SUMO4基因多态性与NF-κB、糖尿病及冠心病的关系

糖尿病( diabetes mellitus,DM)和冠心病(coronary artery disease,CAD)均为多基因介导、基因和环境相互作用的慢性复杂疾病.核因子κB(nuclear factor kappa B,NF- κB)是一类转录因子家族,在细胞内信号传导系统中起关键作用,参与包括DM和CAD在内的多种炎症性疾病的发生发展.研究证实小泛素样修饰蛋白4( small ubiquitin- like modi - fier 4,SUMO4)使NF- κB的抑制剂IκBα免于降解,负性调节NF- κB的转录活性,另外游离的NF- κB能够与SUMO4基因启动子结合并激活SUMO4基因的转录.而SUMO4基因多态性导致NF-κB活性显著增加,并与DM和CAD的易感性相关.此文主要就SUMO4基因多态性对NF-κB转录活性的影响及其在DM和CAD遗传易感性的关联研究进展作一概述.     

TNFα激活NF-κB转录活性由Rel/p65 529位丝氨酸磷酸化介导

NF－κB／Rel转录因子在与免疫和炎症反应、生长、发育和死亡等有关基因转录中具有重要的调控作用．NF－κB因其与免疫球蛋白κ轻链基因增强子结合而得名,是由p50和p65组成的杂合二聚体;存在于大多数细胞的胞浆中,与抑制蛋白IκBs结合而没有活性．以往的许多研究证明I...     

NF-κB在人肝细胞肝癌中的表达及与HBV X蛋白的关系

目的：研究核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中的表达及其与乙型肝炎病毒（HBV ）X蛋白的关系。方法；用免疫组织化学S－P法，检测52例人肝细胞肝癌组织中核转录因子NF－-κB及HBV X蛋白的表达；用脂质体介导的基因转染法将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染入人肝癌细胞系HCC－9204，检测肝癌细胞内核转录因子NF－-κB的表达。结果：52例人肝细胞肝癌组织均有核转录因子NF－-κB的广泛表达，并且在11例HBV X蛋白阳性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于细胞胞质和胞核，而在41例HBV X蛋白阴性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于肝癌细胞的胞质。将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染 入人肝癌细胞系HCC－9204，并在稳定表达X蛋白 的肝癌细胞，核转录因子NF－-κB定位于其胞质和胞核，而未进行基因转染的亲体细胞，核转录因子NF－-κB仅定位于细胞质，细胞核无核转录因子NF－-κB的表达。结论：核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中广泛表达，人肝细胞肝癌中存在着核转录因子NF－-κB的异常激活，并且核转录因子NF－-κB的异常激活与HBV X蛋白有关，X蛋白激活核转录因子NF－-κB， 使其从细胞转位于细胞核，这可能在HBV相关的人原发性肝癌肝癌的发生中起一定作用。     

NF-κB的信号通路与阻断策略

核因子κB(nuclearfactor -kappaB ,NF -κB)是普遍存在于细胞浆中以p5 0 /p6 5异二聚体为形式的一种快反应转录因子 ,与NF -κB的抑制性蛋白 (in hibitorkappaB ,IκB)结合而呈非活性状态。大量研究表明 ,它可以被多种刺激剂 ,如TNF -α、IL - 1、神经生长因子、蛋白激酶C激活剂、有丝分裂原、氧化剂、细菌、病毒、免疫刺激剂、脂多糖 (lipopolysacchar ide ,LPS)、自由基以及紫外线等激活[1- 3] 。激活的NF -κB与IκB解离后转位入核与靶基因启动子 /增强子上的κB位点结合 ,从而调节许多靶基因的表达 ,因此被誉为控制早期基因…     

SUMO化修饰对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞IκB/NF-κB信号的影响

目的 探讨小泛素相关修饰物(SUMO)修饰对高糖诱导的肾系膜细胞IκB/NF-κB信号的影响.方法 体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,设对照组、不同浓度高糖干预组和渗透压对照组,用免疫共沉淀检测SUMO1,SUM02/3蛋白与IκBα蛋白的相互作用;免疫印迹检测IκBα、NF-κB P65蛋白表达.结果 高糖特异性地减弱肾系膜细胞SUMO2/3与IκBα蛋白间的相互作用(P＜0.05);高糖呈浓度-时间依赖性促进IκBα泛素化降解(P＜0.05),同时上调NF-κB P65表达(P＜0.05).结论 高糖特异性减弱IκBα的SUMO化修饰,可能介导了肾系膜细胞、NF-κB信号的激活,参与了糖尿病肾病的发病.     

