ROS在FTY720诱导U266细胞死亡中的作用机制研究

本研究探讨活性氧（ROS）在FTY720诱导多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡及自噬中的作用。不同浓度FTY720处理U266细胞24 h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测LC3B的表达。结果显示：应用FTY720可引起U266细胞发生凋亡及自噬,自噬的发生可促进细胞死亡。自噬抑制剂Bafilomycin A1可降低FTY720导致的细胞生存率下降。应用ROS抑制剂NAC或Tiron后,FTY720引起的细胞凋亡减轻,联合应用NAC或Tiron和FTY720后LC3B-Ⅱ表达较单用FTY720明显下降。结论：FTY720可诱导U266细胞发生凋亡及自噬,ROS是FTY720引起的多发性骨髓瘤细胞凋亡及自噬的共同调节剂。     

腺苷对人胃癌MGC-803细胞增殖与凋亡的影响

目的观察腺苷(adenosine)对人胃癌MGC-803细胞的增殖、凋亡的影响。方法 CCK-8法检测不同浓度腺苷(0.01~10 mmol/L)对胃癌MGC-803细胞增殖的影响。流式细胞仪检测腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)对细胞凋亡的影响。Western blot检测腺苷处理后细胞内凋亡相关蛋白和内质网应激相关蛋白的表达量。结果腺苷能抑制胃癌MGC-803细胞的活力,并且呈现浓度和时间依赖性(P0.05)。腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)处理24 h后,细胞的总凋亡率显著升高(P0.01)。腺苷可以引起凋亡相关蛋白Caspase-3活化片段的蛋白表达量上调(P0.01)。腺苷能诱导内质网应激(ERS)相关蛋白Caspase-4活化片段、p-JNK、CHOP、GRP78的表达量上调(P0.05)。结论腺苷可以抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,并且促进凋亡,而内质网应激可能参与了腺苷引起的凋亡。     

内质网应激对非酒精性脂肪性肝病细胞线粒体凋亡影响研究

目的探讨内质网应激对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型中线粒体途径凋亡的影响。方法采用油酸诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪变性细胞模型,将实验细胞分为对照组、造模12h组、造模16h组和4-苯基丁酸(4-PBA,加入内质网抑制剂)组,BODIPY 493/503染色检测细胞内脂肪变性;采用Hoechst 33258染色观察各组细胞凋亡情况及Annexin V-FITC/PI双染法检测各组HepG2细胞凋亡率;采用JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位(MMP)变化。采用免疫蛋白印迹(Western blot)检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及线粒体途径凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的以及细胞质细胞色素C(CytC)的表达。结果与对照组相比,造模组细胞内脂质沉积明显增加;与造模16h组相比,4-PBA组细胞内脂质沉积明显降低。Hoechst 33258染色及Annexin V-FITC/PI双染法检测提示与对照组相比,造模后细胞凋亡增加;与造模16h组相比,4-PBA组细胞凋亡率明显降低。JC-1法检测显示与对照组相比,造模后细胞MMP下降,加用4-PBA后细胞MMP升高。Western blot检测显示造模后细胞Bax、Caspse-3、GRP78、CHOP、胞质CytC蛋白表达增加,而Bcl-2表达降低;加用4-PBA后细胞GRP78、CHOP、Bax、Caspse-3、胞质CytC蛋白表达降低,而Bcl-2表达增加。结论内质网应激可诱导NAFLD细胞线粒体途径凋亡。     

