猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育潜力

目的 优化猪胚胎体外生产培养系统。方法 将猪卵母细胞在不同培养认中行体外成熟、体外受精，比较成熟率和卵裂率。结果 促性腺激素明显提高猪卵母细胞成熟率，其中以15IU／ml FSH 30IU/ml LH成熟率、卵裂率最高，分别为62％和15％。M199和NCSU－23基础培养液中的成熟率相近，但二者的卵裂率差异显著（15.7% vs 36%)；两种基础培养液中添加150μmol/L半胱氨酸后，仅M199培养液中出现促卵裂效应（P＜0.05)；添加1mmol/L dbcAMP后，卵母细胞的GVBD被阻止，去除dbcAMP后继续培养22h，实验组的成熟率和卵裂率分别为76.1%-83.3%和43.9%-52.9%率，显著高于基础液组和半胱氨酸单独添加组。结论 促性腺激素是猪卵细胞体外成熟的重要调节因子；dbcAMP通过调节卵体外成熟动力学，促卵母细胞分裂同步化，提高成熟和发育能力。     

卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究

目的探讨卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究。方法选取昆明小鼠50只作为研究对象,根据培养液的不同将50只小鼠分为A组和B组,每组各25只。A组采用低糖细胞培养基（DMEM）培养,B组采用含15％～20％胎牛血清的人类输卵管液培养,两组在相同条件下进行培养,比较两组的体外受精率、正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、可移植胚胎率、妊娠率及活产率。结果A组小鼠的体外受精率（71．4％）、正常受精率（65．7％）及卵裂率（89．1％）与B组（67．6％、68．1％、85．1％）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;A组小鼠的优质胚胎率（31．7％）和可移植胚胎率（56．1％）均优于B组（25．0％、42．5％）,差异有统计学意义（X2=8．26、10．17,P〈0．05）。A组小鼠的妊娠率（23.3％）低于B组（32．6％）,差异有统计学意义（X2=7．58,P〈0．05）;但A组小鼠的活产率（17．8％）稍低于B组（18．9％）比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。结论低糖DMEM培养液具有较好的应用效果,但仍需进一步的研奔．     

促排卵中多卵泡发育者改行IVF-ET的分析

目的探讨促排卵中多卵泡发育者的积极处理方法,保持受孕机会的同时减少卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS）和多胎妊娠的风险。方法对于克罗米酚（clomiphene citrate,CC）或人绝经后促性腺激素（human menopausal gonodatropin,hMG）促排卵中发生多卵泡发育的15例患者,采用改行体外受精-胚胎移植（invitro fertilization and embryo transfer,IVF—ET）的方法进行处理。结果改行IVF—ET者与本中心同期同年龄组行常规IVF—ET者相比,其受精率分别为67．21％对74．17％,卵裂率分别为90．24％对95．79％,取卵周期妊娠率分别为26．67％对37．65％,移植周期妊娠率分别为36．36％对40．13％,上述数据均无统计学差异（P〉0．05）,15例患者中无一发生OHSS,说明改行IVF—ET可以作为促排卵中多卵泡发育的一种积极处理方法。结论促排卵治疗中出现多卵泡发育时,行IVF—ET可能是有效、安全的治疗方法。     

卵母细胞成熟调控及体外成熟影响因素的研究

自 1993年以来 ,有关未成熟卵母细胞体外成熟培养的研究成为生殖医学领域的又一热点。女性不孕症的主要病因之一是由患顽固性多囊卵巢综合症等因素造成的卵子成熟障碍 ,这种病因即使采用体外授精技术也无法受孕 ;在进行体外授精 胚胎移植(IVF ET)治疗时 ,药物超促排卵可使妇女在同一周期产生多个卵子 ,有成熟和未成熟的 ,其卵子的成熟度直接关系到卵子的受精效率、卵裂效率和妊娠效率。所谓理论指导实践 ,因此深入研究卵子发生发育的机理 ,了解卵母细胞成熟的调控及影响因素至关重要。1　卵母细胞成熟的机制目前 ,人们对哺乳动物卵母细胞…     

卵母细胞体外成熟技术在体外受精-胚胎移植中的补救应用

目的 对未成熟卵的体外成熟(IVM)技术在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的补救性应用进行总结,探讨影响其治疗结果的因素.方法 在IVF-ET治疗中,对卵巢反应不良、卵泡发育迟缓和卵泡过多生长有发生过度刺激可能需要取消治疗周期的患者,在B超引导下经阴道卵泡穿刺术取卵后,对未成熟卵进行体外培养成熟后进行IVF或卵胞浆内单精子显微注射,良好胚胎进行移植.结果 取卵周期33个,共获未成熟卵214个,进行体外培养后126个成熟;32个周期进行常规胚胎移植,8例临床妊娠,移植周期临床妊娠率为25.00%(8/32);7例分娩8个健康婴儿.结论 未成熟卵IVM技术是IVF-ET治疗不孕不育中有效的补充方法,可以补救未成熟的卵,减少患者取消IVF-ET治疗周期的发生.     

