地塞米松降低紫杉醇对肺癌细胞化疗作用的实验研究

目的研究地塞米松(dexamethasone,Dex)降低紫杉醇对肺癌细胞的化疗作用。方法 MTT法考察不同浓度的紫杉醇,以及地塞米松(10μmol·L~(-1))与不同浓度的紫杉醇联用,对肺癌细胞A549、Calu-1存活率的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测地塞米松对糖皮质激素受体(GR)、P-糖蛋白(P-gP)、多药耐药蛋白1(MRP-1)表达的影响;裸鼠移植瘤实验考察地塞米松降低紫杉醇对肺癌细胞的化疗作用。结果与紫杉醇单独作用相比,地塞米松(10μmol·L~(-1))联合紫杉醇降低了紫杉醇对肺癌细胞A549、Calu-1的敏感性,使IC_(50)明显提高(A549细胞:IC_(50)由0.58μmol·L~(-1)提高到1.35μmol·L~(-1);Calu-1细胞:IC_(50)由1.10μmol·L~(-1)提高到2.10μmol·L~(-1));地塞米松使GR蛋白表达增高,同时使P-gP、MRP-1蛋白的表达明显升高;地塞米松联合紫杉醇明显降低紫杉醇对裸鼠移植瘤的抑瘤效果。结论地塞米松联合紫杉醇可能使肺癌细胞产生耐药性,降低紫杉醇的化疗效果。     

白杨素对TNF-α诱导慢性暴露TGF-β卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响

目的研究白杨素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导慢性暴露转化生长因子-β(TGF-β)卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响,并探讨其作用机制是否涉及下调NF-κB(p65)蛋白表达。方法 TNF-α(10μg·L~(-1))处理TGF-β(5μg·L~(-1))预暴露12 d的卵巢癌OVCAR-3细胞24 h,球形成率测定法检测不同浓度(5.0、10.0、20.0μmol·L~(-1))白杨素对球形成率的影响;Western blot检测NF-κB(p65)蛋白表达;NF-κB(p65)siRNA转染探讨作用机制。结果 TNF-α(10μg·L~(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L~(-1))处理增高OVCAR-3细胞系球形成率。白杨素能有效地拮抗致炎因子诱导卵巢癌细胞自我更新作用,呈剂量依赖性(P<0.05),并伴随着NF-κB(p65)蛋白表达下调。与对照siRNA相比,NF-κB(p65)siRNA转染OVCAR-3细胞NF-κB(p65)蛋白表达下调,并明显增强白杨素抑制球形成作用。结论下调NF-κB(p65)蛋白表达参与白杨素抑制TNF-α(10μg·L~(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L~(-1))处理诱导卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成作用。     

没药甾酮下调PI3K/Akt通路增强替莫唑胺抗脑胶质瘤细胞增殖作用

目的探讨没药甾酮增强替莫唑胺抗人脑胶质瘤细胞增殖的作用及机制。方法分别用CCK-8、Hoechst 33342染色和流式细胞术、Western blot检测没药甾酮、替莫唑胺单药及联合对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡、PI3K/Akt通路活性,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达影响。结果与替莫唑胺(1～400μmol·L~(-1))单药组相比,没药甾酮(30μmol·L~(-1))联合替莫唑胺(1～400μmol·L~(-1))明显增强对人脑胶质瘤U251细胞的抗增殖作用;与替莫唑胺(400μmol·L~(-1))单药组相比,没药甾酮(30μmol·L~(-1))联合替莫唑胺(400μmol·L~(-1))明显增强对人脑胶质瘤U251细胞的凋亡诱导作用(P <0. 01);与替莫唑胺(400μmol·L~(-1))单药组相比,没药甾酮(30μmol·L~(-1))联合替莫唑胺(400μmol·L~(-1))明显下调PI3K、p-PI3K p110、p-Akt(Ser473)和Bcl-2的表达。结论没药甾酮可通过下调PI3K/Akt通路,增强替莫唑胺对人脑胶质瘤细胞U251的增殖抑制作用。     