核转录因子-κB与免疫应答

核转录因子 κB(nuclearfactorκB ,NF κB)是一种重要的核转录因子 ,NF κB系统由NF κB Rel蛋白家族和IκB蛋白家族组成 ,通过对多种基因表达的调节 ,影响机体非特异性免疫反应和特异性免疫反应 ,从而在体机免疫功能调节中发挥重要作用。本文就NF κB在免疫应答中的作用作一综述。     

Syk基因对乳腺癌血管内皮生长因子-C表达的调控作用

目的 研究Syk基因对乳腺癌血管内皮生长因子(VEGF)-C表达的调控机制.方法 采用免疫组织化学(EnVision法)检测乳腺癌组织中Syk、NFκB与VEGF-C的蛋白表达情况,分析三者的相关性及与淋巴转移的关系.转染pcDNA3.1(-)-Syk至乳腺癌MDA-MB-231细胞,检测对VEGF-C和NFκB表达的影响.结果 在淋巴转移组中,Syk蛋白阳性率低于非淋巴转移组,VEGF-C与NFκB阳性率在淋巴转移组高于非淋巴转移组.Syk蛋白表达与NFκB(r=-0.448,P=0.002)、VEGF-C(r=-0.620,P=0.000)蛋白表达呈负相关,VEGF-C与NFκB呈正相关(r =0.310,P=0.036).转染pcDNA3.1(-)-Syk重组质粒的乳腺癌细胞中VEGF-C的mRNA及蛋白表达水平均低于空白对照组,细胞核NFκB蛋白表达低于空白对照组(均P＜0.05).结论 Syk基因与乳腺癌转移相关,可能是通过抑制NFκB的活性而下调VEGF-C的表达,从而抑制乳腺癌的淋巴转移.     

蝎素组分Ⅲ对THP1细胞NF-κB转录因子的影响

目的:研究蝎素组分Ⅲ(Scorpion venom crudeⅢ,SVC-Ⅲ)对THP1细胞中NFκ-B转录因子的影响。方法:用RT-PCR方法检测THP1细胞中p65和IKK1基因的表达;Western blot检测细胞p65蛋白的表达;荧光素酶报告基因的方法观察NF-κB的转录活性。结果:1μg/L浓度的SVC-Ⅲ在mRNA和蛋白水平均对NFκ-B有促进表达作用,并增强NFκ-B的转录活性;10μg/L浓度的SVC-Ⅲ则未显示出促进作用;100μg/L浓度的SVC-Ⅲ反而表现出一定的抑制作用。结论:SVC-Ⅲ能以剂量依赖的方式调节THP1细胞NFκ-B转录因子的表达和活性。     

呼吸道合胞病毒激活靶细胞NF—κB的机制及途径研究进展

NF－κB是一个重要的转录调节因子，调控许多生物活性介质基因的转录和表达。静息时，NF－κB与IκB结合以非活性异寡聚体的形式存在于胞浆中，胞外刺激通过不同的信号转录途径激活NF－κB。本文主要介绍了呼吸道合胞病毒作用于靶细胞通过蛋白激酶C、磷脂酰肌醇激酶3、丝裂原活化蛋白激酶及蛋白磷酸酶2A等介导的信号级联反应活化NF－κB的机制及途径的研究进展。     

核转录因子κB在全身为症反应综合征中的作用

核转录因子κB（NF－κB）是一种多向性核转录调工蛋白,参与多种炎症介质基因的转录和调控,在炎症、免疫反应中发挥重要作用。本文就NF－κB与全身炎症反应综合征的关系以及阻断NF－κB对全身炎症反应综合征、多器官功能不全综合征的治疗作用作一综述。     

