不同浓度骨髓基质细胞修复大鼠牙周组织缺损的实验研究

目的探讨不同浓度骨髓基质细胞（BMSCs）对牙周组织再生的影响。方法将BMSCs以不同浓度（5×105,5×106,5×107mL-1）与胶原膜BME-10X复合培养后,复合物和空白胶原膜BME-10X分别植入SD大鼠牙周缺损部位,并覆盖膨体聚四氟乙烯膜（e-PTFE膜）,以缺损处只覆盖e-PTFE膜为对照组,4周后取材,H-E染色观察牙周组织再生情况。结果各实验组新生牙槽骨面积与对照组相比有明显增加（P〈0.05）,5×106,5×107mL-1组的新生牙槽骨量与5×105mL-1和空白BME-10X组比较,差别有统计学意义（P〈0.05）,而5×106,5×107,5×105mL-1与空白BME-10X组组间比较则无统计学意义（P〉0.05）;各组新生牙骨质面积之间差别无统计学意义（P〉0.05）。结论 BMSCs浓度可影响其体内成骨能力,高浓度BMSCs能有效促进牙周组织再生。     

骨髓基质干细胞与黄芪-壳聚糖/聚乳酸支架对犬牙周骨缺损再生的影响

目的:探讨以犬骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)为种子细胞、黄芪-壳聚糖/聚乳酸(astragalus polysaccharides-chitosan/polylactic acid,AP-C/PLA)为支架移植对水平型牙周骨缺损再生的影响。方法:分离并诱导培养自体犬BMSCs细胞,与AP-C/PLA、壳聚糖/聚乳酸(chitosan/polylac-ticacid,C/PLA)支架构建组织工程复合物随机植入10只犬双侧下颌第3,4前磨牙水平型牙周骨缺损处,共40个实验牙位,每组10个牙位,共设4组:空白对照组;AP-C/PLA 培养基对照组;C/PLA BMSCS材料对照组;AP-C/PLA BMSCS实验组。8周后分别收集牙周标本作组织检查和组织学测量。另取2只犬植入AP-C/PLA BMSCS,4周后作组织学检查。结果:体外诱导培养的BMSCs表达Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶活性(alka linephos phatase,ALP);4周实验组缺损部位均有不规则的新骨形成;第8周时,新骨逐渐成熟,各组均有不同程度的牙周再生:实验组牙槽骨修复高度和修复率[(2.90±0.41)mm,57.46%]明显高于空白对照组[(0.83±0.30)mm,15.68%]、培养基对照组[(1.46±0.55)mm,30.13%]、材料对照组[(2.67±0.26)mm,51.87%](P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论:黄芪多糖具有促进牙周缺损部位骨形成作用,以BMSCs为种子细胞、黄芪-壳聚糖/聚乳酸为支架的组织工程复合物修复水平型牙周骨缺损可获得部分的牙周组织再生。     

牙周韧带细胞植入量与牙周组织再生量关系的动物实验

目的 将不同数量牙周韧带细胞(PDLC)植入慢性实验性牙周缺损内,观察细胞植入数量与牙周组织再生量的关系,确定可促进牙周组织再生的有效细胞浓度和有效细胞数量.方法 人工构建4只Beagle犬慢性实验性牙周缺损模型(5 mm×5 mm×3 mm的牙槽骨U型缺损),分别将载有1×104、1×105和1×106 PDLC的胶原膜植入牙周缺损内.12周后行组织学观察,测量新生牙骨质(NC)长度百分率和新生牙槽骨(NB)面积百分率并行统计学分析.结果 各组均可见不同程度牙周组织再生,1×104 PDLC组和1×105 PDLC组与对照组比较差别无统计学意义,1×106PDLC组的NB面积百分率较对照组显著增高.结论 在实验性牙周缺损内植入PDLC,可促进牙周组织再生,其有效浓度为5×107 mL-1,有效数量为1×106 PDLC.     

