恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人血管平滑肌细胞分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的：观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)作用下人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)的影响。方法：采用体外培养第4-6代的人脐动脉VSMC，实验分为6组，即对照组、AngⅡ(1&;#215;10^-6mol／L)组及AngⅡ+不同磁感应强度(1，5，10，50Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用24h后收集标本，用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA)检测MCP-1的分泌量，免疫细胞化学检测MCP-1的蛋白表达。结果：AngII1&;#215;10^-6mol／L刺激VSMC24h，MCP-1的分泌量显著增高(P&;lt;0．05)；而1，5，10，50Gs恒磁场组细胞MCP-1的分泌量显著低于AngⅡ组(F=752．89，P&;lt;0．05)。AngⅡ1&;#215;10^-6mol／L与VSMC孵育24h后，MCP-1的表达显著增加(P&;lt;0．05和对照组)；而1，5，10，50Gs恒磁场组MCP-1的表达显著低于AngⅡ组(F=238．26，P&;lt;0．05)。结论：1～50Gs的恒磁场可拮抗AngⅡ的作用，抑制VSMC分泌与表达MCP-1.     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制

目的：研究恒磁场对血管紧张素Ⅱ（ansiotensin，AngⅡ）诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖及胞浆内游离钙离子浓度的影响。方法：建立AngⅡ诱导的人脐VSMC增殖模型，5mT恒磁场垂直作用于VSMC，用四唑盐比色法和^3H-TdR掺入法检测增殖数量，流式细胞仪分析细胞周期，激光共聚焦显微镜技术观察恒磁场对VSMC胞浆游离钙离子浓度的影响。结果：5mT的恒磁场能逆转AngⅡ所致的人脐动脉VSMC数量增多，阻止VSMC由静止期（Go／G1期）进入DNA合成期（S期）和有丝分裂期（G2／M期）。5mT的恒磁场作用10-50min使胞浆内钙离子浓度明显下降。结论：5mT的恒磁场能抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖，对胞浆内的钙离子浓度有明显减少作用，适宜强度的恒磁场抑制VSMC增殖，是一种具有应用前景的治疗再狭窄的方法。[著者文摘] 摘要 目的:研究恒磁场对血管紧张素Ⅱ（angiotensin,AngⅡ）诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖及胞浆内游离钙离子浓度的影响。方法:建立AngⅡ诱导的人脐VSMC增殖模型，5mT恒磁场垂直作用于VSMC，用四唑盐比色法和3H-TdR掺入法检测增殖数量，流式细胞仪分析细胞周期，激光共聚焦显微镜技术观察恒磁场对VSMC胞浆游离钙浓度的影响。结果:5mT的恒磁场能逆转AngⅡ所致的人脐VSMC数量增多，阻止VSMC由静止期 （G0/G期）进入DNA合成期（S期）和有丝分裂期（G2/M期）。5mT的恒磁场作用10-50min使胞浆内Ca2+ 较对照组明显下降。结论:5mT的恒磁场抑制AngⅡ诱导的VSMC的增殖，对胞浆内的Ca2+浓度有明显减少作用，适宜强度的恒磁场抑制VSMC增殖，是一种具有应用前景的治疗再狭窄的方法。     

