四环素荧光标记不脱钙骨甲酯包埋法

四环素荧光标记是评估骨重塑速率的一种方法 ,需做不脱钙骨切片。甲酯包埋法是常用的不脱钙骨包埋法 ,作者曾对此进行探讨 ,现报道如下。1　材料和方法1.1　四环素荧光标记　标本来自犬股骨头内松质骨 ,于第1、4周及 7周全周 7天饲给四环素粉剂 ,每天 2 5ｍｇ/ｋｇ。第9周末取材 ,75 %乙醇固定 3天～ 1年。组织块大小 0 5～1 0ｃｍ ,厚 0 3～ 0 5ｃｍ。1.2　试剂　 (1)甲基丙烯酸甲酯单体 ,(2 )聚甲基丙烯酸甲酯粉末 ,(3)甲基丙烯酸正丁酯单体 ,(4 )洗涤剂 :5 %氢氧化钠 ,(5 )引发剂 :过氧化苯甲酰 ,(6 )吸水剂 :氯化钙 ,无水硫酸钠或无…     

自制脱水盒在全自动密封式组织脱水机中的应用

现在病理科活检标本数量增长迅速,原有的组织脱水机容量小、处理标本质量随季节变化难以控制以及试剂气味泄露于工作环境中等缺点日渐突出,而全自动密封式(以下简称全封)组织脱水机的使用完全解决上述问题[1].但该脱水机在使用时,从标本取材到石蜡包埋、切片,以及蜡块归纳存档均与先前的工作模式有较大的差别,而且要求购买昂贵的配套设施,这在很多医院病理科难以实现.     

介绍一种FAAPT冷冻切片快速固定液

手术中冷冻切片的病理诊断是根据冷冻切片组织学形态来进行 ,以确定病变组织的良恶性为目的〔1〕。制作冷冻切片包括制片、固定、染色三个环节 ,在冷冻切片中固定液的选择是不可忽视的一个因素。我们在工作中经反复试验在众多固定液中选择ＦＡＡ液 (福尔马林 -醋酸 -乙醇 ) ,经改良配成一种适合于冷冻切片的ＦＡＡＰＴ(福尔马林 -醋酸 -乙醇 -苦味酸 -ＴｒｉｔｏｎＸ - 10 0 )快速固定液。该液具有固定速度快、渗透力强、ＨＥ染色鲜艳、组织结构清晰等优点。1　材料与方法1 1　ＦＡＡＰＴ固定液的配制　福尔马林 15ｍｌ,醋酸 3ｍｌ,95 %乙醇…     

微波滴染法在临床肾穿组织特殊染色中的应用

肾穿标本的光镜病理诊断在临床诊断肾病方面具有重要作用 ,作者采用微波湿盒滴染法 ,应用于肾穿标本的ＰＡＳＭ Ｍａｓｓｏｎ、ＰＡＳ、ＨＥ 3种染色 ,既明显缩短时间 ,又节省大量试剂 ,不用使用染色缸等 ,效果满意 ,现予报道。一、材料与方法1.标本与切片 :临床肾穿标本 ,均经皮肾穿刺活检。经ＰＢＦ Ａ液 (甲醛 乙醇 磷酸盐缓冲液 )固定[1] 1ｄ ,换成 0 .1ｍｏｌ/ＬＰＢＳ保存 ,然后按石蜡包埋程序包埋 ,每步脱水及透明各 10ｍｉｎ ,浸蜡 1ｈ ,用 5 8～ 6 0℃石蜡包埋。用一次性刀片切片 2 μｍ厚 ,6 0℃烤片过夜 ,脱蜡入水。2 微波炉…     

对脱水剂的改进及应用

不论是组织学还是病理学的实验教学都离不开石蜡切片。为保证切片的质量包埋前的组织脱水很关键。常规的脱水方法为酒精逐级脱水 ,此法的不足是步骤多且常引起组织的硬化。特别是对于组织学的观察非常不利。我们通过制作大量教学及临床活检切片对常规脱水剂进行改进 ,将正丁醇、乙醇两种单独使用的脱水剂按不同比例混合后用于组织脱水。1　具体方法是固定后依次投入 ( 1)脱水 A液 :正丁醇与无水乙醇按 3∶ 1混合 ,时间 1～ 4小时 ,( 2 )脱水 B液 :正丁醇与无水乙醇按 1∶ 1混合 ,时间 1～ 4 8小时 ,( 3)脱水 C液 :正丁醇液 ,时间 1～ 4小…     