噻唑蓝法测定香菇多糖体外对癌细胞毒作用

目的评价香菇多糖对癌细胞的体外细胞毒作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法测定香菇多糖对人前列腺癌细胞PC-3、人肺癌细胞A-549、人肝癌细胞HepG2和人白血病细胞K-562的细胞毒作用。结果香菇多糖对人前列腺癌细胞PC-3、人肺癌细胞A-549、人肝癌细胞HepG2和人白血病细胞K-562的半数抑制浓度(IC50)值分别为(25.8±3.4),(90.0±7.8),(63.3±4.2),(33.1±3.3)μg.mL-1,生长曲线显示香菇多糖100μg.mL-1对PC-3细胞及HepG2细胞的抑制率随着时间增加而增强,表现出一定的时-效关系。结论香菇多糖对癌细胞具有一定的体外细胞毒作用。     

桑黄素和乙酰化白藜芦醇对沙奎那韦在大鼠体内药代动力学的影响

目的评估桑黄素和乙酰化白藜芦醇对大鼠体内沙奎那韦(P-gp作用底物)药物代谢动力学的影响。方法将SD大鼠分为4组,每组5只,即对照组、实验Ⅰ和Ⅱ组、阳性对照组,分别灌胃给予30 mg·kg-1沙奎那韦;30 mg·kg-1沙奎那韦联用40 mg·kg-1桑黄素;30 mg·kg-1沙奎那韦联用40 mg·kg-1乙酰化白藜芦醇和30 mg·kg-1沙奎那韦联用40 mg·kg-1维拉帕米。采用HPLC-MS/MS方法测定给药后不同时间沙奎那韦的血药浓度,计算药动学参数。结果 4组大鼠体内主要药动学参数分别为:AUC0-t:381.53μg·h·L~(-1),185.53μg·h·L~(-1),360.43μg·h·L~(-1),529.95μg·h·L~(-1);AUC0-∞:409.48μg·h·L~(-1),228.52μg·h·L~(-1),446.67μg·h·L~(-1),552.41μg·h·L~(-1);Cmax:110.80μg·L~(-1),86.44μg·L~(-1),139.84μg·L~(-1),423.60μg·L~(-1);Tmax:0.25 h,0.25 h,0.25 h,0.50 h;T1/2:5.72 h,5.94 h,6.78h,3.78 h;MRT0-∞:10.30 h,9.61 h,12.30 h,4.89 h;CL/F:7.59 m L·kg-1·h-1,13.88 m L·kg-1·h-1,7.28 m L·kg-1·h-1,5.52 m L·kg-1·h-1。结论沙奎那韦的药时曲线存在多峰现象;桑黄素可明显降低沙奎那韦的口服生物利用度并对其药动学参数产生影响,而乙酰化白藜芦醇对沙奎那韦的口服生物利用度和药动学参数没有明显影响。     

艾迪注射液对大鼠体内紫杉醇药代动力学的影响

目的:研究艾迪注射液对大鼠体内紫杉醇药代动力学参数的影响。方法:12只SD大鼠,雌雄各半,体重180~220 g,随机分为对照组和实验组,实验组连续5 d给予艾迪注射液1 mL·kg~(-1),每天1次,对照组给予等量生理盐水代替。最后一次给药后30 min两组均给予紫杉醇注射液12 mL·kg~(-1),并于给药后0、0.5、1、2、4、8、12、24和48 h分别自眼眶取血0.2 mL。分离血浆后采用液质联用的方法测定血浆中紫杉醇的含量,采用DAS2.0软件分析药代动力学参数,采用SPSS软件进行统计学分析。结果:对照组和实验组的C_(max)分别为(39 555.69±1 728.70)和(79 957.62±18 067.58)μg·L~(-1)(P<0.05);AUC_(0→t)分别为(28 616.24±7 059.78)和(76 066.42±32 518.88)μg·L~(-1)·h(P<0.05);t_(1/2)分别为(3.49±1.17)和(5.99±0.75)h(P<0.05);其他参数差异无显著性。结论:艾迪注射液可显著增加大鼠体内紫杉醇的C_(max)和AUC_(0→t)并降低t_(1/2)。     

反相高效液相色谱法测定千层纸素的含量和有关物质

目的建立测定千层纸素的含量和有关物质的RP-HPLC方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为ODS-2(4.6 mm×150 mm,5μm),甲醇-乙腈-10 mmol·L~(-1)磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长271 nm。结果在含量测定色谱条件下,千层纸素浓度在2.02~20.23μg·m L~(-1)内与峰面积呈良好线性关系(r=1.000,n=6);在有关物质测定色谱条件下,有关物质黄芩素、汉黄芩素、杂质Ⅰ分别在质量浓度0.0197~0.7872μg·m L~(-1)(r=1.000,n=6)、0.0313~0.6250μg·m L~(-1)(r=0.9997,n=6)、0.0818~2.0440μg·m L~(-1)(r=0.9999,n=5)内与峰面积呈良好的线性关系;黄芩素、杂质Ⅰ和各杂质总含量分别为0.11%、0.39%、0.57%。结论本方法灵敏度高、重现性好、准确可靠,可用于千层纸素有关物质的检测分析及质量控制。     