NADPH氧化酶抑制剂对高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞中内质网应激的作用机制探讨

目的探讨在有或无还原型烟酰胺腺嘌呤核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂存在的条件下,高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞中内质网应激蛋白GRP78及凋亡蛋白caspase-12表达的变化,从细胞和分子水平探讨糖尿病肾病中氧化应激和内质网应激的相互作用机制。方法大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)培养,使用高糖(30mmol/L)DMEM培养基刺激NRK52E细胞24 h,荧光显微镜检测细胞内活性氧ROX的产生量,Western-blot检测细胞内内质网应激蛋白GRP78及凋亡蛋白Caspase12的表达;并且使用NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μM)预处理细胞,并观察其对细胞内ROX产生及GRP78和Caspase12蛋白的表达影响。结果高糖刺激24 h可明显增加细胞内ROS的产生,为正常对照组的2.5倍(P<0.05)。NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μΜ)预处理后,高糖诱导的细胞内ROS产生明显受到抑制,较高糖刺激刺激组降低了43.69%(P<0.05)。高糖刺激NRK52E细胞24 h后可,细胞内内质网应激蛋白GRP78蛋白表达显著上调,为正常对照组的5倍(P<0.05)。与正常对照组相比,高糖刺激组NRK52E细胞凋亡相关蛋白caspase12的表达也显著增加(P<0.05)。NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μΜ)预处理后并高糖刺激NRK52E细胞24 h,与高糖刺激组相比,DPI处理组NRK52E细胞内质网应激蛋白GRP78表达显著下调(P<0.05),凋亡相关蛋白caspase12的表达显著下调(P<0.05)。结论高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞后,细胞内发生氧化应激与内质网应激反应,并且氧化应激可能作为上游信号诱导细胞内内质网应激反应的发生,并最终导致细胞凋亡的发生。     

双去甲氧基姜黄素抑制肝癌细胞增殖并诱导凋亡的机制

目的探讨双去甲氧基姜黄素(BDMC)对肝癌细胞的作用及其机制。方法不同BDMC(0、20、40、80μmol/L)干预肝癌细胞株HEPG2 72 h,MTT评价细胞增殖,Tunel分析细胞凋亡,ELISA检测活性氧(ROS)水平和p-STAT3水平,Western blot检测AMPK。采用ROS抑制剂N-乙酰-L半胱氨酸(NAC 2.5 mmol/L)处理30 min后BDMC再干预24 h,评价细胞凋亡能力。结果 BDMC可诱导肝癌细胞凋亡,增加ROS生成和AMPK磷酸化水平,抑制p-STAT3表达。抑制ROS生成可抑制BDMC诱导HEPG2凋亡的能力。结论 BDMC通过ROS/AMPK/STAT3信号通路诱导肝癌细胞凋亡。     

活性氧在荆花牡荆素诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定CAS对A549细胞增殖的抑制;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针流式细胞术分析活性氧(ROS)生成.结果 CAS能抑制人肺癌A549细胞增殖,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10 μmol/L的CAS作用A549细胞12 h、24 h、48 h后,其凋亡率分别为22.39%、38.66%、64.82%.H2DCFH-DA探针流式细胞术分析表明,完全培养基组、溶媒(0.1% DMSO)组对A459细胞作用0 h;CAS(10 μmol/L)对A549细胞作用3 h、6 h、12 h;N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,10 mmol/L)+CAS(10 μmol/L)组对A549细胞作用6 h的ROS生成水平分别为8.47、15.26、66.2、74.1、82.2、67.3,随着CAS作用时间延长,细胞内ROS水平增加.NAC对细胞凋亡有抑制作用.结论 CAS可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与提高细胞内ROS产生增加有关.     

顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激差异的研究

目的研究顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激的差异。方法顺铂分别作用SKOV3组、SKOV3/DDP组细胞0 h、12 h、24 h。MTT检测两种细胞对顺铂敏感性差异;Western blot方法检测并比较内质网应激相关蛋白表达;RT-PCR方法检测顺铂对各时间点细胞的XBP-1表达。结果顺铂诱导两种细胞内质网应激存在显著差异。顺铂引起SKOV3细胞中内质网应激相关蛋白明显活化;而对SKOV3/DDP细胞中内质网应激相关蛋白没有明显影响;顺铂诱导SKOV3/DDP中XBP-1明显表达上调。结论顺铂诱导的内质网应激相关基因的表达差异可能是卵巢癌细胞耐药机制之一。     

