氨磷汀对足叶乙甙所致小鼠DNA损伤和造血损伤的预防作用研究

目的了解细胞保护剂氨磷汀(WR-2721)在拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙(VP-16)对小鼠遗传损伤和造血损伤中的预防作用。方法以昆明小鼠为研究对象,采用随机数字表法将小鼠分为1、5、15 mg/kg VP-16处理组(A1、A2、A3);上述不同剂量VP-16联合200 mg/kg WR-2721处理组(B1、B2、B3);C组给予等体积生理盐水;D组给予WR-2721。通过单细胞凝胶电泳,计数拖尾细胞发生率和DNA迁移度;比较各组嗜多染红细胞(PCE)中微核(MN)比率的差异;统计各组小鼠存活率、外周血白细胞和骨髓粒-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)。结果联合WR-2721后,MN发生率、DNA受损淋巴细胞百分率、DNA迁移度及小鼠30 d存活率、平均存活时间、外周血白细胞计数、骨髓CFU-GM计数均较单用VP-16对照组改善明显。结论WR-2721能有效降低VP-16导致的小鼠遗传损伤和骨髓造血损伤。     

慢性粒细胞性白血病骨髓间充质干细胞的分离纯化及其功能特性的研究

目的 分离、纯化慢性粒细胞性白血病（CML）患者骨髓间充质干细胞（MSC）,并对MSC进行功能、特性鉴定。方法 获取CML患者的骨髓MSC,应用极限稀释法获取单克隆来源的MSC,并在低血清培养液中培养和扩增;流式细胞术检测MSC免疫表型和细胞周期;通过油红O染色、Von Kossa染色和Western印迹检测MSC向脂肪、骨和神经细胞的分化。电镜检测CML患者骨髓MSC的超微结构;通过软琼脂培养法和裸鼠接种,确定CML来源的MSC是否存在致瘤性。结果 MSC在相应的诱导条件下可以向骨、脂肪和神经细胞分化。CML来源的MSC在倒置显微镜下为梭形,表达CD29、CD44、CDl05,而CDllb,CD31、CD34、CD45、HLA—DR均为阴性。CML来源的MSCBCR／ABL融合基因阴性,不具备体内和体外致瘤性。结论CML患者骨髓中存在具有多向分化能力的MSC,该细胞群体不具备体外和体内致瘤性,表现为正常MSC的生物学特征。     

间质干细胞的免疫调节及免疫治疗作用研究进展

间质干细胞（MSC）是属于中胚层的一类多能干细胞，具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌（肌腱）细胞、骨髓基质细胞、肝脏细胞和神经细胞等多种细胞分化的能力‘”。近年来由于MSC具有体外高度扩增、多向分化潜能并支持造血及调节免疫特性，其免疫调节及免疫治疗作用成为研究的热点。     

VEGF与Notch信号通路对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞的调控机制研究

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)通过Notch信号通路对再生障碍性贫血（AA）患者骨髓造血微环境的影响,探讨VEGF与Notch信号通路对骨髓间充质干细胞（MSC）的调控机制。方法选取AA患者与健康志愿者的骨髓MSC,VEGF干预后分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测MSC细胞增殖、分化情况,分别采用Westernblot、qRT-PCR法检测MSCVEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因表达情况,采用免疫荧光法检测MSC内皮分化能力。结果CCK-8法检测显示,VEGF的干预可明显上调AA患者MSC的增殖能力。流式细胞仪检测显示,VEGF通过阻断S期细胞促进AA患者MSC的增殖,抑制其凋亡。Westernblot、qRT-PCR法检测显示,AA患者MSCVEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因表达受抑制,VEGF的干预可促进MSC的Notch信号通路传导。免疫荧光法检测提示,AA患者MSC内皮分化能力弱于正常MSC。结论VEGF或可通过Notch信号通路调控AA患者MSC,从而改善骨髓造血微环境。     

