CNTN1基因对乳腺癌细胞株Hs578T增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的：研究CNTN1基因对乳腺癌细胞株Hs578T细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。方法：将前期构建的稳定表达pEGFP－N1－CNTN1的Hs578T细胞系,采用MTT、流式细胞仪技术、平板克隆实验及Transwell实验检测pEGFP－N1－CNTN1对Hs578T细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。结果：与空白组及对照组相比,过表达CNTN1基因的Hs578T细胞增殖能力、克隆形成、迁移及侵袭能力增强（P＜0．05）。结论：CNTN1基因能够增强Hs578T细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。     

ZEB1过表达对乳腺浸润性导管癌细胞增殖与转移潜能影响

目的乳腺浸润性导管癌(breast invasive carcinoma,BRCA)在乳腺癌中最常见,比导管原位癌恶性程度更高,预后和治疗效果不乐观。本研究通过检测BRCA细胞中E盒锌指结合蛋白(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)的表达,分析其过表达对人BRCA细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,探讨其与BRCA发生发展的关系。方法通过蛋白质印迹法检测BRCA细胞中ZEB1蛋白水平的表达情况,另构建过表达ZEB1BRCA细胞并通过蛋白质印迹法确认其过表达水平。采用细胞计数盒8(cell counting kit 8,CCK8)法和Transwell实验分别检测过表达ZEB1对BRCA细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果蛋白质印迹法结果显示,ZEB1在BRCA细胞HCC38和BT474中的表达分别为0.28±0.02和0.22±0.01,低于正常乳腺上皮细胞(0.90±0.06),差异有统计学意义,t值分别为23.56和18.33,均P<0.001。CCK8实验结果显示,HCC38细胞ZEB1过表达组和Vector组经2因素分析结果显示F组别=6.610,P组别=0.042;F时间=9.236,P时间=0.963;F组别×时间=26.287,P组别×时间<0.001。这表明处理药物的主效应差异有统计学意义,而且药物与时间存在协同作用。ZEB1过表达组在第4天和第5天时的细胞增殖活性低于Vector组,且差异有统计学意义(t4d=4.370,P4d=0.001;t5d=5.627,P5d=0.001);BT474细胞ZEB1过表达组和Vector组经2因素分析结果显示F组别=6.737,P组别=0.039;F时间=14.619,P时间=0.921;F组别×时间=267.723,P组别×时间<0.001。这表明处理药物的主效应差异有统计学意义,而且药物与时间存在协同作用。BT474细胞ZEB1过表达组在第4天和第5天时,细胞增殖活性低于Vector组,差异有统计学意义(t4d=3.682,P4d=0.001;t5d=6.819,P5d<0.001)。Transwell迁移和侵袭实验发现,在HCC38细胞中过表达ZEB1,细胞迁移数目为41±7.94,少于Vector组82.33±7.09,t=4.28,P=0.003;在BT474细胞中过表达ZEB1,细胞迁移数目为44.33±6.11,也少于对应的Vector组89.33±5.69,t=5.51,P=0.006;过表达ZEB1的HCC38细胞,细胞侵袭数目为22.33±4.04,少于对照66.33±8.74,t=2.41,P=0.001;过表达ZEB1的BT474细胞,细胞侵袭数目为21.33±2.52,少于Vector组62.67±6.66,t=3.07,P=0.004。结论ZEB1在BRCA细胞中低表达,过表达ZEB1抑制BRCA细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