面肩肱型肌营养不良症发病机制的研究进展

面肩肱型肌营养不良症,是一种常染色体显性遗传疾病,至今尚未找到其致病基因。大部分面肩肱型肌营养不良症患者和4q35区域3.3-kb的串联重复序列Z4D4的整倍缺失紧密连锁,几乎所有面肩肱型肌营养不良症患者,Southern杂交片段小于35 kb(少于11个D4Z4重复序列),而正常人群该片段为350 kb(11-150个D4Z4重复序列)。通过分子生物学研究与生物信息学分析,在4q35区域内,排除了FRG1、FRG2、ALP、ANT1、DUX4、YY I、HMGB2及Nu-c lolin等几个可能的候选基因;有关肩肱型肌营养不良症发病机制的位置变异效应假说,需要更多的证据支持;另一假说认为,面肩肱型肌营养不良症患者,D4Z4区域内类似沉默子的序列与转录抑制复合物相结合,由于D4Z4的缺失,该复合物不能形成并导致D4Z4上游基因的过表达,有关基因的过表达通过某种不明机制导致FSHD疾病的发生;D4Z4的缺失使4qter在细胞核内的定位异常,使许多基因的表达不正常,从而引起一系列的病理变化,并最终导致FSHD疾病的发生,也是FSHD发病的可能性机制之一。FSHD的发病相关基因和发病机制的研究有待深入。     

肝素治疗纤溶酶原激活剂抑制物-1基因启动因子区-675 4G/4G基因型基因所致重复流产孕妇的疗效探讨

目的 探讨肝素(heparin)治疗纤溶酶原激活剂抑制物-1基因启动因子区-675 4G/4G基因型基因所致重复流产的疗效.方法 将56例反复性妊娠丢失患者(排除感染、内分泌、子宫附件、免疫等导致流产的其它因素,由纤溶酶原激活剂抑制物-1基因启动因子区-675 4G/4G基因型基因),就诊后一经诊断为妊娠即给分为两组,分别给予肝素治疗或不给予任何干预.观察两组的妊娠结局. 结果肝素治疗24例中,22例足月产(91.66%)、2例早产35.9±1.6w(33～37.6)并产出活婴(11.11%)、活产率100%.比对照组50% (12/24),差异有显著性(P＜0.01).结论 肝素对纤溶酶原激活剂抑制物-1基因启动因子区-675 4G/4G基因型基因所致重复流产孕妇的治疗效果显著.     

PIWIL4的克隆及其抗体制备和初步应用

目的 制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位.方法 构建原核表达质粒pGEX-5X-1-PIWIL4,转化大肠杆菌BL21,PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清.以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测PIWILA在各细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位.结果 成功构建原核表达质粒,表达并纯化PIWIL4蛋白.免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:20 000,Western blot和免疫组化确定抗体具有高度特异性,并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位.结论 PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备,为进一步研究PIWILA的生物学功能奠定了基础.     

PIWIL4的克隆及其抗体制备和初步应用

目的 制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位.方法 构建原核表达质粒pGEX-5X-1-PIWIL4,转化大肠杆菌BL21,PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清.以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测PIWILA在各细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位.结果 成功构建原核表达质粒,表达并纯化PIWIL4蛋白.免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:20 000,Western blot和免疫组化确定抗体具有高度特异性,并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位.结论 PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备,为进一步研究PIWILA的生物学功能奠定了基础.     

Genetic analysis of Huntington disease in Italy

Twelve Italian families with Huntington disease were tested with 10 probes known to be linked to the disease locus and able to detect polymorphisms at the following loci on chromosome 4: D4S10, D4S127, D4S95, D4S43, D4S115, D4S111, D4S90. The results confirmed the applicability of the linkage approach for presymptomatic diagnosis in Italian families. Positive lod scores were found between D4S10, D4S95, D4S43 and the disease, wherease D4S90 did not indicate significant linkage values. With the limitations due to the small size of the tested sample, no genetic heterogeneity was detected in the families examined for loci D4S10, D4S95/S127, D4S43.     

