Sprouty2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达及增殖情况研究

目的 探究Sprouty2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达及增殖情况。方法 回顾性选取2019年1月至2021年12月间就诊于海南省人民医院肿瘤内科的80例乳腺癌患者临床资料,收集乳腺癌组织标本,对Sprouty2蛋白表达的乳腺癌MCF-7细胞进行培养,根据培养方法的不同分为观察组与对照组,观察组应用Sprouty2蛋白特异性抗体孵育,对照组应用DPBS孵育。对比两组Sprouty2蛋白表达情况;利用siRNA技术对MCF-7细胞Sprouty2基因表达进行干预,根据结果分为siRNA干扰组与未干扰组;应用MTT法对细胞增殖活力予以检测,根据划痕试验结果分为沉默组、DMSO对照组;并采用蛋白质印迹法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13表达。结果 观察组患者MCF-7细胞中Sprouty2蛋白免疫细胞百分数及平均荧光强度为(31.56±0.55)%、3.21±0.16,均明显低于对照组[(37.31±1.32)%、3.29±0.06],差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA干扰组的Sprouty2相对变化量为0.19±0.05,明显低于未干扰组(1.00±0.14)...     

小飞蓬活性成分对乳腺癌MCF-7细胞的作用

目的通过体外实验研究小飞蓬（Erigeron canadensis L.）活性成分对乳腺癌MCF-7细胞生长、凋亡和侵袭的影响。方法以5-氟尿嘧啶（5-FU）作用组为阳性对照组,以不加药组为阴性对照组,小飞蓬组为实验组作用MCF-7细胞。采用CCK8试剂盒测定药物对MCF-7的生长抑制率。绘制在不同药物浓度作用下的细胞生长曲线。观察不同药物浓度作用下细胞的形态学变化。利用免疫细胞化学染色技术检测药物作用后MCF-7细胞Caspase-3、MMP-9表达情况。结果 （1）小飞蓬活性成分可抑制MCF-7细胞的生长,IC50为0.29 mg.mL-1;（2）生长曲线显示,药物作用后的MCF-7细胞生长较对照组缓慢,形态学观察显示细胞逐渐变为长,黏附性减弱;（3）药物作用后的MCF-7细胞Caspase-3的表达强于不加药物组（P〈0.001）,MMP-9的表达明显弱于对照组（P〈0.001）。结论小飞蓬活性物质可抑制MCF-7细胞生长、侵袭,诱导凋亡。     

Prohibitin 表达及对乳腺癌细胞系MCF-7 抑制生长的机制研究

目的　该研究从细胞水平研究了抗增殖蛋白（prohibitin）高表达在乳腺癌细胞中的生物学功能,并研究其抑制 MCF-7 生长的分子机制。方法　使用基因重组法构建pEGFP-PHB 重组质粒,脂质体瞬时转染乳腺癌细胞系MCF-7, real time-PCR 和Western Blotting 验证其高表达后,检测细胞生物学功能。包括:MTT（噻唑蓝）法检测细胞生长、流 式细胞仪检测细胞周期与凋亡、肿瘤相关基因P53, Bcl-2, ERBB2 及E2F-1 的检测和Transwell 小室侵袭实验。两样本差 异比较采用t 检验,多样本差异采用单因素方差分析。结果　MTT 显示PHB 高表达组在转染24, 48 和72h 对细胞生长 的抑制率分别为20.98%, 14.93% 和62.94%,差异有统计学意义;流式细胞仪检测细胞分裂周期,phb 高表达G1 期无差异, S 期降低,G2 期增加;凋亡检测中,高表达组细胞总凋亡率为33.67%±8.68%,阴性对照组的凋亡率12.13%±3.76%, 空白对照组凋亡率为6.99%±2.33%,高表达组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义（F=18.992, P=0.003）; PHB 高表达时,肿瘤相关蛋白P53 和ERBB2 的表达量高于对照组（t=4.590, P=0.044; t=9.489, P=0.011）,Bcl-2 表达降 低,差异有统计学意义(t=7.143, P=0.019),E2F-1 蛋白各组间差异无统计学意义(t=2.175, P=0.162);PHB 高表达组细胞 侵袭能力低于对照组,差异有统计学意义（t=3.221, P=0.01;t=4.057, P=0.003）。结论　PHB 高表达抑制S 期DNA 的合 成,阻滞细胞于G2/M 期,增加细胞凋亡率,抑制肿瘤细胞MCF-7 的生长。其与肿瘤相关蛋白P53 和ERBB2 的增高, Bcl-2 表达的降低紧密相关。     