下调胰岛素样生长因子-1表达对人胃癌细胞增殖和侵袭及迁移的影响

目的 胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor-1,IGF-1)作为体内重要的促有丝分裂原分子,可能与恶性肿瘤的转化及转移相关,但是目前有关IGF-1的表达与胃癌细胞迁移、侵袭的研究较少.本研究旨在研究IGF-1在胃癌组织中的表达,并探讨其表达对人胃癌HGC-27细胞体外增殖及侵袭、迁移能力的影响.方法 检测承德医学院附属医院2014-05-10-2016-05-10胃癌手术切除78例胃癌组织、30例癌旁正常组织及体外不同胃癌细胞系中IGF-1的表达情况.针对IGF-1基因序列,设计发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)干扰序列并构建干扰载体,转染胃癌HGC-27细胞.荧光实时定量PCR及蛋白质印迹技术分别检测转染干扰载体后HGC-27细胞中IGF-1的表达情况.细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测下调IGF-1对体外细胞HGC-27增殖及迁移、侵袭能力的影响.结果 免疫组织化学法检测显示,低分化胃癌组织中IGF-1阳性表达率为76％(29/38),高、中分化为53％(21/40),癌旁正常组织为27％(8/30).不同胃癌组织与癌旁组织中IGF-1的表达差异有统计学意义,x2=16.66,P＜0.01.并且其表达与胃癌的病理分期(x2=7.430,P=0.007)、组织分化(x2=4.618,P=0.032)等病理因素相关.体外不同胃癌细胞系中IGF-1均呈现高表达,但差异无统计学意义.利用干扰载体能够有效下调胃癌细胞HGC-27中IGF-1在mRNA及蛋白质水平的表达.与空载体转染对照组和野生型HGC-27细胞比较,IGF-1表达下调明显抑制胃癌细胞的体外增殖和侵袭、迁移能力.结论 IGF 1在体内胃癌组织及体外胃癌细胞中高表达,下调IGF-1的表达能够抑制人胃癌细胞HGC-27的增殖及体外侵袭、迁移能力.     

microRNA-506 regulates proliferation,migration and invasion in hepatocellular carcinoma by targeting F-spondin 1 (SPON1)

Our previous study indicates microRNA-506 (miR-506) is downregulated in hepatocellular carcinoma (HCC). In the current study, we investigate the effects of miR-506 on proliferation, migration and invasion in HCC. We report that enforced expression of miR-506 inhibits proliferation, migration and invasion in vitro, and suppresses tumor growth in vivo. Conversely, suppression of miR-506 exhibits promoting effects on proliferation, migration and invasion in vitro, and on tumor growth in vivo. In addition, miR-506 binds to the 3’UTR of F-spondin 1(SPON1), and enforced expression of miR-506 decreases accumulation of SPON1. Moreover, enforced expression of SPON1 and suppression of SPON1 alleviates effects of miR-506 mimics and inhibitors on proliferation, migration and invasion in vitro, respectively. In conclusion, microRNA-506 regulates proliferation, migration and invasion in HCC by targeting SPON1.     

沉默FOXM1拮抗肝细胞生长因子对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭的诱导作用

目的:探索转录因子FOXM1在肝细胞生长因子(HGF)诱导胃癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用.方法:体外培养胃癌细胞SGC7901,根据不同处理将细胞分组:空白对照组、20 ng/ml HGF组、40 ng/ml HGF组、60 ng/ml HGF组、siRNA-scramble+HGF组、siRNA-FOXM1+HGF组.采用MTT法检测各组SGC7901细胞的增殖,Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭情况,qRT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞中FOXM1 mRNA和蛋白水平.结果:与空白对照组相比,不同浓度HGF均能够促进胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭,同时上调FOXM1的表达水平,并且呈浓度依赖性关系.沉默HOXM1表达能够明显抑制HGF对SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭的诱导作用.结论:HGF对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的诱导作用可能与上调FOXM1表达有关,沉默FOXM1表达能够抑制HGF的作用.     

