盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

纤维粘连蛋白与流体剪切力对体外培养的牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：在体外利用流体剪切力模拟咬合创伤，对牙周膜成纤维细胞（HPDLF）给予不同浓度的纤维粘连蛋白（FN）处理．在不同时段测量HPDLF的COX-2mRNA的表达量．以期模拟HPDLF在口腔存在咬合创伤的情况下FN对其生物学行为的影响。方法：收集因正畸矫治需要拔除的健康年轻恒牙，以第3代细胞作为研究对象。样本分为A、B2组，A组为利用水平摇床施加剪切力培养，转速为35r／min；B组为静态培养。A、B2组中分别分为加入FN0μg／ml（对照）、20μg／ml、40μg／ml、60μg／ml等4组，每组4孔。无血清培养6h、12h。采用SPSS13．0软件包对结果进行配对t检验。结果：HPDLF原代培养，24h后80％组织块贴壁。7～10d有细胞从组织块周围游出。14d左右长满培养瓶。免疫组化染色显示抗波丝蛋白阳性，抗角蛋白阴性。RT-PCR结果显示，A组6h后COX-2表达即有体现：12h后，相同FN用量的样本的COX-2表达量较加力6h时高。且表达量随着FN用量的增加而减少。B组中，各样本电泳结果为阴性。光密度扫描分析，配对t检验结果t=13．45，P〈0．01。结论：流体剪切力可以引起HPDLF的炎性反应。人血浆FN可以减少HPDLF的COX-2mRNA表达，呈时间、剂量依赖性。     

高糖状态对脂多糖诱导人牙龈上皮细胞表达炎症因子的影响

目的：研究高糖状态对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人牙龈上皮细胞（humangingivalepithelial cells,HGECs）表达炎症因子的影响。方法原代培养HGECs,取第3代细胞分别在含5．5 mmol／L D－葡萄糖（对照组）、含25 mmol／L D－葡萄糖（高糖组）培养基中培养48 h后,加入0μg／mL、1μg／mL、5μg／mL和10μg／mL的LPS,2 h、4 h和8 h时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测炎症因子白细胞介素－6（interleukin-6, IL-6）、白细胞介素－8（interleukin-8,IL-8）、白细胞介素－1β（interleukin-1,IL-1β）的mRNA表达,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-8的表达。结果在5μg／mL LPS 刺激8 h 后,高糖组和对照组 HGECs 炎症因子转录水平 IL-6分别为13．20±0．84和8．85±0．53（t＝7．60,P＝0．002）,IL-8分别为14．88±1．54和8．12±0．46（t＝7．281,P＝0．002）, IL-1β分别为1．69±0．19和1．27±0．11（t＝3．348,P＝0．029）,两组比较差异均具有统计学意义（P＜0．05）;两组细胞培养上清液中IL-8的表达分别为（134．0±10．8） pg／mL和（103．0±11．0） pg／mL,差异具有统计学意义（t＝3．480,P＝0．025）。结论高糖状态可增强LPS诱导HGECs炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达。     

白介素10对伴放线放线杆菌内毒素诱导兔肺巨噬细胞凋亡的影响

目的：探讨白介素10（IL-10）对伴放线放线杆菌内毒素（Aa—LPS）体外诱导兔肺巨噬细胞凋亡作用的影响。方法：经兔气管肺泡灌洗获得肺泡巨噬细胞,随机分为空白对照组、Aa—LPS组、Aa—LPS＋IL-10组。按实验分组加入Aa—LPS（1汕g／mL）、IL-lo（o．1p．g／mL）,24h后裂解细胞,荧光定量PCR法检测促凋亡基因bax、p53和caspase-3的表达。结果：Aa—LPS组bax、caspase-3的表达较空白对照组明显升高（P〈0．05）,p53的表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Aa—LPS＋IL-10组bax、p53、caspase．3的表达较Aa—LPS组降低（P〈0．05）。结论：Aa—LPS体外对肺巨噬细胞有促凋亡作用,IL-10可抑制Aa—LPS的促凋亡作用,其机制可能与细胞凋亡的线粒体途径有关。     

