黄荆子乙酸乙酯提取物对HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制人急性髓性白血病HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。方法:体外培养HL-60细胞和人外周血单核细胞(PBMC),MTT法测定细胞增殖;软琼脂培养集落形成法检测细胞生长;PI染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果:EVn-50对HL-60细胞增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性;而对PBMC的增殖活性影响小。EVn-50对HL-60细胞集落形成有抑制效应,呈浓度依赖性。EVn-50有效诱导HL-60细胞凋亡。结论:EVn-50具有抑制HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。     

人参三醇对K562白血病细胞的抑制及增加化疗药敏感性的研究

目的 :探讨人参三醇 (GPT)对 K5 62白血病细胞生长的影响 ,及对化疗药敏感性的协同作用。方法 :在液体培养、半固体集落形成培养中 ,以不同浓度的 GPT处理 K5 62细胞 2 4、48、72小时 ,用细胞生长曲线和集落形成率来观察 GPT的增殖和抑制效应 ;用 MTT法检测 GPT对化疗药物的协同性。结果 :低浓度 (1 0μg/ml、2 0μg/ml)的 GPT能显著地刺激 K5 62细胞增殖 ,中浓度(5 0μg/ml)时使细胞增殖受抑 ,并呈时间—效应依赖性。 GPT分别与化疗药物高三尖杉酯硷(HHr)、阿糖胞苷 (Ara-c)联合应用能增加对 K5 62细胞的杀伤作用 ,抑制率为 (88.4± 2 .7) %和(73 .8± 8.8) % ,明显高于对照组的 (4 9.3± 9.3 ) %和 (3 0 .1± 7.5 ) % (P<0 .0 1 )。对低敏的足叶乙甙 (Vp-1 6)组也能使抑制率从原先的 <1 0 %提高到 >5 0 %。结论 :不同剂量的 GPT对 K5 62细胞具有刺激增殖和抑制生长的双相效应 ,并能增强 K5 62细胞对化疗药物的敏感性 ,是人参皂甙内抑制白血病细胞的有效成分 ,可为临床应用提供依据。     

EGCG抑制HL-60细胞增殖作用的机制研究

目的探讨EGCG抑制白血病HL-60细胞增殖的作用机制。方法采用软琼脂集落形成实验和绘制细胞生长曲线,检测EGCG对HL-60细胞增殖的影响;FCM及DNA凝胶电泳法检测EGCG处理HL-60细胞后的凋亡情况;实时荧光定量RT-PCR和Wester blotting检测AKT1的表达。结果细胞生长曲线和软琼脂集落形成实验结果均显示EGCG呈浓度依赖性抑制HL-60细胞的增殖（P〈0.05）;FCM及DNA凝胶电泳法结果显示EGCG呈浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡（P〈0.05）。实时荧光定量RT-PCR和Wester blotting结果显示EGCG浓度升高,HL-60细胞中AKT1的表达降低。结论 EGCG可能通过下调AKT1的表达,促进细胞凋亡,发挥其对HL-60细胞增殖的抑制作用。     

人参皂甙对白血病耐药细胞化疗药物敏感性的研究

目的 :通过观察人参皂甙 ( GS)协同化疗药物对 K5 62 /VCR、K5 62 /Adr白血病耐药细胞株的抑制作用 ,探讨 GS是否能提高肿瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性。方法 :选用 K5 62 /VCR、K5 62 /Adr两耐药细胞株作为靶细胞 ,液体培养和半固体集落培养法观察不同浓度的 GS对耐药细胞增殖的影响 ,及 GS协同化疗药物对 K5 62 /VCR、K5 62 /Adr耐药细胞集落生成的抑制作用。结果 :1单用 GS作液体培养 MTT分析法和集落培养法均显示低、中等浓度的 GS5～ 5 0 μg/ml对细胞增殖无明显影响 ,但当浓度升高至 75 μg/ml时 ,则抑制细胞增殖和集落形成 ( P<0 .0 1 )。2当 GS与化疗药物联合应用时 ,即使化疗药物浓度 ( 1 μg/ml)不变 ,K5 62 /VCR、K5 62 /Adr耐药细胞对化疗药物的敏感性与 GS呈剂量依赖关系。即 GS浓度达到 5 0μg/ml时 ,化疗药物对细胞的抑制作用明显 ( P<0 .0 1 ) ,且随着 GS浓度的升高 ,抑制作用逐渐增强。结论 :GS通过提高耐药细胞对化疗药物的敏感性而与化疗药物起协同作用 ,同时在一定浓度下 ,能直接地抑制白血病耐药细胞增殖     