DKK1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力影响的研究

  目的  探讨Dikkopf 1（DKK1）对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。  方法  采用免疫组织化学方法检测DKK1在乳腺癌组织中的表达,并通过免疫荧光对DKK1在细胞中的定位进行分析;DKK1过表达的真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA231,应用Western blot检测转染后乳腺癌细胞MDA231中DKK1蛋白表达水平。划痕实验检测转染后MDA231细胞的迁移能力,Transwell实验检测MDA231细胞侵袭能力的改变。  结果  免疫组织化学检测到乳腺癌组织原发病灶及转移病灶DKK1表达明显高于对应的癌旁组织（P < 0.05）。DKK1表达的阳性率在有淋巴结转移组织中明显比无淋巴结转移组织中低。免疫荧光结果显示DKK1主要呈细颗粒状散在分布于细胞质中。Western blot检测表明DKK1过表达明显。过表达DKK1的MDA231细胞迁移和侵袭能力明显比阴性对照组和空白组低。  结论  DKK1的表达与乳腺癌细胞迁移和侵袭能力呈负相关。      

顺铂耐药促进卵巢癌OVCAR-3细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:观察人卵巢癌顺铂(cisplatin,CDDP)敏感细胞株OVCAR-3和耐药细胞株OVCAR-3/CDDP生物学行为的差异,并探讨其可能的机制。方法:取对数生长期的OVCAR-3和OVCAR-3/CDDP细胞,软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力;Transwell小室、失巢凋亡实验和裸鼠皮下移植瘤实验分别检测细胞体外和体内的侵袭、迁移能力;免疫组织化学实验检测移植瘤组织中MMP-2和MMP-9的表达。结果:与OVCAR-3细胞比较,OVCAR-3/CDDP细胞克隆形成能力显著增加[(0.66±0.09)%vs(0.31±0.07)%,P<0.05]。Transwell小室实验发现,OVCAR-3/CDDP细胞较OVCAR-3细胞侵袭和迁移能力均明显增强[(233.1±8.5)vs(167.4±5.9),P<0.01;(143.6±9.1)vs(95.8±6.2),P<0.01];OVCAR-3/CDDP细胞较OVCAR-3细胞更易聚集,细胞凋亡指数下降[(7.78±1.32)%vs(15.41±1.26)%,P<0.01]。OVCAR-3/CDDP细胞移植瘤组织中MMP-2、MMP-9的表达高于OVCAR-3细胞。结论:顺铂耐药OVCAR-3/CDDP细胞的增殖、抗失巢凋亡、侵袭和迁移能力显著增强,其机制可能与MMP-2和MMP-9表达升高有关。     

Claudin-1蛋白在胃癌组织和细胞中的表达及促进其表达后对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究紧密连接跨膜蛋白(Claudin-1)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学行为及裸鼠皮下成瘤能力的影响.方法:收集50例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织,采用RT-qPCR和免疫组化检测Claudin-1的表达;RT-qPCR和Western Blot检测Claudin-1在人胃癌细胞株MKN45、SGC790...     

circNEIL3 通过靶向miR-4784 调控乳腺癌MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：研究环状RNA nei 样DNA糖化酶3（circNEIL3）和微小RNA（miR）-4784 对乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖、迁移和侵袭的影响。方法：收集2018 年1月至2019 年12月在济南市中西医结合医院经组织病理诊断为乳腺癌并行手术切除的45 例乳腺癌患者的癌组织和配对癌旁组织,qPCR 法检测乳腺癌组织、癌旁组织中circNEIL3 和miR-4784 的相对水平。将circNEIL3 的小干扰RNA（si-circNEIL3）、miR-4784 模拟物、si-circNEIL3+miR-4784 抑制物分别转染MDA-MB-231 细胞,采用CCK-8法、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell 实验检测circNEIL3和miR-4784 表达对细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀（RIP）和RNA pull-down 实验检测circNEIL3和miR-4784 之间相互作用。结果：乳腺癌组织中circNEIL3呈高表达（P<0.05）,miR-4784 呈低表达（P<0.05）。干扰circNEIL3显著降低MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率以及侵袭数（均P<0.05）。过表达miR-4784 显著降低MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率以及侵袭数（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验、RIP 和 RNA pull-down 实验均证实circNEIL3 与miR-4784 可直接结合,干扰circNEIL3 能明显上调miR-4784表达（P<0.05）,过表达circNEIL3 能明显下调 miR-4784 表达（P<0.05）。抑制miR-4784 表达部分逆转干扰circNEIL3对MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论：干扰circNEIL3通过靶向上调miR-4784表达抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭。     