卵母细胞体外成熟技术在体外受精-胚胎移植中的补救应用

目的对未成熟卵的体外成熟(IVM)技术在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的补救性应用进行总结,探讨影响其治疗结果的因素。方法在IVF-ET治疗中,对卵巢反应不良、卵泡发育迟缓和卵泡过多生长有发生过度刺激可能需要取消治疗周期的患者,在B超引导下经阴道卵泡穿刺术取卵后,对未成熟卵进行体外培养成熟后进行IVF或卵胞浆内单精子显微注射,良好胚胎进行移植。结果取卵周期33个,共获未成熟卵214个,进行体外培养后126个成熟;32个周期进行常规胚胎移植,8例临床妊娠,移植周期临床妊娠率为25.00%(8/32);7例分娩8个健康婴儿。结论未成熟卵IVM技术是IVF-ET治疗不孕不育中有效的补充方法,可以补救未成熟的卵,减少患者取消IVF-ET治疗周期的发生。     

表皮生长因子对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠卵母细胞体外成熟及受精的作用.方法 在体外成熟液中分别添加0、0.1、1、5、10ng/Mlegf,12h后检查成熟率,并观察EGF对体外受精的影响.结果 添加5ng/Ml和10ng/Mlegf组卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),并且5ng/Ml组的效果显著高于其他各组(P<0.05);比较培养液中添加以上浓度EGF对体外受精胚发育的影响,结果发现添加5ng/Ml EGF虽不能显著提高囊胚发育率(P>0.05),但可显著提高其通过二细胞阻滞率和囊胚孵化率(P<0.01).结论 EGF对小鼠卵母细胞体外成熟及受精有促进作用,可提高体外成熟率及囊胚孵化率,还可促进受精卵通过二细胞阻滞.     

卵母细胞体外成熟在体外受精-胚胎移植中的应用

随着辅助生殖技术的发展,体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)已经成为治疗不孕症的常规手段,广泛应用于不孕不育症的临床治疗.但目前IVF-ET的临床妊娠率较低,国外报道为28%[1],国内报道为43.3%[2].     

人类卵母细胞及体外受精发育阻滞胚胎中的组蛋白乙酰化水平的检测

目的 探讨人类不同成熟阶段的卵母细胞及体外受精发育阻滞胚胎中的组蛋白乙酰化水平的变化规律.方法 收集接受卵胞浆内单精子注射技术(ICsI)治疗的患者废弃的卵母细胞生发泡(GV)期、第一次减数分裂中期(MⅠ期)和经体外成熟培养发育至第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞,采用间接免疫荧光染色方法对人类不同成熟阶段的卵母细胞及体外受精阻滞胚胎中的组蛋白的(H4K12和H3K9)乙酰化水平进行检测.结果 人类GV期卵母细胞中组蛋白H4K12和H3K9均强表达.74.1%的MⅠ期卵母细胞中H4K12和H3K9的乙酰化水平显著降低.79.2%的MⅡ期卵母细胞中组蛋白H4K12乙酰化呈微弱表达或不表达,而来源于高龄妇女的MⅡ期卵母细胞仍维持较高的H4K12乙酰化水平.在MⅡ期卵母细胞中几乎检测不到H3K9的乙酰化表达.83.3%的发育阻滞胚胎中组蛋白H4K12和H3K9的乙酰化水平较高.结论 人类卵母细胞的成熟经历了一个组蛋白乙酰化到去乙酰化的动态修饰过程,体外受精后又重新建立新的组蛋白乙酰化修饰.     

卵母细胞体外成熟评价标准的改良研究

目的探讨改良式人未成熟卵母细胞评分标准的可行性和颗粒细胞指标的合理性及其对卵子发育潜能的影响。方法体外培养卵丘-卵母细胞复合体,按改良式人未成熟卵母细胞评分标准,将未成熟卵母细胞分为优质卵和非优质卵,对成熟卵母细胞进行受精,并对胚胎进行评价;用琼脂糖凝胶电泳检测两类卵的颗粒细胞凋亡。结果优质卵的成熟率、卵裂率和优质胚胎率都优于非优质卵,优质卵成熟数和优质胚胎数与非优质卵比较差异有统计学意义（P<0.01）;非优质卵其卵丘细胞DNA凝胶电泳后形成明显DNA 梯带,凋亡程度高于优质卵的卵丘细胞。 结论改良式人未成熟卵母细胞评分标准在临床上具有可行性。     