全自动密闭式脱水机的应用

随着现代病理技术的快速发展和病理设备的不断更新,对病理切片质量的要求也是精益求精。全自动密闭式脱水机以其安全、高效、污染小、组织处理好等诸多优点被广大医院病理科所采用。我科自2004年4月使用Leica TP1020脱水机以来,根据自身科室的特点对组织脱水流程、试剂更换周期     

介绍一种抗酸染色法

抗酸染色法有多种 ,根据本科近 10年来应用不同抗酸染色法的经验 ,对 8例已确诊为结核病的病理切片及细胞学涂片 ,从染色效果、操作难易程度及染色时间方面 ,用 6种不同抗酸染色法〔1～ 4〕反复染色对比实验结果 ,推荐一种经典的、简易的、快速实用性强的抗酸染色法———萋纳石炭酸染色法。1　材料与方法1.1　溶液配制　 (1)萋纳石炭酸复红溶液 :碱性复红乙醇饱和溶液 10ｍｌ,5 %石炭酸溶液 90ｍｌ。 (2 )脱色剂 :浓盐酸 3ｍｌ,95 %乙醇 97ｍｌ。 (3)复染液 (吕弗勒美蓝液 ) :美蓝乙醇饱和溶液 30ｍｌ,10 %氢氧化钾 0 1ｍｌ,蒸馏水 10 0ｍ…     

塑料包埋不脱钙大块骨组织切片及染色

近 1年来 ,笔者采用Ｌｅｉｃａ 2 5 0 0型切片机 ,制作塑料包埋不脱钙大块骨组织切片 ,获得 8～ 10 μｍ厚完整切片。游离片染色 ,着色效果良好。1　材料与方法1.1　取材部位　狗桡骨 ,大小 35ｍｍ× 15ｍｍ ,于 10 %～2 0 %中性福尔马林液内固定 1～ 2ｄ ,流水冲洗 1～ 2ｈ。1.2　包埋剂的制备　 1号试剂 :甲基丙稀酸甲脂 40 0ｍｌ,邻苯二甲酸二丁酯 10 0ｍｌ,二甲苯 5 0 0ｍｌ。 2号试剂 :甲基丙稀酸甲酯 80 0ｍｌ,邻苯二甲酸二丁酯 2 0 0ｍｌ。 3号试剂 :甲基丙稀酸甲酯 80 0ｍｌ,过氧化苯甲酰 2 0ｇ ,邻苯二甲二丁酯2 0 0ｍｌ。 4号试剂…     

改良Warthin-Starry染色技术的新用途

我们用改良Ｗａｒｔｈｉｎ Ｓｔａｒｒｙ(Ｗ Ｓ)染色方法检查一些病原体取得较好效果 ,现将我们的工作体会介绍给同行。1　材料和方法1.1　材料　实验材料均取自外检组织 ,包括梅毒螺旋体感染的皮肤粘膜组织、鼻硬结症之鼻腔粘膜 ,侵袭性霉菌病之上颌窦粘膜组织、胃炎粘膜组织及淋病炎性渗出物涂片。组织均经常规处理、石蜡包埋 ,每份切成数张 6 μｍ厚的切片备用。涂片常规固定 1ｍｉｎ后漂洗吹干备用。1.2　染色液的配制和染色程序1.2 .1　 染色液的配制　①明胶原液 :明胶 5 ｇ ,蒸馏水 10 0ｍｌ,加热溶解。②显色剂 :明胶原液 8ｍｌ、2 …     

用石蜡包埋制作眼球及全眼眶的方法和体会

从 198 9年以来 ,我室经过日常工作实践初步总结用石蜡制作眼球及全眼眶肿瘤的常规制作方法 ,在一般设备条件下都能够进行眼球切片。1　材料和方法1 1　固定及固定液　将眼球放入固定液 (6 0 %～ 70 %乙醇75ｍｌ、37%～ 40 %福尔马林 2 5ｍｌ、冰醋酸 5ｍｌ) ,眼球固定后可直接转入脱水剂脱水。一般固定时间眼球为 12～ 2 4ｈ ,全眼眶则 3天以上 ,固定 2ｈ后取出 ,用大头针在不同部位刺几针 ,用注射器于眼直肌近端底下将固定液注入玻璃体内 ,加速固定、复原。1 2　取材、脱水　脱水由 70 %乙醇开始 ,经 70 %～ 80 %、95 %乙醇各置 1ｈ ,然后…     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