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目的系统评价盐酸米诺环素软膏与碘甘油在治疗急性局限型智齿冠周炎中的临床疗效。方法采用计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、万方等数据库,纳入盐酸米诺环素软膏与碘甘油治疗急性局限型智齿冠周炎的临床随机对照研究（RCT）,评价纳入研究的方法学质量后采用RevMan5．2软件进行Meta分析。结果共纳入13个研究,共1596例患者,其中盐酸米诺环素软膏组818例,碘甘油组778例。Meta分析结果显示,盐酸米诺环素软膏组的有效率显著高于碘甘油组（Re=1．25,95％CI：1．13～1．39,P〈0．0001）;第4天与第5天复诊时,盐酸米诺环素软膏组的有效率均显著高于碘甘油组（RR=1．22,95％CI：1．04～1．43,P=0．02;RR=1．30,95％CI：1．21～1.39,P〈0．00001）。结论本研究提示盐酸米诺环素软膏治疗急性局限型智齿冠周炎临床疗效优于碘甘油。     

盐酸米诺环素软膏治疗牙周炎的临床疗效分析

目的：观察盐酸米诺环素软膏局部治疗牙周炎的临床效果。方法：随机将52名牙周炎病人共156颗患牙分成试验组和对照组，观察用药前、后的临床症状和菌斑指数、探诊出血、牙周袋探诊深度、附着水平的变化。结果：两组基线时的牙周各项指数的平均值均无差异（P＞0．05);晦4周、7周均有显著性差异（P＜0．01）。结论：盐酸米诺环素软膏是治疗牙周炎有效、安全、简便的局部治疗药物。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和骨保护素mRNA表达的影响

目的：研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）增殖和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）mRNA表达的影响。方法：体外培养人PDLCs，用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷（0．001、0．01、0、1μg／mL）、不同时间（24、48、72、96h）作用下人PDLCs的增殖水平；RT-PCR检测OPG mRNA的表达。结果：淫羊藿苷（0、001-0．1μg／mL）对人PDLCs增殖和OPG mRNA表达具有促进作用（P〈0．01），0．01μg／mL浓度作用最明显。结论：淫羊藿苷能够促进人PDLCs增殖和OPG mRNA表达。     

盐酸米诺环素软膏与丁硼乳膏治疗急性局限型智齿冠周炎的临床观察

目的：比较盐酸米诺环素软膏（minocycline hydrochloride ointment，商品名为派丽奥）与丁硼乳膏（商品名雅皓乳膏）治疗急性局限型智齿冠周炎的疗效，并以碘甘油治疗作对照。方法：选取急性局限型智齿冠周炎276例．分为3组，局部用3％过氧化氢和生理盐水交替冲洗后擦干，采用以下方式局部给药：A组注入适量盐酸米诺环素仅1次：B组将少量丁硼乳膏停留患区5min后漱13，3次／d，共3d；C组局部置入2％碘甘油，1次／d，共3d。所有治疗组均未全身用药，第4天观察疗效。结果：A、B组症状均有明显改善，总有效率分别为94．68％和87．78％．两组间疗效无显著性差异（P〉0．05）。但A、B组的疗效均好于C组（63．04％），P〈0．01。结论：盐酸米诺环素与丁硼乳膏治疗急性局限型智齿冠周炎均有较好疗效，其效果明显优于对照组。     