低血清条件下分离脐血间充质干细胞及其生物学特性检测

目的研究低血清条件下分离人脐血间充质干细胞及其表型,生物学性状和分化能力。方法分离足月生产胎儿的脐血单个核细胞,以特定的低血清培养基培养MSC,测定生长曲线和体外分化潜能,利用流式细胞仪进行MSC表型测定和细胞周期分析,检测造血因子的表达,诱导成脂和成骨分化。结果利用低血清培养从脐血中可以分离出MSC,其形态和表面抗原性与骨髓来源的MSC一致,在体外可有效扩增,表达特定造血因子,具有向成骨及脂肪组织分化的潜力。结论低血清条件下分离的脐血来源MSC具有典型间充质干细胞的生物学特征,并具有向其它组织分化的潜能,可以作为细胞组织工程的种子细胞。     

不同类型急性白血病患者骨髓间充质干细胞的病理学特征

骨髓间充质干细胞（MSC）具有在体内和体外支持造血的功能，因此联合MSC的造血干细胞移植有可能增强移植效果，最近研究结果证实联合MSC的造血干细胞移植可以促进造血干细胞的植入和造血恢复。既往研究发现急性白血病患者骨髓造血微环境存在病理改变，包括细胞的组成和功能改变。但是，急性白血病患者骨髓MSC是否受到影响以及影响程度，尚不清楚。此外，MSC的来源有限，而且异基因MSC存在归巢效率低等问题。     

骨髓间充质干细胞在骨髓移植中的应用

间充质干细胞（Mesenehymal Stem Cells，MSC）是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞，是成体干细胞的一种，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富。由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓间充质干细胞（bone marrow meschymal stem cell，BM—MSC）。也因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆，又可称为贴壁细胞或者成纤维细胞集落形成单位（CFU—F）、骨髓基质细胞（MSC）或间充质干细胞或间充质祖细胞（MPC）。许多研究发现，BM—MSC在骨髓移植中有着极其重要的应用价值，一方面在骨髓微环境中支持造血；另一方面，对移植免疫有一定的影响，能够在某些方面减轻移植物抗宿主效应。     

右归丸对骨髓抑制小鼠造血功能的影响

目的：观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期和凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法：小鼠48只,随机分为正常组、模型组,右归丸低、中、高剂量组和阳性对照组,每组8只。除正常组外,余五组均予造模,连续3天给予腹腔注射环磷酰胺制备骨髓抑制模型。造模后各组应用相应药物治疗7天。用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、造血祖细胞培养和流式细胞术（FCM）分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、体外培养各系造血祖细胞的集落数以及骨髓细胞周期和凋亡的影响。结果：右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、骨髓有核细胞（BMC）数,高剂量对血小板（PET）和白细胞（WBC）有明显升高作用。右归丸能明显提高体外培养各系造血祖细胞的集落数,以中、高剂量效果显著。右归丸低、高剂量均能促进骨髓G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,提高G2／M期细胞比例,增殖指数（PI）明显升高。右归丸中、低剂量组的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论：右归丸可能通过促进G0期造血干细胞进入细胞周期,进行增殖;加速骨髓细胞修复受损的DNA,通过GI／S和S期监测点;抑制造血细胞的凋亡;调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复。     

脐血单个核细胞的免疫学研究进展

造血干细胞移植（HSCT）已成为治疗多种血液病、某些恶性实体肿瘤、部分遗传性疾病、重症免疫缺陷等疾病的最有效措施之一。骨髓、外周血和脐血是造血干细胞的三大来源。但异基因骨髓移植（allo—BMT）或外周血干细胞移植（allo-PBSCT）受HLA匹配供者来源的限制,自体造血干细胞移植又受到干细胞体外净化等问题的困扰,而脐血造血干细胞因其广泛的来源、较强的增殖分化能力及较弱的免疫原性而日益受到重视。     

HO-1基因转染对骨髓间充质干细胞增殖、 表型及多向分化能力的影响

目的 探讨在体外培养条件下,慢病毒载体介导的血红素加氧酶-1(HO-1)基因转染对骨髓间充质干细胞(MSC)增殖、表型及多向分化能力的影响。方法 分离培养大鼠源性骨髓MSC,利用过表达HO-1重组慢病毒载体(lenti-HO-1)将HO-1基因转染到MSC中,用荧光倒置显微镜及Western blot法分析评估转染效率。利用1.5μg/ml的嘌呤霉素筛选稳定过表达HO-1的MSC(MSC-HO-1)。用Western blot法检测MSC与MSC-HO-1内HO-1蛋白表达情况,用细胞计数法绘制MSC与MSC-HO-1的生长曲线,流式细胞仪检测MSC与MSC-HO-1表型,成骨、成脂及成软骨细胞诱导分化检测多向分化潜能变化。结果 MOI=50的 Lenti-HO-1可高效转染MSC。与MSC比较,MSC-HO-1在经过多次传代后仍能高效过表达HO-1,差异有统计学意义(P<0.05)。MSC-HO-1的增殖生长趋势、表面标志表达及多向分化潜能均与未转染的MSC相似。结论 重组慢病毒载体Lenti-HO-1可成功转染MSC并高效表达转入的基因;HO-1基因修饰对MSC增殖活性、免疫表型及多向分化潜能无显著影响。     