Hilar cholangiocarcinoma with extensive immunoglobulin G4 reaction

Immunoglobulin G4 (IgG4)-related disease (IgG4-RD) is a systemic fibroinflammatory disorder that can involve multiple organs. It is often challenging to distinguish IgG4-related sclerosing cholangitis (IgG4-SC) from cholangiocarcinoma because of overlap in their clinical findings. A 75-year-old man presented to a hospital for a detailed examination of the elevation of some biliary enzymes. Radiographic examination revealed segmental bile duct with wall thickening of the common hepatic bile duct, and dilation of the peripheral branches. Transampullary biopsy showed a non-specific inflammatory reaction with several IgG4-positive cell infiltrations. There were no signs of malignancy. The liver biopsy showed bile duct injury accompanied by IgG4-positive cell infiltration. We then performed bile duct biopsy and finally diagnosed the patient with cholangiocarcinoma. We should remember that the IgG4 reaction is neither completely sensitive nor specific for IgG4-RD and avoid resting solely on the IgG4 reaction to precisely distinguish IgG4-SC from cholangiocarcinoma.     

Severe limb malformations in 4p deletion

Severe limb anomalies with radial aplasia and hypodactylia are reported in a male newborn with 4p deletion syndrome. In apparent contradiction with previous reports, this finding indicates that the radial aplasia, as frequently observed in patients with ring chromosome 4 , seems to be more likely related to the 4p deletion, rather than to the 4q deletion.     

抗CD4及抗CXCR4抗体阻断HIV—1感染细胞作用的研究

为探讨抗ＣＤ４ 及抗ＣＸＣＲ４ 抗体在阻断Ｉ型人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－ １） 感染应用中的意义, 本文应用上述两种抗体分别与ＳｕｐＴ１ 细胞及人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ） 共培育, 以封闭ＨＩＶ－ １ 在上述细胞上的受体。然后, 以ＨＩＶ１ ＮＬ４３ 病毒株感染上述细胞, 通过测定感染细胞上清中ＨＩＶ－ １ 的Ｐ２４ 蛋白含量, 观察上述抗体对ＨＩＶ－ １ 感染细胞的阻断作用。结果显示, 无论是抗ＣＤ４ 或抗ＣＸＣＲ４ 的抗体单独应用或是两者联合应用, 均可明显地抑制ＨＩＶ－ １ 感染细胞的作用。该结果为今后开拓ＡＩＤＳ的抗体治疗提供了理论基础。     

类风湿关节炎T细胞亚群4-1BB的表达与其分泌TH1/TH2细胞因子的关系

目的探讨体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)T淋巴细胞上共刺激分子4-1BB的表达,及与其分泌T_H1/T_H2细胞因子的关系。方法应用流式细胞术检测体外培养的30例RA患者和20例正常对照者T细胞活化前后4-1BB的表达,并且应用ELISA方法检测培养上清液中IFN-γ、IL-4水平。结果RA患者CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB明显高于正常对照组(表达百分率分别为18.56%±4.08%和10.33%±2.13%;1.24%±0.12%和0.87%±0.09%,P<0.01),经抗CD3单抗体外刺激后CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB均显著高于活化前(表达百分率为33.21%±4.29%和21.35%±8.12%,P<0.01)。RA患者CD4~ T/CD8~ T比值明显升高,而且与4- 1BB~ CD4~ T细胞数呈正相关关系(r=0.84,P<0.01),RA患者T淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、IL-4均高于正常对照组(P<0.05),经抗CD3单抗体外刺激后上清液中IFN-γ及Ib-4均明显高于活化前,以IFN-γ升高最为显著(P<0.01)。而且抗CD3单抗刺激前后4-1BB~ CD4~ T细胞数与培养上清液中IFN-γ水平均呈正相关关系(r=0.721,r=0.487,P<0.05)。结论类风湿关节炎患者T细胞表达的4-1BB在类风湿关节炎的发生发展中具有重要意义,4-1BB可能通过对CD4~ T细胞活化,促使T_H1细胞因子分泌,参与关节炎症和免疫损伤。     

4-1BB／4-1BBL在T细胞免疫应答及疾病发生中的作用

共刺激分子4-1BB和4-1BB配体（4-1BBL）属于肿瘤坏死因子／肿瘤坏死因子受体（TNF／TN—FR）超家族的重要成员,分别表达在活化的T细胞及树突状细胞（DC）上。4-1BB与4-1BBL相互作用产生的共刺激信号能够促进T细胞增殖、分化以及细胞因子的产生。4-1BB／4—1BBL信号途径在自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染等疾病的发生、发展过程中起着重要的免疫调节作用。干预调节4-1BB／4-1BBL信号途径有望为疾病的免疫治疗提供新的思路。