应用液质联用法同时测定新西兰家兔血浆中左炔诺孕酮和炔雌醇浓度及其药动学

目的建立液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)测定新西兰家兔血浆中左炔诺孕酮(LNG)和炔雌醇(EE)浓度的方法,并探讨LNG/EE复方避孕贴多次给药后药动学特征。方法 6只雌性新西兰家兔连续10次给予LNG/EE复方避孕贴(5 cm×4 cm,每贴含LNG 5.35 mg,EE 0.11 mg),每3 d1贴,连续给药30 d,分别于给药后不同时间耳缘静脉采血,血浆样品经丹酰氯衍生化后,采用HPLC-MS/MS测定血浆中LNG和EE浓度,并采用DAS3.0软件计算首末次给药的主要药动学参数。结果 LNG的线性范围为0.10~20.00μg·L~(-1),最低定量限为0.10μg·L~(-1),提取回收率均>78.30%,日内精密度<7.38%、日间精密度<12.89%。首次给药后LNG的主要药动学参数为:峰浓度C_(max)为(8.10±2.38)μg·L~(-1),达峰时间(T_(max))为(2.38±1.45)h,西药浓度-时间曲线下面积(AUC)(0-768)为(142.35±36.99)h·μg·L~(-1);末次给药后LNG的药动学参数:C_(max)为(7.05±1.07)μg·L~(-1),T_(max)为(2.71±1.83)h,AUC(0-768)为(141.95±22.31)h·μg·L~(-1)。EE的线性范围为0.02~5.00μg·L~(-1),最低定量限为0.02μg·L~(-1),提取回收率均>79.99%,日内精密度<3.28%、日间精密度<12.76%。首次给药后EE的药动学参数:C_(max)为(0.18±0.04)μg·L~(-1),T_(max)为(2.50±1.30)h,AUC(0-768)为(2.65±0.56)h·μg·L~(-1);末次给药后EE的药动学参数:C_(max)为(0.17±0.07)μg·L~(-1),T_(max)为(2.17±0.26)h,AUC(0-768)为(2.02±0.82)h·μg·L~(-1)。结论建立的HPLC-MS/MS法准确灵敏,可用于同时测定血浆中LNG和EE的浓度。新西兰家兔给予LNG/EE复方避孕贴后首末次主要药动学参数无显著性差异,且多次给予此避孕贴后体内血药浓度无蓄积。     

麦角甾醇与吉非替尼联合用药协同抑制非小细胞肺癌A549和PC-9细胞增殖

目的研究麦角甾醇(ERG)与吉非替尼(GEF)联合用药协同对非小细胞肺癌A549(GEF耐药细胞)和PC-9(GEF敏感细胞)细胞的抑制作用。方法将人肺癌细胞A549和PC-9细胞分别分为对照组、ERG 5～160μmol·L~(-1)单药组、GEF 5～160μmol·L~(-1)(A549)或0.625～20μmol·L~(-1)(PC-9)单药组及不同浓度ERG+GEF联合用药组,MTT法测定细胞增殖;Hoechst 33258观察细胞核形态变化;流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞周期;Western印迹法检测蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt),磷酸化AKT(p-Akt),表皮生长因子受体(EGFR),磷酸化EGFR(p-EGFR)蛋白的表达。结果在不同作用时间点,与ERG和GEF单药组相比,相应浓度两药联用组对A549和PC-9细胞的增殖抑制率提高(P<0.01),表现出明显的协同效应(q>1.15);Hoechst 33258凋亡染色结果显示,与单药组相比,联用组A549细胞和PC-9细胞各给药组细胞出现明显核分叶、碎裂、凋亡样小体和核大小不一等典型凋亡样特征。与相应浓度GEF和ERG单药组相比,ERG+GEF联用(10+10)μmol·L~(-1)和(40+40)μmol·L~(-1)组A549细胞凋亡率升高(P<0.01),ERG+GEF(40+5)μmol·L~(-1)和(80+10)μmol·L~(-1)组PC-9细胞凋亡率显著升高(P<0.01);两药联用组(20+20)μmol·L~(-1)A549细胞的p-EGFR/EGFR蛋白比值显著降低(P<0.01),两药联用组(40+5)μmol·L~(-1)PC-9细胞的p-Akt/Akt和p-EGFR/EGFR蛋白比值显著下调(P<0.05,P<0.01);细胞周期结果显示,对于A549细胞,两药联用改变了G_0/G_1,G_2/M和S期细胞比例,主要将细胞阻滞在G_0/G_1期。对于PC-9细胞,两药联用未改变G_0/G_1,G_2/M和S期细胞比例。结论 ERG与GEF联用具有协同抑制A549和PC-9细胞增殖的作用,诱导细胞凋亡,其作用机制可能是抑制EGFR信号通路相关蛋白。     