高血压心肌纤维化的发病机制:成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1的表达状况

目的:研究成年大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaxia protein-1,MCP-1)表达情况,探讨高血压合并心脏损害的可能机制。 方法:成年大鼠CFs体外培养,在不同浓度血管紧张素Ⅱ不同作用时间刺激下,应用免疫蛋白印迹法和ELISA法分别测定细胞中和培养上清中MCP-1的含量。 结果:①在细胞内和培养上清中均有MCP-1表达。②随着血管紧张素Ⅱ、刺激浓度的增加和刺激时间的延长,细胞内和上清中MCP-1的表达量也逐渐增加。在1×10~(-11),1×10~(-9),1×10~(-8),1×10~(-7),1×10~(-6)mol/L的血管紧张素Ⅱ作用下,上清中MCP-1的含量分别为(1.60±0.21),(3.18±0.15),(4.70±0.22),(9.18±0.52),(8.75±0.42)μg/L,与对照组(1.13±0.09)μg/L比较,除1×10~(-11)mol/L组外,差异均有显著性意义(t=26.21～39.67,P<均0.05)。③在1×10~(-7)mol/L的血管紧张素Ⅱ作用下,3,6,12和24h MCP-1的表达量分别为(2.13±0.31),(3.25±0.20),(5.28±0.50)和(9.18±0.52)μg/L,与空白对照组(1.13±0.09)μg/L比较差异均有显著性意义(t=6.93～34.11,P均<0.05)。 结论:成年大鼠CFs的MCP-1的表达对血管紧张素Ⅱ的刺激有浓度和时间依赖性。CFs的MCP-1的表达可能参与高血压时     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因可调控表达对体外培养血管平滑肌细胞中P21表达的影响

目的：利用多西环素开放(Dox-on)可调控哺乳动物表达系统将AT2R基因引入体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)，并经两次抗生素的筛选建立起了受四环素类似物多西环素(Doxycicline，Dox)紧密调控、表达血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensin Ⅱ subtype 2 receptors，AT2R)基因的双重稳定VSMC细胞系，在此基础上对细胞周期素激酶抑制蛋白-P21的表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法：通过常规分子生物学方法，建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞系。将该VSMC细胞系随机分为8组：①未转染对照组。②未转染+血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)组。③转染组。④转染+AngⅡ组。⑤转染+AngⅡ+Dox组。⑥转染+AngⅡ+Dox+CV-11974组。⑦转染+AngⅡ+Dox+PD123319组。⑧转染+AngⅡ+Dox+CV-11974+PD123319组。应用RT-PCR和免疫细胞化学染色技术，观察该双重稳定表达AT2R的VSMC细胞系中p21的mRNA及蛋白表达情况；采用AngⅡ及其1，2型其受体拮抗剂干预上述细胞，观测上述指标的变化。结果：加入Dox前转染组p21表达处于高水平，其mRNA及蛋白表达强度分别为118．363&;#177;19．225，0．196&;#177;0．013；AngⅡ1&;#215;10^-7moL／L干预VSMC后p21mRNA及蛋白表达强度均显著降低，分别为51．761&;#177;4．429，0．032&;#177;0．014(t=13．10，10．41，P&;lt;0．01)；在AngⅡ1&;#215;10^-7moL／L干预的同时加入Dox后，p21呈现较强表达，其mRNA及蛋白表达强度明显高于转染+AngⅡ组(t=13．76，13．53，P&;lt;0．01)；CV-11974可进一步增强p21的表达，其中p21mRNA及蛋白表达强度明显高于转染+AngⅡ组(t=9．81，34．90，P&;lt;0．01)；PD123319干预组p21表达则处于低水平，与转染+AngⅡ组比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：AngⅡ干预降低VSMC中p21表达水平，这一作用是通过AT1R介导的；经Dox诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用，说明在这一生物学效应上，AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能。AT2R基因经诱导后表达可以参与VSMC细胞周期进展的有效调控。     