比格犬骨髓基质细胞和牙周韧带成纤维细胞体外再生组织能力的比较

目的 通过比较比格犬牙周韧带成纤维细胞(PDLFs)和骨髓基质细胞(BMSCs)体外促进牙周相关组织再生潜能,为牙周组织的再生治疗提供依据.方法 通过体外ELISA、免疫细胞化学染色、Von Kossa染色分别比较BMSCs和PDLFs这两种细胞的碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)和胶原Ⅻ、形成的钙化结节,用实时...     

脱细胞真皮基质材料的研究及应用

本文对脱细胞真皮基质材料的制备方法、作用机制、免疫原性及临床应用做一综述。     

屏障膜联合自体骨髓基质细胞修复牙槽骨缺损的实验研究

目的 初步探讨屏障膜与骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)结合后在牙槽骨缺损修复领域的应用潜能.方法 ①细胞培养:采用犬来源的MSCs体外扩增培养,观察检测非诱导条件下MSCs的生长变化和成骨分化.②动物实验:拔除3只雄性杂种犬的双侧上下颌第一、二前磨牙,保留唇舌侧牙槽嵴,制备一近远中向15 mm×5 mm,冠根向8 mm的骨内缺损,随机分3组予以下处理:a.空白对照组:直接缝合牙龈;b.单纯膜组:骨缺损区上覆盖Bio-Gide(R)膜后缝合牙龈;c.膜 MSCs:缺损区植入自身MSCs-胶原膜复合物,细胞朝向骨面,覆盖Bio-Gide(R)膜后缝合牙龈,分别于术后4,8,12周随机取材,进行大体、X线和组织学检测.结果 形态学观察表明,MSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞样外观,未加入成骨诱导剂,细胞形态发生变化,钙沉积出现,碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)表达.3代内扩增的MSCs有成骨活性,原代细胞成骨活性优于传代后细胞.动物实验表明,两盖膜组较空白对照组在8周内有明显的骨形成,但胶原膜加用MSCs在促进骨形成上未见明显区别.结论 MSCs在体外培养能大量扩增,具有自然向成骨细胞分化的能力.使用Bio-Gide(R)胶原膜进行引导骨再生术(GBR)可促进成骨,并且与GBR联用MSCs差异不明显,提示两者联合应用还有待进一步研究.     

磷酸化壳聚糖膜引导牙周组织再生的实验研究

目的 评价磷酸化壳聚糖膜引导牙周组织再生的效果.方法 选择Beagle犬3条,采用丝线结扎及高糖饮食的方法 制备慢性牙周炎模型,随机将所制备的24颗牙周炎实验牙分为一个对照组和两个实验组.A实验组使用磷酸化壳聚糖膜,B实验组放置载药的磷酸化壳聚糖膜,C组仅给予翻瓣术作为对照组.术后12周,病理切片组织学观察,统计学分析相关数据.结果 动物实验发现新生牙槽骨、牙骨质和结缔组织附着分别为:A实验组:(1.22±0.15)mm、(1.00±0.15)mm、(1.72±0.17)mm,B实验组:(1.44±0.14) mm 、(1.20±0.19)mm、(2.27±0.18) mm,C空白对照组:(0.56±0.16)mm、(0.51±0.14)mm、(1.27±0.16)mm.A组和B组牙周组织修复再生的效果好于C组,B组好于A组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论磷酸化壳聚糖膜可以有效促进牙周组织再生与修复;载入抗菌药物后,效果更明显.     

制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的 采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)并进行组织学观察和微生物学检测,探讨这种方法的可行性和机制。方法 SD大鼠4只,分别麻醉后以8％硫化钠溶液脱去躯干部皮毛,常规消毒铺巾,切取大鼠背部全层皮肤制成厚约0.4mm的中厚皮,1mol／LNaCl溶液37℃浸泡48h分离表真皮,以0．25％胰蛋白酶 0.1％乙二酸二乙胺(EDTA)溶液37℃分别热消化60、70、80、90min脱去细胞成分,并进行冷冻干燥处理。ADM作光镜、电镜观察和微生物学检测并比较分析每只大鼠不同时间消化处理的ADM的差别和不同大鼠经相同处理得到的ADM的差别。结果消化时间不同的ADM均具有柔软、一定的柔韧性和伸展性、弹性好、弯曲不断裂的特点,组织学观察见表皮细胞均完全去除,但是消化90min,ADM的基底膜(Basement membrane complex,BMC)和胶原纤维的结构与排列有不同程度的破坏;消化60、70min的ADM虽然基底膜和胶原纤维的结构与排列正常存在,但脱细胞不完全;消化80min制备的ADM组织学检查基底膜完整连续．胶原纤维、弹力纤维结构及排列完整规则,没有细胞成分存在。不同SD大鼠经同样的处理所得的ADM一般形状和组织学没有明显差别。微生物学检测没有细菌生长。结论采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质的方法能达到既完全脱去细胞成分又使基底膜完整连续,胶原纤维和弹力纤维结构及排列正常的双重目标,ADM柔韧性好、不断裂,无细菌生长。     

