抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

用国人肝癌细胞免疫BALB/c鼠,经三次细胞融合、反复筛选及克隆化,得到了15株杂交瘤;又经正常肝组织及肝癌细胞吸收试验,进一步选出两株杂交瘤。它们分别能持续稳定地分泌特异性抗人肝癌单克隆抗体A-QGY_1和A-QGY_2。此两株单克隆抗体只与体外培养或患者组织中的肝癌细胞产生反应,而不与正常成人和胎儿肝组织及其他多种正常或肿瘤组织发生反应,与乙肝病毒抗原及甲胎蛋白、癌胚抗原等也无免疫交叉反应。     

抗胰腺癌单克隆抗体的研究

用人新鲜胰腺癌组织免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Agl4融合,获得了分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文重点报道以ABC免疫组织化学法检查YPC1单克隆抗体与人正常组织和肿瘤组织的反应性。结果表明YPC1单克隆抗体与16例被检测的胰腺癌组织发生反应。其中9例(56.3％)呈强阳性反应,与23种正常组织中的10种(43.5％)以及19种非胰腺肿瘤中的8种(42.1％)有不同程度的交叉反应,但多数反应较弱。本研究提示以新鲜人体肿瘤组织作为免疫原制备单克隆抗体是简便可行的,YPC1单克隆抗体可能有助于胰腺癌的诊断和治疗。     

肿瘤内皮细胞标志物8单抗的制备及组织分布

目的　制备特异性抗人肿瘤内皮细胞标志物 8(TEM8)单克隆抗体 ;检测TEM 8蛋白在部分肿瘤和正常组织中的分布。方法　原核表达含TEM 8膜外段多肽的融合蛋白 ,免疫Balb/c雌性小鼠后取效价较高的小鼠脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞进行细胞融合 ,以ELISA、Westernblot筛选、鉴定分泌特异性抗TEM8的单克隆杂交瘤细胞株 ;ABC免疫组织化学方法检测TEM 8蛋白表达产物在结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌旁组织等组织中表达。结果　共获得 5株稳定分泌TEM 8抗体的单克隆杂交瘤细胞株 ;TEM 8在多种组织细胞表达 :结肠癌新生血管 (4 / 2 3) ,结肠癌癌性腺上皮 (8/ 2 3) ,结肠癌旁组织腺上皮 (6 / 17) ,结肠组织平滑肌 (17/ 37) ,前列腺癌腺上皮 (1/ 17)。结论　成功制备抗人TEM 8单克隆抗体 ;TEM8在蛋白质水平并非肿瘤血管特异性标志物     

抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性

目的：制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性。方法：用人骨肉瘤细胞系OS-732免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-1融合,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选,获3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞。将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后,应用间接免疫荧光抗体实验检测。 结果：3株McAb均与骨肉瘤组织呈阳性反应,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应。3株McAb分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合。 结论：抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性。     

抗人肺癌单克隆抗体的制备及其生物特征的研究

目的制备抗人肺癌细胞的单克隆抗体（McAb）,鉴定其生物学特征。方法用人肺癌细胞株A549作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人肺癌细胞McAb,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其特异性。结果获得了1株分泌抗人肺癌细胞McAb杂交瘤细胞（命名为1D11）,其染色体呈双亲特点,该McAb与人卵巢癌细胞株SKOV3有交叉反应,与肝癌细胞株SMMC7721,宫颈癌细胞株Hela.表皮癌细胞株A431,正常肝细胞株L02无交叉反应。结论该McAb对肺癌和卵巢癌具有特异性。     

抗人胰腺癌单克隆抗体杂交瘤的建立

用小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0与新鲜癌组织匀浆免疫的Balb/C小鼠脾细胞融合制备抗人胰腺癌单克隆抗体。经间接荧光抗体法和免疫组织化学法筛选及有限稀释法克隆化后,获得一株产生与正常人体组织不反应,与人胰腺癌反应率高的抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

高效价抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高效价抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化人血红蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗人Hb单克隆抗体的细胞株,将阳性细胞株接种于小鼠腹腔制备单克隆抗体并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚类,分析其敏感性、特异性及纯化抗体的相对亲和力。结果共获得3株单克隆抗体杂交瘤细胞株,均与人Hb有较高的亲和力,其敏感性可达0.5μg/ml,而且与人肌红蛋白(Mb)及各种动物血红蛋白、肌红蛋白均无交叉反应。结论3株单克隆抗体杂交瘤细胞株有较好的特异性,与人Hb有较高的亲和力。     