山羊体外受精的研究

通过在山羊卵母细胞体外成熟培养液中添加不同的血清和不同浓度的卵泡液 ,在体外成熟培养液中培养不同的时间 ,以及采用不同的精子获能方法来摸索效率较高的体外受精方法体系。在山羊卵母细胞体外成熟培养液中添加FCS、EGS及不同浓度的卵泡液 ,成熟培养时间分别为 16、2 0、2 4和 2 7h ,山羊新鲜精液用钙离子载体法和肝素法进行获能处理后用于体外受精 ,比较其体外成熟率和体外受精率。添加FCS、EGS和 2 0 %卵泡液组的成熟率无显著差异 ,显著高于添加 10 %和 3 0 %卵泡液组的成熟率 ;但添加FCS和EGS组的受精率显著高于添加10 %、2 0 %、3 0 %卵泡液组的受精率。培养 2 4h组和 2 7h组的成熟率显著高于另外两组 ,而培养 2 7h组的受精率显著高于其余各组。用钙离子载体法处理的山羊精子的顶体反应率和体外受精率显著高于肝素法。EGS可以代替FCS添加于成熟培养液中 ,对COCs的成熟率和受精率没有明显的影响 ,但卵泡液不能完全代替FCS的作用。培养时间为 2 7h ,精子用钙离子载体法处理获能后能得到较高的体外受精率     

未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值.方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者.测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B).未经任何药物刺激,于月经周期的9～12 d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵.体外培养24～48 h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18 h后观察受精情况,继续培养24～48 h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化.结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54).1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47).47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48 h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%.妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P＜0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组[(8.0±1.5)cm vs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cm vs(8.3±1.3)cm,P＜0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异.结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关.     

激活素A、抑制素A对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的探讨激活素A(activin A,ACTA)、抑制素A(inhibin A,INHA)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)及早期胚胎发育的影响。方法①分别将ACTA、INHA分3个浓度水平(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL)进行卵母细胞体外成熟培养,寻找ACTA、INHA最佳的卵母细胞体外成熟培养浓度;②比较ACTA、INHA、ACTA+INHA与对照组对卵母细胞体外成熟的影响;③比较对照组与ACTA组、INHA组和ACTA+INHA组对小鼠卵母细胞受精率及囊胚形成率的影响。结果不同浓度组之间相较,无论是ACTA还是INHA,100ng/mL和200ng/mL组的卵母细胞成熟率均比50ng/mL组高(P<0.05);100ng/mL、200ng/mL浓度间差异无统计学意义。ACTA组(100ng/mL)、INHA组(100ng/mL)和ACTA(100ng/mL)+INHA(100ng/mL)组的卵母细胞成熟率、成熟卵母细胞受精率、囊胚形成率均高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ACTA和INHA均对卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育潜能具有明显的促进作用。卵母细胞体外成熟培养的添加浓度以100ng/mL为宜。     

短时受精对体外受精结果的影响

目的观察短时受精在IVF中的临床作用。方法35例IVF-ET患者经促排卵治疗后获得的卵子,孵育4~6h,先与精子共培养3h后,一半的卵子经洗涤后去除外周的精子,在新鲜培养液滴中培养,作为实验组,剩余的一半卵子在精子液滴中过夜培养至16~18h,作为对照组。比较两组的受精率(2PN、1PN、≥3PN)、卵裂率、优质胚胎率,进行统计学分析。结果实验组卵子数为219个,受精率、2PN率、1PN率、≥3PN率、卵裂率、优质胚胎率分别为73.6%、59.7%、6.1%、3.6%9、5.7%、43.4%,而对照组卵子数为228个,受精率、2PN率、1PN率、多PN率、卵裂率、优质胚胎率分别为75.9%、58.9%5、.4%、9.8%、96.1%、45.8%。两组的受精率、卵裂率、优质胚胎率及正常受精2PN率差异无显著性(P>0.05),多精受精率差异有显著性(P<0.05)。结论短时受精可作为降低多精受精的一种补充办法。     

