端粒酶活性与白血病细胞系的分化

为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法采用ＰＣＲ－ＬＩＳＡ方法检测白血病细胞株Ｋ－５６２和ＨＬ－６０诱导分化前后的端粒酶活性。结论分化是细胞自身调控的过程,端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。     

顺铂对人鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性和细胞周期及凋亡的影响

目的研究顺铂对人鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性、细胞周期及凋亡的影响,以探讨顺铂诱导CNE-2Z细胞凋亡与端粒酶活性水平的关系以及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制。方法分别以不同的药物浓度作用于体外培养的CNE-2Z细胞不同的时间,用TRAP-ELISA的方法定量检测CNE-2Z细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平,同步进行细胞形态观察,流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果CNE-2Z细胞端粒酶呈阳性。用不同浓度的顺铂不同的时间作用于CNE-2Z细胞,结果细胞周期被阻滞在G1期,出现细胞凋亡,下调端粒酶活性,且呈时间依赖性及剂量依赖性。结论化疗药物顺铂可能是通过改变细胞周期分布(G1期阻滞)并同时诱导细胞凋亡、下调其端粒酶活性而发挥抗癌作用的,故可将化疗前后细胞端粒酶活性的变化作为鼻咽癌化疗敏感性指标之一。     

端粒酶反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡的实验

目的研究端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞株的凋亡诱导作用及其机制。方法以人肝癌细胞株SMMC-7721、正常肝细胞株L-02为研究对象,采用TRAP-ELISA法对肿瘤细胞端粒酶活性进行定性定量分析;细胞形态学、TUNEL染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳观察端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞的凋亡诱导作用,用流式细胞仪对细胞周期进行时相分析,Western杂交对细胞周期蛋白进行研究。结果一定浓度的端粒酶反义寡核苷酸可抑制肝癌细胞端粒酶活性,肝癌细胞端粒酶活性被抑制后传代23～26次出现细胞凋亡。细胞凋亡与细胞周期蛋白有关。结论端粒酶反义寡核苷酸可抑制肝癌细胞端粒酶活性并诱导其凋亡。     

苦参碱诱导K562白血病细胞分化和凋亡的实验研究

目的：研究苦参碱的抗肿瘤作用。方法：以人红白血病细胞株Ｋ５６２为研究对象,通过形态学观察和细胞化学染色了解不同浓度的苦参碱对肿瘤细胞的诱导分化作用。并利用程序性细胞死亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果：０．１ｇ／Ｌ苦参碱能够诱导Ｋ５６２白血病细胞分化,形态学上类似中幼红和晚幼红细胞,联苯胺染色阳性率由１％￣２％上升至７％,细胞化学染色显示糖原由阴性转为强阳性且阳性率为１００％;１．０ｇ／Ｌ苦     

苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562／vin,K562／dox的诱导调？…

目的：明确中药苦参碱对化疗敏感和耐药细胞的诱导调亡作用。方法：采用ＭＴＴ法测定苦参碱对各细胞的ＩＣ５０值。Ｋ５６２、Ｋ５６２／ｋｉｎ、Ｋ５６２／ｄｏｘ细胞与浓度苦参碱共同孵育于１６４０培养液中,一定时间后对细胞行Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ－Ｇｉｅｍｓａ染色,做形态学观察,同时行ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞仪ＤＮＡ含量分析以检测调亡。结果：细胞形态学观察可见０．２５￣１．００ｍｇ／ｍｌ浓度苦参碱作用后的细胞体积缩     

顺铂和放疗对喉癌细胞端粒酶活性的诱导及其机制研究

 目的　观察 CDDP和放疗对喉癌细胞的端粒酶活性和细胞周期的影响 ,并探讨其机制。方法　 Hep- 2细胞经不同剂量的顺铂或60 Co- 射线处理。分别用流式细胞仪、端粒酶 PCR-ELISA法检测及聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法分析 CDDP和射线诱导的端粒酶活性和细胞周期的变化。结果　CDDP及放疗均能使 Hep- 2细胞的端粒酶活性明显上调 ,并表现为浓度依赖性。CDDP能蓄积 S期细胞 ,放疗阻滞 G2 /M期细胞。放化疗引起的端粒酶活性的上调与 S期细胞的百分比相关 ( r=0 .5371 ,b=7.8393)。结论　放化疗引起的端粒酶活性的变化与其对细胞周期的诱导有关.     

