HPLC-MS法测定关附甲素及其在Caco-2细胞上的摄取特性

目的建立关附甲素的LC-MS测定法,研究其在Ca-co-2细胞上的摄取特性。方法采用ShimadzuVP–ODS,C8柱,(250mm×2.1 mm,5μm),流动相:乙腈∶水=30∶70(V/V),用0.2%冰乙酸溶液,加入二乙胺适量调pH至4.0左右,流速:0.2 ml.min-1,电喷雾离子化(ES1)方式,采用选择性离子检测法,检测离子为正离子,关附甲素的选择性离子:[M+H],m/z 430。考察温度、药物浓度、时间和pH值对关附甲素在Caco-2细胞上摄取的影响。结果关附甲素在0.2～50.0μmol.L-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9988),最低定量限0.2μmol.L-1。关附甲素在Caeo-2细胞上的摄取具有一定的浓度、时间和pH值依赖性,其摄取表现为被动扩散。结论该法灵敏、简单,专属性强,关附甲素在Caco-2细胞上具有良好的摄取。     

雷公藤甲素诱导细胞凋亡的研究进展

目的：介绍雷公藤甲素诱导细胞凋亡的研究现状。方法：通过查阅文献，综述雷公藤甲素诱导细胞凋亡的作用及研究机制进展。结果：雷公藤甲素可以诱导或促进肿瘤细胞，淋巴细胞，树突细胞等多种细胞凋亡。结论：雷公藤甲素可通过诱导细胞凋亡而发挥其药理作用，其机制有待进一步研究。     

大蒜素在Caco-2细胞模型转运特征的研究

目的研究大蒜素在Caco-2细胞的转运特征。方法应用Caco-2细胞模型考察转运时间、药物浓度时大蒜素吸收的影响,采用高效液相色谱法测定大蒜素浓度,计算其表观渗透系（Papp）。结果随着浓度增加和时间延长,大蒜素累积通透量逐渐增加;大蒜素的Papp在2个方向比值[Papp（BL→AP）,Papp（AP→BL）]为1．80,存在方向性差异。结论大蒜素的转运属于双向转运,且吸收良好。     

仙茅苷在Caco-2细胞模型中跨膜转运特征研究

目的：采用Caco-2细胞Transwell模型研究仙茅苷的跨膜转运机制。方法：建立Caco-2细胞Transwell吸收模型,用聚酯碳酸酯膜培养Caco-2细胞21天,形成致密的单层细胞模型。研究浓度、时间、温度、细胞旁路转运及跨膜转运蛋白（P-糖蛋白,多药耐药蛋白,乳腺癌耐药蛋白）在仙茅苷跨膜转运中的作用。结果：仙茅苷在Caco-2细胞模型中的跨膜转运存在一定的浓度及时间依赖性,细胞旁路转运不参与其转运,仙茅苷的外排转运存在一定的能量依赖性,且由P-gp参与。结论：仙茅苷在Caco-2细胞模型上主要以主动转运方式作跨膜转运,且P-gp参与其跨膜转运。     

蛇床子素及其制剂在Caco-2细胞模型中转运机制的研究

I摘要】目的：研究蛇床子素及其制剂在Caco-2细胞模型中的摄取、转运机制。方法：建立Caco-2细胞单层模型,研究蛇床子素、蛇床予素β-环糊精包合物及其包合物分散片的摄取和跨膜转运,考察其时间、温度、浓度、吸收促进剂和抑制剂对药物摄取及跨膜吸收的影响,并比较原料药与制剂吸收过程的差异。结果：Caco-2细胞对蛇床子素及其制剂溶液的摄取与时间、温度、浓度均呈正相关,p-糖蛋白抑制剂（CyA）与能量抑制剂（NaN3）对摄取无显著性影响,其摄取量的大小依次为分散片〉包合物〉原料药;转运实验中,随浓度和温度的增加,蛇床子素及其制刑的溶液在Caco-2细胞中的转运量均增加,而只r与Rt比值无明显变化,P-糖蛋白抑制剂（CyA）、能量抑制剂（NaN,）、细胞内吞抑制剂．氧化苯砷（oxophenylarsine）7L胞旁路转运促进剂一去氧胆酸钠（sodiumdeoxycholate,SDCh）对蛇床子素的转运无影响,而去氧胆酸钠对包合物和分散片的转运有明显的影响,3种制刑AP—BL方向上的Papp为分散片〉包合物〉原料药。结论：蛇床子素主要以被动扩散的方式被吸收,包合物和分散片中的药物以被动转运为主,少部分以细胞旁路转运途径被细胞吸收;难溶性药物经包合物可促进其吸收,制剂辅料对药物的吸收有一定的促进作用。     

