脂联素对原代大鼠肝星状细胞表达MMP-2和MMP-13的影响

目的观察外源性脂联素对体外培养原代大鼠肝星状细胞（HSC）表达基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响,探讨脂联素对肝纤维化的影响。方法改良的肝脏二步原位灌注法分离肝星状细胞,外源性脂联素（125μg/L、250μg/L、500μg/L）处理体外培养的原代肝星状细胞。Real-time PCR方法分析其对原代HSCMMP-2和MMP-13 mRNA表达的影响,ELISA方法检测原代HSC分泌MMP-2和MMP-13蛋白水平,酶谱法检测细胞外MMP-2的酶活性。结果脂联素促进MMP-2和MMP-13 mRNA表达,随脂联素浓度增加,作用更加明显。脂联素可促进HSC分泌MMP-2及MMP-13蛋白,提高MMP-2酶活性,但均无剂量依赖性。结论脂联素调节MMP-2表达和活性,促进MMP-13表达,可能对肝纤维化产生影响。     

基质金属蛋白酶-13在大鼠酒精性肝纤维化表达的研究

目的 观察大鼠酒精性肝纤维化形成过程中MMP—13的表达,探讨MMP—13在酒精性肝纤维化发生、发展中的作用。 方法 56％(v/v)的白酒平均以7 g/kg的剂量每日早晨灌胃1次制备肝纤维化模型,灌胃4周、12周及24周采用股静脉放血法分别处死大鼠,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测MMP—13 mRNA的表达。 结果 研究表明,正常肝脏表达MMP—13 mRNA(0.24±0.41),白酒灌胃4周后其mRNA表达逐渐上升(0.62±0.54),但与对照组相比差异无显著性,至12周肝组织中MMP—13 mRNA表达较正常组显著增加(1.6 5±0.47),两组比较差异有显著性(t=-4.36 3,P<0.01)。而至24周,大鼠肝组织中MMP—13 mRNA表达(0.39±0.25)又下降至与正常组相似,两组比较差异无显著性。 结论 MMP—13可能参与酒精性肝纤维化早期基质的降解,且其表达存在明显的窗口期。     

脂联素对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 观察外源性脂联素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和活化的影响,探讨脂联素对肝纤维化的影响.方法 外源性脂联素(0.1 μtg/mL、1μtg/mL、10 μg/mL)处理体外培养的HSC-T6,MTT法分析其对HSC-T6增殖的影响,Western blot法检测HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 脂联素对HSC的抑制作用随药物浓度的增加而增强,α-SMA的蛋白表达随脂联素浓度增加而下降.结论 脂联素能抑制HSC-T6的增殖,从而发挥抗肝纤维化作用.     

PDGF-BB对肝星状细胞表达MMP-2及TIMP-1的影响

目的：探讨血小板衍生生长因子－BB（PDGF－BB）对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC）表达基质金属蛋白酶－2（MM－2）及金属蛋白酶组织抑制因子－1（TIMP－1）的影响。方法：原位灌流分离HSC，体外培养激活，用PDGF－BB干预，采用半定RT－PCR方法检测各组MMP－2、TIMP－1 mRNA的表达情况。结果：PDGF－BB干预组TIMP－1 mRNA的表达较对照组明显增强（P＜0．01），且随着干预时间的延长其表达逐渐增强（P＜0．01）；而PDGF－BB干预组MMP－2表达与对照组无明显差异（P＞0．05）。结论：PDGF－BB促进肝纤维化与其引起HSC表达TIMP－1增强有关。     

干扰素-γ对大鼠肝组织中的MMP-13与TIMP-1表达的干预作用

目的 探讨干扰素-γ对实验性大鼠肝组织中的基质金属蛋白酶-13(MMP-13)与金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响.方法 SD大鼠22只,随机分为3组:正常组(7只)、模型组(6只)和干扰素-γ组(9只);用四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,在10周末处死各组大鼠,取肝脏进行HE染色,并运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中MMP-13 mRNA与TIMP-1 mRNA的表达量.结果 MMP-13 mRNA的表达,与正常组对比,模型组和干扰素-γ组的MMP-13 mRNA的表达量增高(P<0.01),但模型组和干扰素-γ组之间还不能认为有统计学差别(P>0.01);而TIMP-1 mRNA表达与正常组相比,模型组和干扰素-γ组中的TIMP-1 mRNA的表达都升高(P<0.01),而且模型组中的TIMP-1 mRNA表达量比干扰素-γ组高(P<0.01).在肝纤维化病理学观察的量化秩和分析中,各组之间的差别明显(P<0.005).结论 干扰素-γ逆转肝纤维化的机制可能是减少肝纤维化大鼠肝脏中的TIMP-1 mR-NA的表达,从而逆转肝纤维化.     