壳聚糖膜促进牙周骨再生的实验研究

在３只杂种犬尖牙唇侧形成牙槽骨“开窗”缺损模型，观察壳聚糖膜对牙周骨再生的促进作用。结果表明，实验组新骨形成较对照组多，在８周实验期的组织标本内虽有膜残余，但引起的组织学反应符合可吸收生物材料的规律，表明壳聚糖膜有较好的生物相容性，对牙周骨再生有促进作用。     

hBMP-7基因转染大鼠骨髓基质细胞促进骨质疏松大鼠牙周组织再生的实验研究

目的 探讨人骨形成蛋白-7(hBMP-7)基因修饰的大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)在骨质疏松(PMO)大鼠牙周组织再生中的作用.方法 通过去除双侧卵巢构建SD大鼠绝经后骨质疏松(PMO)模型,在大鼠右侧下颌第一二磨牙颊侧制备牙周缺损模型.将转染有hBMP-7基因的假手术(SHAM)大鼠的BMSCs和去卵巢(OVX)大鼠...     

骨质疏松大鼠骨髓基质细胞膜片制备过程中纤维连接蛋白表达检测

目的 探讨骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(BMSC)膜片体外构建过程中纤维连接蛋白(FN)的表达情况。 方法 体外分离培养骨质疏松大鼠BMSC,采用含50 μg/mL维生素C的培养基连续培养构建细胞膜片,通过倒置显微镜和组织学染色对细胞膜片进行形态学观察; 利用免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测细胞外基质中FN在基因和蛋白水平的表达情况。 结果 采用含维生素C的培养基连续培养可获得含多层细胞及丰富胞外基质的BMSC细胞膜片。免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测结果显示所构建的细胞膜片高表达FN。 结论 以浓度为50 μg/mL的维生素C培养基连续培养可成功构建骨质疏松大鼠BMSC细胞膜片,膜片富含FN,有望应用于骨质疏松状态下牙槽骨缺损的治疗。     

骨髓间充质干细胞培养液对牙周组织再生的影响

目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs）培养液对牙周组织再生的影响。方法 原代培养SD大鼠BMMSCs,取细胞培养液（conditioned media, CM）。采用ELISA检测培养液里与成骨相关的IGF-1、VEGF、PDGF-BB、BMP-2的含量;利用BMMSCs培养液对牙周膜细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）进行培养后,RT-PCR法检测PDLCs矿化相关基因核心结合因子2（Runx2）、骨桥素（OPN）、骨钙素（OCN）的变化;Western印迹法检测Runx2、OPN、OCN蛋白的表达变化。将BMMSCs培养液及种子细胞分别制备成凝胶,在大鼠左下第一磨牙颊侧及根分叉处制备牙周缺损,放入制备好的凝胶。分别在术后第4、8周,处死大鼠,取出左侧下颌骨,进行Micro-CT扫描及组织学分析。结果 BMMSCs培养液中含有大量IGF-1和VEGF;RT-PCR和Western印迹法均能检测到牙周膜细胞OPN、OCN、Runx2的表达,且利用BMMSCs培养液培养的PDLCs表达高于常规培养的PDLCs(P＜0.05)。8周时,BMMSCs培养液凝胶组相比于对照组生成了更多的牙槽骨(P＜0.05)。结论 同等条件下,BMMSCs培养液比种子细胞能更好地修复缺失的牙周组织。     