白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖抑制作用

目的：观察白藜芦醇（resveratrol，Res）体外单独及联合阿糖胞苷（Ara-c）对白血病HL-60细胞的抑制作用。方法：在体外培养条件下观察不同浓度Res、Ara-c作用48小时后分别对HL-60细胞增殖的影响。然后根据以上抑制结果，选择对HL-60细胞抑制率15％～30％的Ara-c药物浓度，再与不同浓度的Res联合用药。在联合药物处理HL-60细胞48小时后，同样用MTT法检测联合用药对细胞增殖抑制作用。结果：Res、Ara-c体外单独用药均能显著抑制HL-60细胞的生长增殖，Res联合Ara-c（2．5μg／m1）后，对HL-60细胞的增殖抑制作用显著提高，与单独用药组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：Res体外能显著抑制人HL-60细胞的增殖，Res联合Ara-c能显著提高对HL-60细胞的增殖抑制作用。     

人参皂苷及其三醇对白血病细胞增殖抑制、凋亡和药敏的研究

目的:观察人参总皂苷(GS)及其三醇(GPT)对白血病祖细胞增殖抑制、诱导凋亡及化疗药物的协同作用，寻找GS中抗白血病的有效成分。方法:从人参提取GS，再分离出有效成分GPT；用白血病原代细胞与细胞株进行半固体祖细胞集落培养和液体培养，经GS或GPT处理后，采用MTT试验、流式细胞术、Annexin V试验和DNA片段电泳分析及药敏试验等方法检测。结果:(1)GS对白血病祖细胞的促进和抑制增殖的作用呈剂量依赖性，即小剂量刺激正常和白血病祖细胞增殖，中等剂量仍促进正常集落增加，但抑制白血病集落生长。(2)GS与化疗药高三尖杉酯碱、阿糖胞苷、阿霉素和足叶乙苷具有协同增敏作用，小剂量就能增强化疗药物的杀伤作用1．84—2．23倍，并使部分药敏试验由原先的不敏感转为敏感。(3)50mg/L的GS使化疗药物对K562／VCR、K562/／Adr两耐药细胞株的抑制作用明显，且随着GS浓度的升高而逐渐增强。(4)50mg/L的GS作用于HL-60细胞3d能够诱导其凋亡，Annexin V阳性细胞率明显增高，并出现典型的DNA梯形条带。(5)GPT 20mg/L低浓度能够显著地刺激K562细胞增殖，中浓度50mg／L时则抑制细胞增殖。GPT分别与化疗药物高三尖杉酯碱、阿糖胞苷联合应用时，对K562细胞的抑制作用明显增强。结论：不同剂量的GS及GPT对白血病祖细胞具有刺激增殖与抑制生长的双向效应，即小剂量时通过刺激增殖而增强化疗药物的杀伤作用，中等剂量则诱导白血病细胞凋亡。提示GPT是人参皂苷内抗白血病的有效成分，可为临床用作白血病的辅助治疗提供依据。     

小剂量阿糖胞苷与重组人白血病抑制因子联合诱导HL-60细胞凋亡的作用

白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一类具有广泛生物学活性的细胞因子,对胚胎发育、神经细胞再生、关节软骨代谢、肿瘤细胞增殖等方面均有影响[1-3].阿糖胞苷(Cytosinearabinoside,Ara-c)是治疗白血病的重要药物.有研究认为,化疗药物是否能够有效地诱导白血病细胞凋亡是判断急性髓系白血病(AML)患者化疗敏感性的重要指标[4].资料显示,小剂量Ara-c及rh-LIF单用均可诱导细胞凋亡[5,6].最近,小剂量Ara-c与其它药物联合治疗白血病获得较好疗效[7,8].本文报道rh-LIF和Ara-c联合诱导HL-60凋亡的作用.     

尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡Caspase信号途径的影响

目的探讨尼莫地平(NMDP)对阿糖胞苷(Ara-c)诱导HL-60细胞凋亡机制的影响。方法取对数生长期HL-60细胞,分为未加任何药物的HL-60细胞组(对照组)、NMDP(0.001～0.100g/L)组、Ara-c(0.005～0.500g/L)组、NMDP+Ara-c组,各组HL-60细胞均处理24h。采用ATP化学发光法检测细胞增殖抑制率,AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡,化学发光法检测各组细胞Caspase 8活性。结果与对照组比较,不同浓度NMDP组及Ara-c组细胞增殖抑制率差异均有显著性(F=12 231.563、6 404.210,P<0.01);当Ara-c浓度为0.010g/L、NMDP浓度为0.050g/L时,细胞增殖抑制率最高,差异有显著性(F=916.836,P<0.01)。当Ara-c浓度为0.010g/L、NMDP浓度为0.050g/L时,Ara-c组及NMDP+Ara-c组细胞凋亡率明显高于对照组、NMDP组,以NMDP+Ara-c组凋亡率为最高(F=148.02,P<0.01)。与对照组及NMDP组相比,Ara-c组与NMDP+Ara-c组Caspase 8活性均明显升高,以NMDP+Ara-c组增高最显著(F=732.84,P<0.01)。结论 NMDP能增强Ara-c诱导的HL-60细胞凋亡,其机制可能与增强Caspase 8活性有关。     

益气养阴方对小鼠白血病祖细胞及化疗药物敏感性的影响

通过测定 L_(7212)小鼠白血病祖细胞(CFU—L)集落形成率及在化疗药体外综合药敏实验基础上加用一定量中药,发现益气养阴方能降低 CFU—L 集落形成率和提高体外化疗药物的敏感性。提示此方能抑制白血病细胞和协同化疗药杀伤白血病细胞。清热解毒方也有抑制白血病细胞的作用。     

阿司匹林诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:研究非甾体类抗炎药阿司匹林(ASA)对体外诱导人急性白血病细胞的凋亡作用及其相关机制.方法:采用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,通过光镜、流式细胞仪(FCM)、原位末端标记法(TUNEL)观测ASA诱导HL-60细胞凋亡,半定量RT-PCR检测基因表达.结果:浓度为2.5～10mmol/L的ASA能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;ASA与阿糖胞苷(Ara-c)抗肿瘤作用具有相加效应;ASA可下调HL-60细胞c-myc mRNA水平表达.结论:一定浓度ASA在体外有抑制急性白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与c-myc基因下调有关.     

白血病细胞在无血清体系中增生能力的探讨

采用无血清甲基纤维素半固体培养方法,对白血病细胞系和原代白血病细胞进行一次集落培养,将形成的集落细胞重新悬浮,进行二次集落培养、计数。结果白血病细胞系的二次植入效率为３１．３０％,原代髓系白血病细胞的二次植入效率为２２．６６％。提示白血病细胞存在具有高增殖能力的干细胞性细胞群;原代白血病细胞的再增殖能力低于白血病细胞系。     

急性髓细胞白血病集落生长的研究：附24例报告

应用PHA-LCM与HM-CM作液相—半固体相二步法培养24例AML的祖细胞集落,PHA-LCM组的集落产率为142.5±21.2/2×10~5细胞,明显高于HM-CM组的37.3±5.1/2×10~5细胞(P<0.01),两者呈显著正相关,且集落均由典型的原始细胞组成,提示均能生长CFU-AML,而用琼脂一步法培养的集落数均明显低于二步法(P均<0.01),此外两种条件培养基均适合正常的CFU-GM生长,但正常骨髓无论用一步法还是二步法培养,集落产率无显着差异(P>0.05)。     