缺氧对肝星状细胞基质金属蛋白酶Ⅱ表达及活性调节的影响

目的 研究缺氧对ＨＳＣ基质金属蛋白酶Ⅱ（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－２,ＭＭＰ－２）表达及活性调节的影响。方法 大鼠ＨＳＣ体外原代培养,以免疫细胞化学及ＥＬＩＳＡ法分别检测细胞内ＭＭＰ－２及基质金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ（Ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｏｒｅｉｎａｓｅ－２,ＴＩＭＰ－２）的表达,和培养上清流中两者的相对量,并以酶图法测培养上清液ＭＭＰ－     

MMP-1过表达抑制人肝星状细胞I型胶原表达

目的观察人肝星状细胞（LX-2）过表达基质金属蛋白酶-1（MMP-1）后,肝纤维化相关指标的变化。方法构建含MMP-1全长编码基因的表达质粒,并转染人肝星状细胞,荧光定量PCR与Western blot法分别检测MMP-1、I型胶原（collagenI）、TIMP-1基因与蛋白水平的表达。结果成功构建含MMP-1全长编码基因的表达质粒dl6-95-MMP-1;dl6-95-MMP-1转染LX-2细胞7d后,荧光定量PCR结果显示,MMP-1基因转录水平显著增加,而CollagenI、TIMP-1在基因转录水平无明显改变;Western blot结果显示转染7d后,MMP-1蛋白表达明显增加,CollagenI蛋白表达明显下降,而TIMP-1蛋白表达无明显变化。结论人肝星状细胞高表达MMP-1后显著抑制CollagenI蛋白的表达,其机制主要通过发挥其酶活性降解collagenI蛋白,而不影响collagenI基因水平的表达,同时也不影响TIMP-1在基因以及蛋白水平的表达。     

柔肝抑纤饮对实验性肝纤维化大鼠肝组织HSC、MMP-2免疫组化的影响

目的:观察柔肝抑纤饮抗肝纤维化的疗效及优势,并探讨其抗肝纤维化机制.方法:用CCl4制备大鼠实验性肝纤维化模型,采用免疫组化技术半定量观察各组动物肝纤维化形成过程中肝组织表达HSC、MMP-2的变化,并相应检测血清肝功能、脂质过氧化指标等.结果:与模型组比较,柔肝抑纤饮可明显抑制肝纤维化形成过程中肝组织HSC、MMP-2的表达,半定量统计两者均降低,并能使血清ALT、MDA降低,SOD升高,经统计差异具有显著性意义(P＜0.05、P＜0.01).结论:柔肝抑纤饮具有抗脂质过氧化、降低HSC增殖活化、减少MMP-2分泌的作用,从而发挥了良好的抗肝纤维化作用.     

瘦素对HSC-T6细胞基质金属蛋白酶-2基因表达、蛋白分泌及酶活性的影响

本实验采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及酶谱法分别测定瘦素对肝星状细胞(HSC)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA表达、蛋白分泌及酶活性的影响,以进一步了解瘦素致纤维化的机制.     

内毒素受体在肝星状细胞的表达及其作用

目的了解内毒素受体在肝星状细胞活化中的变化和作用。方法分离正常大鼠的肝星状细胞，以逆转录聚合酶链反应法检测其在体外培养过程中内毒素受体（CD14和TLR4）mRNA的表达变化。以细胞免疫染色法检测肝星状细胞内毒素受体CD14的表达。制作肝纤维化和肝硬化的大鼠模型，免疫组织化学法动态检测肝组织内CD14和α平滑肌肌动蛋白的表达变化和定位。结果初分离的肝星状细胞表达低水平的CD14 mRNA，不表达TLR4 mRNA，培养活化的肝星状细胞内毒素受体的表达增强，内毒素可上调这种表达。体外培养10d的肝星状细胞表达CD14蛋白，内毒素作用后CD14表达更明显。在肝纤维化的发展过程中，肝组织内CD14阳性细胞增多，阳性细胞多分布于肝窦周围，晚期CD14阳性细胞聚集在纤维隔内，与α平滑肌肌动蛋白阳性细胞的分布一致。结论肝星状细胞在体内外的活化过程中内毒素受体的表达增强，因此，内毒素受体可能参与肝星状细胞在肝脏炎症和纤维化中的作用。     

化学缺氧对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达及活性的影响

目的探讨化学缺氧对大鼠HSC MMP-2的表达和活性的影响及其调节机制。方法用不同浓度的氯化钴（CoCl2,0、50、100、200μmol/L）造成大鼠HSC化学缺氧,RT-PCR、酶图法分别检测MMP-2 mRNA表达及其酶活性;Western blot检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达;用荧光素酶报告基因分析技术测HIF-1α对MMP-2基因的激活作用。结果随CoCl2浓度从0μmol/L依次递增到200μmol/L,MMP-2 mRNA表达的量（用吸光度值表示）从0.53±0.12依次上调到1.57±0.11,4组间差异有统计学意义（F=34.21,P〈0.01）,其活性下降幅度（用吸光度值表示）从84.49±5.38逐渐下降至53.70±3.42,4组间差异有统计学意义（F=29.54,P〈0.01）,HIF-1α表达量依次增加;核蛋白提取物与MMP-2基因探针（含缺氧反应元件）共浴后,电泳迁移条带产生延迟现象,竞争性序列能部分拮抗其结合。结论化学缺氧能使HSC MMP- 2 mRNA表达上调,酶活性下降。HIF-1α可能参与了缺氧条件下MMP-2的表达调节。     