超高效液相色谱法同时测定活血涤痰汤中7种活性成分的含量

目的建立UPLC方法同时测定活血涤痰汤中黄芪甲苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量。方法采用Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min~(-1),进样量为3μL,检测波长分别为205和254 nm。结果黄芪甲苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的线性范围分别为2.89～57.76μg·m L~(-1)(r=0.9993)、2.10～42.08μg·m L~(-1)(r=0.9994)、3.04～60.88μg·m L~(-1)(r=0.9993)、1.06～21.12μg·m L~(-1)(r=0.9998)、0.89～17.84μg·m L~(-1)(r=0.9999)、1.18～23.60μg·m L~(-1)(r=0.9999)、1.14～22.88μg·m L~(-1)(r=0.9998),平均加样回收率分别为97.5%,97.3%、98.2%、99.3%、99.1%、99.1%和98.8%,RSD值分别为2.4%、2.5%、2.0%、2.0%、2.1%、2.1%和1.9%。结论建立的UPLC方法简便快速,重现性好,可用于活血涤痰汤的质量控制与评价。     

成骨细胞的功能与损伤和骨质疏松的防治

骨质疏松是一种全身性骨骼疾病,导致骨折风险增加。成人的骨量通过破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成作用来维持动态平衡,治疗骨质疏松症的理想策略是抑制破骨细胞的骨吸收和/或增强成骨细胞的骨形成功能。目前针对保护成骨细胞及增强其功能的骨质疏松疗法相对较少。因此,本文针对成骨细胞相关功能蛋白、各种细胞损伤机制（内质网应激、氧化应激、机械过载、微小RNA和长链非编码RNA的影响等）及骨质疏松的治疗与预防作一综述,以期为针对增强成骨细胞功能的骨质疏松治疗策略提供新思路。     

PTEN和DNA含量与非小细胞肺癌侵袭转移的关系探讨

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中抑癌基因PTEN的表达和DNA含量与NSCLC侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP方法检测PTEN在78例肺癌标本中的表达,并用流式细胞术检测30例肺癌标本中DNA含量.结果:肺癌标本中PTEN蛋白总缺失率为42.3%,有淋巴结转移组和无淋巴结转移组肺癌表达缺失率分别为52.1%和26.7%(P＜0.05),其表达缺失率随TNM分期增加而上升,分期越晚表达缺失率越高.PTEN缺失率高者生存时间短.DNA指数(DI)的分布范围在1.04～1.93.异倍体肿瘤24例,DI值随TNM分期增加而增加(P＜0.05),与淋巴结转移呈正相关.结论 肺癌组织中PTEN的表达与肺癌淋巴结转移有显著相关性,肺癌细胞DNA含量与肺癌TNM分期及淋巴结转移密切相关.检测PTEN蛋白表达和DNA含量将有助于判断肺癌的转移及预后.     

Seasonal variation of alkaloids of Adhatoda vasica and detection of glycosides and N-Oxides of vasicine and vasicinone

The distribution pattern of the alkaloids of A. Vasica has been studied with change of season. The study also resulted in the detection of glycosides and N-oxides of vasicine and vasicinone.     

CD44与肿瘤侵袭、转移及预后的关系

CD44是一种跨膜受体蛋白 ,属于黏附分子家族 ,可与透明质酸等配体结合 ,介导细胞与细胞、细胞与基质之间的黏附。近年来发现CD44及其变异体在许多肿瘤细胞中异常表达 ,且与肿瘤的发生发展及患者的预后存在着一定的关系 ,因此 ,可作为一个辅助性指标预测肿瘤的发展情况