金标β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜技术的建立及其在人肝细胞中的表达

我们应用低温包埋 ,胶体金标记 ,免疫电镜技术 ,对人体肝细胞中的β -葡萄糖醛酸酶 ( β -Ｇ)进行超微结构定位研究。1　材料和方法1 1　标本和试剂　取新鲜手术切除的、远离癌瘤3ｃｍ以外的肝组织 ,用手术刀片将肝组织切成1ｍｍ3的小组织数块备用。兔抗人 β -Ｇ多克隆抗体和胶体金系美国阿拉巴马大学何康洁教授赠送 ,其它药品均为Ｓｉｇｍａ公司产品。1 2　固定、脱水、包埋与聚合　将组织块在Ｃａｒｓｏｎ-Ｍｉｌｌｏｉｎｇ固定液中室温下固定 3ｈ ;用 0 0 2ｍｏｌ.Ｌ- 1 的ＰＢＳ缓冲液冲洗 3次 ,每次 1 5ｍｉｎ ;然后 60 %乙醇 1 %…     

巨细胞病毒分离及唾液和尿液排毒的比较研究

我们对 10 0 0名住院婴幼儿进行巨细胞病毒 (ＣＭＶ)分离培养 ,并对唾液和尿液ＣＭＶ的检出率和排毒量进行了比较 ,现报告如下 :1　材料与方法1 1　标本的采集和处理　以无菌棉拭擦拭小儿口腔唾液腺开口处 ,将拭子在2ｍｌ运送液 (维持液加青霉素10 0 0Ｕ/ｍｌ、链霉素 10 0Ｕ/ｍｌ和两性霉素 5 μｇ/ｍｌ)洗脱标本。尿液作对倍稀释。标本在采集后 1ｈ内接种细胞。1 2　病素和细胞　ＣＭＶＡＤ16 9参考毒株由湖南医科大学病毒研究室惠赠。人胚肺成纤维细胞由本室制备 ,采用第 10代以内的细胞。1 3　病毒分离　每份处理过的标本接种 3管近融合…     

横纹肌快速染色法

目前 ,横纹肌染色多选用Ｍａｌｌｏｒｙ磷钨酸苏木精染色法(ＰＴＡＨ) ,但该方法存在着配置染液时间长 ,染色时间长等不足。虽有人加高锰酸钾氧化促其成熟 ,但还是需要几天时间 ,且染色效果也不是很满意。我们摸索出一种性能稳定的快速染色法 ,其试剂配制便捷 ,染色过程快速 ,组织色泽艳丽 ,对比度强 ,横纹显示清晰。一、材料与方法1 材料与试剂配置 :( 1)改良的磷钨酸苏木精染液 :苏木精 0 .1ｇ、磷钨酸 2ｇ、蒸馏水 10 0ｍｌ、黄色氧化汞 0 .1ｇ。Ａ液 :苏木精放入 3 0ｍｌ蒸馏水 ,加热使之溶解。Ｂ液 :取一 2 5 0ｍｌ烧杯 ,放入磷钨酸和…     

塑料不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡法对骨组织切片的比较

骨组织内含有大量的钙盐和无机盐,如不脱钙切片,常给骨组织切片和染色造成非常大的困难,直接影响实验结果。作者根据研究的需要,对塑料包埋不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡３种方法切片及染色进行比较,以便找出一种最佳切片方法。１　材料与方法１－１　塑料包埋组　所用材料是我所研究生课题实验材料。新西兰大耳白兔１０只,体重２－２～２－５ｋｇ,♀、♂不限。取双侧尺桡骨１－５ｃｍ保留周围少量肌肉。１０％中性福尔马林固定。梯度乙醇脱水。甲液：甲基丙稀酸甲酯（ＭＭＡ）７５ｍｌ,邻苯二甲酸二丁酯（ＤＢＰ）２５ｍｌ。乙液：Ｍ…     