肝纤维化中肝星状细胞内主要信号转导通路

肝纤维化是肝脏对各种慢性刺激进行损伤修复反应时,以胶原为主的细胞外基质(ECM)在肝内大量沉积的病理过程.活化的肝星状细胞(HSC)是肝纤维化时产生ECM的主要细胞.细胞因子、氧化应激以及ECM的改变等外部因素通过一定的细胞内信号转导通路激活HSC.了解HSC活化的信号转导通路能从根本上为治疗肝纤维化提供更多更有效的思路和方法.目前研究较多的信号途径有TGF-β/Smad通路、MAPK通路、PI3K通路、JAK/STAT通路、NF-κB通路、过氧化物酶体增殖物激活受体通路等.本文简要综述了肝纤维化时HSC中主要的细胞内信号转导通路.     

肝纤维化进程中细胞外基质对肝星状细胞的作用及机制研究进展*

肝纤维化是一种肝内弥漫性细胞外基质（ECM）过度沉积的病理过程,且肝星状细胞（HSC）的激活是肝纤维化发生发展的中心环节。本文主要介绍了在肝纤维化进程中ECM各种成分比例、分子结构的改变及其ECM分子空间结构改变对HSC的激活、增殖和凋亡的作用和机制。     

大鼠肝纤维化自发逆转过程中肝星状细胞凋亡与p75的表达

肝星状细胞（HSC）凋亡是肝纤维化逆转的主要机制之一。人和大鼠的HSC表达低亲和力神经生长因子受体p75，当p75与神经生长因子（NGF）结合时可引起细胞凋亡。本研究通过建立四氯化碳（CCl4）肝纤维化大鼠模型，对肝纤维化自发逆转过程中HSC凋亡和p75表达进行了研究。     

Expression of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in hepatic stellate cells during rat hepatic fibrosis and its intervention by IL-10

AIM: To investigate the expression of matrix metallopr-oteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in hepatic fibrosis and the antifibrogenic role of exogenous interleukin-10 (IL-10). METHODS: Hepatic fibrosis was induced by CCI4 administration and 60 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal control group (group N, 8 rats), CCI4-induced group (group C, 28 rats) and IL-10-treated group (group I, 24 rats). At the beginning of the 7th and 11th wk, rats in each group were routinely perfused with pronase E and type IV collagenase through portal vein catheter and the suspension was centrifuged by 11% Nycodenz density gradient to isolate hepatic stellate cells (HSCs). RT-PCR was used to analyze mRNA of MMP-2 and TIMP-1 from freshly isolated cells. Densitometric data were standardized with β-actin signals. Immunocytochemistry was performed to detect MMP-2 and TIMP-1 expression in HSC cultured for 72 h. RESULTS: Compared to group N in the 7th wk, MMP-2 and TIMP-1 mRNA increased in group C (P= 0.001/0.001) and group I (P= 0.001/0.009). The level of MMP-2 and TIMP-1 mRNA in group I was significantly lower than that in group C (P= 0.001/0.001). In the 11th wk, MMP-2 mRNA in group I was still lower than that in group C (P = 0.005), but both dropped compared with that in the 7th week (P = 0.001/0.004). TIMP-1 mRNA in group I was still lower than that in group C (P= 0.001), and increased in group C (P= 0.001) while decreased in group I (P = 0.042) compared with that in the 7th wk. Same results were found by immunocytochemistry. CONCLUSION: Expression of MMP-2 and TIMP-1 is increased in hepatic fibrosis. IL-10 exhibits an antifibrogenic effect by suppressing MMP-2 and TIMP-1 expression.     

MicroRNAs在肝星状细胞活化过程中表达差异谱的研究

目的 应用MicroRNAs基因芯片技术筛选静止和活化肝星状细胞差异表达的MicroRNAs.方法 用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSCs,并进行体外培养,借助荧光倒置显微镜观察细胞形态,MicroRNAs基因芯片技术和荧光定量PCR检验MicroRNAs在HSCs静止期(2天)和活化期(14天)的表达.结果 HSCs的miRNAs表达谱中差异表达miRNAs共21个,其中上调12个,下调9个(P＜0.01);荧光定量RT-PCR证实其表达水平在静止和活化期肝星状细胞中均有差异(P＜0.01).结论 MicroRNAs基因芯片筛选差异表达miRNAs可望为肝纤维化的基因治疗提供全新的靶标和策略,为肝纤维化的发病机制和诊断治疗研究提供了新的思路.