富血小板血浆和米诺环素对牙周膜成纤维细胞附着增殖的影响

目的：研究富血小板血浆（platelet-richplasma，PRP）和米诺环素对牙周膜成纤维细胞（periodontalliga-ment fibroblast，PDLFs）在病变牙骨质上附着增殖的影响。方法采用组织块法培养原代PDLFs，二步密度梯度离心法制备PRP，取因重度牙周病拔除的患牙，制取牙根片40片，随机分为4组。 A组单独使用PRP；B组单独使用米诺环素；C组联合使用PRP和米诺环素；D组为对照组。采用四唑化合物—吩嗪硫酸甲酯比色法检测病变牙根片上的细胞活性，采用SPSS l1．5统计软件分析结果。结果附着实验A、B、C、D组的光密度值分别为0．4420±0．0165、0．4983±0．0176、0．5443±0．0094和0．3857±0．0047。增殖实验A、B、C、D组的光密度值分别为0．4767±0．0049、0．6533±0．0022、0．6947±0．0011和0．4023±0．0092。 PRP与米诺环素单独作用均显著促进PDLFs在牙骨质上的附着和增殖，而且两者具有协同作用。结论 PRP及米诺环素均对PDLFs在病变牙骨质上的附着和增殖有促进作用，且两者有协同作用。     

雌激素与机械张应力对碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的研究雌激素与机械张应力共同作用对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)增殖分化相关因子碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达水平的影响。方法体外培养HPDLF,分为两组。实验组使用10-7mol/L雌激素干预后,使用4点弯曲加力装置对HP-DLF进行张应力加载;对照组不使用雌激素干预,只进行机械张应力加载。采用实时多聚酶链反应、琼脂糖凝胶电泳和紫外线分析检测HPDLF加力时3、6、12 h时bFGF基因的表达。结果加力0、3、6、12 h时,对照组bF-GFmRNA表达量光密度值分别为1.000,3.245±0.261,4.498±0.431,7.969±0.597,实验组bFGFmRNA表达量光密度值分别为16.736±1.003,22.542±1.768,27.923±1.914,31.556±2.142。雌激素干预与张应力加载共同作用与单纯受到机械张应力作用相比,bFGF的mRNA表达量明显上调(P<0.05)。结论雌激素对机械张应力状态下的牙周膜成纤维细胞增殖分化相关因子bFGF有较强调控作用,表现为bFGF的mRNA表达量显著上升。     

釉基质衍生物对脂多糖作用下牙周膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的研究釉基质衍生物（enamel matrix derivatives,EMD）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS）作用下的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs）增殖和凋亡的影响。方法从正畸治疗需拔除的前磨牙中,分离培养人hPDLFs,传至第4代;实验组培养液中分别加入100μ/mLEMD、10μg／,mL Pg-LPS或者100μ/mL EMD＋10 μg／mL Pg-LPS,对照组不加入刺激物;以四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethy1-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl．2H-tetrazoliumbromide,MTT]法检测hPDLFs的增殖,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法分析细胞凋亡。结果原代hPDLFs生长良好,加入刺激后第3天时,第4代hPDLFs的Mrrr值由高至低分别是：EMD组、对照组、EMD＋LPS组、LPS组。刺激48h后,LPS组凋亡率（12．10％±2．80％）大于EMD＋LPS组（8．07％±2．04％）、EMD组（3．68％±1．73％）和对照组（3．87％±1．27％）（P〈0．05）。结论EMD能减弱Pg-LPS对hPDLFs增殖的影响,并且降低Pg-LPS所导致的hPDLFs凋亡,可能是其促进牙周组织再生的重要机制。     