胎肝提取液对急性髓细胞白血病细胞生长的影响

为了解胎肝提取液中造血生长因子对急性髓细胞白血病(AML)细胞的作用,将胎肝提取液经超滤后分成中分子蛋白(MMWP)和低分子蛋白(LMWP),利用体外集落培养法比较两者的活性,实验结果表明:当MMWP在1250、250、50和10倍稀释时对K_(562)细胞株和AML祖细胞具有明显的刺激增殖作用,作用优于LMWP.进一步比较MMWP与rHuGM-CSF两者作用活性,结果在无PHA-LCM存在时,两者均需较高的浓度才能使CFU-AML生长良好。表明白血病祖细胞对GM-CSF的敏感性低于正常细胞,而存在PHA-LCM时,较低剂量的MMWP和常规剂量的rHuGM-CSF(200u/ml)就能显著地提高CFU-AML集落产率。提示MMWP具有类似于rHuGM-CSF的作用,通过对CFU-AML的刺激增殖作用,提高其对化疗药物的敏感性。     

化疗药物对TRAIL受体DR5在原代白血病细胞表达的影响

目的探讨化疗药物对肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)受体DR5在原代白血病细胞表达变化的作用。方法取10例急性白血病患者骨髓单个核细胞,分6组在体外培养:未处理组,阿克拉霉素(AcLa)处理组,足叶乙甙(VP-16)处理组,阿糖胞苷(Ara-c)处理组,AcLa Ara-c处理组和VP-16 Ara-c处理组。培养72h后,用流式细胞仪检测DR5的表达。结果未处理组原代白血病细胞表达TRAIL-DR5的水平较低,平均荧光强度(MFI)为13±4,AcLa及AcLa Ara-c上调TRAIL-DR5在原代白血病细胞的表达(MFI分别为41±14和47±15),而VP-16,Ara-c和VP-16 Ara-c对DR5的表达水平无明显影响。结论AcLa及AcLa Ara-c在体外上调原代白血病细胞表达DR5水平,提示AcLa可能通过TRAIL凋亡途径诱导白血病细胞发生凋亡而发挥其抗白血病作用,而且与Ara-c联合应用有协同效应。     

碘化砷-硫脲对白血病HL-60细胞增殖及survivin基因表达的影响

目的:探讨新型砷剂配合物砷化砷-硫脲(AsI3-Tu)对白血病HL-60细胞增殖及survivin基因表达的影响。方法:以不同浓度的砷化砷-硫脲作用于HL-60细胞,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡,RT-PCR半定量检测细胞中sur-vivin mRNA表达。结果:①各实验组AsI3-Tu均能抑制HL-60细胞增殖,并与时间和剂量相关。②TUNEL法观察细胞凋亡,可见AsI3-Tu各浓度组凋亡细胞数明显增多。③AsI3-Tu各浓度组细胞中survivin mRNA表达水平降低,且表达水平与AsI3-Tu剂量呈负相关。结论:AsI3-Tu能有效抑制白血病细胞系HL-60细胞的增殖,诱导其凋亡,机制可能与抑制HL-60细胞中survivin基因表达有关。     

抑制Cyclin D1基因对K562细胞生长和Vp16敏感性的影响

目的 应用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi),构建针对细胞周期素D1(Cyclin D1)的RNAi,并检测其对K562细胞增殖和对化疗药物敏感性的影响.方法 采用针对Cyclin D1的RNAi质粒载体转染K562细胞,用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测Cyclin D1RNAi后mRNA和蛋白水平的表达;用MTT实验测定细胞的增殖;流式细胞术测定细胞周期和凋亡.结果 针对Cyclin D1 RNAi转染白血病K562细胞后,可以明显降低白血病K562细胞中Cyclin D1的mRNA和蛋白的表达,明显抑制K562细胞的增殖,提高化疗药物Vp16诱导的细胞凋亡.结论 利用RNAi抑制Cyclin D1可抑制白血病K562细胞增殖,提高对化疗药物Vp16的敏感性.     

