高亲和力抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体制备及检测变异HBsAg方法的建立

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体,建立检测变异HBsAg的方法。方法用血源HB-sAg免疫BALB/c小鼠,制备可以识别变异HBsAg的抗-HBs单抗。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单抗mAb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与2种HBsAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力。对6份临床样品进行检测及序列分析,以证实方法的可靠性。结果经过筛选,得到1种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HB-sAg的单抗。检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂。结论制备的单抗可以用于ELISA检测变异HB-sAg,减少HBsAg变异株的漏检率。     

一组抗人髓系细胞分化抗原单克隆抗体的制备和初步应用

用新鲜白血病细胞或细胞株免疫BALB/c小鼠,经细胞融合技术制备得6株能稳定分泌抗人髓系细胞分化抗原单克隆抗体(以下简称单抗)的杂交瘤株.经鉴定该组单抗各自所识别的特异性抗原分子量为46～150kd.这些抗原在粒单系细胞膜上均有程度不等的表达,6种单抗中有5种具有结合兔补体的能力,其对白血病细胞株补体依赖的特异性细胞毒为73%～94%.两种单抗(Zh_(820),Zh_(114))对正常CFU-GM生长有抑制作用外,余4种单抗无明显影响.6种单抗均与FAB M_1～M_5型急性髓系白血病细胞有不同程度的阳性反应.     

抗AIB1-C单克隆抗体的制备及初步应用

目的:建立分泌抗AIB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:以纯化GST-AIB1-C蛋白为免疫原,免疫BAL b/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA筛选。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗AIB1-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经Western-blot和免疫细胞化学法鉴定,这些McAb特异性高,亲和力强。结论:成功研制出抗AIB1-C单克隆抗体,为双抗体夹心法ELISA试剂盒的研制奠定基础。     

酶标记抗人IgM单克隆抗体的制备及其初步鉴定与应用

用HRP以改良过碘酸钠法标记了6种国产抗人IgM单克隆抗体并进行了初步鉴定。选用高效价的HRP标记抗人IgM McAb,用ELISA间接夹心法检测病人血清中特异性IgM抗体,其特异性阳敏感性与采用HRP标记羊抗人μ链检测基本相同。     

应用酶联免疫吸附试验检测抗可溶性抗原单克隆抗体方法的探讨

本文以提纯冻存抗原和回收抗原包被40孔聚苯乙烯固相载体,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测抗可溶性抗原杂交瘤上清液。比较了不同的封闭剂及其浓度对实验结果的影响。实验结果表明,应用回收抗原和提纯的抗原检测结果一致,可代替首次抗原进行检测,并节约试剂的用量。同时证明20％小牛血清-吐温磷酸缓冲液(FCS-PBS-T)作为封闭剂检测,效果较好,明显优于用1％BSA-PBS-T作为封闭剂。     

抗人脑源性神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

OBJECTIVE: To prepare monoclonal antibodies (mAbs) against human brain-derived neurotrophic factor (BDNF). METHODS: BALB/C mice were immunized with purified BDNF protein in conjunction with acid-treated Salmonella (antigen:thallus=1:5), and mAbs were subsequently derived by hybridoma technique. RESULTS: Three hybridoma cell lines secreting anti-BDNF mAbs were obtained, designated as B1, B2 and 4D1 respectively and all categorized into IgG1 subtype. The titers of the mAbs in the ascitic fluid of the rats ranged from 1x10(6) to 1x10(5), and their relative affinities were B2>B1>4D1. CONCLUSION: mAbs against BDNF are successfully prepared, which can be instrumental for further study of the expression and distribution of BDNF in vivo, and the detection of BDNF produced by genetic engineering.     

快速ELISA法检测单克隆抗体

本文采用HRP-SPA快速ELISA法检测筛选葡萄球菌A蛋白单克隆抗体,使整个检测流程由常规法的5～6小时以上缩短为1小时。常规法与快速法OD值比较,用配对t检验结果:1O~(-1)组t=1.625 P>0.10;10~(-2)组t=1.345 P>0.20,均无显著性差异。证明快速法可替代常规法,具有快速、简便、特异、敏感等特点,是检测单克隆抗体较好的方法。     

乙型肝炎表面抗原亚型决定簇“a”单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本研究中用纯化乙型肝炎表面抗原(HBsAg)“adr”免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合。以ELISA和RIA法检测抗体,获得9孔抗-HBs阳性的杂交瘤,经过5次有限稀释,建立4株单克隆细胞。选其中一株SH_1D_9杂交瘤细胞进行体外连续传代,接种小鼠腹腔,抗-HBs滴度在组织培养上清液中为1∶10,000,小鼠腹水为1∶50,000。经特异性、稳定性鉴定,证明其抗-HBs对HBsAg具有持续的和良好的亲和性,正常人血清无交叉反应,经亚型及Ig亚类鉴定为抗-HBs“a”亚型决定簇,IgG型单克隆抗体,杂交瘤细胞染色体平均为104个。本文并对HBsAg免疫Balb/c小鼠采取的不同方案及建立单克隆抗体杂交瘤细胞株的实验方法加以讨论。     