二氢杨梅素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响

目的研究二氢杨梅素(DMY)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法 2014年3月至2015年2月,该院采用99%纯度的DMY为抑制剂,以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,采用MTT法、流式细胞术法和免疫细胞化学来分析乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的情况。结果当使用浓度大于20μg/mL的DMY处理细胞时,出现了抑制效果,但效果不佳;当用40与80μg/mL的DMY时,明显地抑制了乳腺癌细胞MCF-6的增殖,且有不同程度的敏感性。当DMY为80μg/mL时,其IC50为226.9μg/mL。抑制率和IC50分别与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。40与80μg/mL的DMY处理乳腺癌细胞MCF-6可以诱导其周期阻滞在G2/M期(P0.01),并表现出明显的细胞凋亡现象,同时,G0/G1期也受到阻滞,S期细胞比例降低明显,差异有统计学意义(P0.05);当使用浓度大于20μg/mL的DMY时,PCNA阳性率有所下降,当浓度为40μg/mL的DMY时,乳腺癌细胞MCF-6的PCNA阳性率明显下降(P0.01),尤其浓度为80μg/mL的DMY时,阳性率为10.00%。与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论对乳腺癌患者采用DMY可以有效抑制癌细胞快速增殖,加速器凋亡,减缓患者病情,疗效突出。     

GPR30-PI3K/Akt信号通路对乳腺癌细胞迁移能力的影响研究

目的研究G蛋白偶联雌激素膜受体(GPR30)-磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法分别选取乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-453及MCF-7,采用免疫印迹法检测4种细胞中GPR30的表达情况,将表达量最高的细胞用于后期实验。通过细胞免疫荧光染色检测乳腺癌细胞中GPR30的定位情况;通过免疫印迹法检测不同剂量(0 ng、2 ng、6 ng、10 ng) GPR30激动剂E_2作用乳腺癌细胞后磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况;采用划痕实验检测GPR30-PI3K/Akt信号通路活化对乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果 GPR30在4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDAMB-468、MDA-MB-453及MCF-7中的相对表达量分别为0. 19±0. 03、0. 76±0. 07、0. 62±0. 08、0. 91±0. 09,差异具有统计学意义(P 0. 01)。因MCF-7细胞中GPR30的表达量最高,故以MCF-7细胞为实验对象。经免疫荧光染色可知,GPR30高表达于乳腺癌MCF-7细胞的胞质和胞膜上。随着激动剂E_2使用剂量的提高和刺激时间的延长,pPI3K、p-Akt蛋白表达量均明显增高(P 0. 05),具有时间和剂量依赖性。激动剂E_2最佳使用剂量为10 mg/ml,最佳干预时间为10 min,经激动剂E_2(10 mg/ml)刺激乳腺癌MCF-7细胞10 min后,p-PI3K蛋白表达量显著升高(P 0. 05);而提前采取GPR30特异性阻断剂(G15)进行预处理后,MCF-7细胞中的p-PI3K蛋白表达量显著降低(P 0. 05)。采用激动剂E_2干预后,乳腺癌MCF-7细胞迁移能力明显提升(P 0. 05);而采用GPR30特异性阻断剂(G15)、PI3K特异性阻断剂(LY294002)干预后,乳腺癌MCF-7细胞迁移能力显著降低(P 0. 05)。结论经体外实验表明,GPR30-PI3K/Akt信号通路在乳腺癌中可能具有一定的交叉关系,并且该信号通路异常活化具有参与乳腺癌细胞迁移的作用。     

丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移及相关标志物表达的影响

目的 探讨不同浓度丙泊酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及对程序性死亡配体1(PD-L1)、细胞增殖核抗原(Ki-67)等相关标志物的影响。方法 体外培养人乳腺癌雌激素受体阳性细胞系MCF-7,随机将MCF-7分为3组,对每一组加入不同浓度的丙泊酚,即P₀组(空白对照组)、P₂₅组(25μg/ml丙泊酚组)和P₅₀组(50μg/ml丙泊酚组)。对三组细胞分别进行克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验、侵袭实验、划痕愈合实验以研究各组细胞的增殖、以及细胞的迁移、侵袭变化差异。使用Western blot检测不同浓度丙泊酚做用下对人乳腺癌相关蛋白表达改变情况。结果 与P₀组及P₂₅组相比,P₅₀组乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞迁移、侵袭能力显著升高(P<0.05)。通过Western blot实验发现：P₅₀组的PD-L1、Ki-67蛋白表达显著高于P₀组(P<0.05),其中PD...     