血管紧张素Ⅱ与血管紧张素-（1-7）对人血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ与血管紧张素-（1-7）分别刺激后,培养的人血管平滑肌细胞内游离Ca^2＋浓度的变化情况.方法：实验于2004-06/2004-12在首都医科大学附属北京安贞医院高血压研究室完成.①收集2004-06/2004-09安贞医院心脏外科进行冠状动脉旁路移植术患者术中剩余大隐静脉,进行体外人血管平滑肌细胞培养,并分为高血压搭桥组（n=23,男22例,女1例）和正常血压搭桥组（n=17,男16例,女1例）.②用钙荧光探针Fluo-3/AM作为钙指示剂,利用激光共聚焦显微镜观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-（1-7）分别刺激后的平滑肌细胞内游离钙浓度的变化情况.结果：①在分别加入血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-（1-7）前,细胞内的Ca^2＋也具有一定的荧光光密度,但是相对较低.②经血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-（1-7）刺激后人平滑肌细胞内Ca^2＋均迅速升高.③高血压搭桥组血管紧张素Ⅱ刺激后平滑肌细胞胞内Ca^2＋荧光光密度明显高于正常血压搭桥组,而经血管紧张素-（1-7）刺激后,高血压搭桥组平滑肌细胞胞内Ca^2＋荧光光密度明显低于正常血压搭桥组.结论：①血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-（1-7）刺激后人血管平滑肌细胞存在胞内Ca^2＋的变化.②抑制血管紧张素Ⅱ介导的平滑肌细胞内游离Ca^2＋浓度增加可能是血管紧张素-（1-7）的舒血管机制之一.     

血管紧张素Ⅱ对哮喘患儿单核细胞化学趋化蛋白和细胞间黏附分子表达的影响

目的观察哮喘患儿血管紧张素Ⅱ（AⅡ）表达和AⅡ对正常儿童外周血单核细胞（PBMC）表达单核细胞化学趋化蛋白（MCP-1）和细胞间黏附分子（ICAM-1）的影响。方法对21例急性发作期哮喘患儿和11例正常儿童进行AⅡ测定;对Ⅱ例正常儿童的PBMC．经AⅡ刺激,检测MCP．1、ICAM-1的表达。结果2l例哮喘患儿急性发作期AⅡ水平明显高于Ⅱ例正常儿童（P〈0．05）。11例正常儿童的PBMC与不同浓度的AⅡ浓度（10^-9、10^-88、10^-7、10^-6mol／L）混合培养,在刺激24h后．MCP-1、ICAM．1的表达明显高于对照组,以10^-6mol／L的AⅡ刺激的表达最高（P〈0．01）。10^-6mol／L的AⅡ条件下,刺激2、24、48h,在24、48hMCP-1、ICAM-1的表达均明显高于对照组,以24h表达最高（P〈0．01）。结论哮喘患儿急性发作期AⅡ水平增高,AⅡ可通过MCP-1、ICAM-l的表达参与了哮喘的慢性炎症过程。     

肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响

目的：观察肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响。 方法：实验于2003-09／2004-09在南方医科大学珠江医院中心实验室进行。①采用组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞。②实验分组：空白对照组；1&;#215;10^-9 1&;#215;10^-8 ，1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6mol／L血管紧张素Ⅱ组；1&;#215;10^-9，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6mol／L肾上腺髓质素N端20肽组；1&;#215;10^-7mol／L血管紧张素Ⅱ＋（1&;#215;10^-9，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6mol／L）肾上腺髓质素N端20肽组。③以^3H脯氨酸掺入试验测定血管平滑肌细胞的胶原合成功能，以四氮唑盐法测定细胞增殖情况。分别观察不同浓度肾上腺髓质素N端20肽、血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及合成胶原的影响。 结果：①肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞的胶原合成功能的作用：肾上腺髓质素N端20肽组的。H脯氨酸掺入率与对照组相比（P〉0．05），差异均无显著性。随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高，血管平滑肌细胞的。H脯氨酸掺入率呈递增趋势。血管紧张素H＋肾上腺髓质素N端20肽组的^3H脯氨酸掺入率在血管紧张素H浓度不变的情况下，随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高，血管平滑肌细胞的^3H脯氨酸掺入率呈递减趋势，各组之间差异有显著意义（P〈0．01）。②肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的影响：随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高，四氮唑盐比色值差异无显著性（P均〉0．05）。随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高，四氮唑盐比色值增也明显增高，各组间差异有显著性意义（P均〈0．01）。血管紧张素Ⅱ＋肾上腺髓质素N端20肽组中，在血管紧张素Ⅱ浓度不变的情况下，随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高，四氮唑盐比色值均显著降低（P〈0．01）。 结论：肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增生及胶原的生成起明显抑制作用。     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖与凋亡的影响。方法　采用体外培养的第 3代HUVEC ,分为 6组 ,即对照组、AngⅡ组及AngⅡ +不同强度 (1× 10 -4T、5× 10 -4T、10× 10 -4T和 2 0× 10 -4T)恒磁场组。各组细胞于无磁场条件下培养或不同强度磁场作用 48h后收集标本 ,用MTT比色法和3 H TdR掺入法测定细胞增殖情况 ,末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL法 )和流式细胞仪碘化丙啶染色法检测细胞凋亡情况。结果　 1μmol/LAngⅡ可抑制HUVEC增殖 ,诱导HUVEC凋亡。AngⅡ +不同强度恒磁场组细胞增殖均显著高于AngⅡ组 (P <0 .0 5 ) ,细胞凋亡显著低于AngⅡ组 (P <0 .0 5 ) ,并呈现强度依赖效应。结论　 1μmol/L AngⅡ可抑制HUVEC增殖并诱导HUVEC凋亡 ;(1～ 2 0 )× 10 -4T的恒磁场可强度依赖性拮抗AngⅡ对HUVEC的作用 ,促进HUVEC增殖并抑制HUVEC凋亡。     