维甲酸和地塞米松对骨肉瘤细胞分化与端粒酶活性的影响

目的：观察维甲酸（ＲＡ）和地塞以（ＤＥＸ）对骨肉瘤细胞（ＨＯＳ）形态和功能分化的诱导作用以及分人化后细胞周期与端粒酶活性变化。方法：用ＲＡ和ＤＥＸ诱导ＨＯＳ细胞分化,观察分化后瘤细胞的细胞形态和功能细胞停留在Ｇ２/Ｍ期 ,细胞生长受到明显抑制,细胞形态和功能分化成熟,碱性磷酸酶（ＡＰ）活性明显升高,瘤细胞端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱。结论：ＲＡ和ＤＥＸ能诱导骨肉瘤细胞分化的形态和     

hTERT基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性的影响

探讨人类端粒酶逆转录酶（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ,ｈＴＥＲＴ）基因的反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮＤ）对Ｋ５６２细胞端粒酶活性的影响。方法：采用多聚酶链反应－酶联免疫测定（ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ）方法检测人工合成的反义脱氧寡核苷酸处理Ｋ５６２细胞前后端粒酶活性的改变,以逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）分     

β－榄香烯诱发肿瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨β－榄香烯的抗癌疗效及其作用机制。方法：采用ＭＴＴ方法、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２和ＰＩ荧光染色法、电镜及流式细胞术分析法,发现β－榄香烯乳对Ｋ５６２细胞生长的影响。结果：β－榄香烯明显抑制Ｋ５６２细胞的生长,对Ｋ５６２细胞的半数生长摇抑制剂量（ＩＣ５０）为１７．１４μｇ／ｍｌ。其抑制细胞生长能力主要是诱导细胞凋亡,并且呈浓度和时间依赖性。在影响细胞周期方面,主要使Ｇ、期细胞数目增多,Ｓ期     

苦参碱对K562细胞蛋白酪氨酸激酶及磷酸酶活性的影响

背景与目的:一定浓度的苦参碱能诱导K562细胞分化,本研究拟初步探讨其诱导分化的信号转导机制。方法:运用链亲和素-生物素放大系统结合的酶联免疫法,动态检测苦参碱作用于K562细胞后,K562细胞膜相及胞浆内的蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶活性的变化。结果:苦参碱能抑制K562细胞内的蛋白酪氨酸激酶活性,在<0.1mg/ml的浓度范围内,抑制作用具有浓度依赖性。不同浓度的苦参碱对蛋白酪氨酸磷酸酶活性的影响无显著性差异。0.1mg/ml的苦参碱作用K562细胞后,伴随蛋白酪氨酸激酶的活性变化,蛋白酪氨酸磷酸酶的活性也有一个短暂的下降。结论:在苦参碱诱导K562细胞分化的过程中,涉及到蛋白酪氨酸激酶的活性改变。膜相中蛋白酪氨酸激酶的活性改变先于胞浆内的改变,提示有一个信号的跨膜转运过程。同时伴有蛋白酪氨酸磷酸酶的活性变化,反映了胞内的蛋白酪氨酸残基磷酸化与去磷酸化的即时调节机制。苦参碱对蛋白酪氨酸激酶活性的抑制作用具有特异性与饱和性的特点,还提示有相应的受体存在。     

若参碱对K562细胞端粒酶hTERT—mRNA表达及其酶活性影响作用的研究

目的：观察苦参碱对K562细胞hTERT-mRNA表达及端粒酶活性的影响作用,并明确两者的相关性。方法：以0．1－2mg/ml苦参碱处理K562细胞48h后,RT－PCR检测其hTERT-mRNA表达,同时行TRAP－PCR－ELISA端粒酶活性检测。结果：K562细胞为一强端粒酶活必细胞株,在浓度分别为0．、0．5、1．0、2．0mg/ml苦参碱作用后,K562细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,同时伴有端粒酶活性下降,抑制率分别为0．3％、13．0％、91．7％和98．6％。结论：苦参碱可降低K562细胞hTERT-mRNA表达,同时伴端粒酶活性下降;端粒酶活性强度与hTERT-mRNA表达有关。     