Autocrine/paracrine erythropoietin regulates migration and invasion potential and the stemness of human breast cancer cells

Recent studies suggest that erythropoietin (EPO) has pleiotropic effects in several cell types in addition to hematopoietic cells; however, the role of EPO-mediated cell signaling in nonhematopoietic cells, including in cancer cells, remains controversial. Here, we report our findings of autocrine/paracrine production of EPO by breast cancer cells and its functional significance. We detected a significant level of autocrine/paracrine EPO in the conditioned medium from the culture of SKBR3 breast cancer cells, particularly when the cells were cultured in hypoxia. Through knockdown of EPO and EPO receptor expression and experimental elevation of EPO receptor expression in SKBR3 breast cancer cells, we demonstrated novel roles of autocrine/paracrine EPO-mediated cell signaling in regulating migration and invasion potential and stemness-like properties of breast cancer cells.     

长链非编码RNA ARHGAP5-AS1抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：检测长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）ARHGAP5-AS1在乳腺癌组织及细胞中的表达,分析其表达与患者临床病理参数及预后的相关性,并初步探讨其对乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响。方法：通过对TCGA数据库中乳腺癌相关数据集的生物信息学分析,筛选出在乳腺癌中低表达且与患者不良预后相关的lncRNA ARHGAP5-AS1,采用qPCR 方法在江南大学附属医院肿瘤科从 2010 年 4 月至 2016 年 10 月收集的乳腺癌组织中验证其表达。采用 χ2检验分析ARHGAP5-AS1表达与乳腺癌患者临床病理参数之间的关系,Kaplan-Meier生存分析构建生存曲线,比较高、低表达组的总生存期和无复发生存期。CCK-8 实验、划痕实验和 Transwell 实验分别检测 ARHGAP5-AS1 敲低对乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549的增殖、迁移和侵袭的影响。结果：TCGA 数据库分析结果显示,ARHGAP5-AS1 在乳腺癌组织中的表达水平显著低于正常乳腺组织（P<0.01）,其低表达与较大肿瘤直径（T3）、远处转移（M1）、ER 和 PR 阴性以及较短的总生存期显著相关（均P<0.05）。乳腺癌组织中ARHGAP5-AS1表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,其低表达与较大的肿瘤直径和淋巴结转移相关（均 P<0.05）。同样,ARHGAP5-AS1 在 6 株人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、BT-549、MDA-MB-468、MCF-7、HCC1937、Hs578T）中的表达水平也显著低于正常乳腺上皮细胞系（MCF-10A）（均P<0.05）。细胞功能实验显示,ARHGAP5-AS1敲低促进MDA-MB-231和BT-549细胞的增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）。结论：ARHGAP5-AS1异常低表达可能通过促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭影响乳腺癌的发生发展。     

紫甘薯花色苷通过circ_0003998/miR-145轴调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨紫甘薯花色苷(purple sweet potato anthocyanin,PSPA)是否通过circ_0003998/miR-145轴调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭.方法:选用乳腺癌MDA-MB-231细胞,将其分为对照组,200、400和800μg/ml PSPA组,pcDNA组、...     