WR-2721及胎肝对放烧复合伤小鼠的防治作用

重度放射损伤复合重度烧伤小鼠伤前给WR-2721[S-2(3-氨丙基氨基)乙基硫代磷酸]预防,伤后输注1×10~6同种异基因胎肝细胞悬液治疗,能明显降低动物死亡率,延长死亡动物平均活存日。与对照动物相比,外周血白细胞计数、骨髓有核细胞总数、骨髓CFU-C(粒系造血干细胞)损伤轻、恢复快。外周血酯酶染色的T淋巴细胞计数改变不如骨髓CFU-C变化明显。输注胎肝治疗合并应用辐射防护剂WR-2721对重度放射损伤复合重度烧伤的效果,超过单用胎肝细胞输注或WR-2721的效果。     

同步三维适形放疗联合化疗治疗小细胞肺癌的临床疗效观察

目的探讨同步放化疗与序贯化疗一放疗治疗小细胞肺癌的疗效与毒副作用。方法2005～2009年间46例小细胞肺癌随机分成同期A组（23例）与序贯B组（23例）,化疗用药：VP16 100mg第1～5天静滴,DDP25mg／m2第1～3天静滴。放疗采用三维适形放疗技术,处方剂量为95％PTV接受剂量56～60Gy,200cGy／fx。同期组放疗第1、29天同时行EP方案化疗,序贯组EP方案化疗4～6周期后开始胸部放疗,化疗间隔为21d1周期。结果同期组、序贯组总有效率分别为87．0％、82．6％,2年无进展率和总生存率分别为40．2％、32．8％和52．6％、47．1％,差异有统计学意义（P〈0．05）。同期组、序贯组3级及以上骨髓抑制和放射性食管炎发生率分别为43．4％、34．8％和18．4％、8．7％,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论同期放化疗对绝大数患者能耐受,有较好的近期疗效,提高患者生存率,近期不良反应少,是一种安全有效的治疗手段。     

扶正养营汤对免疫介导再生障碍性贫血小鼠的治疗作用

目的：观察扶正养营汤对免疫介导再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓增殖及外周血IL-2水平的影响。方法：采用完全随机数字表法将制作的免疫介导再障小鼠(BALB/c)模型40只分为4组,另用10只同批正常小鼠设为正常对照组(E组)。采用盲法分别胃饲生理盐水(A组及E组)、扶正养营汤(B组)、环孢霉素A (C组)、扶正养营汤+环孢霉素A (D组)共10d。检测各组小鼠外周血象、骨髓有核细胞计数、测定各组骨髓造血组织容量及外周血IL-2水平。结果：A组小鼠外周血象、骨髓有核细胞数、造血组织容量显著低于E组(P<0.05);B,C,D组较A组增加(P<0.05),尤以D组最为明显(P<0.05);而B组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组小鼠外周血IL-2水平明显高于E组(P<0.05);B,C,D组低于A组(P<0.05);D组低于B组及C组(P<0.05);B组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：扶正养营汤具有促进免疫介导再障小鼠骨髓增殖,降低其外周血IL-2水平的作用。     

WR—2721对小鼠腹腔巨噬细胞的作用

本文观察有效的化学辐射防护的WR－2721对小鼠腹腔Mφ的作用。用昆明种小鼠分为两组，WR－2721组：肌肉注射WR－2721溶液10mg／鼠，用糖原激活和吞噬鸡红细胞的方法，检测Mφ吞噬功能；正常组：除不给WR－2721外，其余方法与WR－2721组相同。实验结果：WR－2721与正常组相比，原始Mφ明显减少（P＜0．001），成熟Mφ明显增加（P＜0．01），Mφ的吞噬率和消化率均明显增加（P＜0．001），组织嗜碱系细胞总数略增加，原始组织嗜酸细胞明显增加（P＜0．05）。表明WR－2721能加速巨噬系细胞成熟，增强Mφ吞噬消化功能，促进组织嗜碱系细胞增殖。     