丙型肝炎病毒NS3蛋白对QSG7701细胞survivin的影响

目的观察丙型肝炎病毒NS3蛋白对QSG7701细胞survivin的影响及其与细胞凋亡的关系,以探讨HCVNS3蛋白是否通过调节survivin的表达来参与对细胞凋亡的调控,进而参与HCV相关性肝癌的发生。方法采用Western blot、免疫细胞化学检测血清饥饿前后细胞survivin蛋白表达的变化,采用TUNEL法检测血清饥饿前后细胞凋亡的变化。结果HCVNS3蛋白促进QSG7701细胞survivin的表达,血清饥饿诱导凋亡后,survivin表达降低,HCV NS3蛋白亦表现出促进survivin表达的作用,效果呈浓度依赖性和时间依赖性。经血清饥饿诱导凋亡后,HCV NS3蛋白抑制凋亡。结论HCV NS3蛋白可能通过促进QSG7701细胞survivin的表达从而抑制细胞凋亡,对HCV相关性肝癌的形成有一定作用。     

阿帕替尼对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞生物学行为的影响

目的探讨阿帕替尼对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞生物学行为的影响。方法取对数生长期的人乳腺癌MCF-7细胞,随机分为对照组和阿帕替尼组,对照组不予任何处理,阿帕替尼组分别给予浓度为2. 5μmol/L、5. 0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的阿帕替尼进行处理。采用二甲基四氮唑蓝(MTT)法检测浓度分别为2. 5μmol/L、5. 0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的阿帕替尼对MCF-7细胞生长抑制的作用;采用丫啶橙(AO)/溴乙锭(EB)染色法,于倒置荧光显微镜下观察MCF-7细胞形态变化;采用酶联免疫吸附法测定阿帕替尼对MCF-7细胞上清液血管内皮生长因子(VEGF)含量的影响;采用流式细胞仪检测阿帕替尼对MCF-7细胞周期和凋亡率的影响。结果阿帕替尼对MCF-7细胞具有明显的生长抑制作用,其抑制率随着浓度的增加而升高,呈明显的时间-剂量依赖关系(P 0. 05);对照组细胞结构正常,细胞核呈绿色;而阿帕替尼组细胞形态发生明显改变,染色质呈橘红色,呈凋亡状;与对照组细胞周期比较,干预组与对照组G_0/G_1期、S期、G_2/M期均值比率无明显统计学差异(P 0. 05);干预组VEGF分泌量明显下降,阿帕替尼浓度越高,VEGF分泌量越低(P 0. 05);阿帕替尼组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论阿帕替尼可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,且具有浓度依赖性,可能与减少VEGF的分泌有关。     

Akt1和ARK5在乳腺癌中的表达及临床病理意义

目的 探讨Akt1和ARK5在乳腺癌组织中表达与临床病理意义.方法 回顾性分析88例乳腺癌临床病理资料,将其肿瘤组织制成组织芯片,并用免疫组化EnVision两步法检测Akt1和ARK5在乳腺癌组织中的表达,取10例癌旁组织作对照.结果88例乳腺癌中Akt1阳性表达率是77.3％(68/88),乳腺癌中Akt1表达与淋...     

