－３２Ｐ斑点杂交与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法鉴定出两只整合有人ＡｐｏＥ基因的转基因雌鼠，其拷贝数分别为２和５。将两只首建鼠（雌性Ｆｏ代）与正常雄鼠交配，建立Ｆ１代转基因鼠系ＴＧＥ７－２和ＴＧＥ７－３，为进一步从整体上研究ＡｐｏＥ在脂质代谢中的作用以及ＡｐｏＥ与动脉粥样硬化和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病的关系创造条件。     

一种提取肠道细菌总基因组DNA的方法

目的:尝试提取人体肠道菌群总DNA,为研究肠道菌群结构提供依据。方法:以人体粪便为样本,使用PBS多次清洗,离心样品,沉淀粪便中的菌体。使用裂解液、溶菌酶和蛋白酶K等裂解菌体,用酚/氯仿方法抽提DNA,以提取到的肠道细菌总DNA为模板进行ERIC-PCR扩增。结果:电泳显示样品DNA条带明亮,少数样品DNA存在降解现象;ERIC-PCR扩增得到较清晰的指纹图谱。结论:经改进后的方法操作简单、实用、经济,适用于肠道菌群结构的研究。     

人骨髓间充质干细胞体外培养及生物特性的观察

目的：观察人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs)在体外培养的生物学特性和作为组织工程的种子细胞的可能性。方法：将人骨髓MSCs自骨髓中分离、纯化和培养，观察原代和传代培养的增殖及生长特征。结果：原代培养及传代培养显示，在体外培养条件下人骨髓MSCS有活跃的增殖能力。结论：体外获得的人骨髓MSCs的生物年龄较为年轻，可以为组织工程的进一步研究提供种子细胞。     

冷冻断裂人胎心肌细胞的扫描电镜观察

应用冷冻断裂技术结合扫描电镜的方法来观察5～10个月人胎心肌细胞的三维立体构象表明:胎儿心肌细胞较成人小。肌丝随月份逐渐增多。线粒体多为圆形、卵圆形,嵴发育好;后继月份有核周区聚集现象;偶见巨大线粒体。横管于6个月后遍及肌丝区,见有核膜攀附现象。肌质网发达,与线粒休、核膜广泛联系。根据以上结果对人胎心肌的发育进行了讨论。     

人力短臂离心机锻炼后心率变异性的改变

目的 :观察经人力短臂离心机锻炼后心率变异性(HRV)参数的变化 .方法 :选取 8名健康男性志愿者进行了连续 7d的人力离心机锻炼 ,每天锻炼时间为 2 0min ,分别于锻炼前、锻炼 3次和 7次后 ,各记录静息心电一次 ,每次记录的时间为 2 0min ,然后利用计算机分析得到HRV的各项指标 .结果 :与锻炼前相比 ,锻炼 3次和 7次后受试者心电的HRV高频成分 (HF)能量显著增加 (P <0 .0 5 ) ,低频成分 (LF)能量显著降低 (P <0 .0 5 ) ,低频成分与高频成分之比 (LF/HF)显著降低 (P <0 .0 5 ) .结论 :通过对心率变异性指标的分析 ,证明人力短臂离心机锻炼可明显改善心血管系统的调节能力 ,增强心脏的泵血功能 .     

二次离心法制备富血小板血浆离心条件的比较

 目的 探讨二次离心法制备富血小板血浆（PRP）的最佳离心条件和方法。方法 从新西兰大白兔耳背中央动脉取血2.7 mL,按照不同离心条件（转速：1 000~2000 r/min,时间：5~20 min）离心2次,比较不同条件下PRP中血小板浓度和血小板回收率。结果 多种离心条件均能成功制备PRP。初次离心：在形成白膜前的临界条件下（转速1 400 r/min,10 min）取得上层血浆的操作简单,且血小板回收率最高（＞85%）。再次离心：转速1 400 r/min,＞10min时,即可制得符合要求的PRP（浓缩率＞5倍）。结论 初次离心条件和上清液的获取方法对PRP的回收率和浓缩率影响较大,在产生白膜前的临界条件下提取上清液操作简单,无需特殊设备,血小板浓度和回收率高,避免了离心速度过高或离心时间过长导致的血小板活化、聚集。该方法是制备PRP简便、有效的方法。     