抗淋球菌单克隆抗体的制备及其生物学特性研究

目的：研制抗淋球菌单克隆抗体,为建立新的淋病诊断方法奠定基础。方法：以淋球菌２９１０６－５株作抗原,按常规淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。并采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法研究单抗的特异性和敏感性。结果：建立了５个持续分泌抗淋球菌单抗的杂交瘤细胞株。他们所分泌的抗体效价可达１∶８１９２～１∶３２７８６。５株单抗均能与淋球菌发生特异性结合,但对脑膜炎球菌、葡萄球菌、大肠杆菌等１５种其他微生物不起反应。淋球菌的最小检测量为１×１０４个／ｍｌ。结论：本研究建立的单抗在检测淋球菌时有高度特异性和敏感性     

抗人脑源性神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗人脑源性神经营养因子(BDNF)单克隆抗体。方法利用BDNF纯品与酸处理后的沙门氏菌菌体(抗原∶菌体为1∶5)混合免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。结果获得3株抗BDNF的单克隆抗体,分别命名为B1、B2和4D1,mAb的Ig亚类均为IgG1。ELISA间接法测定腹水mAb效价为1×10-6~1×10-5,各单抗相对亲和力结果为B2>B1>4D1。结论成功研制出抗人BDNF单克隆抗体,为进一步研究BDNF在体内组织的表达及分布提供了一种工具,并为基因工程制备BDNF提供了检测方法。     

高尔基体蛋白73单克隆抗体的制备和鉴定

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定。方法用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选择GP73抗体阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养,通过腹水制备获得高特异性和高效价的GP73单克隆抗体(单抗)。结果成功筛选出11株能稳定分泌特异性GP73单抗的杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌特异性强、效价高的抗体。11株单抗均能结合天然状态下的GP73蛋白,与无关蛋白均无交叉反应,提示有较强的特异性。应用筛选出的配对GP73单抗可检测出浓度为1ng/ml的GP73基因工程表达抗原。结论制备的GP73杂交瘤细胞株分泌的抗体对GP73蛋白具有特异亲和性,并且有较高效价,为GP73蛋白诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

分泌抗SPA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

以 SPA 作基础免疫 BALB/C 小鼠后,融合前三天直接脾内免疫,取脾细胞与 SP_2/O 瘤细胞常规融合,融合率100%;以快速 ELISA 法检测抗体,阳性率60%。5次有限稀释法克隆化后获得7株杂交瘤细胞,作中和抑制试验,证实为 SPA 特异性抗体。经鉴定属 IgG2a 及 IgG2b 亚类。电镜观察细胞融合,发现其细胞内含逆转录病毒。杂交瘤细胞液氮保存与体外连续传代一年,仍保持原有各种特性。     

应用人—鼠杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌人单克隆抗体的初步研究

The fusion of peripheral B lymphocytes from human immunized with P. aeruginosa polyvalent vaccine and mouse myeloma cell line SP2/0 was successfully performed. The rate of fusion was 74%(71/96) and the positive rate of antibody was 19.7%. Two hybridoma cell lines (A3 and F8) secreting McAb against P. aeruginosa were obtained after three times cloning by limiting dilution. The human chromosomes together with mouse chromosomes were discovered in karyotype assay of the hybrids. A3 and F8McAbs were human IgG by class determination. These MrcAbs could recognize 43 kd and 36 kd MW specific components of P. aeruginosa antigen by enzyme linked immuno-transfer blot technique.     

抗HBsAg单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定

目的:制备分泌抗HBV S蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定其特性,为建立快速诊断HBV感染的方法奠定基础.方法:以重组乙肝疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株,利用间接ELISA技术和Western blot进行单抗特异性的鉴定,同时采用间接ELISA方法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力.结果:获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞4D2,其抗体亚类为IgG1型,腹水效价为1:10(6),相对亲和力在10(5)以上.结论:成功地制备出抗HBV S蛋白的单克隆抗体,为建立快速特异检测HBV感染的实验方法提供了有力的工具.     

抗狂犬病疫苗单克隆抗体的制备和初步鉴定

用狂犬病疫苗为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/O融合,经过培养、克隆、ELISA鉴定,筛出3株分泌抗狂犬病疫苗单克隆抗体细胞株。双扩散结果证明:3株细胞均分泌IgG1。     

鼠抗人TCR/CD3单克隆抗体的制备及其初步应用

目的应用B淋巴细胞杂交瘤技术,制备鼠抗人CD3单克隆抗体,并用于T淋巴细胞亚类检测。方法以本室纯化的CD3蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得1株抗人CD3单克隆抗体。经间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养腹水的抗体效价。结合SDS-PAGE实验考察单克隆抗体对CD3促T淋巴细胞增殖活性的作用。结果杂交瘤细胞培养腹水的抗体含量为20 mg/mL,效价为10-7,并对T淋巴细胞有促增殖活性,检测正常人外周血阳性T细胞百分率为（73±7）%。结论制备的抗人CD3单克隆抗体具备较高的纯度和活性,可用于T细胞亚类的检测。     

人OX40单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定

目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6～8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.