长方案中长效与短效达菲林的垂体降调节效果比较

目的：探讨长方案中长效与短效达菲林的垂体降调节效果及体外受精-胚胎移植的妊娠结局．方法行体外受精助孕的患者317例,均于前1月经周期黄体中期开始注射达菲林．随机分为2组,A组（145例）皮下注射长效达菲林1.25 mg,单次给药;B组（172例）每天皮下注射短效达菲林0.1 mg,14-18 d降调节后减量至每天注射0.05 mg,直到HCG注射日．结果（1）促性腺激素使用天数及用量：A组[（11.8±2.1） d,（31.2±9.5）支]显著多于B组[（10.1±1.3） d,（25.4±9.3）支],P〈0.05;（2）2组患者的获卵数、受精率、优质胚胎数、着床率比较差异无统计学意义（P〈0.05）;（3）临床妊娠率：2组比较差异无统计学意义（P〈0.05）,但B组有增高趋势．结论长方案中短效达菲林的垂体降调节效果与长效达菲林相似,而促性腺激素用量更少,使用更灵活,值得推荐．     

体外受精-胚胎移植治疗不孕症临床分析

目的 总结与探讨影响常规体外受精－胚胎移植（ＩＶＦ－ＥＴ）妊娠率的因素。方法 对１９９９年１月至８月在我院门诊接爱ＩＶＦ－ＥＴ的３６对不孕夫妇采用促性腺激素释放激素（ＣｎＲＨ－ａ）／高纯促卵泡素（ＦＳＨ－ＨＰ）／绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）刺激排卵方案,Ｂ超监测卵泡发育情况并旨导经阴道取卵,培养后加入丈夫精子孵育,将高质量胚胎转移至子宫。结果 取卵３５６个,平均第周期取卵１０．２个;受精率６６．５％     

体外受精周期中不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响

目的：探讨常规体外受精周期中,不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响。方法：回顾性分析2008年1月至2009年12月,在温州医学院附属第一医院生殖医学中心行常规体外受精（in vitrofertilization,IVF）过程中为预防出现卵巢过度刺激综合征或因卵泡发育迟缓,改行未成熟卵体外培养（in vitro maturation,IVM）的91例患者,按促性腺激素（gonadotropin,Gn）使用天数不同分为两组,A组使用Gn 5～7 d,共51例,B组使用Gn 8～13 d,共40例。比较两组的一般指标、Gn用量、体外成熟与胚胎发育及妊娠结局。结果：两组年龄、不孕年限、基础激素水平均差异无统计学意义（P〉0.05）。Gn使用量A组明显低于B组,但获卵数A组明显高于B组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。取卵日的雌激素以及黄体生成素水平A组明显高于B组,而孕激素水平则B组高于A组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。两组的卵子成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、种植率差异均无统计学意义（P〉0.05）。两组的移植周期率、hCG阳性率、周期取消率、临床妊娠率、多胎妊娠率、自然流产率、异位妊娠率等临床结局差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：体外受精咛ヒ浦仓芷谥校煌被男蠭VM均能获得较好的临床结局,但Gn使用后5～7 d比8～13 d可以显著减少促排卵药物的用量,增加获卵数,降低治疗费用。     

不同日龄和品系小鼠超排卵、体外受精及受孕率的比较研究

用PMSG和HCG分别对不同日龄(28日龄、56日龄和112日龄)的ICR,B6C3F1和C57BL/6J三个品系小鼠进行超排处理,并分别进行IVF(体外受精)及体外培养后将2-细胞期的胚胎移植至假孕受体的输卵管中,以此比较不同日龄和品系小鼠的超排、体外受精率和受孕率.结果显示,三个品系的28日龄小鼠的排卵数均高于56日龄和112日龄的排卵数(P<0.01),但品系和年龄并不影响卵母细胞在体外受精后形成2-细胞胚胎的受精率(平均约为91%的受精率),以及这些正常的胚胎在移植至受体后的受孕率(约51%左右).     

NO对小鼠卵母细胞及胚胎发育的影响

目的 评价外源性NO对小鼠卵母细胞体内成熟、体外受精及胚胎发育的影响. 方法受试雌性小鼠超排卵期间分别腹腔注射NO供体硝普钠(SNP)1.0、5.0和10.0 mg/kg,对照组雌性小鼠注射等量的生理盐水.注射hCG 15 h后处死小鼠,收集卵母细胞进行体外受精和胚胎培养,观察卵母细胞的成熟度、受精率、早期胚胎的发育能力及其形态学变化.结果 5.0 mg/kg SNP组M Ⅰ期卵母细胞和M Ⅱ期卵母细胞的比例较对照组和1.0 mg/kg SNP组升高(P＜0.05,P＜0.01),而受精率降低(P＜0.01),10.0 mg/kg SNP组小鼠在注射药物20 min后全部死亡;5.0 mg/kg SNP组2-细胞胚胎以后各阶段胚胎的卵裂率低于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P＜0.01),并被阻滞在桑葚胚期;5.0 mg/kg SNP组形态异常胚胎的比例高于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P＜0.01).结论 较高浓度NO抑制卵母细胞体内成熟、体外受精及早期胚胎发育并影响胚胎的质量.