NGF基因转染对牙周膜细胞成骨性的影响

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因转染对牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC)成骨性的影响.方法 运用基因转染技术将NGF基因通过质粒pcDNA3.1-NGF转入PDLC中,利用免疫组化及免疫印记法鉴定转染细胞的表达并观察对其成骨性的影响.结果 免疫细胞化学证实,牙周膜细胞有NGF蛋白表达.转染NGF后的PDLC的OC含量较未转染NGF组明显增高(P＜0.01).结论 转染NGF后的牙周膜成纤维细胞成骨性明显增强,为使牙周膜细胞成为牙周组织再生的种子细胞奠定基础.     

牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在二种玻璃离子水门汀上附着及增？…

目的 比较人类牙龈成纤维细胞（ＨＧＦ）与牙周韧带细胞（ＰＤＬＣ）在两种玻璃离子水门汀（ＧＩＣ）上的附着及增殖情况。方法 利用体外细胞培养技术及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测ＨＧＦ及ＰＤＬＣ在两种ＧＩＣ上的附着及ＤＮＡ合成。结果 ＨＧＦ与ＰＤＬＣ在培养板上的附着及ＤＮＡ合成差异无显著性（Ｐ〉０．０５）,但ＨＧＦ在ＧＩＣ上的附着及ＤＮＡ合成明显强于ＰＤＬＣ（Ｐ〈０．０５）。结论 Ｋｅｔａｃ Ｆｉｌ和Ｆｕｊｉ     

釉基质蛋白联合骨髓基质细胞促进牙周再生

目的探讨以骨髓基质细胞(BMSCs)为种子细胞,以釉基质蛋白(EMPs)为生长因子,利用组织工程技术修复牙周骨缺损的可行性。方法选取2只健康雄性恒河猴,体外分离髂骨BMSCs并传代培养,第3代细胞与Bio-oss胶原复合。动物双侧上、下后牙区,分别制备人工水平型牙周骨缺损模型,分为空白对照组、单纯材料组、细胞/材料组和细胞/材料/EMPs组,8周时取材进行组织学和Micro-CT观察分析。结果空白对照组为纤维结缔组织形成;单纯材料组可见牙槽骨新生;细胞/材料组可见牙周再生,但新生的牙骨质较少且不规则;细胞/材料/EMPs组新生牙槽骨较多,有规则且连续的牙骨质形成。结论以BMSCs为种子细胞联合EMPs诱导,能显著促进牙周组织再生。     

壳聚糖-胶原支架与人牙周膜细胞复合培养的实验研究

目的 对不同比例的壳聚糖-胶原（chi—col）进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法 将体外培养的人牙周膜细胞（PDLCs）接种于不同比例的chi—col上复合培养,采用细胞计数评价PDLCs在clli—col上的附着、生长情况,并通过MTF测试法和碱性磷酸酶（ALP）活性检测法研究chi—col浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果 人PDLCs在chi—col上形成良好贴附并增殖,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与对照组相比无统计学意义。结论 clli—col具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。     

EGF对人牙周膜细胞增生与ALP活性表达的影响

探讨表皮生长因子 (EGF)对人牙周膜细胞的增生与碱性磷酸酶 (ALP)活性表达的影响 ,为EGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。采用MTT和ALP活性检测法 ,观察不同质量浓度 ( 0 .1～ 1 0 μg/L)EGF第 2 4、4 8和 72h对体外培养的第 3代人牙周膜细胞 (PDLCs)的作用。与对照组比较 ,在 2 4～ 72h ,0 .1～ 5 μg/L的EGF可显著抑制PDLCs的增生 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1 0 μg/LEGF培养 4 8h对PDLCs有促进增生的作用 (P <0 .0 5 ) ,培养 72h有稳定增生的作用 (P >0 .0 5 )。 0 .1、0 .5 μg/LEGF可显著抑制PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1～ 1 0 μg/LEGF在 2 4h可显著增强PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,在培养 4 8和 72h有稳定ALP活性的作用 (P >0 .0 5 )。提示在一定的作用时间内 ,1 0 μg/LEGF对人PDLCs的生长和分化可同时具有促进作用。