苦参碱诱导K562细胞磷脂酶A2活性与表达的改变

目的：研究磷脂酶A2在苦参碱促K562细胞分化的信号转导中的作用。方法：利用磷脂酶A2的水解作用，以掺入大肠杆菌膜的[^3H]标记的油酸为酶解底物，检测K562细胞内磷脂酶A2的活性。以半定量的RT-PCR方法检测K562细胞内磷脂酶A2的mRNA水平。结果：0．1mg/ml浓度的苦参碱作用K562细胞后，磷脂酶A2的活性与表达量的增高。结论：磷脂酶A2作为细胞内的重要信号分子，通过活性与表达量的改变参与苦参碱促K562细胞分化的信号转导。，     

苦参碱对白血病细胞癌基因和细胞周期调控蛋白表达的影响

目的：探讨在苦参碱诱导下,白血病细胞株K562增殖和分化时相关癌基因及细胞周期调控蛋白表达表达的改变及意义。方法：应用分子生物学Norhern Blot和DotBlot杂交技术检测人红白细胞病细胞株K562在苦参碱作用后的c-myc,N-ras及p53mRN表达;同时用Western BLotting-ECL分析苦参碱作用前、后24、48、72小时K562细胞Cyclin D1,CyclinE,Ddk2,Cdk5的不同表达水平。结果：在增殖的K562细胞（培养48小时）中,伴随着DNA合成增加,CyclinE和Cdk2保持高表达;而在苦参碱作用24小时分化启动的细胞中,随着DNA合成减少,N-ras,p53mRNA表达增强;c-myc mRNA表达明显受抑;同时CyclinD,Cdk5表达增强,结论：若参碱抑制K562细胞增殖并诱导分化可能与相关癌基因表达和CyclinD1/Cdk5,CyclinE/Cdk2不同表达有关。     

苦参碱K562细胞早期原癌基因表达的影响

背景与目的：苦参碱具有抗癌活性,我们前期的研究也证明苦参碱对K562细胞有增殖抑制与诱导分化作用。但苦参碱诱导K562细胞多向分化的分子机制尚不清楚。我们拟对其分子机制进行初步研究。方法：采用RT-PCR半定量技术分别检测0.2mg/ml苦参碱对K562细胞原癌基因c-myc、c-jun、H-ras、p21和肝细胞核转录因子HNF-1α表达的影响。结果：经苦参碱处理3h后K562细胞c-myc、c-jun、NHF-1αmRNA表达明显降低,而H-ras、p21mRNA表达明显增高。结论：0.2mg/ml苦参碱引起的K562细胞相关癌基因表达变化可能与K562细胞的增殖抑制和诱导分化有关。     

反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响

 目的　研究靶向封闭端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的反义硫代寡核苷酸（ASPSODN）对K562细胞目的基因的抑制及其对端粒酶活性及细胞增殖周期和凋亡的影响 。方法　ASPSODN转染到人类红白血病细胞株K562,采用MTT法、酶联免疫吸附（ELISA）法和流式细胞术（FCM）检测K562细胞的增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果　0.6 μmol／L的ASPSODN（0.42±0.16）能明显下调hTERT表达（P＜0.05）,端粒酶相对活性降至52 %;MTT法检测显示明显抑制K562细胞增殖活性;FCM显示细胞凋亡率为10.31 %,PI染色显示细胞被阻止在G1／G0期,S期及G2／M期的细胞减少,但无特征性的凋亡峰。结论　ASPSODN靶向 hTERT 能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调端粒酶活性,抑制K562细胞增殖,并通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞凋亡。     