血管紧张素Ⅱ与血管紧张素-(1-7)对人血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ与血管紧张素-(1-7)分别刺激后，培养的人血管平滑肌细胞内游离Ca~(2+)浓度的变化情况。 方法：实验于2004-06／2004-12在首都医科大学附属北京安贞医院高血压研究室完成。①收集2004-06／2004-09安贞医院心脏外科进行冠状动脉旁路移植术患者术中剩余大隐静脉，进行体外人血管平滑肌细胞培养，并分为高血压搭桥组(n=23，男22例，女1例)和正常血压搭桥组(n=17，男16例，女1例)。②用钙荧光探针Fluo-3／AM作为钙指示 剂，利用激光共聚焦显微镜观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)分别刺激后的平滑肌细胞内游离钙浓度的变化情况。 结果：①在分别加入血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)前，细胞内的Ca~(2+)也具有一定的荧光光密度，但是相对较低。②经血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)刺激后人平滑肌细胞内Ca~(2+)均迅速升高。③高血压搭桥组血管紧张素Ⅱ刺激后平滑肌细胞胞内Ca~(2+)荧光光密度明显高于正常血压搭桥组，而经血管紧张素-(1-7)刺激后，高血压搭桥组平滑肌细胞胞内Ca~(2+)荧光光密度明显低于正常血压搭桥组。 结论：①血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)刺激后人血管平滑肌细胞存在胞内Ca~(2+)的变化。②抑制血管紧张素Ⅱ介导的平滑肌细胞内游离Ca~(2+)浓度增加可能是血管紧张素-(1-7)的舒血管机制之一。     

血管平滑肌细胞功能调节中血管紧张素1型受体表达和生物学作用的变化

目的:探讨血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)转染表达血管紧张素II(angiotensinII,AngII)2型受体(angiotensinIItype2receptor,AT2R)后其1型受体(angiotensinIItype1receptor,AT1R)表达所受的影响。方法:用同源重组方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV-AT2R),体外转染VSMC,分别用流式细胞仪检测AT1R、AT2R细胞转染表达率、用免疫组织化学法和免疫荧光法检测其膜表达、以反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)和蛋白印迹法检测其mRNA和蛋白表达。结果:AdCMV-AT2R转染后,随着转染表达时间延长,AT2R细胞表达率呈显著增加趋势,48h最高表达率达89.51%,AngII作用与否及不同浓度AngII作用对AT2R表达无显著影响。而转染前后AT1R表达相对较稳定,受不同浓度AngII作用,其表达明显呈增加趋势。AT2R峰值表达时,免疫组织化学法和免疫荧光法检测其膜表达结果也提示AT2R表达随转染表达时间延长显著增加,转染前后AT1R表达无明显变化,在一定浓度范围内,AngII刺激对AT2R表达无显著影响,却显著增加AT1R的膜表达。RT-PCR法和蛋白印迹法检测AT1R和AT2R的mRNA和蛋白表达结果与其细胞表达率和膜表达的检测结果相一致。结论:AT2R转染表达并发挥其生物学作用时,对AT1R的表达无明显影响,VSMC转染表达AT2R后,     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因可调控表达对体外培养血管平滑肌细胞中P21表达的影响