柚皮苷对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响

目的探讨柚皮苷(naringin,NRG)对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响。方法以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(100μg/mL)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)损伤,采用MTT法检测NRG对LPS诱导HPDLF损伤的保护作用,利用ELISA法和Western blotting法检测NRG对LPS诱导的HPDLF中白介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-1β等炎症因子蛋白表达的影响,同时利用Real-time PCR方法检测NRG对LPS诱导的HPDLF组IL-6、IL-8、IL-1β等炎症因子基因表达的影响。结果经LPS(100μg/mL)刺激后,HPDLF增殖受到抑制,与CON组比较,LPS组细胞存活率显著降低,细胞周期进程受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NRG(40,20,10μg/mL)可显著抑制LPS诱导的HPDLF损伤,并可降低细胞内炎症因子表达;与LSP组比较,LPS+NRG 40μg/mL组、LPS+NRG 20μg/mL组、LPS+NRG 10μg/mL组HPDLF存活率显著提升,细胞周期进程加快,抑制IL-6、IL-8、IL-1β蛋白及基因表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论NRG对LPS诱导的HPDLF损伤具有保护作用,并可通过抑制LPS诱导的HPDLF中IL-6、IL-8、IL-1β的蛋白及基因表达水平,促进HPDLF增殖。     

中药补肾固齿丸对牙周炎治疗作用机制的探讨

目的研究补肾固齿丸水提液对LPS影响人牙周膜成纤维细胞生长及分泌IL-1β作用的调节能力,初步探讨补肾固齿丸的治病作用机理,以期为更好的利用中药治疗牙周病提供理论依据。方法人牙周膜成纤维细胞分别与脂多糖LPS 50μg／ml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液12．5μg／ml、LPS 50μml＋补肾固齿丸水提液25μml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液50μg／ml共同孵育6、72h,于6h收集细胞培养上清液,应用ELISA法检测细胞IL-1β分泌水平;72h应用MTT法检测存活细胞数量,评价细胞生长增殖情况。结果LPS可显著抑制牙周膜成纤维细胞生长（OD=0．198±0．097）,并刺激细胞IL-1β分泌水平显著升高（1．122±0．370pg／ml）（P〈0．01）;而补肾固齿丸水提液25μg／ml和50μg／ml则可显著抑制LPS的细胞毒性作用（OD=0．354±0．055,OD=0．368±0．029）、细胞IL-1β泌量也显著降低（0．685±0．168pg／ml,0．525±0．143pg／ml）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论补肾固齿丸有效治疗牙周病的作用机理可能与降低细菌对宿主细胞生长抑制的毒性作用以及调节宿主免疫反应作用有关。     

脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎性因子表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）对人牙周膜干细胞（HPDLSCs）增殖及炎性因子表达的影响。方法 培养和鉴定HPDLSCs。实验分为3组,A组采用含有10 μg•mL-1 LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs,B组采用含有10 ng•mL-1 LPS刺激单核细胞的上清液培养HPDLSCs,C组采用α-MEM培养液培养HPDLSCs。MTT法检测HPDLSCs的增殖能力,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HPDLSCs白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达。结果 HPDLSCs具有克隆形成能力和骨向及脂向分化能力。与C组相比,A组和B组均抑制HPDLSCs的增殖,且B组比A组的抑制作用更明显（P<0.05）;A组和B组IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达均增加,且B组比A组增加更明显（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌可通过LPS直接或间接地一方面抑制HPDLSCs的增殖,另一方面增加炎性因子的表达,从而加重牙周炎症组织的损伤,延缓牙周组织的自我修复。     

氧化苦参碱对内毒素作用下人牙周膜细胞白细胞介素-6和白细胞介素-1β mRNA表达的影响

目的研究氧化苦参碱对内毒素（LPS）作用下人牙周膜细胞（PDLC）白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达的影响,探讨氧化苦参碱抑制LPS所造成的牙周炎症反应的机制。方法体外分离及培养PDLC,实验组分别为LPS和不同质量浓度的氧化苦参碱溶液的不同组合,对照组为仅含1% FBS的DMEM培养液。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-6和IL-1β mRNA的水平。结果质量浓度为25 μg·mL-1 LPS能够有效地增强IL-6和IL-1β mRNA水平的表达,实验组高于对照组,差异有统计学意义,加入氧化苦参碱进行干预后实验组与对照组IL-6和IL-1β mRNA的表达无显著差异。结论氧化苦参碱可抑制LPS所造成的PDLC IL-6和IL-1β mRNA表达。     