Depsipeptide联合阿糖胞苷、多柔比星对人白血病细胞株的抑制效应

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂Depsipeptide联合阿糖胞苷(Ara-c)、多柔比星(DNR)对人白血病细胞株K562、HL-60的抑制效应,并定量分析其协同、相加或拮抗作用.方法:以不同浓度的Depsipeptide、 Ara-c、DNR单独或联合处理K562、HL-60细胞株 48 h,MTT法测定细胞生长抑制作用,中效原理法判断联合用药的相互作用.结果:①三种药物单用或两药联合作用于两种细胞株,均呈现剂量依赖性抑制效应.②Depsipeptide与Ara-c或DNR联合作用于K562、HL-60细胞株,在低抑制效应时呈现拮抗作用,高抑制效应时呈现协同作用.③改变两药的联合比率影响合用效应.结论:Depsipeptide作为一类新型的抗肿瘤药物,可有效抑制人白血病细胞株K562、HL-60增殖;其与传统化疗药物Ara-c、DNR联合可呈现协同作用;联合用药比率是影响抑制效应的重要因素.     

干扰素、阿糖胞苷单独及联合应用对慢性粒细胞性白血病细胞生长的影响

目的 探讨临床治疗慢性粒细胞性白血病（CML）更有效的方法。方法 以半固体集落培养，药物作用24小时液体培养及常规染色分析法研究干扰素（IFN）与阿糖胞苷（Ara-c)对K562细胞株和CML患者及正常人的骨髓单核细胞的生长影响。结果 IFN对K562细胞无明显抑制作用。IFN与Ara-c对CMLCFU-GM有优势抑制作用。对Ph^ 细胞存在选择性杀伤作用，IFN与Ara-c联合使用能增强IFN或Ara-c单药对CML白血病细胞的杀伤作用。结论 IFN与Ara-c可作为CML慢性期治疗的药物治疗，IFN与Ara-c联合治疗CML有望获得比单用Ara-c更好的治疗效果。     

高白细胞性急性髓系白血病细胞基因表达谱的研究

[目的]综合分析高白细胞性急性髓系白血病不同预后患者祖细胞集落形成及对化疗药物的敏感性以及差异表达的基因。[方法]半固体集落形成法观察不同预后患者骨髓祖细胞集落形成及对化疗药物的敏感性。采用Affymetrix公司人类寡核苷酸表达谱芯片检测患者初诊时骨髓单个核细胞基因表达谱,筛选出差异表达数据。[结果](1)患者骨髓祖细胞集落形成和化疗药物的敏感性与预后密切相关,未缓解者的骨髓祖细胞集落明显高于完全缓解患者,且对化疗药物不敏感。(2)完全缓解患者白血病细胞表达上调2倍以上的基因109条,占0.5%。下调2倍以上的基因134条,占0.6%,其中与预后密切相关的为TRIM16、TM4SF1。CD34和DNMT3B。(3)差异表达的基因按功能分成离子通道运输、细胞周期、细胞骨架运动、细胞凋亡等14类。上调的主要为DNA合成修复、细胞凋亡、细胞周期和应激相关等4类;而下调的主要为蛋白翻译合成、信号传导传递、发育相关和细胞骨架运动等4类。[结论]特定的基因表达模式决定患者预后。     

脂质体介导hTERT反义寡核苷酸对HL60细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究经脂质体介导转染端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖、凋亡的影响.方法 运用四唑盐比色(MTT)法检测HL-60细胞的增殖、Annexin VFITC/PI双标记法细胞早期凋亡流式检测法检测HL-60细胞的凋亡.结果 hTERT ASODN组(终浓度10 μmol/L)、脂质体介导hTERT ASODN组(终浓度0.5 μmol/L)均能抑制HL60细胞增殖,诱导HL-60细胞凋亡,两组比较差异无显著性.各ASODN组对HL-60的抑制作用及诱导凋亡作用均弱于阿糖胞苷(终浓度10 μmol/L)(P<0.01).结论 脂质体的介导增强了hTERT AS0DN抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡的作用效果.脂质体介导hTERT ASODN有可能成为化疗外治疗急性白血病的有益补充.