左旋紫草素肠道转运及Caco-2细胞转运特性

目的研究左旋紫草素肠道及Caco-2细胞转运特征及其机制。方法应用翻转肠囊法和Caco-2细胞模型考察时间、浓度对左旋紫草素转运吸收特性的影响,应用P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对左旋紫草素转运吸收机制进行研究,采用HPLC法测定左旋紫草素的浓度,计算其表观渗透系数(Papp)。结果在Caco-2细胞模型,随浓度增加和时间延长,左旋紫草素的累积转运量逐渐增加;加用维拉帕米后,使AP侧到BL侧的表观渗透系数Papp(AP→BL)显著增加,而从BL侧到AP侧的表观渗透系数Papp(BL→AP)显著降低。在翻转肠囊模型,100μmol·L-1左旋紫草素中加入维拉帕米后Papp显著增加。结论左旋紫草素的转运存在被动转运和主动转运2种形式,P糖蛋白参与主动转运过程;该药经肠道吸收中等,加入维拉帕米可能促进吸收。     

雷公藤贴膏中雷公藤甲素的含量测定

用薄层扫把法在硅胶G板上,以氯仿:乙醚(4:1)为展开剂,分离雷公藤甲素,然后依次用3、5-二硝基苯甲酸和KOH显色,以535nm波长扫描测定,按外标二点法计算含量,平均回收率98.63%,变异系数1.7%(n=3),线性范围1.75—15.75μg甲素.     

雷公藤贴膏中雷公藤甲素的含量测定

用薄层扫把法在硅胶G板上,以氯仿:乙醚(4:1)为展开剂,分离雷公藤甲素,然后依次用3、5-二硝基苯甲酸和KOH显色,以535nm波长扫描测定,按外标二点法计算含量,平均回收率98.63%,变异系数1.7%(n=3),线性范围1.75—15.75μg甲素.     

金丝桃苷在Caco-2细胞模型中的跨膜转运方式

目的研究金丝桃苷在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用Caco-2细胞单层模型研究金丝桃苷的双向转运,考察pn、药物质量浓度、方向、温度、抑制剂对金丝桃苷细胞转运的影响。采用HPLC法检测金丝桃苷的含量,计算其表观渗透系数(P_app)。结果金丝桃苷的细胞转运P_app。具有pH依赖性。金丝桃苷肠腔（A）侧→基底（B）侧P_app>B→A,并且随着金丝桃苷质量浓度的增大而减小,具有浓度依赖性。P-gp抑制剂维拉帕米增加金丝桃苷的细胞正向转运P_app,降低了其逆向转运P_app。金丝桃苷较高浓度时,MRPl抑制剂吲哚美辛和ATP抑制剂叠氮化钠显著降低了金丝桃苷的转运量。结论金丝桃苷在Caco-2细胞单层模型中的转运具有pH依赖性和浓度依赖性,是以主动转运为主,被动扩散为辅,同时涉及外排蛋白作用的转运方式。     

人参皂苷Rb_3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征研究

目的:研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。方法:人参皂苷Rb3细胞样品经高速离心后取上清液,以乙腈-1mmo·lL-1甲酸铵水溶液(34∶66)为流动相,以人参皂苷Rg2为内标,采用电喷雾离子源(ESI),在负离子条件下以多重离子反应监测模式(MRM)检测。检测离子:m/z1077.7→m/z783.4(人参皂苷Rb3),m/z783.6→m/z475.1(人参皂苷Rg2)。测定透过Caco-2单细胞层的人参皂苷Rb3浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果:人参皂苷Rb3的线性范围为50～2000ng·mL-1,日间、日内精密度均小于15%。Papp从基顶侧(AP)到基底侧(BL)为3.22×10-6cm·s-1,从BL侧到AP侧为6.0×10-6cm·s-1,其P(BL-AP)/P(AP-BL)比值为1.86。结论:本方法简单、灵敏度高,可用于研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。     

Transport characteristics of isorhamnetin across intestinal Caco-2 cell monolayers and the effects of transporters on it

Flavonoid isorhamnetin occurs in various plants and herbs, and demonstrates various biological effects in humans. This work will clarify the isorhamnetin absorption mechanism using the Caco-2 monolayer cell model. The isorhamnetin transport characteristics at different concentrations, pHs, temperatures, tight junctions and potential transporters were systemically investigated. Isorhamnetin was poorly absorbed by both passive diffusion and active transport mechanisms. Both trans- and paracellular pathways were involved during isorhamnetin transport. Active transport under an ATP-dependent transport mechanism was mediated by the organic anion transporting peptide (OATP); isorhamnetin’s permeability from the apical to the basolateral side significantly decreased after estrone-3-sulfate was added (p < 0.01). Efflux transporters, P-glycoproteins (P-gp), breast cancer resistance proteins (BCRP) and multidrug resistance proteins (MRPs) participated in the isorhamnetin transport process. Among them, the MRPs (especially MRP2) were the main efflux transporters for isorhamnetin; transport from the apical to the basolateral side increased 10.8-fold after adding an MRP inhibitor (MK571). This study details isorhamnetin’s cellular transport and elaborates isorhamnetin’s absorption mechanisms to provide a foundation for further studies.     