苦参碱对K562细胞端粒酶hTERT-mRNA表达及其酶活性影响作用的研究

目的：观察苦参碱对K562细胞hTERT-mRNA表达及端粒酶活性的影响作用,并明确两者的相关性。方法：以0.1～2mg/ml苦参碱处理K562细胞48h后,RT-PCR检测其hTERT-mRNA表达,同时行TRAP-PCR-ELISA端粒酶活性检测。结果:K562细胞为一强端粒酶活性细胞株,在浓度分别为0.1、05、10、20mg/ml苦参碱作用后,K562细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,同时伴有端粒酶活性下降,抑制率分别为0.％、13.％、91.7％和98.6％。结论：苦参碱可降低K562细胞hTERT-mRNA表达,同时伴端粒酶活性下降;端粒酶活性强度与hTERT-mRNA表达有关。     

苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时对 G1细胞周期调节因子的调控

目的：观察苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时,G1细胞周期调节因子的变化,探讨苦参碱对肿瘤细胞增殖的调控。方法：0、0．3、0．8、1．5g/L苦参碱作用HepG2细胞3天,免疫组化检测p53,Rb,p21,p27,p16,cyclinD1蛋白表达：原位杂交检测p53,cyclin D1mRNA的表达。真彩色图像分析对基因表达强弱进行定量。结果用Microsoft-Excel软件统计处理。结果：用药后细胞周期负调控因子p53,Rb,p21,p27,p16表达增强;正调控因子cyclinD1表达减弱。结论：苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2分化、凋亡的机制可能与苦参碱上调了G1细胞周期负调节因子的表达,下调了G1期正调节因子cyclinD1表达有关。     

CGI-100 specific shRNA inhibits proliferation and induces differentiation in leukemia K562 cells

Objective: To investigate the characteristics of CGI-100- knockdown K562 cells and the effect of CGI-100 RNA interference (RNAi) on matrine-treated K562 cells.Methods: Three oligonucleotides targeting CGI-100 gene and a pair of negative control containing the same nucleotide composition with a different sequence were devised and chemically synthesized. The inhibition efficiency of CGI-100 expression by shRNA-CGI-100 in K562 cells was determined using semiquantitative RT-PCR and dot blot hybridization. The effect of CGI-100 RNAi on the growth of K562 cells was examined using MTT assay and cell differentiation was measured by distinct approaches including flow cytometry, benzidine staining and electron microscope. After CGI-100-konckdown K562 cells were incubated with 0.2 mg/ml of matrine or 30 μmol/L of hemin for 48 h, the expression levels of Glycophorin A(GPA)(CD235a) and Growth factor independence-1B mRNA(Gfi-1B mRNA) were measured by RT-PCR and the protein levels of GPA, CD14 and CD15 were detected by flow cytometry.Results: The eukaryotic expression vectors of CGI-100 RNAi were successfully constructed. The K562/shRNA-CGI-100 cell line was established in which the inhibition efficiency of CGI-100 gene expression by shRNA-CGI-100 was 54%. CGI-100-knockdown inhibited the proliferation and induced erythroid differentiation in K562 cells. Compared with the control K562 ceils, the K562/shRNA-CGI-100 cells showed decreased absorbance value detected by MTT assay, decreased enchromation, increased heterochromation, increased percentage of G0/G>1 phase cells, decreased population of S phase cells, decreased PI (proliferation index of cells), and elevated percentage of benzidine-positive cells. Moreover, the sensitivity of K562/shRNA-CGI-100 cells to either matrine or hemin was enhanced and the sensitivity of these cells to matrine was higher than that to hemin. Compared with the control K562 cells, matrine treatment in K562/shRNA-CGI-100 cells resulted in increased inhibitory rate of proliferation, elevated percentage of benzidine-positive cells, obviously up-regulated mRNA expressions of GPA and Gfi-1B, and increased mean fluorescence intensity (MFI) of GPA. No CD14 expression was detected and no statistical significance was found for the detected CD15. Finally, the MFI of GPA increased in K562/shRNA-CGI-100 cells treated with hemin and was 1.7 times less than that in cells exposed to matrine.Conclusion: These results suggest that the function of CGI-100 gene is correlated with the deregulated proliferation and the block of erythroid differentiation in K562 cells and may also be involved in matrine-induced erythroid differentiation in K562 cells.