姜黄素对乳腺癌细胞顺铂敏感性的影响

目的 探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制.方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0、1.25、2.5、5、10、20 μg/mL)、姜黄素(0、1、5、20、30、50、100 μmol/L)单独及联合处理后FEN1(flap endonuclease 1)表达水平的变化;CCK-8检测沉默FEN1对MCF7细胞中CDDP敏感性的影响.结果 CDDP、姜黄素均可以剂量依赖方式抑制MCF7细胞增殖,其IC50分别为5、30 μmol/L;与单独2μg/mLCDDP处理组比较,2μg/mL CDDP联合20-μmol/L姜黄素、30 μmol/L姜黄素处理组对细胞增殖的抑制效应明显增强[分别为(84.1±0.8)％、(51.1±0.5)％、(29.4±0.3)％,P＜0.05];与单独20μmol/L姜黄素处理组比较,20 μmol/L姜黄素联合2μg/mL CDDP、5μg/mL CDDP处理组对细胞增殖的抑制效应也明显增强[分别为(76.9±0.7)％、(42.4±0.3)％、(31.6±0.4)％,P＜0.05];2μg/mL CDDP联合20 μmol/L姜黄素组的细胞凋亡明显增强(P＜0.05);与Control siRNA组比较,FEN1 siRNA+CDDP组可显著增强CDDP抑制MCF7细胞增殖的敏感性[(25.4±0.3)％vs(18.7±0.2)％,P＜0.05];CDDP增殖抑制无效浓度或低浓度时,FEN1蛋白的表达随CDDP的处理剂量依赖性上调,而姜黄素可剂量依赖性下调FEN1蛋白表达;与单独CDDP和姜黄素处理组比较,2μg/mL CDDP联合20 μmol/L姜黄素组可显著降低FEN1蛋白表达(P＜0.05).结论 姜黄素可增强CDDP对乳腺癌细胞的敏感性,其机制与降低细胞FEN1的表达有关.     

双氢青蒿素对MRL/lprSLE小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响研究

目的探讨双氢青蒿素对MRL/lpr系统性红斑狼疮（SLE）小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响。方法从MRL/lprSLE小鼠脾脏获取CD4+T细胞,进行体外细胞双氢青蒿素干预培养。通过CCK-8实验检测双氢青蒿素的细胞毒性,高效液相色谱技术检测CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平,RT-PCR和Westernblot检测CD4+T细胞DNA甲基化转移酶1（DNMT1）、生长阻滞和DNA损伤基因a（Gadd45a）mRNA和蛋白表达水平。结果双氢青蒿素对SLE小鼠CD4+T的半抑制浓度（IC50）为62滋mol/L。双氢青蒿素可抑制CD4+T细胞增殖,且随着浓度的增加,对CD4+T细胞增殖的抑制作用增强。双氢青蒿素干预后,CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平显著升高;且双氢青蒿素浓度越高,基因组DNA甲基化水平越高。双氢青蒿素干预培养后,SLE小鼠CD4+T细胞DNMT1mRNA和蛋白水平均明显上调,而Gadd45amRNA和蛋白水平均明显下调,其作用与浓度有关。结论双氢青蒿素可能通过DNA甲基化调控机制发挥治疗SLE的作用。     

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。     

乳腺癌相关基因异常甲基化研究进展及其临床应用

乳腺癌是世界范围内女性常见的恶性肿瘤。由于发病机制复杂,目前还缺乏有效的一级预防措施,早发现、早诊断、早治疗有助于改善预后并提高生存质量。抑癌基因启动子区DNA异常甲基化是乳腺癌发生过程中的早期事件,及时识别乳腺组织及外周血循环DNA甲基化模式的变化是最有前景的早期诊断手段之一。本文重点介绍乳腺癌抑癌基因DNA甲基化研究进展及其临床应用。     

DNA甲基转移酶3b对乳腺癌细胞微小RNA表达的影响

目的 通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响.方法 通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲基化水平,免疫荧光染色检测其抑制...     