乳腺癌组织中survivin蛋白与C-erbB-2基因及各耐药基因表达的关系

目的 探讨survivin在乳腺癌组织中的表达与C-erbB-2基因及各耐药基因表达的关系.方法 采用免疫组织化学法检测51例乳腺癌患者肿瘤组织中survivin与C-erbB-2及各耐药基因的表达情况.结果 51例乳腺癌组织中survivin表达的阳性率为68.63％;survivin蛋白表达在有无淋巴结转移方面差异有统计学意义(P＜0.05),在肿瘤大小及雌激素受体方面差异无统计学意义(P＞0.05); survivin蛋白在C-erbB-2、肺耐药蛋白、胸苷酸合成酶、P-糖蛋白阳性者的阳性表达率高于C-erbB-2、肺耐药蛋白、胸苷酸合成酶、P-糖蛋白阴性者,差异有统计学意义(P＜0.05);在谷胱甘肽转移酶阳性者与阴性者间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 survivin在乳腺癌的发生发展中起一定作用;检测survivin对乳腺癌的预后分析和进一步治疗有指导意义.     

ASPP1和ASPP2基因高表达对白藜芦醇诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡能力的影响

目的观察ASPP1和ASPP2基因高表达对白藜芦醇诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡能力的影响。方法采用瞬时转染法将pcDNA3／ASPPI和pcDNA3／ASPP2质粒分别转染入乳腺癌细胞MCF-7中,经G418筛选获得高表达ASPP1和ASPP2的MCF7阳性克隆细胞株MCF-7／ASPP1与MCF7／ASPP2。MCF-7、MCF-7／ASPP1与MCF-7／ASPP2细胞分刖加入0、25、50μmol／L 白藜芦醇,采用MTT法检测细胞增殖情况,RT-PCT法检测细胞p53下游基因bax与p21mRNA表达情况;3种细胞分别加入0、100、200μmol／L 白藜芦醇,采用ELISA法检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示,25、50μmol／L。白藜芦醇处理后,MCF7／ASPP1与MCF-7／ASPP2细胞存活细胞吸光度值均明显低于MCF-7细胞（P〈0．05）;RTPCR结果显示,25、50μmol／L白藜芦醇处理后,MCF7／ASPPI与MCF-7／ASPP2细胞中Bax和p21mRNA表达水平高于MCF-7细胞;细胞凋亡试验结果显示,100、200μmol／L白藜芦醇处理后,MCF7／ASPP1与MCF-7／ASPP2细胞凋亡细胞吸光度值均明显高于MCF-7细胞（P〈0．05）。结论ASPP1和ASPP2高表达可增强乳腺癌细胞对自藜芦醇的敏感性,且随浓度增高而敏感性增强。     

Trichostatin A down-regulates CYP19 transcript and protein levels in MCF-7 breast cancer cells

Epidemiological and experimental evidence implicates estrogens in the etiology and progression of breast cancer. The biosynthesis of estrogens from androgens is catalyzed by an enzymatic complex designated as aromatase (CYP19).     

PRL-3基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察短发夹状小干扰RNA（shRNA）沉默PRL-3基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法：构建PRL-3基因特异性shRNA表达载体,使用脂质体法将PRL-3-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞。采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测转染后MCF-7细胞PRL-3基因mRNA和蛋白的表达;运用MTT法检测转染后MCF-7细胞的增殖水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：酶切鉴定和测序分析证实PRL-3-shRNA表达载体成功构建。转染成功后,PRL-3-shRNA组PRL-3基因mRNA和蛋白表达水平明显降低。MTT结果显示MCF-7细胞转染PRL-3-shRNA后细胞增殖水平降低;流式细胞仪检测显示,PRL-3-shRNA转染后,MCF-7细胞凋亡率明显增高。结论：沉默PRL-3基因表达可抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡。     

Effects of chemotherapy agents on Sphingosine-1-Phosphate receptors expression in MCF-7 mammary cancer cells

Sphingosine-1-phosphate (S1P) is a potent bioactive sphingolipid involved in the regulation of cell proliferation and cancer progression. Increased expression of S1P receptors has been detected in advanced breast tumours with poor prognosis suggesting that S1P receptors might control tumour response to chemotherapy. However, it remains unclear how the levels of S1P receptor expression are influenced by chemotherapy agents. Western immunoblotting, PCR analysis and fluorescent microscopy techniques were used in this study to analyze expression patterns of S1P receptors 2 and 3 (S1P2/S1P3) in MCF-7 breast adenocarcinoma cells treated by Tamoxifen (TAM) and/or Medroxyprogesterone acetate (MPA). We found that TAM/MPA induce downregulation of S1P3 receptors, but stimulate expression of S1P2. According to cell viability and caspase activity analyses, as expected, TAM activated apoptosis. We also detected TAM/MPA-induced autophagy marked by formation of macroautophagosomes and increased level of Beclin 1. Combined application of TAM and MPA resulted in synergistic apoptosis- and autophagy-stimulating effects. Assessed by fluorescent microscopy with autophagosome marker LAMP-2, changes in S1P receptor expression coincided with activation of autophagy, suggestively, directing breast cancer cells towards death. Further studies are warranted to explore the utility of manipulation of S1P2 and S1P3 receptor expression as a novel treatment approach.     