依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究

目的　观察依那西普（Etanercept）对牙龈卟啉菌内毒素（lipopolysaccharide,LPS)作用下体外培养的人牙周膜细胞(HPDLCs)的增殖能力的影响。方法　体外原代培养人牙周膜细胞,经免疫细胞化学鉴定,加入LPS和1 μg/ml Etanercept+LPS,LPS浓度分别为10、50、100、200、300 μg/ml检测（吸光度）A值。采用MTT法测定细胞增殖能力。结果　 人牙周膜细胞原代细胞生长状态良好。第3代细胞进行鉴定,Vimentin染色呈阳性,Ck(pan)染色呈阴性。MTT法检测加入梯度浓度的LPS 24 h后,HPDLCs增殖率随着LPS浓度的增加,对HPDLCs的增殖抑制逐渐增强,200 μg/ml LPS能最大程度抑制HPDLCS的增殖,抑制率为46.21%(P<0.01)。Etanercept + LPS组对HPDLCs细胞作用相对增殖率与LPS组比较（P＜0.01）,能明显抑制LPS对HPDLCs的抑制作用。结论　TNF-α抑制剂Etanercept能明显抑制牙周膜细胞在内毒素刺激下的死亡。     

不同牙周状态正畸力诱导IL-23在牙周组织表达的实验研究

目的 研究不同牙周状态正畸力作用下IL-23在牙周组织的表达变化,为牙周病正畸治疗提供参考.方法 建立大鼠牙周炎静止期、牙周炎活动期模型,以50克力移动牙周正常组、牙周炎静止期组、牙周炎活动期组的上颌磨牙.分别于牙齿移动的第3和7天处死大鼠.采用免疫组化和实时荧光定量PCR定性定量分析各组IL-23在牙周组织的表达.结果 正常牙周移动组IL-23mRNA的表达较正常对照组差异无显著性（P＞0.05）.静止期牙齿移动组IL-23mRNA在牙周组织的表达较正常牙周移动组增高,差异有显著性（P＜0.05）;较活动期移动组显著减小（P＜0.01）.牙周炎活动期牙齿移动组IL-23mRNA的表达较其他各组均高,且差异有高度显著性（P＜0.01）.结论 IL-23参与调节牙周炎正畸牙齿移动.牙周炎静止期正畸治疗不会导致IL-23的过度高表达,但要密切控制牙周易感因素.     

低浓度牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激骨唾液酸蛋白的基因表达和转录

目的研究低浓度牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）对成骨细胞系（ROS17/2.8）中骨唾液酸蛋白（Bonesialoprotein,BSP）基因表达和转录的调节作用,以及细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）转导途径阻断剂（U0126）对此调节作用的影响。方法0.01mg/LP.g·LPS作用ROS17/2.8细胞0h、3h、6h和12h后,用Northern杂交观察BSP和骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）mRNA的表达;再将ROS17/2.8细胞随机分为四组：空白对照组、LPS（0.01mg/LP.g·LPS）组、U0126（5μmol/L）组、U0126＋LPS组（U0126预刺激细胞30min后,U0126与P.g·LPS共同作用）,各组持续作用12h后,用瞬时转染法分析BSP基因启动子的转录活性。结果0.01mg/LP.g·LPS作用ROS17/2.8细胞12小时后BSP和OPN的mRNA杂交条带增强;0.01mg/LP.g·LPS使BSP基因启动子（pLUC3）转录活性值与空白载体活性值的比值升高1.582（F=5.734,P〈0.05）,U0126使其降低2.693（F=11.500,P〈0.01）,U0126使LPS对比值的升高变化降低2.242（F=6.204,P〈0.05）。结论低浓度（0.01mg/L）P.g·LPS增强ROS17/2.8细胞BSP基因表达和转录,而且其对BSP基因转录活性的上调作用是经由ERK1/2信号转导路径介导的。