三种不同方法制备的硫酸钙片植入修复桡骨节段性骨缺损的实验研究

目的 比较3种不同方法制备的硫酸钙片修复兔桡骨节段性骨缺损的效果.方法 采用3种经不同方法制备的硫酸钙片修复兔桡骨节段性骨缺损.A组:空白对照组;B组:常规方法制备的硫酸钙组;C组:加压方法制备并经壳聚糖包衣的硫酸钙组;D组:壳聚糖包衣的复合rhBMP-2加压硫酸钙组.术后4、8、12周进行四环素荧光和组织学观察,以及生物力学测试.结果 壳聚糖包衣的复合rhBMP-2加压硫酸钙组、壳聚糖包衣的加压硫酸钙组骨缺损愈合,而且前者优于后者.壳聚糖包衣的复合rhBMP-2加压硫酸钙组和壳聚糖包衣的加压硫酸钙组抗弯曲强度高于其他两组,而壳聚糖包衣的复合rhBMP-2加压硫酸钙组义高于壳聚糖包衣的加压硫酸钙组(F=125.3,P<0.01).结论 壳聚糖包衣的加压硫酸钙片降解时间与新骨形成时间趋于一致,而且抗压强度高,可以修复节段性骨缺损,复合rhBMP-2后可以取得更好的效果.     

骨髓间充质干细胞对高氧肺损伤大鼠的治疗作用

【目的】: 观察骨髓间充质干细胞(MSC)对新生大鼠高氧肺损伤的治疗作用?【方法】 贴壁法体外培养扩增大鼠骨髓MSC,利用携带GFP基因的慢病毒液对骨髓MSC进行转染;SD新生大鼠随机分为A?B?C?D?E五组,A,B两组高氧暴露7 d后经尾静脉分别注射(1 × 105 /只和1 × 104 /只)骨髓MSC,C组注射磷酸盐缓冲液(PBS),D?E两组为空气组,分别注射骨髓MSC和PBS,观察骨髓MSC在大鼠肺组织的分布情况?大鼠的体质量增长?肺系数?放射性肺泡计数(RAC)及肺组织的病理改变?【结果】 A?B?D组肺组织中均可见GFP+ 细胞;MSCs干预3?7 d,A,B两组GFP+ 细胞占总细胞数的比例高于D组(31.3 ± 2.6% vs. 11.8 ± 1.3%,A组 vs. D组, 22.7 ± 1.3% vs 11.8 ± 1.3%, B组 vs. D组,P < 0.05);A组治疗第3?7?14天GFP+ 细胞占总细胞数的比例高于B组,P < 0.05;A?B两组治疗后体质量增长加快(66 ± 9 g vs. 48 ± 7 g,A组 vs. C组, P < 0.05),肺系数降低(2.26 ± 0.23% vs. 2.9 ± 0.4%,A组 vs. C组, P < 0.05),RAC值明显增加(9.2 ± 0.7 vs. 7.4 ± 0.4,A组 vs. C组, P < 0.05),肺部炎性反应减轻;A组对高氧肺损伤的治疗作用优于B组,P < 0.05?【结论】 两种剂量的骨髓MSC均可以减轻高氧肺损伤,高剂量组对高氧肺损伤的治疗效果更明显。     

VEGF基因转染骨髓间充质干细胞对大鼠心梗区血管新生的影响

目的：探讨转染血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因的骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）心肌移植及其对大鼠心梗区血管新生的影响。方法：以Wistar近交系大鼠建立心肌缺血模型,实验动物随机分为4组（n=12）。冠脉结扎2周后,联合组（A组）于心梗区移植转染VEGF基因的MSC,细胞组（B组）移植等量的MSC,基因组（c组）注射脂质体-pcDNA3.1-VEGF165DNA复合物,对照组（D组）注射等容积培养液,移植4周后通过Ⅷ因子染色检测血管新生,RT-PCR检测VEGF基因的体内表达。结果：Ⅷ因子染色示A组动物心梗区毛细血管密度明显高于B组和D组,较C组亦有一定程度的升高;RT—PCR显示VEGF基因的体内表达从高到低依次为A组、C组、B组、D组。结论：BMMSC有利于VEGF基因的稳定表达,可作为VEGF基因的良好细胞载体。     