Doxycycline induces expression of P glycoprotein in MCF-7 breast carcinoma cells

P-glycoprotein (P-gp) overexpression by tumor cells imparts resistance to multiple antineoplastic chemotherapeutic agents (multiple drug resistance). Treatment of tumor cells with chemotherapeutic agents such as anthracyclines, epipodophyllotoxins, and Vinca alkaloids results in induction of P-gp expression. This study was performed to determine if clinically relevant antimicrobial drugs (i.e., drugs that are used to treat bacterial infections in cancer patients) other than antineoplastic agents can induce expression of P-gp in MCF-7 breast carcinoma cells. Expression of P-gp and MDR1 mRNA was determined in samples from MCF-7 cells that were treated in culture with doxorubicin (positive control) and the antimicrobial drugs doxycycline, piperacillin, and cefoperazone. The functional status of P-gp was assessed using laser cytometry to determine intracellular doxorubicin concentrations. The MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay was used to determine if the cytotoxicity of experimental drugs was related to their ability to induce P-gp expression. MCF-7 cells treated with doxycycline (MCF-7/doxy) were stimulated to overexpress P-gp, whereas cells treated with piperacillin and cefoperazone did not overexpress P-gp. MCF-7/doxy cells were compared to a positive-control subline, MCF-7/Adr, previously selected for doxorubicin resistance, and to MCF-7 cells treated with doxorubicin (MCF-7/doxo). All three sublines overexpressed P-gp and MDR1 mRNA and accumulated less intracellular doxorubicin than did control MCF-7 cells. P-gp expression was induced only by experimental drugs that were cytotoxic (doxorubicin and doxycycline). Doxycycline, a drug that has been used for treatment of bacterial infections in cancer patients, can induce functional P-gp expression in cancer cells, resulting in multidrug resistance.     

青蒿琥酯对生存素在乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达的影响

目的 探讨青蒿琥酯对生存素(survivin)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中表达的影响.方法 以不同浓度(0、25、50 μg/mL)的青蒿琥酯处理MDA-MB-231细胞,分别于药物处理后24、48和72 h收集细胞及培养上清液,用RT-PCR检测不同组别、不同时间点的细胞中survivin的基因表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组、各时间点培养上清液中survivin的蛋白质表达水平.结果 PCR结果和ELISA结果均显示,随着药物浓度的增加和处理时间的延长,survivin基因水平和蛋白质水平的表达也逐渐降低,同一时间点各组间survivin的表达量进行单因素方差分析,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组(0 μg/mL)在24 h和48 h survivin的表达量变化不大,经t检验分析,差异无统计学意义(P＞0.05),而各浓度经药物处理48 h后survivin的表达量明显低于24 h的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可通过抑制survivin的表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

艾塞那肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的:研究艾塞那肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及涉及的信号通路。方法:艾塞那肽以不同浓度、时间作用于人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法测细胞数目,流式细胞仪测定细胞周期,Western blot测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,Erk1/2)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)磷酸化程度。结果:艾塞那肽1、10 nmol/L作用24、48 h或100、1 000 nmol/L作用24、48、72、96 h,MCF-7细胞数目减少,但差异无统计学意义,艾塞那肽1、10 nmol/L作用72、96 h,MCF-7细胞数目较对照组明显减少(P<0.05)。艾塞那肽10 nmol/L作用96 h,S+G2/M期细胞数目减少(P<0.05),同时出现Erk1/2磷酸化程度下降、Akt磷酸化程度升高,但差异无统计学意义。结论:艾塞那肽1、10 nmol/L作用MCF-7细胞72、96 h,抑制细胞增殖,该作用未涉及Erk和PI3K/Akt信号通路。