乳腺癌DNA甲基化临床研究进展

乳腺癌在女性恶性肿瘤中发病率和病死率均较高,是肿瘤研究中的热点问题。基因异常甲基化作为肿瘤发生过程中的关键性分子事件,对乳腺癌发生、发展、转移等病理过程均有重要影响,且特定基因甲基化改变呈现出显著的肿瘤特异性,因而异常的DNA甲基化可能成为乳腺癌潜在的生物学标志物。鉴定可靠的DNA甲基化生物标签不仅能发掘乳腺癌早期诊断的新指标,更早地筛查和诊断乳腺癌,同时还具有成为乳腺癌强预后因子的潜力。以异常DNA甲基化为治疗靶点,也将有助于改善乳腺癌的临床治疗。     

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞体外生长的影响

【摘要】 目的 探讨姜黄素通过Notch1途径影响前列腺癌PC-3细胞体外生长的分子机制。方法培养前列腺癌PC-3细胞,分别给予不同浓度的姜黄素处理,分别为500 nmol/L组、10 μmol/L组、100 μmol/L组和空白对照组。观察PC-3细胞增殖和凋亡的变化,并分析姜黄素对Notch1和PI3K mRNA水平的影响。结果不同剂量的姜黄素均可抑制PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,增加Caspase-3和Caspase-9活性（均P<0.05）,并具有一定的剂量依赖性。PC-3细胞中Notch1 和PI3K高表达,经过姜黄素处理的PC-3细胞,可以显著降低Notch1 和PI3K mRNA水平和蛋白表达（P< 0.05）,体现一定的剂量依赖性。结论姜黄素通过Notch1途径抑制前列腺癌PC-3细胞的体外生长。     

乳腺癌组织与血清BRCA1基因异常甲基化的临床意义

目的:探讨乳腺癌BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其在乳腺癌早期诊断中的价值。方法:用甲基化特异PCR方法对乳腺癌患者癌组织、癌旁组织及对应血浆进行BRCA1异常甲基化检测。结果:乳腺癌组织中BRCA1启动子异常甲基化检出频率为35/102(34%),血浆的检出率为32/102(32%),而癌旁组织中没有检出BRCA1异常甲基化。根据不同病理特征将35例散发性乳腺癌按组织类型、不同分级、有无淋巴结转移和年龄进行分类分析。结果显示,MSP法检测肿瘤组织与对应血浆BRCA1异常甲基化有很好的一致性(P>0.05)。102例患者的组织与血清中甲基化检出率的一致性良好(Kappa=0.765)。BRCA1基因甲基化结合病理特征表明,BRCA1基因在原位癌中甲基化检出率明显低于浸润性癌(P<0.05),有淋巴结转移相应标本BRCA1基因甲基化检出率也明显高于无淋巴结转移的标本(P<0.05),而BRCA1基因甲基化与否与肿瘤分级及年龄(绝经前后)无明显关联(P>0.05)。结论:BRCA1基因异常甲基化在乳腺癌组织与血清有相似的甲基化模式,且在乳腺癌的组织分型与转移方面有一定的鉴别诊断价值。     

乳腺癌相关基因DNA甲基化的研究进展

乳腺癌是女性发生率较高的恶性肿瘤之一,其产生与发展是一个复杂的生物学过程,而DNA甲基化是促使乳腺癌发生的重要方式。DNA甲基化可介导乳腺癌致病基因的异常表达。随着人们对乳腺癌认识的不断深入,通过基因组水平筛选出乳腺癌主要致病基因,对进一步诊断及治疗乳腺癌有重要意义。本文对乳腺癌DNA甲基化及相关基因的研究进展进行综述与评价。     

土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响

目的:观察土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响.方法:Annexin V-FITC/PI双标法检测100、200、400 μmol/L土大黄苷对SK-BR-3细胞凋亡的影响,Western blot法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达情况,试剂盒检测caspase-3的活性变化.结果:土大黄苷可诱导SK-BR-3细胞出现明显的早期凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05～P<0.01).土大黄苷在100、200、400 μmol/L浓度时均可抑制Bcl-2蛋白的表达,且随着其浓度的增加,蛋白表达逐渐降低,并促进Bax蛋白的表达(P<0.01).土大黄苷对caspase-3具有激活作用,且随着土大黄苷浓度的增加,caspase-3的活化程度逐渐增强.结论:土大黄苷具有诱导乳腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及激活caspase-3有关(P<0.01).     