RhoGTP酶对血吸虫病鼠肝窦毛细血管化的调控作用

目的探讨RhoGTP酶在肝窦内皮细胞转分化过程中的调控作用,及其对血吸虫病性鼠肝窦毛细血管化病变的影响和可能机制。方法采用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴建立血吸虫病性肝纤维化模型,于13周吡喹酮顿服杀虫,14周追加hydroxyfasudil。13周时正常对照组（A组,10只）与血吸虫病组（B组,6只）,16、19周和21周后（B组）、杀虫实验对照组（C组）、血吸虫病＋hydroxyfasudil组（D组）、杀虫＋hydroxyfasudil组（E组）各6只）剖腹取肝组织。分别作HE、Masson染色和透射电镜观察;免疫组化检测：p-膜联蛋白、CTGF、CD31、ColⅣ和LN;Western印迹检测：p-膜联蛋白、CTGF、RhoA、ColⅣ和LN蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测：CTGF、RhoA、ROCKⅡ mRNA水平。结果与A组相比,动态观察B组肝组织RhoA、ROCKⅡ及CTGF mRNA表达水平明显上升,p-膜联蛋白、CTGF、RhoA、ColⅣ和LN蛋白表达量也增高。给予干预措施后,与C组及其它组相比,E组CTGF mRNA表达于16周显著下调,同时显示CTGF、LN、ColⅣ蛋白水平也降低。与B组相比,D组、E组p-膜联蛋白降低,16周时最为显著,但D组于19周开始p-膜联蛋白表达量渐恢复到原水平,其中E组明显低于D组。肝窦的超微结构观察,于21周时C组分别与B、D组相比,浸润的炎性细胞明显减少,Disse腔内胶原纤维有所减少,但肝窦内皮细胞窗孔、肝窦内皮下基底膜差异无统计学意义。E组与C组比较肝细胞器形态明显恢复,可见窗孔,未见基底膜。结论RhoGTP酶在调控血吸虫病性鼠肝窦内皮细胞转分化过程中,通过上调CTGF和p-膜联蛋白发挥作用,抑制RhoGTP酶信号通路有可能为防治肝窦毛细血管化提供新的有效靶点。     

富血小板血浆诱导骨髓基质干细胞联合软骨支架治疗兔激素性股骨头坏死

目的 观察自体富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)诱导骨髓基质干细胞联合同种骨软骨支架治疗早期兔激素性股骨头坏死的疗效,探索早期股骨头坏死治疗的新方法.方法 采用含有抗凝剂的真空采血管从实验兔的耳中央动脉采取动脉血5 mL,再通过离心方法获取PRP,用16号骨髓穿刺针从实验兔自体股骨髓腔抽取骨髓5 mL,把抽取的骨髓进行密度梯度离心,获取兔骨髓基质干细胞,并进行细胞原代培养和成骨诱导.对已获取PRP和骨髓基质干细胞的实验兔进行激素性股骨头坏死造模,取同种股骨髁部骨软骨制作软骨支架,最后以制备的软骨支架为载体,将经过成骨诱导的骨髓基质干细胞移植到软骨支架上,形成细胞-支架复合物,用16号骨髓穿刺针对坏死的股骨头进行髓芯减压术,术中将细胞-支架复合物植入坏死的股骨头下.实验动物共分为4组,每组20只,A组为空白对照;B组仅进行髓芯减压;C组髓芯减压后植入经过成骨诱导培养的细胞;D组髓芯减压后植入细胞-支架复合物.实验后在第2、4、8周各组分别处死6、6、8只,每只实验兔的股骨头行大体标本及组织学检查.结果 D组治疗效果最显著,通过空骨陷窝计数发现D组与其他各组的差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨髓基质干细胞通过PRP的诱导向成骨细胞分化;软骨支架材料为骨髓基质干细胞向成骨细胞分化提供良好的空间结构,有利于其向成骨细胞分化;PRP和软骨支架材料联合应用可促进早期兔激素性股骨头坏死的修复.