Acquisition technology research of EEG and related physiological signals under +Gz acceleration

Background

With the continuous improvement of maneuvering performance of modern high-performance aircraft, the protection problem of flight personnel under high G acceleration, the development as well as research on monitoring system and the equipment for human physiological signals processing which include electroencephalogram (EEG) have become more and more important. Due to the particularity of +Gz experimental conditions, the high-risk of human experiments and the great difficulty of dynamic measurement, there is little research on the synchronous acquisition technology of EEG and related physiological signals under +Gz acceleration environment.

Methods

We propose a framework to execute human experiments using the three-axial high-performance human centrifuge, develop reasonable operation mode and design a new experimental research method for EEG signal acquisition and variation characteristics on three-axial high-performance human centrifuge under the environment of +Gz acceleration. We also propose to build the synchronous real-time acquisition plan of EEG, electrocardiogram, brain blood pressure, ear pulse and related physiological signals under centrifuge +Gz acceleration with different equipments and methods.

Results

The good profiles of EEG, heart rate, brain blood pressure and ear pulse are obtained and analyzed comparatively. In addition, the FMS hop-by-hop continuous blood pressure and hemodynamic measurement system Portapres are successfully applied to the ambulatory blood pressure measure under centrifuge +Gz acceleration environment.

Conclusions

The proposed methods establish the basis and have an important guiding significance for follow-up experiment development, EEG features spectral analysis and correlation research of all signals.     

一种改进的显微注射用DNA片段的纯化方法

目的显微注射用DNA的纯度是影响转基因动物制备成功与否的重要因素,本文建立一种可行的适用于普通实验室的纯化DNA方法,替代普遍使用的试剂盒纯化方法。方法分别使用酚-氯仿多次抽提法及常规的凝胶提取试剂盒纯化含有蚓激酶基因的DNA片段,通过显微注射技术将纯化的DNA片段导入小鼠受精卵的原核,制备转基因小鼠。根据转基因实验的结果对两种方法进行比较。结果使用两种方法纯化DNA均能获得转基因小鼠。在DNA纯度及注射卵的存活率上,两种方法无明显差别;在移植卵的出生率及转基因阳性率上,抽提法优于试剂盒法。结论本实验建立的抽提方法可以替代试剂盒方法纯化显微注射用DNA片段,在降低实验成本、简化实验条件及提高转基因阳性率方面具有优势。     

Precision of navigated and conventional open-wedge high tibial osteotomy in a cadaver study

High tibial osteotomy (HTO) is an established treatment option for isolated medial osteoarthritis in young and active patients. One important factor for success of this procedure is the degree of correction of the weight-bearing line. Computer-assisted navigation systems are believed to improve the precision of axis correction through intraoperative real-time monitoring. This study investigates the precision of correction of the weight-bearing line in open-wedge HTO with and without a navigation system.Nineteen legs of well-preserved human cadaver were randomly assigned to navigated (n = 10) or conventional (n = 9) HTO. In order to achieve a sufficient amount of correction in all legs the weight-bearing line was aimed at 80 percent of the width of the tibial plateau.The mean deviation of the weight-bearing line from the desired 80 percent was 1 percent in the navigated and 8.6 percent in the conventional operated legs (p = 0.002). The weight-bearing line of all navigated but only 5 of the 9 conventional operated legs was within a ± 5 percent tolerance level (p = 0.33).Navigated open-wedge HTO achieved better correction of the weight-bearing line than the conventional method in human cadaver legs. Future studies have to prove this advantage in a clinical setting and it''s effect on patient outcome.