高容量血液滤过对多器官功能障碍综合征犬内质网应激标志蛋白Caspase-12基因水平及表达的影响

目的探讨高容量血液滤过(HVHF)治疗多脏器功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)对内质网应激相关性细胞凋亡及应激标志蛋白Caspase-12基因水平及表达的影响,并探讨高容量血液滤过(high volume hemofiltration,HVHF)治疗MODS的机制。方法经二次打击建立犬MODS模型。分HVHF组和MODS组,于术前(T1)、内毒素注射完后0h(T2)、6h(T3)、12h(T4)及24h(T5)留血标本。体内实验:应用荧光定量PCR法检测肝、肾及肺组织Caspase-12m RNA基因表达水平。体外实验:2组血清体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立内质网应激凋亡模型。测定si RNA干扰前后Caspase-12m RNA基因表达、蛋白表达及内皮细胞凋亡率。结果体内实验:与MODS组相比,HVHF组肾、肺组织Caspase-12m RNA基因表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05),而肝组织Caspase-12m RNA基因表达水平无明显差异(P0.05)。体外实验:干扰前与MODS组相比,HVHF组在T2-T5HUVECs Caspase-12m RNA基因表达水平、Caspase-12蛋白表达水平及细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。干扰后2组HUVECs Caspase-12m RNA基因表达水平、Caspase-12蛋白表达水平及细胞凋亡率均较干扰前显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论内质网应激凋亡信号通路在MODS演进过程中占重要地位,经过HVHF治疗后内质网应激(ERS)凋亡信号通路中的关键蛋白Caspase-12基因表达、Caspase-12蛋白表达水平及细胞凋亡率均明显下降,此作用有助于减轻机体细胞凋亡程度,有效地救治MODS。而RNA干扰(RNAi)技术有望成为治疗MODS新的治疗靶点。     

丹参素对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞损伤和内质网应激的改善作用

目的观察丹参素(DLA)通过抑制内质网应激和凋亡对H9C2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后损伤的保护作用。方法将离体培养的H9C2心肌细胞随机分为3组:对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、DLA+H/R组(DLA组)。H/R组先缺氧6h后复氧24h;DLA组于缺氧时给予DLA(10-6M)培养6h,再复氧24h。对照组心肌细胞正常培养至实验结束。ELISA测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和丙二醛(MDA)的含量;Western blot检测细胞中内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Caspase-12、Bax、Bcl-2和SOD的蛋白含量。结果与对照组比较,H/R组细胞LDH、CK-MB和MDA的含量显著升高(P<0.05),GRP78、Caspase-12和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),而Bcl-2和SOD的蛋白含量明显降低(P<0.05);给予DLA可明显改善上述指标的变化。结论H/R可诱导H9C2心肌细胞发生凋亡、氧化应激和内质网应激,引起细胞损伤和凋亡;DLA可以通过抑制凋亡、氧化应激和内质网应激,减少细胞损伤,发挥保护细胞的作用。     

HMGB1对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究高迁移率蛋白1(HMGB1)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法膀胱癌细胞BIU-87分成对照组、siRNA control组、HMGB1 siRNA组共3组,siRNA control组、HMGB1 siRNA组细胞为感染siRNA control慢病毒和HMGB1 siRNA慢病毒的BIU-87细胞,对照组为不感染慢病毒的BIU-87细胞。用Realtime PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平。MTT检测膀胱癌细胞增殖活性,流式细胞术检测膀胱癌细胞凋亡,Western blot检测膀胱癌细胞中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、活化型Caspase-12(Cleaved Caspase-12)、活化转录因子4(ATF4)蛋白水平。结果 HMGB1 siRNA可以下调膀胱癌细胞中HMGB1的表达和转录,siRNA control对膀胱癌细胞中HMGB1表达没有影响。沉默HMGB1后膀胱癌细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-12表达水平升高,内质网应激蛋白CHOP、ATF4表达水平也升高。结论 HMGB1沉默可以通过内质网途径诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察

失眠症又称不寐，指入睡困难，或维持睡眠障碍（易醒、早醒和再入睡困难）导致睡眠时间减少或睡眠质量下降，不能满足身体生理需要，明显影响日间社会功能和生活质量。现将星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察总结如下。