分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤细胞株E_4和E_7

用分泌抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的6-巯基鸟嘌呤抗性杂交瘤突变株BAH_1-TG细胞与用辣根过氧化物酶(HRP)免疫的小鼠脾细胞进行二次杂交。二次杂交瘤细胞的培养上清用双抗原夹心放射免疫测定法和双抗原夹心酶联免疫测定法检测抗hCG-抗HRP双特异抗体。经多次克隆和筛选,获得两株分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤株E_4和E_7。     

抗骨肉瘤单克隆抗体在骨肉瘤组织中的免疫组化定位研究

本文报道了用本室建立的2株抗人体骨肉瘤细胞株所分泌的单克隆抗体,采用ABC酶标法,对24种肿瘤组织和正常人体组织进行了免疫组化定位研究,发现OS-McAb_1和OS-McAb_2除对部分骨源性恶性肿瘤有阳性反应外,对其他部位的肿瘤均显示阴性反应;与所标记的正常成人及胎儿相应组织无交叉反应。提示OS-McAb对骨肉瘤有较高的特异性,在骨源性恶性肿瘤的免疫诊断方面有一定应用价值。     

分泌抗H_(615)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用抗正常615纯系小鼠肝细胞抗体处理的H615瘤细胞免疫Balb/c小鼠、取其脾细胞与小鼠骨髓细胞融合、以间接免疫荧光法和细胞ELISA二种方法检测、建立两株分泌抗H615单克隆抗体的杂交瘤细胞系。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615小鼠的肝、脾、肺、肾、心肌、横纹肌、胸腺的组织细胞和小鼠肿瘤细胞及人肝癌细胞无交叉反应,证明两种单克隆抗体具有一定的特异性。对两种单克隆抗体进行亚类检定均属IgG_1。     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

新型抗人胃肠癌单抗CMU15的研制及应用研究

用新鲜高分化大肠腺癌组织提取的亚细胞膜相成分为免疫原,采用淋巴细胞杂交瘤技术,经ABC免疫组化和亚细胞膜结合ELISA法进行筛选,研制出一种稳定的分泌IgG_1型的鼠单克隆抗体,命名为CMU15的杂交瘤。经免疫组化研究证实,该单抗与胃肠癌具有高选择性反应,阳性率分别为75.6％和31％,且与管状腺癌的分化程度有关,亦与淋巴结转移癌有较好的反应。正常组织仅见少数细胞有反应。同时检测76例胃癌前病变胃粘膜不典型增生其抗原表达与细胞异型增生相关,表明该单抗有益于监测癌变潜能。     

抗结核杆菌耐热抗原单克隆抗体杂交瘤细胞的建立及其特性的初步鉴定

目的：建立针对结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法：BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在HAT培养液中进行选择性培养,常规有限稀释法筛选克隆和亚克隆化;用间接ELISA法测定单抗效价和特异性鉴定。结果：在细胞融合2次,筛选杂交瘤细胞3次和亚克隆化后,获得了3株杂交瘤细胞株,ⅠC12、ⅡE4、ⅡG8,效价分别为1∶32 000、1∶16 000、1∶16 000。其中ⅠC12杂交瘤株分泌的抗体仅与Mtb-HAg的蛋白峰Ⅰ有阳性反应,但ⅠC12单抗对Mtb-HAg激活人γδT细胞的活性没有明显影响。ⅡE4和ⅡG8杂交瘤株分泌的抗体与Mtb-HAg蛋白峰Ⅰ、峰Ⅱ、峰Ⅲ均无反应。结论：应用杂交瘤技术获得了三株能稳定分泌高滴度抗Mtb-HAg的单克隆抗体细胞株,其中ⅠC12对蛋白峰I有特异性。     

抗卵巢上皮癌人单克隆抗体HMD_4的制备及其特性的研究

本文报道用人-鼠杂交技术制备出一株分泌人IgG型单克隆抗体的人-鼠杂交瘤细胞系,通过早克隆化和反复再克隆化等使该株细胞已稳定分泌15月以上。染色体核型分析符合人-鼠杂交瘤特征。免疫印迹和免疫组化等方法证实该抗体可识别分子量为55KDa的卵巢上皮癌相关抗原,命名为HMD_4。本文还对如何保持种间杂交瘤分泌功能和人单抗筛选中如何克服内源性Ig问题进行了讨论。     