环状RNA hsa_circ_0002185对乳腺癌细胞瘤细胞活力和侵袭能力的影响及其作用机制

目的 ：探讨环状RNA hsa＿circ＿0002185对乳腺癌细胞瘤细胞活力和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 ：收集2018年1月至2020年1月在宁夏医科大学总医院接受根治性手术治疗的20对乳腺癌组织及癌旁,通过qRT-PCR检测hsa＿circ＿0002185和hsa-miR-1248在人乳腺上皮细胞MCF10A和人乳腺癌细胞（MCF-7、T47D、BT-474和SK-BR-3）中m RNA的表达水平。构建T47D-siCirc(hsa＿circ＿0002185沉默)和T47D-NC（空载体对照）细胞株系,并以T47D作为空白对照,qRT-PCR检测hsa＿circ＿0002185 m RNA的表达水平;分别采用CCK-8细胞活性实验、划痕实验和Transwell实验检测hsa＿circ＿0002185对T47D细胞的增殖、迁移和侵袭能力;免疫荧光实验检测E-cadherin和Vimentin表达;使用生物信息学网站Circular RNA Interactome预测hsa＿circ＿0002185可互补结合的miRNA,再根据Targetscan网站预测相应miRNA可靶向结...     

HER-2／neu·siRNA表达载体的构建及对人乳腺癌细胞株的影响

目的：探讨siRNA对人乳腺癌细胞株SK—BR-3的HER-2／neu基因表达的影响。方法：以HER-2／neu mRNA序列为模板设计合成2对siRNA序列,构建pGenesil-1-HER-2／neusiRNA重组质粒,转化感受态的大肠杆菌,质粒酶切、测序鉴定。转染SK—BR-3细胞48h后,提取RNA进行RT—PCR,采用方差分析（ANOVA）,分析RNA干扰效应。结果：成功构建了pGenesil-1-HER-2／neu siRNA重组质粒,成功转染SK—BR-3细胞。重组质粒抑制HER-2／neu基因的表达接近54．45％（P=0．000）。结论：HER-2／neu siRNA重组质粒明显下调HER-2／neu基因在乳腺癌细胞中的表达。     

他莫昔芬对ER- GPER+乳腺癌细胞上皮间质转化的影响及机制

目的：探讨他莫昔芬（TAM）对雌激素受体（ER）阴性、G蛋白偶联雌激素受体（GPER）阳性乳腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法：以ER阴性（ER-）、GPER阳性（GPER+）乳腺癌MDA-MB-468细胞为研究对象,用TAM处理细胞,GPER特异性抑制剂G15抑制胞内GPER活性,siRNA干扰GPER蛋白表达,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测ERα、GPER、Vimentin、E-cadherin及N-cadherin蛋白表达变化。结果：TAM（5 μmol/L）可明显增强MDA-MB-468细胞的侵袭能力（P＜0.01）;G15（10 μmol/L）预处理能显著抑制TAM诱导的细胞侵袭活动（P＜0.01）;GPER-siRNA可明显干扰MDA-MB-468细胞GPER蛋白表达（P＜0.01）;干扰GPER蛋白表达能有效抑制TAM诱导的细胞侵袭活动（P＜0.01）。TAM处理明显诱导Vimentin和N-cadherin蛋白表达上调（P＜0.01）,E-cadherin蛋白表达下调（P＜0.01）;G15预处理或干扰GPER蛋白表达均能抑制TAM的上述诱导作用（均P＜0.05）。结论：TAM能诱导ER- GPER+乳腺癌MDA-MB-468细胞EMT,其作用与其激活GPER有关。     

槲皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-435S抑制作用及其机制

目的探讨槲皮素抑制乳腺癌增殖的作用及其机制。方法MTT法检测槲皮素对ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-435S生长的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR及免疫组化方法检测槲皮素作用后VEGF、p53mRNA及蛋白质的表达。结果(1)槲皮素可呈时间及浓度依赖性地抑制乳腺癌的生长和增殖,其IC50为17.59μM。(2)流式细胞仪分析发现,槲皮素作用48h后,细胞被阻滞于G0/G1期。(3)槲皮素作用后VEGF、p53mRNA及蛋白质的表达下调。结论(1)槲皮素具有抑制ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-435S生长的作用,并呈时间及浓度依赖性。(2)槲皮素抗乳腺癌增殖作用的可能机制槲皮素下调乳腺癌细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达使肿瘤细胞的自分泌因子作用减弱;下调MTp53mRNA及蛋白质的表达从而将乳腺癌细胞阻滞于G0/G1期,不能继续增殖。     