目的:利用多西环素开放(Dox-on)可调控哺乳动物表达系统将AT2R基因引入体外培养的血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMC),并经两次抗生素的筛选建立起了受四环素类似物多西环素(Doxycicline,Dox)紧密调控、表达血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡsubtype2receptors,AT2R)基因的双重稳定VSMC细胞系,在此基础上对细胞周期素激酶抑制蛋白-P21的表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法:通过常规分子生物学方法,建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞系。将该VSMC细胞系随机分为8组:①未转染对照组。②未转染+血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)组。③转染组。④转染+AngⅡ组。⑤转染+AngⅡ+Dox组。⑥转染+AngⅡ+Dox+CV-11974组。⑦转染+AngⅡ+Dox+PD123319组。⑧转染+AngⅡ+Dox+CV-11974+PD123319组。应用RT-PCR和免疫细胞化学染色技术,观察该双重稳定表达AT2R的VSMC细胞系中p21的mRNA及蛋白表达情况;采用AngⅡ及其1,2型其受体拮抗剂干预上述细胞,观测上述指标的变化。结果:加入Dox前转染组p21表达处于高水平,其mRNA及蛋白表达强度分别为118.363±19.225,0.196±0.013;AngⅡ1×10-7moL/L干预VSMC后p21mRNA及蛋白表达强度均显著降低,分别为51.761±4.429,0.032±0.014(t=13.10,     

血管紧张素Ⅱ受体阻断剂对慢性肾脏病患者肾素-血管紧张素系统表达的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ受体阻断剂（angiotensinⅡ receptor blocker,ARB）对慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）患者循环和肾脏肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）表达的影响。方法：行肾脏活组织检查且2个月内未曾服用血管紧张素转换酶抑制剂的CKD患者,其中2周内ARB治疗的患者17例（ARB治疗组）,另选取2周内未应用ARB治疗的患者17例（空白对照组）,根据年龄、性别、血压、估算肾小球滤过率（eGFR）、24h尿蛋白、尿钠等进行配对。采用放射免疫法和酶联免疫吸附分析（ELISA）方法测定血、尿RAS组分的浓度,并采用免疫组织化学方法评价肾脏肾素、血管紧张素原（AGT）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和血管紧张素Ⅱ受体的表达。分析ARB对血、尿和肾组织RAS表达的影响。结果：ARB治疗组与空白对照组在性别、年龄、eGFR、24h尿蛋白、尿钠和血压等方面均显著差异。ARB治疗组血浆AngⅡ高于空白对照组[（63.09±15.14）pg/mL比（53.66±8.33）pg/mL,P〈0.05],肾内肾素免疫组织化学染色面积高于空白对照组[（48.65±19.58）%比（30.29±24.98）%,P〈0.05]。ARB治疗组肾内AGT、AngⅡ和血管紧张素Ⅱ1型受体免疫组织化学染色面积略低于空白对照组,但差异无统计学意义。结论：ARB治疗对循环和肾脏局部RAS表达的影响不同,可使循环AngⅡ升高,并可能抑制肾脏局部AngⅡ的表达。     