家鼠类肾上腺嗜铬细胞简易染色法

一、染色方法 :( 1 )固定小家鼠肾上腺髓质于下列固定液中 2 4hr:即 3%重铬酸钾水溶液 1 0 ml,1 0 %福尔马林 2 0 ml,蒸馏水2 0 ml。 ( 2 )移浸入 3%重铬酸钾水溶液 48hr。( 3)水洗 2 4hr。 ( 4 )石蜡包埋、切片。 ( 5 )切片脱蜡至蒸馏水。 ( 6 )常规苏木素染液 1 5 min、水洗。 ( 7) 1 %盐酸酒精分化适度、水洗1 5 min。 ( 8)各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果 :肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒呈现棕黄色 ,细胞核呈蓝色。二、注意事项 :( 1 )动物选择家鼠类 ,组织力求新鲜。 ( 2 )固定液临用前配制。 ( 3)组织铬化过程需每日更换新液…     

弹力纤维染色与免疫组织化学双重染色技术

我们采用Gomori醛品红弹力纤维染色法和免疫组织化学SP法结合的双重染色方法 ,可同时显示血管壁上的弹力纤维和某些抗原成分 ,效果满意 ,介绍如下。一、材料与方法1.材料 :大鼠髂动脉粥样硬化标本 35份 (例 ) ,经 4 %甲醛固定 ,常规脱水、石蜡包埋 ,切片厚 5 μm。2 .试剂 :(1)醛品红染液 :碱性品红 0 .5g ,70 %乙醇10 0ml,浓盐酸 1ml,三聚乙醛 1ml,将碱性品红溶于 70 %乙醇 ,然后加入浓盐酸混合均匀后 ,加入三聚乙醛 ,轻轻摇动使混合均匀 ,于室温下静置 2d ,成熟时呈深紫色。过滤于小口砂塞瓶 ,置冰箱备用。 (2 ) 70 %乙醇。 (3)免疫组织…     

超声波快速石蜡切片在病理活检中的应用

我们将超声波技术运用于小的活检标本 ,如内窥镜、宫腔、宫颈、声带等 ,并且在仪器操作说明书的基础上作了改进 ,改进后的制片质量和效果优于改进前的切片 ,与传统石蜡切片质量相差无异 ,完全符合病理诊断要求。一、材料与方法1.材料 :取自本院 2 0 0 1年 11月至 12月窥镜室、妇产科、耳鼻咽喉科、内科等科室的活检标本 65例。其中改进前 12例 ,改进后 5 3例。快速固定液配制方法 :95 %乙醇 85 0ｍｌ,40 %甲醛 10 0ｍｌ,冰乙酸 5 0ｍｌ。试剂均为北京化工厂产品。2 .仪器 :上海震康科技公司生产的ＰＨＴ 40 0病理样品超声波快速处理仪 ,双超…     

培养细胞的免疫细胞化学操作体会

对培养的细胞进行免疫细胞化学反应 ,可以在培养皿内直接进行 ,亦可经树脂包埋后 ,在半薄切片上进行。本实验应用上述二种方法 ,对培养的大鼠内耳血管纹的组织细胞进行了免疫细胞化学显示。组织细胞处理 :1 )平皿培养和盖玻片上培养的大鼠内耳血管纹处组织细胞 ,经Bouin固定液固定 4h,0 .0 1 Mol/L PBS浸洗 ,0 .1 %的 Triton x- 1 0 0处理 2 0 min;2 )平皿培养的细胞经酶处理 ,离心收集 ,2 %戊二醛固定液固定 4h,经丙酮脱水与锇酸固定( - 2 0℃ )、树脂包埋、半薄切片。免疫细胞化学反应 :上述处理的细胞或切片进行免疫细胞化学反应 ,其…     

自配血液粘度质控物的应用

在 反映血液流变特性的诸多指标中 ,全血粘度占有重要地位[1] ,因此我们必须把好全血粘度检测的质量关。但目前由于市场的质控物 (标准油 )价格昂贵 ,每毫升约 5 0元左右 ,这样每天都做质控不太可能。为此我们自行配制了一种质控物 :丙三醇 乙醇混合物 ,认为其具有一定的实用性和可使用性。本文对自配方法及结果报道如下。1　材料与方法1.1　配制质控物配二种不同浓度的质控物 ,分为二组 ,即质控物Ａ组和质控物Ｂ组。质控物Ａ组 :取丙三醇 90ｍｌ加乙醇 2 10ｍｌ充分混匀 ,比例为 3∶7。分装于 10ｍｌ小瓶中加盖置 2℃～ 8℃保存备用。质控…