阿立哌唑在Caco-2细胞单层模型中的跨膜转运

本文研究了阿立哌唑（aripiprazole）在Caco-2细胞模型中的跨膜转运特征。一种体外培养的人小肠上皮细胞模型 —— Caco-2细胞模型应用于阿立哌唑的跨膜转运研究。评价了时间、供给液浓度、pH值、温度及P-糖蛋白抑制剂对阿立哌唑跨膜转运的影响。采用高效液相色谱法检测药物浓度。结果表明阿立哌唑主要通过被动扩散的机制转运,同时兼有载体介导转运。阿立哌唑的转运量与时间、pH值、温度成正相关。表观渗透系数P_app值随供给液浓度升高而增大,10 μg·mL^-1时趋向饱和,之后随阿立哌唑浓度的增加而逐渐减小。P-糖蛋白抑制剂环孢菌素-A显著增加阿立哌唑的跨膜转运。     

熊果酸在Caco-2细胞单层模型中的跨膜转运

熊果酸(Ursolic acid, UA),又名乌索酸,乌苏酸,属a-香树脂醇(a-amyri)型五环三萜类化合物.在自然界分布非常广泛,据目前所知,至少存在于26个科70多种天然植物中[1].大量的研究表明,UA具有广泛的药理作用和重要的生物活性,尤其在抗炎、护肝、抗肿瘤以及机体免疫调节等方面已经显现出令人关注的药理特性[2,3].体内药代动力学研究表明, UA的生物利用度低[4],口服吸收情况较差,而且其在体内吸收转运的方式和机制也并不清楚.Caco-2细胞系来源于人结肠类腺癌细胞,其结构和生化作用类似于人小肠上皮细胞,含有与小肠刷状缘上皮相关的转运系统以及一     

Permeability of the Cyanotoxin Microcystin-RR across a Caco-2 Cells Monolayer

Microcystins (MCs) are toxins produced by several cyanobacterial species found worldwide. While MCs have a common structure, the variation of two amino acids in their structure affects their toxicity. As toxicodynamics are very similar between the MC variants, their differential toxicity could rather be explained by toxicokinetic parameters. Microcystin-RR (MC-RR) is the second most abundant congener and induces toxicity through oral exposure. As intestinal permeability is a key parameter of oral toxicokinetics, the apparent permeability of MC-RR across a differentiated intestinal Caco-2 cell monolayer was investigated. We observed a rapid and large decrease of MC-RR levels in the donor compartment. However, irrespective of the loaded concentration and exposure time, the permeabilities were very low from apical to basolateral compartments (from 4 to 15 × 10⁻⁸ cm·s⁻¹) and from basolateral to apical compartments (from 2 to 37 × 10⁻⁸ cm·s⁻¹). Our results suggested that MC-RR would be poorly absorbed orally. As similar low permeability was reported for the most abundant congener microcystin-LR, and this variant presented a greater acute oral toxicity than MC-RR, we concluded that the intestinal permeability was probably not involved in the differential toxicity between them, in contrast to the hepatic uptake and metabolism.     

Caco-2细胞对酸枣仁皂苷A的跨膜转运

目的研究酸枣仁皂苷A（Jujuboside A,JuA）在Caco-2细胞的跨膜转运特性。方法采用体外培养的Caco-2细胞单层模型,考察时间、介质pH值、药物浓度、抑制剂对JuA在Caco-2细胞上转运的影响。结果 Caco-2细胞转运JuA呈时间及浓度依赖性;在pH为5.0～8.0范围内,Caco-2细胞对JuA的转运不受pH值的影响;P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）抑制剂维拉帕米（Verapamil,Ver）对Caco-2细胞转运JuA无影响;线粒体呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮化钠（Sodium azide）对Caco-2细胞转运JuA有抑制作用;JuA的AP-BL侧的Papp与BL-AP侧的Papp的两组均数比较无统计学意义。结论 JuA不是P-gp的底物,其跨膜转运是被动转运与主动转运共同参与的过程。     

姜黄素在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的测定姜黄素透过Caco-2单细胞层的浓度,研究其吸收特征。方法用Caco-2细胞单层模型来考察时间、浓度、不同药物酮康唑、维拉帕米、胡椒碱对姜黄素吸收的影响。采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法,测定姜黄素浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果不同浓度姜黄素在90 min之前Papp大小顺序为:180>240>300μg/ml;与对照组比较,胡椒碱,低浓度酮康唑,维拉帕米对姜黄素的吸收均呈不同程度的促进作用(P<0.05)。结论姜黄素的吸收具有明显的高浓度饱和现象,且不呈线性变化,初步判定其吸收为主动吸收机制;促进姜黄素吸收的原因可能与酮康唑抑制Ⅰ相代谢酶CYP450 3A4和1A2酶的活性;胡椒碱抑制姜黄素Ⅱ相代谢酶—葡萄糖醛酸苷酶;维拉帕米抑制药物外排性转运蛋白—P-糖蛋白的活性有关。     

Quantification and Imaging of Mannitol Transport Through Caco-2 Cell Monolayers Using a Positron-Emitting Tracer

Pharmaceutical Research -