血管紧张素Ⅱ对单核细胞组织因子表达的影响及调控机制

目的　观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对人单核细胞组织因子 (TF)表达的影响及机制。方法　人外周血单核细胞的分离采用淋巴细胞分离液及Percoll。细胞促凝活性 (PCA)的检测采用一期凝固法。细胞TF抗原测定采用ELISA法 ;TFmRNA检测采用RT PCR的方法 ;IκBα水平分析采用Westernblot方法 ;NF κB的变化分析用凝胶电泳迁移率实验。结果　AngⅡ (10 - 9～ 10 - 7mol L)可剂量依赖性诱导单核细胞PCA、TF抗原及mRNA的增加 ,并有明显的时效关系。洛沙坦 (losartan)浓度在 10 - 6 ～10 - 5mol L可不同程度地阻断AngⅡ的作用。Staurosporine(2 .5× 10 - 7mol L)以及金雀异黄素 (4× 10 - 5mol L)可显著抑制AngⅡ (10 - 7mol L)诱导的单核细胞PCA、TF抗原增加及TFmRNA的表达 ;AngⅡ(10 - 7mol L)作用 15min可引起单核细胞IκBα水平下降 (P <0 .0 5 ) ,6 0min时IκBα水平降至最低水平 ,180min时恢复至正常水平 ;凝胶电泳迁移率显示AngⅡ (10 - 7mol L)诱导单核细胞NF κB的作用在 15min起效 ,6 0min时核内NF κB的水平最高 ,180min恢复正常 ;洛沙坦 (10 - 5mol L)或PDTC(10 - 4mol L)均可抑制NF κB的活化。结论　AngⅡ可诱导单核细胞TF的表达 ,该作用是通过AngⅡ 1型受体实现的。胞内PKC发挥较强的作用。NF κB的     

血管紧张素-(1-7) 对高血压大鼠血管紧张素Ⅱ及其受体的影响

目的观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对二肾一夹(2K1C)高血压大鼠血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ及其受体的影响.方法采用微渗泵植入技术,建立Ang-(1-7)对高血压大鼠干预模型,放免法测定血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ(AⅡ)浓度,RT-PCR检测肾组织内血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1)和2型受体(AT2)mRNA水平.结果 Ang-(1-7)减轻2K1C高血压大鼠肾脏病理损害,Ang-(1-7)对血浆及肾组织AⅡ浓度无显著影响,对肾组织内AT2受体表达无显著影响,减少肾组织内AT1受体表达.结论 Ang-(1-7) 对2K1C高血压大鼠肾损害具有保护作用,其机制之一是通过减少肾组织内AT1受体而实现.     

高血压心肌纤维化的发病机制：成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1的表达状况

目的：研究成年大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaxia protein-1，MCP-1)表达情况，探讨高血压合并心脏损害的可能机制，方法：成年大鼠CFs体外培养，在不同浓度血管紧张素Ⅱ不同作用时间刺激下，应用免疫蛋白印迹法和ELISA法分别测定细胞中和培养上清中MCP-1的含量。结果：①在细胞内和培养上清中均有MCP-1表达。②随着血管紧张素Ⅱ、刺激浓度的增加和刺激时间的延长，细胞内和上清中MCP-1的表达量也逐渐增加。在1&;#215;10^-11，1&;#215;10^-9，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6mol／L的血管紧张素Ⅱ作用下，上清中MCP-1的含量分别为(1．60&;#177;0．21)，(3．18&;#177;0．15)．(4．70&;#177;0．22)，(9．18&;#177;0．52)，(8．75&;#177;0．42)μg／L，与对照组(1．13&;#177;0．09)μg／L比较，除1&;#215;10^-11mol／L组外，差异均有显著性意义(t=26．21-39．67．P均&;lt;0．05)。③在1&;#215;10^-7mol／L的血管紧张素Ⅱ作用下，3，6，12和24h MCP-1的表达量分别为(2．13&;#177;0．31)，(3．25&;#177;0．20)．(5．28&;#177;0．50)和(9．18&;#177;0.52)μg／L，与空白对照组(1.13&;#177;0．09)μg／L比较差异均有显著性意义(t=6.93～34．11，P均&;lt;0．05)。结论：成年大鼠CFs的MCP-1的表达对血管紧张素Ⅱ的刺激有浓度和时间依赖性。CFs的MCP-1的表达可能参与高血压时心肌内的炎性反应和心肌纤维化。     

肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响

目的观察肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响.方法实验于2003-09/2004-09在南方医科大学珠江医院中心实验室进行.①采用组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞.②实验分组空白对照组;1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L血管紧张素Ⅱ组;1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L肾上腺髓质素N端20肽组;1×10-7mol/L血管紧张素Ⅱ+(1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L)肾上腺髓质素N端20肽组.③以3H脯氨酸掺入试验测定血管平滑肌细胞的胶原合成功能,以四氮唑盐法测定细胞增殖情况.分别观察不同浓度肾上腺髓质素N端20肽、血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及合成胶原的影响.结果①肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞的胶原合成功能的作用肾上腺髓质素N端20肽组的3H脯氨酸掺入率与对照组相比(P＞0.05),差异均无显著性.随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高,血管平滑肌细胞的3H脯氨酸掺入率呈递增趋势.血管紧张素Ⅱ+肾上腺髓质素N端20肽组的3H脯氨酸掺入率在血管紧张素Ⅱ浓度不变的情况下,随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高,血管平滑肌细胞的3H脯氨酸掺入率呈递减趋势,各组之间差异有显著意义(P＜0.01).②肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的影响随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高,四氮唑盐比色值差异无显著性(P均＞0.05).随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高,四氮唑盐比色值增也明显增高,各组间差异有显著性意义(P均＜0.01).血管紧张素Ⅱ+肾上腺髓质素N端20肽组中,在血管紧张素Ⅱ浓度不变的情况下,随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高,四氮唑盐比色值均显著降低(P＜0.01).结论肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ剌激血管平滑肌细胞增生及胶原的生成起明显抑制作用.     

骨髓间充质干细胞的体外趋化与单核细胞趋化蛋白1的作用

目的：观察单核细胞趋化蛋白1对骨髓问充质干细胞体外增殖和迁移的作用，及单核细胞趋化蛋白1抗体对该作用的影响。方法：实验于2003—12／2004一02在军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物实验室完成。取10只健康雄性Wistar大鼠骨髓，体外分离、培养骨髓间充质干细胞，选择第2代作为实验细胞。观察0，5，25，50，75，150μg／L单核细胞趋化蛋白1对大鼠骨髓间充质干细胞的生物学作用；通过细胞迁移实验，观察0，5，25，50，75，150μg／L单核细胞趋化蛋白1对骨髓间充质干细胞的体外趋化作用，以及加入单核细胞趋化蛋白1抗体中和后其对骨髓间充质干细胞趋化作用的变化；应用反转录多聚酶链反应方法，检测大鼠骨髓间充质干细胞有无单核细胞趋化蛋白1相关受体细胞趋化因子受体2的表达。结果：①二甲基偶氮唑盐法测定细胞增殖实验结果：在体外，单核细胞趋化蛋白1以浓度梯度（0，5，25，50，75，150μg／L)依赖方式促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖，但作用较温和。②细胞迁移实验结果：单核细胞趋化蛋白1以浓度梯度（0，5，25，50，75，150μg／L)依赖方式促进大鼠骨髓骨髓间充质干细胞的定向迁移，该作用显著（P&;lt;0．05)。③抗体中和后的迁移实验：75μg／L质量浓度单核细胞趋化蛋白1对骨髓间充质干细胞的促迁移作用可被单核细胞趋化蛋白1中和抗体明显减弱（P&;lt;0．05)。④反转录聚合酶链反应方法证实骨髓间充质干细胞表达单核细胞趋化蛋白1的相关受体细胞趋化因子受体2。结论：在体外，单核细胞趋化蛋白1以浓度梯度依赖方式引起骨髓间充质干细胞的定向迁移，而且该作用可被单核细胞趋化蛋白1中和抗体减弱。单核细胞趋化蛋白1可能通过与细胞趋化因子受体2结合后发挥作用。本实验为了将影响因素相对简单化，便于观察其中的相互关系，并非将体外实验结果完全等同于在体情况。     

肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ剌激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响

目的:观察肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ剌激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响。方法:实验于2003-09/2004-09在南方医科大学珠江医院中心实验室进行。①采用组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞。②实验分组:空白对照组;1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L血管紧张素Ⅱ组;1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L肾上腺髓质素N端20肽组;1×10-7mol/L血管紧张素Ⅱ (1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6mol/L)肾上腺髓质素N端20肽组。③以3H脯氨酸掺入试验测定血管平滑肌细胞的胶原合成功能,以四氮唑盐法测定细胞增殖情况。分别观察不同浓度肾上腺髓质素N端20肽、血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及合成胶原的影响。结果:①肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞的胶原合成功能的作用:肾上腺髓质素N端20肽组的3H脯氨酸掺入率与对照组相比(P>0.05),差异均无显著性。随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高,血管平滑肌细胞的3H脯氨酸掺入率呈递增趋势。血管紧张素Ⅱ 肾上腺髓质素N端20肽组的3H脯氨酸掺入率在血管紧张素Ⅱ浓度不变的情况下,随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高,血管平滑肌细胞的3H脯氨酸掺入率呈递减趋势,各组之间差异有显著意义(P<0.01)。②肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的影响:随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高,四氮唑盐比色值差异无显著性(P均>0.05)。随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高,四氮唑盐比色值增也明显增高,各组间差异有显著性意义(P均<0.01)。血管紧张素Ⅱ 肾上腺髓质素N端20肽组中,在血管紧张素Ⅱ浓度不变的情况下,随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高,四氮唑盐比色值均显著降低(P<0.01)。结论:肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ剌激血管平滑肌细胞增生及胶原的生成起明显抑制作用。     

活性氧介导血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：了解血管紧张素Ⅱ通过活性氧诱使血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径，为抗氧化剂治疗提供理论依据。资料来源：应用计算机检索1990—01／2005-09期间Medline的相关章。检索词“vascular smooth musclecell，angiotensin Ⅱ，reactive oxygen species，signaling transduction”，并限定章语言种类为English。资料选择：对资料进行初审，选取随机、盲法的研究献，然后筛除重复研究。对剩余的献开始查找全。资料提炼：共收集到48篇关于活性氧在血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞增殖中的信号转导献，16篇符合纳入标准。排除的32篇中，18篇为未随机研究或重复性研究，14篇为综述类章。资料综合：血管紧张素Ⅱ通过一型受体作用于血管平滑肌细胞，刺激NAD（P）H氧化酶产生活性氧，活性氧作为重要的第二信使激活下游的信号分子，如钙离子、蛋白酪氨酸激酶、丝裂原活化的蛋白激酶、核因子-KB，通过信号的级联反应参与血管平滑肌细胞的增殖。结论：活性氧作用于血管平滑肌细胞的信号途径，血管平滑肌细胞增殖中具有重要作用。     

罗格列酮对高糖时人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

【目的】探讨高糖对人肾小球系膜细胞（HRMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响，以及过氧化物酶增殖体激动剂罗格列酮对其影响及作用机制。【方法】将HRMC分为三组处理：①正常对照组（糖浓度5．5mmol／L）；②高糖（30mmol／L）组；③高糖加罗格列酮（5μmol／L，10μmol／L）组。用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测MCP-1mRNA表达，用EIISA方法测定细胞上清MCP-1蛋白浓度。【结果】高糖刺激系膜细胞后MCP-1mRNA表达明显升高，蛋白浓度增加，加入罗格列酮后MCP-1表达明显下降。且随罗格列酮浓度增大，作用更明显。【结论】高糖刺激HRMC，其MCP-1表达增强，可能是糖尿病肾病（DN）发病机制中的一个重要途径。罗格列酮能抑制MCp-1mRNA表达及蛋白合成，说明其具有抑制炎症的作用，在预防DN的发生发展中可能有重要意义。