过表达CHL1基因对乳腺癌细胞瘤细胞活力、侵袭能力和凋亡的影响及其作用机制

目的：探讨过表达细胞黏附样分子（close homologue of L1,CHL1）基因对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法：细胞实验分为正常组（细胞常规培养,不进行外界干预）、对照组（细胞转染pcDNA3.1-CHL1-mimic-NC后,常规培养）、实验组（细胞转染pcDNA3.1-CHL1-mimic后,常规培养）;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。Western blot检测各组细胞中CHL1、分化抗原44(CD44)表达的水平。结果：单因素方差分析显示,正常组、对照组和实验组细胞凋亡率、侵袭细胞个数及CHL1、CD44表达水平的差异均具有统计意义（F=2698.000,P=0.000;F=655.973,P=0.000;F=914.107,P=0.000;F=3653.000,P=0.000）。流式细胞结果显示实验组细胞的凋亡率明显高于对照组（P=0.000）;Transwell小室显示实验组细胞的细胞侵袭个数明显少于对照组（P=0.000）;Western blot检测显示实验组细胞中CHL1的表达明显高于正常...     

姜黄素对肾癌ACHN细胞增殖与凋亡的影响及作用机制

目的 研究姜黄素对肾癌ACHN细胞增殖与凋亡的影响,并探讨其中的作用机制。方法不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)姜黄素作用于ACHN细胞不同时间(12、24、48 h)后,利用CCK-8检测细胞增殖活性的改变;应用Annexin-V/PI双标染色后上流式细胞仪检测细胞凋亡变化;Real-time PCR测定Notch1基因表达量的变化;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3和Notch蛋白表达情况。结果CCK-8结果表明,姜黄素作用后ACHN细胞增殖速度减慢（P<0.05）,且抑制作用呈时间及浓度依赖性;流式检测结果显示姜黄素作用后ACHN细胞凋亡增加（P<0.05）;Real-time PCR检测结果显示Notch1基因表达增加,且表达量呈时间及浓度依赖性(P<0.05);Western blot检测发现随着姜黄素浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bax、Caspase-3、Notch1蛋白表达增加。结论姜黄素能够抑制肾癌ACHN细胞的增殖并诱导其凋亡,其过程可能通过调节Notch1基因的表达,抑制抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达,促进凋亡因子Bax蛋白表达,从而激活促凋亡因子Caspase-3,继而引发凋亡反应。     

熊果酸对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨熊果酸（UA）对ER（-）、Her-2过表达的人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响。方法利用噻唑蓝（MTT）比色法观察UA对SK-BR-3细胞增殖的影响。用Hoechst 33258荧光染色及电子显微镜观察凋亡细胞核形态变化。流式细胞仪检测UA对细胞周期的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段的断裂。结果UA明显抑制SK-BR-3细胞的增殖,差异有统计学意义（P〈0.05）,并呈时间和浓度依赖性。经UA处理后的实验组细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光。流式细胞仪检测发现UA作用48h,后SK-BR-3细胞阻滞在G0/G1期,差异有统计学意义（均P〈0.05）。DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA大片段的断裂。结论UA在体外对SK-BR-3细胞具有抗增殖和诱导凋亡的作用。     

异氟醚对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响及相关机制探讨

目的探讨异氟醚对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖凋亡的影响机制。方法采用MTT法观察异氟醚作用24 h对MDA-MB-231细胞(密度5×10~5/孔)增殖能力的影响;采用Western blot法检测磷酸化Akt(蛋白激酶B,protein kinase B),Bcl-xl(B细胞淋巴瘤/白血病-xl基因,B-cell lymphoma-extra large)、Bad(人促凋亡蛋白,Human apoptosis protein)的蛋白表达情况,以探究其对细胞凋亡的调控机制。结果(1)异氟酿对人乳腺癌MDAM B-231细胞增殖的抑制作用,随着时间的延长逐渐增强,与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P0.05)。结果可见异氟醚对人乳腺癌MDA-MB-231细胞増殖起到抑制作用,且具有明显的量效与时效关系;(2)各组磷酸化Akt的表达变化差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比、异氟醚组磷酸化Akt在麻醉24h降低63.1%(P0.05),48 h及72 h均呈回升趋势(P0.05);(3)实验组咅时点Bad表达的变化差异没有统计学意义(P0.05)。但各时点Bcl-xl表达的变化有显著差异(P0.05),7+2.h Bcl-xl表达较对照组下降82.2%(P0.05)。结论异氟醚可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并可通过Akt/Bd细胞通路诱导其细胞凋亡。