抗—P^30单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

BALB/c mice were immunized with the purified p30 antigen. SP2/0 myeloma cells and immune spleen cells were fused with 50% PEG (Sigma, MW 3,350-4,000). The cell fusion rate was 93.95%, and the antibody producing rate 21.01%. The technique of limiting dilution was used for cloning of the hybridoma cells. Two hybridoma cell lines E8 and G1 secreting McAb against p30 antigen were obtained. The number of chromosome of both E8 and G1 cell lines was 98.7 +/- 6.54 and 97.7 +/- 7.77, respectively. Results of the PAGE of the ascites generated by the hybridoma cell lines E8 and G1 showed a thick protein band at the gamma-region which was absent from the ascites generated by the SP 2/0 myeloma cells. The immunoglobulin of the McAb E8 and G1 belonged to IgG2 subclass. The results of the immunohistochemical method using the horseradish peroxidase conjugated antibody showed that both E8 and G1 McAb only reacted with epithelial cells of the normal human prostatic glands and their ducts, but did not cross-react with other thirty-four different kinds of normal human tissues. The results of inhibiting ELISA test showed that both E8 and G1 McAb were only inhibited by the human seminal plasma and p30, weakly inhibited by the adult male's urine, but were not inhibited by other eight different kinds of human body fluids and secretions as well as semen from eight different species of animals. It was concluded that McAb of E8 and G1 were organ and species specific.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

Observation of monoclonal antibody E4B7D5 inhibitory effect on leptospiral adherence using scanning electron microscope]

BALB/c mice were immunized intraperitoneally with outer envelopes of serogroup icterohaemorrhagiae lai serovar strain 017 leptospires. Monoclonal antibody (McAb) E4B7D5 against outer envelopes (IgG1, agglutinating titre 1:25,600) was produced by hybridoma technique. Passive immunoprotection experiments have demonstrated the immunoprotection of McAb E4B7D5 against strain 017 leptospires. Effect of McAb E4B7D5 on leptospiral adherence to the surface of normal human pulmonary embryonic fibroblasts was observed by using scanning electron microscope. The results indicated that the leptospiral adherence noted in various agglutinating titre McAb E4B7D5 groups was less frequent than that in the three control groups. It was concluded that the inhibitory effect of McAb E4B7D5 on leptospiral adherence may play a role in the immunoprotection.     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

用O型人红细胞免疫的Balb/c小鼠脾细胞和NS--1骨髓瘤细胞融合、克隆后,获得两株杂交瘤细胞株。两株细胞分泌的单克隆抗体都是IgG_s亚类。文中对此类抗体的特性进行探讨。吸收试验表明,这两种单克隆抗体并不是和红细胞H抗原反应,但可能是同ABO各型红细胞上一种共同抗原反应。     

人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的 通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Western blot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2.间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×10~5.Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原.结论 成功制备ALT1单克隆抗体.     

A human monoclonal antibody HMD4 against ovarian carcinoma associated antigen.

Lymphocytes from regional lymph nodes of patients with ovarian carcinoma were immortalized by fusing them with a nonsecreting cell line of murine myeloma (Sp2/0-Ag14). The fusion rate was 0-87.5%. By early cloning and recloning, a hybrid cell line, named HMD4, was established. It has stably secreted human IgG for more than 15 months. Chromosome analysis showed the characteristics of human-mouse hybridoma. The cells of HMD4 were injected into the abdominal cavities of nude mice and 2-3 weeks later large quantities of ascites were obtained. Human IgG of lambda light chain was detected and purified from the ascites. The specificity of HMD4 human McAb was tested by ABC or PAP immunoperoxidase stainings of paraffin-embedded tissue sections, cryostat sections, cell smears of various tissues and different cancer cell lines. 60.5% (26/43) of epithelial ovarian cancers was positive, while nonepithelial ovarian cancers, most cancers from other organs and almost all nonmalignant and normal tissues were negative. The molecular weight of the antigen recognized by HMD4 was 55 KDa determined by Western blotting. The problems of maintaining the IgG secreting function of human-mouse hybridoma and its screening were also discussed.

     

建立分泌抗人精液抑制素杂交瘤细胞株及其单克隆抗体的研究

用人精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ—１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得４株分泌抗人精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＩＢ１０，ＩＧ５，ＩＡ４和ＩＡ６。其分泌抗元体均为ＩｇＧ１型，均不与大鼠ＬＨ，ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应，杂交瘤细胞染色体平均为８６～１０３条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定的分泌特异性抗体。