Cyclooxygenase inhibitors retard murine mammary tumor progression by reducing tumor cell migration, invasiveness and angiogenesis

Tumor-derived prostaglandins (PGs) have been implicated in the progression of murine and human breast cancer. Chronic treatment with a non-selective PG inhibitor indomethacin was shown in this laboratory to retard the development and metastasis of spontaneous mammary tumors in C3H/HeJ female retired breeder mice. The present study examined the role of endogenous prostaglandins in the proliferation/survival, the migratory and invasive behavior and angiogenic ability of a highly metastatic murine mammary tumor cell line, C3L5, originally derived from a C3H/HeJ spontaneous mammary tumor. This cell line was shown to express high levels of cyclooxygenase (COX) -2 mRNA and protein as detected by Northern and Western blotting as well as immunostaining. PGE(2) production by C3L5 cells was primarily owing to COX-2, since this was blocked similarly with non-selective COX inhibitor indomethacin and selective COX-2 inhibitor NS-398, but unaffected with the selective COX-1 inhibitor valeryl salicylate. C3L5 cell proliferation/survival in vitro was not influenced by PGs, since their cellularity remained unaffected in the presence of PGE(2) or NS-398 or PG-receptor (EP1/EP2) antagonist AH6809; a marginal decline was noted only at high doses of indomethacin, which was not abrogated by addition of exogenous PGE(2). Migratory and invasive abilities of C3L5 cells, as quantitated with in vitro transwell migration/invasion assays, were inhibited with indomethacin or NS-398 or AH6809 in a dose-dependent manner; the indomethacin and NS-398-mediated inhibition was partially reversed upon addition of exogenous PGE(2). An in vivo angiogenesis assay that used subcutaneous implants of growth factor-reduced matrigel inclusive of tumor cells showed a significant inhibition of blood vessel formation in these implants in animals treated with indomethacin compared with animals receiving vehicle alone. These studies show that selective and nonselective COX-2 inhibitors retarded tumor progression in this COX-2-expressing murine mammary tumor model by inhibiting tumor cell migration, invasiveness and tumor-induced angiogenesis. The inhibitory effects were not entirely PG dependent; some PG-independent effects were also noted.     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

miR-106b-5p靶向调控细胞周期蛋白D1抑制结直肠癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-106b-5p对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制.方法:实时荧光定量PCR检测miR-106b-5p在CRC组织与相应的癌旁组织、永生化的肠上皮细胞以及肠癌细胞中的表达量;CCK8实验检测DLD1细胞增殖能力;细胞划痕实验检测DLD1细胞的...     

CPNE7通过上皮间质转化影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CPNE7在胃癌组织和细胞中的表达及影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:基于生物信息学数据库GEPIA 从转录水平分析CPNE7在胃癌及癌旁正常组织中的表达差异。qRT-PCR法检测CPNE7在3种胃癌细胞系(AGS、MKN-45、HGC-27)和胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中的表达,选择表达量相对较高的AGS细胞作为后续实验细胞。通过慢病毒转染AGS细胞敲减CPNE7的表达,根据不同处理分为RNAi-vector组、RNAi-1组、RNAi-2组、RNAi-3组,qRT-PCR、Western blot验证细胞转染效率,选择敲减效率最有效的RNAi-1(实验组)和RNAi-vector(对照组)进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞活力,EdU和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax、Bcl-2)及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果:CPNE7在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P＜0.05)。与正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)相比较,CPNE7在胃癌细胞中明显高表达(P＜0.05),在AGS胃癌细胞中CPNE7相对表达量最高（P＜0.001)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax的表达,下调Bcl-2的表达（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可增加上皮标志物蛋白(E-cadherin)的表达水平(P＜0.01),降低间质标志物蛋白(N-cadherin、Vimentin)的表达水平（P＜0.01)。结论:CPNE7在胃癌组织和细胞中表达上调,敲减CPNE7可通过影响EMT进程抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其可能成为胃癌的潜在分子标志物。     

敲低远端上游元件结合蛋白1的表达对胰腺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:研究敲低远端上游元件结合蛋白1(FUBP1)的表达对胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响.方法:细胞转染干扰序列siFUBP1降低胰腺癌细胞PaTu8988中FUBP1的表达,FUBP1-nc作为阴性对照.CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力.结果:敲低胰腺癌细胞...